检索结果-南通市图书馆

Recombinant Expression and Purification of Mouse Nectin-like 4 Glycoprotein in 293ET Cell Line

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Chinese Medical Sciences Journal 2018年第1期33卷 1-8页

作者：李冬冬安泰刘枭阴彬彭小忠舒鹏程中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院国家医学分子生物重点实验室

To screen the transient and stable cell lines with high production of Nectin-like 4(Necl-4)protein.Methods First,cDNA sequences encoding the extracellular domain of Necls were cloned into the modified vector pAPtag at the N terminus of alkaline phosphatase(AP)for fusion expression.Next,293ET cells stably expressed Necls-AP fusion protein and secreted it into the culture medium which were detected by the AP activity assay and Western blot analysis.Then,by adding N-glycosylation processing inhibitor kifunensine into the medium,complex glycan was inhibited to generate.The residual glycan of purified protein was removed by endoglycosidase H.Finally,AP protein was removed by using human rhinovirus protease and size exclusion chromatography.The concentration of purified Necl-4 protein was monitored by measuring the absorbance at 280 nm and analyzed by SDS-PAGE.Results The transient and stable cell lines with high production of Necl-4 protein were screened by the color reaction with the AP-tag in the recombinant vector.The soluble and active form of purified Necl-4 protein was obtained after deglycosylation of native N-glycan protein with an expression level of 4 mg/L culture and purity of 95%.Conclusions By using modified AP mammalian protein expression system,we can easily screen the high productive stable cell lines by using AP activity assay.By adding mannosidase inhibitor kifunensine into the medium and cutting purified protein by using endoglycosidase H,we can obtain deglycosylated Necl-4 protein in milligram quantities.Our method might throw a light on the expression and purification of glycoprotein for structural and functional studies.

关键词： Nectin-like immunoglobulin membrane protein fast and easy screening glycosylation mammalian cell

miR-9和miR-9＊在SAMP8小鼠衰老中的功能及机制

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国医学科学院学报 2015年第3期37卷 253-258页

作者：刘伟刘畅阴彬彭小忠中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院北京协和医学院人体解剖与组织胚胎学系北京100005 中国医学科学院北京协和医学院神经科学中心北京100005

目的探讨miR-9和miR-9*在SAMP8小鼠衰老中的功能及机制。方法选取4-、8-、12-月龄快速老化倾向小鼠(SAMP8)作为研究对象,并以同月龄快速老化抵制小鼠(SAMR1)为对照,每组3只,取脑,切片进行原位杂交检测miR-9和miR-9*的表达;分别以miR-9和... 详细信息

目的探讨miR-9和miR-9*在SAMP8小鼠衰老中的功能及机制。方法选取4-、8-、12-月龄快速老化倾向小鼠(SAMP8)作为研究对象,并以同月龄快速老化抵制小鼠(SAMR1)为对照,每组3只,取脑,切片进行原位杂交检测miR-9和miR-9*的表达;分别以miR-9和miR-9*的模拟物和抑制物转染N2a细胞,采用流式细胞术检测过表达和敲低miRNA对细胞周期的影响;生物信息学预测miR-9和miR-9*靶基因并进行双荧光素酶报告基因实验验证。结果 miR-9和miR-9*在SAMP8小鼠海马区的表达低于SAMR1小鼠。敲低miR-9和miR-9*都可以增加N2a细胞G1期细胞在群体中的比例,减少S期细胞在群体中的比例,过表达则相反。生物信息学预测并通过文献筛选miR-9的靶基因有PSEN1、SCN2B、MAP3K3和BACE1,miR-9*的靶基因有CDKn1c。荧光素酶报告基因实验证实miR-9的靶基因是MAP3K3,miR-9*的靶基因是CDKn1c。结论 miR-9和miR-9*可能是分别通过其靶基因MAP3K3和CDKn1c在SAMP8小鼠衰老进程中发挥重要作用。

关键词： miR-9 miR-9＊衰老 SAMP8小鼠 SAMR1小鼠靶基因

PCGF1蛋白的表达、纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞与分子免疫学杂志 2011年第1期27卷 71-73页

作者：李辉吴旭东龚燕华阴彬武警医学院组织学与胚胎学教研室天津300162 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 武警医学院生物化学教研室天津300162

目的:原核表达人表观抑制因子Polycomb家族成员PCGF1蛋白片段,并制备其鼠源单克隆抗体(mAb)。方法:应用PCR技术扩增人PCGF1基因编码区部分序列(CDS区第382～567bp的DNA片段)并插入到pET-32a(+)质粒中,在大肠杆菌BL21中进行His-PCGF1-128... 详细信息

目的:原核表达人表观抑制因子Polycomb家族成员PCGF1蛋白片段,并制备其鼠源单克隆抗体(mAb)。方法:应用PCR技术扩增人PCGF1基因编码区部分序列(CDS区第382～567bp的DNA片段)并插入到pET-32a(+)质粒中,在大肠杆菌BL21中进行His-PCGF1-128/189融合蛋白(简写为His-N128/189)的原核表达。利用所表达的融合蛋白中含有的6×His标签进行亲和层析纯化。用所获得的纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术,分别通过ELISA和Western blot法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,用免疫双向扩散法鉴定mAb的Ig亚类。取1株杂交瘤细胞按照常规方法制备腹水,利用Millipore公司的mAb纯化试剂盒纯化mAb,用Western blot法检测mAb的效价。结果:表达纯化了重组人His-N128/189蛋白;筛选出2株可稳定分泌特异性抗人PCGF1 mAb的杂交瘤细胞株,其免疫球蛋白类型均为IgG1类;通过腹水制备和纯化获得高效价(1∶6000)、高特异性的鼠抗人PCGF1 mAb。结论:原核表达的PCGF1片段融合蛋白可以被纯化,并具有足够的蛋白免疫原性,所制备的相应mAb可特异识别内源性和外源性PCGF1蛋白,可以运用于PCGF1基因功能的研究。

关键词： PCGF1 单克隆抗体杂交瘤技术

小RNA干扰PCBP2在神经胶质瘤细胞中对P53相关基因的调节和对细胞增殖的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基础医学与临床 2014年第6期34卷 776-781页

作者：韩为阴彬彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探索多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)表达下调对相关基因和胶质瘤细胞增殖的影响。方法 3株神经胶质瘤细胞系(T98G、U87MG和U251)各分为2组,分别转入特异性靶向PCBP2基因的小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA,用Western blot法检测siRNA对PCBP... 详细信息

目的探索多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)表达下调对相关基因和胶质瘤细胞增殖的影响。方法 3株神经胶质瘤细胞系(T98G、U87MG和U251)各分为2组,分别转入特异性靶向PCBP2基因的小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA,用Western blot法检测siRNA对PCBP2蛋白的抑制效果及对P53蛋白和它的两个靶基因PUMA和BAX的表达影响,同时检测P53共调节因子FHL2和同家族成员FHL1表达变化。用生物素pull-down分析PCBP2是否和FHL家族成员mRNA结合。用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)掺入法检测细胞增殖能力,Hoechst染色观察细胞凋亡率。结果 PCBP2 siRNA转染这3株细胞后使PCBP2蛋白表达水平明显下调(P<0.05);增加P53及它的靶基因PUMA和BAX的蛋白表达(P<0.05);抑制FHL2蛋白(P<0.05),但并不结合其mRNA的3'非编码区(3'UTR);Brd U阳性细胞减少(P<0.05);Hoechst染色阳性细胞增多(P<0.05)。结论抑制PCBP2表达可以增强胶质瘤细胞中P53通路活性,并减弱细胞增殖能力,诱导细胞凋亡。

关键词： RNA干扰多聚胞嘧啶结合蛋白2 P53 细胞增殖细胞凋亡

全面质量管理在特种设备检验检测机构中的应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国科技期刊数据库工业A 2022年第12期 0100-0102页

作者：阴祖彬山东省特种设备检验研究院集团有限公司山东济南250101

当前随着社会经济的不断发展,我国特种设备的数量在不断增加。与其他设备不同,特种设备本身具有高危险性,在使用过程中必须要做好严格的检验检测工作以及预防准备工作。在市场不断扩张的背景下,特检设备的检验检测工作也受到了高度的重... 详细信息

当前随着社会经济的不断发展,我国特种设备的数量在不断增加。与其他设备不同,特种设备本身具有高危险性,在使用过程中必须要做好严格的检验检测工作以及预防准备工作。在市场不断扩张的背景下,特检设备的检验检测工作也受到了高度的重视。本文以特种设备检验检测机构为主体,对其实施全面质量管理的意义、发展现状、质量管理中存在的问题以及具体的改进策略等展开探讨,以期能为相关人员提供参考。

关键词：特种设备检验检测全面质量管理应用策略

Sirt6基因脑特异性敲除对老年小鼠大脑皮层的影响

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中华行为医学与脑科学杂志 2021年第6期30卷 481-488页

作者：王新寰侯琳阴彬刘伟彭小忠中国医学科学院基础医学研究所(北京协和医学院基础学院)医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系医学灵长类研究中心神经科学中心北京100005 中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118

目的研究衰老基因沉默信息调节因子6(silent information regulator 6,Sirt6)敲除后对于老年小鼠大脑皮层的影响。方法构建Sirt6-flox转基因小鼠,利用Emx1-Cre工具鼠对小鼠脑组织进行特异性Sirt6基因敲除。根据基因分型,将11只野生型小... 详细信息

目的研究衰老基因沉默信息调节因子6(silent information regulator 6,Sirt6)敲除后对于老年小鼠大脑皮层的影响。方法构建Sirt6-flox转基因小鼠,利用Emx1-Cre工具鼠对小鼠脑组织进行特异性Sirt6基因敲除。根据基因分型,将11只野生型小鼠作为对照组(WT组),10只Sirt6基因敲除小鼠作为条件敲除组(cKO组)。对老年小鼠的体型和体质量进行测量,HE染色比较大脑皮层厚度;EdU标记分析大脑神经再生,Western blot检测衰老相关RNA结合蛋白HuR和凋亡相关蛋白Caspase-3的表达,同时检测皮层内组蛋白乙酰化水平。结果成功构建Sirt6脑组织特异性敲除小鼠,12月龄组实验中,与WT组小鼠脑组织面积[(2.07±0.22)cm^(2)]和皮层厚度[(970.56±80.91)μm]相比,Sirt6 cKO组脑组织面积[(1.61±0.14)cm^(2)]和皮层厚度[(822.88±53.94)μm]均偏小,均差异有统计学意义(均P0.05)。结论Sirt6的脑组织特异性缺失会导致老年小鼠大脑神经再生减少,衰老加剧,凋亡增加,这可能是导致其大脑皮层变薄,脑组织萎缩的原因,推测其分子机制与Sirt6敲除后乙酰化水平升高有关。

关键词：沉默信息调节因子6 条件性基因敲除组蛋白乙酰化神经再生衰老

大型水电工程构建双重预防机制的探索与实践——以白鹤滩水电站为例

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国安全生产科学技术 2020年第2期16卷 155-160页

作者：龚远平阴彬杨建业张旭王伟中国三峡建设管理有限公司四川宁南615421 中国能源研究会北京100038

为有效遏制大型水电工程中重特大事故的发生,探索并构建双重预防机制。以白鹤滩水电站为例,系统介绍双重预防机制构建流程,在大量工程项目风险控制实践的基础上,总结提炼出“以安全设计减少风险源头、以本质安全强化风险管控、以安全隐... 详细信息

为有效遏制大型水电工程中重特大事故的发生,探索并构建双重预防机制。以白鹤滩水电站为例,系统介绍双重预防机制构建流程,在大量工程项目风险控制实践的基础上,总结提炼出“以安全设计减少风险源头、以本质安全强化风险管控、以安全隐患微信系统深化隐患排查治理”作为重要途径和手段。结果表明:以建设单位为主导,在参建单位主动参与的管理模式下,使用反馈分析并持续改进的方法,可形成统一、规范、高效的双重预防机制。

关键词：白鹤滩水电站项目安全管理双重预防机制风险评估隐患排查与治理

两种不同缓冲系统的多聚甲醛对鼠脑组化结果的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基础医学与临床 2014年第5期34卷 699-700页

作者：杜志荣张琳阴彬彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京100005

哺乳动物大脑皮质的发育长期以来都是发育生物学研究的焦点和热点.目前用于研究大脑发育的组织化学技术主要有原位杂交技术和免疫荧光染色,而这些技术均需要前期的标本制备,尤其是取材后的组织固定.组织固定的主要目的是尽可能保持组织... 详细信息

哺乳动物大脑皮质的发育长期以来都是发育生物学研究的焦点和热点.目前用于研究大脑发育的组织化学技术主要有原位杂交技术和免疫荧光染色,而这些技术均需要前期的标本制备,尤其是取材后的组织固定.组织固定的主要目的是尽可能保持组织内待检测物的原位性、完整性和免疫活性[1],所以组织固定的效果往往决定着组化实验最终结果的成败.4％多聚甲醛（paraformaldehyde,PFA）因其优良的理化性质成为目前固定标本组织的常用固定剂之一[2-3],而关于其配制方法,尤其是用于溶解它的溶剂的选择目前还未有定论.本研究以此问题为出发点,比较不同溶剂的4％PFA对鼠脑组织的固定效果,探讨最佳的组织固定方法.

关键词：多聚甲醛组化鼠脑组织化学技术系统缓冲免疫荧光染色原位杂交技术

小鼠皮质神经祖细胞分化过程中Twist1的功能

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基础医学与临床 2014年第6期34卷 757-761页

作者：付红烨阴彬彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的检测Twist1在小鼠大脑皮质发育过程不同时间点的表达模式,并对其基因功能进行初步研究。方法在小鼠皮质组织切片中,用原位杂交检测Twist1基因的表达;构建基因的过表达克隆,在小鼠胚胎中在体转染神经祖细胞,检测神经祖细胞的分化情... 详细信息

目的检测Twist1在小鼠大脑皮质发育过程不同时间点的表达模式,并对其基因功能进行初步研究。方法在小鼠皮质组织切片中,用原位杂交检测Twist1基因的表达;构建基因的过表达克隆,在小鼠胚胎中在体转染神经祖细胞,检测神经祖细胞的分化情况。结果在选取大脑皮质发育的4个时间点Twist1均有表达,表达部位以室管膜区为主,过表达Twist1后室管膜区的细胞明显减少(P<0.01),中间前体细胞增多(P<0.05)。结论 Twist1在小鼠大脑皮质发育过程中有表达,且在祖细胞表达量较高,Twist1可以促进神经祖细胞分化及迁移。

关键词： Twist1 神经祖细胞分化