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作者：陆世银广西医科大学

学位级别：硕士

目的:肝纤维化(hepatic fibrosis)由多种慢性肝病长期发展所致,其进一步恶化发展可导致肝硬化与肝癌。然而,当前临床缺少对肝纤维化具有良好疗效的药物。据研究报道,岩黄连生物总碱对慢性肝纤维化大鼠具有抗肝纤维化作用及肝保护作用。... 详细信息

目的:肝纤维化(hepatic fibrosis)由多种慢性肝病长期发展所致,其进一步恶化发展可导致肝硬化与肝癌。然而,当前临床缺少对肝纤维化具有良好疗效的药物。据研究报道,岩黄连生物总碱对慢性肝纤维化大鼠具有抗肝纤维化作用及肝保护作用。但目前岩黄连抗肝纤维化的活性成分仍未明确。基于此,本课题以岩黄连为研究对象,采用组效关系的研究思路,结合大鼠肝星状细胞(HSC-T6)模型,对岩黄连抗肝纤维化潜在药效物质基础及其初步作用机制进行研究。方法:1.采用超高效液相色谱-四级杆飞行质谱(UPLC-Q/TOF MS)技术,根据色谱峰的准分子离子峰/分子离子峰及其相应离子碎片信息与化合物标准对照品进行比对及参考有关文献资料,对岩黄连提取物中的化学成分进行鉴定归属。2.运用高效液相色谱(HPLC)法,对岩黄连9个正交提取物样品进行了半定量分析,通过中药指纹图谱系统(traditional Chinese medicine fingerprint,TCM fingerprint)确定其共有峰;MTT法评价9个正交提取物样品对HSC-T6细胞增殖抑制的活性。3.利用SIMCA-P 11.5软件的正交投影偏最小二乘法(Orthogonal Partial least squares,OPLS)分析,研究共有峰与药效的相关性,根据S-载荷图(S-loading plot)与变异权重参数值(Variable importance in projection,VIP)辨识显著活性成分;同时结合对照品鉴定出部分共有峰。4.采用细胞乳酸脱氢酶(LDH)法观察脱氢卡维丁、巴马汀和小檗碱对人正常肝细胞(HL-7702)乳酸脱氢酶活性的影响。应用MTT法、流式细胞术(flow cytometry,FCM)、透射电镜(transmission electron microscope,TEM)分别检测HSC-T6细胞增殖、凋亡。蛋白免疫印迹(Western blot,WB)法检测与细胞凋亡密切相关蛋白caspase-3、bax、bcl-2的表达。结果:1.根据岩黄连提取物与对照品的质谱信息,并参考相关文献资料鉴定出岩黄连提取物中19个化合物,并总结了岩黄连中小檗碱、四氢小檗碱类生物碱化合物的二级质谱裂解途径。2.建立了岩黄连提取物的HPLC分析方法,对岩黄连正交9个提取物样品进行了半定量研究,结果显示不同样品同等生药量的组成成分差异很大;采用MTT法评价正交9个提取物样品抑制HSC-T6细胞的活性,结果发现由于采用不同的提取条件,使得同等生药量的正交提取物样品对HSC-T6细胞的增殖抑制活性存在差异,MTT结果显示对HSC-T6细胞最高抑制率达到90.1%,而最低的抑制率仅为5.3%。3.采用OPLS分析方法辨识出对HSC-T6细胞增殖抑制率有较大贡献的6个共有峰依次为19>18>13>20>14>16号峰。其中确证18、19和20号峰分别为脱氢卡维丁、巴马汀和小檗碱。4.LDH法测定结果显示,系列浓度梯度的脱氢卡维丁、巴马汀、和小檗碱分别与HL-7702细胞作用24h后,安全剂量范围分别为0.01.15;0.01.10;0.01.10 mg·mL。MTT结果表明脱氢卡维丁、巴马汀、和小檗碱可显著抑制HSC-T6细胞的增殖,而且发现联合给药抑制作用优于单独给药,各给药组均呈浓度依赖性(P<0.05或P<0.01)。FCM、TEM观察到经药物干预后可提高HSC-T6细胞凋亡率和引起细胞形态学发生明显变化。WB实验进一步证实了脱氢卡维丁、巴马汀、和小檗碱通过下调bcl-2,上调bax、活性caspase-3实现诱导HSC-T6细胞的凋亡。结论:1.本研究鉴定了岩黄连提取物中的19个化学成分并分析其质谱裂解途径,同时证实了岩黄连提取物可有效抑制HSC-T6细胞的增殖。2.首次采用组效关系研究岩黄连提取物对HSC-T6细胞的作用,发现了6个与抑制HSC-T6细胞增殖显著相关的潜在活性成分,其中3个确证为脱氢卡维丁、巴马汀和小檗碱;表明组效关系的研究思路为中药、特色民族药活性成分的辨识提供了借鉴。3.0.10 mg·mL的脱氢卡维丁、巴马汀和小檗碱及其联合用药均具有抑制HSC-T6细胞增殖与诱导其凋亡的作用;其作用机制可能与抑制bcl-2、促进bax、caspase-3蛋白表达有关;实验结果表明脱氢卡维丁、巴马汀和小檗碱是岩黄连抗肝纤维化的潜在活性成分。4.脱氢卡维丁、巴马汀和小檗碱联合用药对HSC-T6细胞的药效活性对比单独用药效果更为明显,提示多组分协同作用有可能是岩黄连促进HSC-T6细胞凋亡的起效模式。

关键词：岩黄连组效关系大鼠肝星状细胞抗纤维化生物碱超高效液相色谱串联四极杆/飞行时间质谱

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理中汤急性毒性和亚慢性毒性实验研究

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大众科技 2023年第2期25卷 109-112页

作者：周桂梅黄曙院陆世银柳州市中医医院(柳州市壮医医院)药学部广西柳州545001 柳州市中医医院(柳州市壮医医院) 广西柳州545001

目的:研究理中汤的急性毒性和亚慢性毒性,并对其安全性进行评价,为理中汤的临床用药提供理论依据。方法:急性毒性试验采用最大给药量法,以180.0 g/(kg·d)的剂量分3次小鼠灌胃理中汤水提液,连续观察14 d内的毒性反应。亚慢性毒性试验,... 详细信息

目的:研究理中汤的急性毒性和亚慢性毒性,并对其安全性进行评价,为理中汤的临床用药提供理论依据。方法:急性毒性试验采用最大给药量法,以180.0 g/(kg·d)的剂量分3次小鼠灌胃理中汤水提液,连续观察14 d内的毒性反应。亚慢性毒性试验,设高、中、低3个剂量组(6.0、12.0、24.0 g/kg),SD大鼠分别按相应剂量每天灌胃1次,对照组给予蒸馏水,连续灌胃90 d。实验结束大鼠经麻醉后采血测血液学和血生化指标,采集实体器官称重,计算脏器系数,并进行组织病理学检查。结果:急性毒性试验结果表明,昆明小鼠在最大给药量180.0 g/(kg·d)下未表现出任何毒性反应,解剖也未发现明显可见的病理变化。亚慢性毒性试验结果显示,各剂量组SD大鼠的体重、血常规指标、血清生化指标和脏器系数与对照组相比均未发生显著变化(P>0.05);经剖检和组织病理学检查,发现高剂量组和对照组SD大鼠的肝脏、肺脏及肾脏等器官组织均未出现与受试药物相关的病理改变。结论:在本实验条件下,理中汤无急性毒性作用,长期用药也未发生亚慢性毒性反应,具有可靠的安全性,可在临床上推广应用。

关键词：理中汤急性毒性亚慢性毒性用药安全

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基于网络药理学探讨白花蛇舌草抗肝纤维化作用机制及实验验证

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国际中医中药杂志 2023年第2期45卷 181-187页

作者：王月明吴腾陆世银周晓玲梁甜广西中医药大学研究生院南宁530200 柳州市中医医院消化内科柳州545001

目的基于网络药理学方法研究白花蛇舌草抗肝纤维化的作用机制。方法检索TCMSP与Uniprot数据库,筛选白花蛇舌草有效成分及靶基因。通过GeneCards及OMIM数据库筛选肝纤维化的疾病靶基因,使用Cytoscape 3.8.2软件构建“疾病-成分-靶点”网... 详细信息

目的基于网络药理学方法研究白花蛇舌草抗肝纤维化的作用机制。方法检索TCMSP与Uniprot数据库,筛选白花蛇舌草有效成分及靶基因。通过GeneCards及OMIM数据库筛选肝纤维化的疾病靶基因,使用Cytoscape 3.8.2软件构建“疾病-成分-靶点”网络。通过STRING数据库构建PPI网络,借助Cytoscape 3.8.2软件筛选核心靶点,并对核心靶点进行GO功能富集和KEGG通路富集分析。对分析结果进行实验验证。腹腔注射40%四氯化碳橄榄油溶液制备肝纤维化大鼠模型,将造模成功大鼠按随机数字表法分为模型组及白花蛇舌草组,每组10只。另以10只健康大鼠为空白对照组。白花蛇舌草组灌胃白花蛇舌草水提液2.7 g/kg,空白对照组及模型组灌胃等体积的蒸馏水,1次/d,连续4周。观察各组大鼠肝组织病理学变化及血清GPT、GOT、Alb水平;ELISA法检测外周血IL-6、IL-1β、TGF-β1水平;采用Western blot法检测PI3K、Akt、HIF-1α、VEGF蛋白表达。结果获得白花蛇舌草治疗肝纤维化的有效成分5个,有效靶点118个。度值较高的有效成分为豆甾醇、β-谷甾醇、槲皮素等;度值较高的作用靶点为VEGF、EGFR、HIF-1α、IL-6。PPI网络中核心基因为HIF-1α、IL-6等;GO功能富集分析显示,可能影响RNA转录、蛋白结合等过程;KEGG通路富集分析显示,显著富集的通路为癌症通路、乙型肝炎通路、PI3K/Akt、HIF-1通路等。动物实验结果显示,与模型组比较,白花蛇舌草组肝脏组织病理学明显改善,白花蛇舌草组大鼠血清GPT、GOT、IL-6、IL-1β、TGF-β1水平降低(P<0.01),Alb水平升高(P<0.01),肝组织中PI3K、Akt、HIF-1α、VEGF蛋白表达降低(P<0.01)。结论白花蛇舌草可通过作用VEGF、EGFR、HIF-1α与IL-6靶点,调控PI3K/Akt、HIF-1通路等发挥抗肝纤维化作用,并具有抗炎、抗血管新生、抗肿瘤等生物学功能。

关键词：白花蛇舌草肝纤维化网络药理学药理作用分子作用机制(中药)

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玉郎伞多糖对S_(180)荷瘤小鼠氧化应激、免疫调节及血管生成的影响

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湖南中医药大学学报 2022年第11期42卷 1849-1854页

作者：覃妮陆世银罗文婷陈家豪龙嘉怡黄仁彬柳州市中医医院(柳州市壮医医院)药学部广西柳州545026 广西医科大学药学院广西南宁530021

目的探讨玉郎伞多糖(Yulangsan polysaccharides,YLSPS)对S_(180)荷瘤小鼠的体内抗肿瘤作用及其机制。方法以昆明小鼠建立S_(180)皮下移植瘤模型,随机分为模型组、环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX 20 mg·kg^(-1)·d^(-1))组、YLSPS低,中,高剂量(150、300、600 mg·kg^(-1)·d^(-1))组,连续给药8 d后处死小鼠,检测小鼠瘤体质量、抑瘤率及其脏器指数;通过HE染色观察小鼠移植瘤细胞的形态学特征;测定血清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物(glutathione peroxidase,GSH-PX)活性,丙二醛(malondialdehyde,MDA)及过氧化氢酶(catalase,CAT)的含量;采用ELISA法测定小鼠血清中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的含量;免疫组织化学法检测药物对微血管密度(microvascular density,MVD)表达的影响。结果与模型组比较,YLSPS(300、600 mg·kg^(-1)·d^(-1))可显著抑制S_(180)荷瘤小鼠的肿瘤生长,提高小鼠脾脏指数和胸腺指数(P<0.05或P<0.001);移植瘤HE染色表明,相较于模型组,经YLSPS干预后肿瘤细胞异型性降低,病理性核分裂减少,可见散在及融合成片状的坏死灶;血清生化指标显示YLSPS(300、600 mg·kg^(-1)·d^(-1))能够明显升高血清GSH-Px、CAT和SOD水平,降低血清MDA及VEGF水平(P<0.05或P<0.001);ELISA法与免疫组织化学法表明YLSPS(300、600 mg·kg^(-1)·d^(-1))可显著抑制VEGF、MVD的表达(P<0.05或P<0.001)。结论YLSPS可抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,其机制可能与增强小鼠免疫功能、抗氧化作用及抑制S_(180)肿瘤组织中VEGF与MVD的表达有关。

关键词：玉郎伞多糖 S_(180)荷瘤小鼠微血管密度血管内皮生长因子抗氧化

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FTIR结合PLS-DA鉴别不同陈化时间六堡茶熟茶

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食品工业 2016年第2期37卷 20-22页

作者：郑华陆世银苏志恒梁永红宋慧广西医科大学医学科学实验中心南宁530021 广西医科大学药学院南宁530021

对不同陈化时间的六堡茶熟茶进行了傅里叶变换红外光谱(FTIR)法分析,考察了不同陈化时间六堡茶熟茶与红外光谱特征的关系,结合偏最小二乘判别分析(PLS-DA)进行鉴别,并找出其化学组分差异。样本在主成分空间中区分为不同的类别,基本实现... 详细信息

对不同陈化时间的六堡茶熟茶进行了傅里叶变换红外光谱(FTIR)法分析,考察了不同陈化时间六堡茶熟茶与红外光谱特征的关系,结合偏最小二乘判别分析(PLS-DA)进行鉴别,并找出其化学组分差异。样本在主成分空间中区分为不同的类别,基本实现不同陈化时间六堡茶熟茶的鉴别。载荷因子分析显示,5个不同陈化时间六堡茶熟茶化学组成的差异主要体现在茶多酚、咖啡碱及茶多糖3类物质成分含量的不同。可以反映不同陈化时间六堡茶熟茶主要成分组成的差异并进行快速的鉴别。

关键词：六堡茶红外光谱偏最小二乘判别法载荷因子分析陈化时间

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济生肾气汤加三七、鳖甲对CCl4诱导肝纤维化大鼠模型的干预作用及机制

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海南医学院学报 2022年第10期28卷 742-749页

作者：钟镇康周晓玲王月明吴腾陆世银沈新辉广西中医药大学研究生院广西南宁530001 柳州市中医医院广西柳州545001

目的:探讨济生肾气汤加三七、鳖甲对四氯化碳(CCl;)诱导的肝纤维化大鼠模型的干预作用及具体机制。方法:将SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药治疗(低、中、高剂量)组,模型组与中药治疗组采用腹腔注射40%CCl4橄榄油溶液,每周2次,... 详细信息

目的:探讨济生肾气汤加三七、鳖甲对四氯化碳(CCl;)诱导的肝纤维化大鼠模型的干预作用及具体机制。方法:将SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药治疗(低、中、高剂量)组,模型组与中药治疗组采用腹腔注射40%CCl4橄榄油溶液,每周2次,持续8周的方法复制肝纤维化大鼠模型。造模成功后,各给药组分别灌胃相应药物,对照组及模型组予等体积蒸馏水灌胃,每天1次,治疗4周。末次灌胃结束后,对肝组织切片进行HE染色和Masson染色观察肝组织病理形态学,检测肝功能指标(ALT、AST);ELISA法测定转化生长因子β(TGF-β)、血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)、壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;RT-PCR法测定Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白(Col-Ⅰ、Col-Ⅲ)及TGF-βmRNA的表达水平。结果:HE和Masson染色显示模型组大鼠大量肝细胞炎症坏死,肝组织胶原纤维广泛增生,纤维间隔相互连接,假小叶形成,而中药各剂量治疗组大鼠的肝脏炎症及肝纤维化程度均较模型组减轻;与模型组比较,中药治疗组ALT、AST、TGF-β、Ang-Ⅱ、CHI3L1、IL-1、IL-6、TNF-α水平均下降,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、TGF-βmRNA表达均减少,其中以中药中、高剂量组效果最为明显(P<0.01)。结论:济生肾气汤加三七、鳖甲对CCL4诱导的大鼠肝纤维化具有明显的改善作用,其作用机制可能与下调血管紧张素转换酶(ACE)-血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)-血管紧张素Ⅱ受体1(AT1R)信号通路相关基因表达,降低相关细胞因子水平、促进细胞外基质降解方面等有关。

关键词：济生肾气汤加三七、鳖甲肝纤维化大鼠 ACE-Ang-Ⅱ-AT1R信号通路

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基于^1H-NMR的当归四逆汤抗凝血作用的代谢组学研究

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中国中药杂志 2015年第20期40卷 4088-4093页

作者：郑华秦霞宋慧唐超玲阮俊翔张洪也陆世银梁永红苏志恒广西医科大学医学科学实验中心广西南宁530021 广西医科大学药学院广西南宁530021

采用1H-NMR代谢组学技术研究当归四逆汤抗凝血作用机制以及对小鼠血浆内源性代谢产物的影响。当归四逆汤灌胃给药1周后,观察当归四逆汤对小鼠凝血酶时间的影响,并采用1H-NMR技术分析小鼠血浆代谢指纹图谱,采用主成分分析(principal comp... 详细信息

采用1H-NMR代谢组学技术研究当归四逆汤抗凝血作用机制以及对小鼠血浆内源性代谢产物的影响。当归四逆汤灌胃给药1周后,观察当归四逆汤对小鼠凝血酶时间的影响,并采用1H-NMR技术分析小鼠血浆代谢指纹图谱,采用主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares-discrimination analysis,OPLS-DA),研究给药组与正常组之间的代谢物组差异,筛选与抗凝血作用相关的潜在生物标志物。连续当归四逆汤灌胃给药1周后,能显著延长小鼠凝血酶时间(P<0.05)。代谢组学结果显示空白组和复方组能明显区分,与空白组比较,复方组内源性代谢产物肉碱、苯丙氨酸和异丁酸显著上调(P<0.01),赖氨酸、组氨酸和胆固醇显著下调(P<0.05)。肉碱、苯丙氨酸、组氨酸和胆固醇为当归四逆汤抗凝过程中潜在代谢标志物,当归四逆汤可能通过调节脂质代谢、能量代谢和氨基酸代谢影响血小板聚集功能和组织因子、纤维蛋白酶的表达来发挥抗凝作用。

关键词：当归四逆汤抗凝 1H-NMR 代谢组学代谢标志物

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水轮机渗铝转轮抗汽蚀抗磨损的试验研究

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江西水利科技 1986年第3期 78-89页

作者：陆世银务源县水电局

本文阐述低碳钢渗铝后的金相组织及其性能,并从水轮机汽蚀磨损的机理着眼,试用该金相组织之性能以提高水轮机抗汽蚀抗磨损抗腐蚀的本领。通过一些典型电站的运行试验,显示了低碳钢渗铝的优良性能,而且某些方面可与18-8不锈钢相媲美。

关键词：转轮汽蚀轮(机械元件) 空蚀水泵水轮机渗铝层抗磨损试验研究

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基于组效关系的壮药岩黄连提取物抑制人肝癌细胞SMMC-7721活性成分辨识研究

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时珍国医国药 2016年第10期27卷 2372-2375页

作者：唐超玲郑华王捷宋慧陆世银程邦吴方张洪也阮俊翔梁永红苏志恒广西医科大学药学院广西南宁530021 广西医科大学医学科学实验中心广西南宁530021 广西医科大学制药厂广西南宁530021

目的基于高效液相色谱(HPLC)分析方法,结合人肝癌SMMC-7721细胞模型,通过组效关系研究,寻找与药效活性相关的成分。方法通过分析岩黄连正交9个提取物样品,以HPLC对岩黄连提取物进行成分表征,确定了20个共有峰。采用MTT法检测岩黄连提取... 详细信息

目的基于高效液相色谱(HPLC)分析方法,结合人肝癌SMMC-7721细胞模型,通过组效关系研究,寻找与药效活性相关的成分。方法通过分析岩黄连正交9个提取物样品,以HPLC对岩黄连提取物进行成分表征,确定了20个共有峰。采用MTT法检测岩黄连提取物抑制人肝癌细胞SMMC-7721活性,以抑制率为评价指标,将其与HPLC图共有色谱峰的相对峰面积进行正交投影的偏最小二乘法(orthogonal partial least squares,OPLS)分析,根据变异权重系数(variable importance in the projection,VIP)辨识显著活性成分。结果结果表明,岩黄连提取物中11个共有峰与其抑制SMMC-7721细胞活性显著相关,贡献较大的共有峰依次为15>12>20>1>17>10>4>2>5>11>3,其中15号与17号共有峰分别为脱氢卡维丁与巴马汀。经细胞试验验证,发现0.20,0.25,0.30mg·ml-1脱氢卡维丁组细胞增殖抑制率分别为(69.67±1.0)%,(72.47±0.3)%,(73.08±1.1)%,0.20,0.30,0.40mg·ml-1巴马汀组细胞增殖抑制率分别为(36.14±2.8)%,(66.03±0.7)%,(70.66±0.6)%。结论通过组效关系研究发现岩黄连提取物中脱氢卡维丁和巴马汀对肝癌SMMC-7721细胞的增殖具有抑制作用,提示这两个化学物质可能是岩黄连抗肝癌作用的潜在活性成分。

关键词：岩黄连提取物组效关系人肝癌细胞SMMC-7721 脱氢卡维丁巴马汀

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气相色谱法测定医用聚乳酸薄膜中三氯甲烷残留量

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实用口腔医学杂志 2018年第1期34卷 30-32页

作者：吕丽华黄华陆世银苏志恒广西医科大学附属口腔医院南宁530021 广西医科大学药学院

目的:建立医用聚乳酸薄膜中三氯甲烷残留量的测定方法。方法:采用直接进样色谱法进行测定,使用RESTEK RTX毛细管色谱柱,检测器:电子捕获检测器(ECD),检测器温度:270℃,柱温:85℃,维持3 min;分流进样方式,分流比:10∶1;进样口温度:200℃... 详细信息

目的:建立医用聚乳酸薄膜中三氯甲烷残留量的测定方法。方法:采用直接进样色谱法进行测定,使用RESTEK RTX毛细管色谱柱,检测器:电子捕获检测器(ECD),检测器温度:270℃,柱温:85℃,维持3 min;分流进样方式,分流比:10∶1;进样口温度:200℃;载气:高纯氮气,流速:1.0 ml/min;进样量:1μl。结果:三氯甲烷在25~2 000 ng/ml范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9);检测限为1.50 ng/ml,定量限为4.62 ng/ml;平均回收率为98.35%,RSD=1.98%。结论:本实验方法灵敏、准确,可作为医用聚乳酸薄膜中三氯甲烷残留量的检测方法。

关键词：气相色谱三氯甲烷电子捕获检测器(ECD) 聚乳酸薄膜

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