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作者：阳揭宇第二军医大学

学位级别：硕士

近几十年来,人们对蛋白和基因的研究有很大的突破,但是对于早期发现的广泛存在于细胞表面且表达各异的糖缀合物却知之不多。Galectin(半乳糖凝集素)是细胞质蛋白,广泛地分布于细胞内外,可以靶向分泌到细胞核内或在胞浆中,与细胞质和细... 详细信息

近几十年来,人们对蛋白和基因的研究有很大的突破,但是对于早期发现的广泛存在于细胞表面且表达各异的糖缀合物却知之不多。Galectin(半乳糖凝集素)是细胞质蛋白,广泛地分布于细胞内外,可以靶向分泌到细胞核内或在胞浆中,与细胞质和细胞核中的蛋白相互作用,传导细胞信号,调节mRNA的剪切、细胞周期、细胞增殖和细胞的凋亡。或者通过非经典途径和内质网高尔基体复合物,释放到细胞外基质中,连接细胞外基质中包含β-半乳糖苷的糖缀合物和细胞表面的黏附因子,调节细胞的黏附和分化。至今已经成功克隆了15个家族成员,Galectin-1及Galectin-3等已研究得较为深入。 Galectin-9是半乳糖结合蛋白家族的成员之一,属于动物凝集素,能够与细胞表面和细胞间质中的半乳糖特异性的结合,发挥细胞之间以及细胞与间质之间的信号传递作用。Galectin-9结构上具有两个羰基结合区域(CRD),分子量为36 kDa,中间由连接肽连接,具有比较明确的激活嗜红细胞,分化单核细胞的作用。人类Galectin-9是在Hodgkin’s病人的组织克隆出来的,并广泛分布于人体。其生物活性主要介入细胞黏附,增殖,凋亡,细胞周期。在免疫反应中,可以在T细胞浸润的组织中不同的细胞上如内皮细胞、成纤维细胞、肺上皮细胞和心肌细胞等检测到。提示Galectin-9在调控免疫反应中起重要作用。最新文献提示Galectin-9在数种肿瘤中有抗转移潜力,例如乳癌,鳞状细胞癌。还有报道Galectin-9可诱导树突状细胞成熟。 T细胞免疫球蛋白粘蛋白3(T cell immunoglobulin mucin 3,TIM3)是分化成熟Th1细胞表达的分子,而不表达在Th2细胞表面,现已证明Galectin-9作为其配体,此途径已明确是Th1细胞免疫作用的重要调节因子,可诱导Th1细胞的凋亡。且以鼠重组Galectin-9结合TIM-3可显著抑制同种异体移植排斥和延长同种异体皮肤移植的生存。免疫抑制是通过免疫抑制剂对T、B淋巴细胞的活化、分化好增殖的抑制以及诱导调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)的负向调节发挥抑制免疫系统的作用。CD4CD25Tregs亚群具有免疫调节功能,是机体内调节性T细胞的主要类型,于1995年首次由Sakaguchi等提出。CD4CD25Tregs的免疫学特点是免疫无反应性和免疫抑制性,可以通过下调机体的免疫应答维持对自身和非自身抗原的免疫耐受,CD4CD25Tregs数量低下和功能紊乱可导致多种自身免疫性疾病,另外,它们在某些严重的炎症性疾病和下调肿瘤免疫应答中也起重要作用。CD4CD25Tregs以细胞接触依赖性方式抑制CD4和CD8 +T细胞。在无抗原呈递细胞出现的情况下仍可发生抑制现象,说明细胞间接触方式是在抑制T细胞与反应T细胞间进行的,CD4CD25Tregs通过它们的TCR活化成为抑制性效应T细胞,细胞一旦激活,其抑制功能是非特异性的,可抑制CD4和CD8 T细胞的活性。CD4CD25Tregs还抑制自然杀伤细胞、B细胞以及其他免疫细胞的功能。在人类也发现了Tregs参与免疫耐受的证据,Tregs升高往往与移植器官功能良好、免疫耐受的出现等呈现正相关。转录因子Foxp3基因参与Treg细胞的中枢性和外周性生成过程,并影响Treg细胞免疫调节功能的发挥。 Galectin-9是半乳糖凝集素之一,诱导嗜酸性细胞,肿瘤,及T细胞的凋亡,优先诱导CD4T细胞凋亡,我们设想通过分析Galectin-9是否能在体能诱导Treg细胞的分化和增殖,负向调节发挥抑制免疫系统的作用,从而影响受体对移植物的免疫耐受的形成。因此本实验首先构建小鼠重组腺病毒载体pAdeasyTM- Galectin-9,经PCR、酶切、测序鉴定及Westernblot检测,结果显示,携带小鼠Galectin-9基因的腺病毒载体构建成功。经过病毒的扩增及滴度检测,我们构建的小鼠pAdeasyTM- Galectin-9腺病毒获得了较高的滴度。通过将外源性重组Galectin-9输入小鼠心脏移植模型体内观察对移植物生存的影响,并且观察Treg细胞的分化,增殖,探讨Galectin-9可能诱导免疫耐受的作用提供新的思路。第一部分Galectin-9腺病毒载体的构建腺病毒载体因其具有基因组结构简单、宿主细胞范围广、滴度高、感染效率高、无插入突变危险等优势,因此我们选择了AdEasy? Adenoviral Vector System体系构建Galectin-9载体。首先取经过LPS刺激4小时后的小鼠脾脏,抽提其mRNA,然后根据报道及Genebank发布的基因和蛋白序列,设计带酶切位点的特异性引物,RNA逆转录PCR(RT-PCR)扩增获得小鼠Galectin

关键词： Galectin-9 脂多糖 PCR Adenoviral Vector 调节性T细胞小鼠空病毒 Foxp3 体内

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重组Galectin-9腺病毒对心脏移植小鼠Treg细胞分化和增殖的影响

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第二军医大学学报 2010年第6期31卷 595-598页

作者：阳揭宇郭闻渊肖亮傅宏施晓敏刘芳丁国善傅志仁第二军医大学长征医院器官移植科上海200003

目的观察重组Galectin-9腺病毒对小鼠心脏移植物生存期及调节性T(Treg)细胞分化和增殖的影响。方法建立小鼠心脏移植模型,随机均分为3组(n=10):对照组(术后用0.9%NaCl溶液)、空腺病毒组、重组Galectin-9腺病毒组,记录心脏移植物生存时间... 详细信息

目的观察重组Galectin-9腺病毒对小鼠心脏移植物生存期及调节性T(Treg)细胞分化和增殖的影响。方法建立小鼠心脏移植模型,随机均分为3组(n=10):对照组(术后用0.9%NaCl溶液)、空腺病毒组、重组Galectin-9腺病毒组,记录心脏移植物生存时间,于移植心停搏或术后14d取脾,分离单个核细胞,流式细胞仪检测CD4+CD25+Treg细胞比例。ELISA法检测外周血IL-10、TGF-β1浓度。结果与对照组、空腺病毒组相比,重组Galectin-9腺病毒组心脏移植物生存时间明显升高(P<0.01),重组Galectin-9腺病毒组CD4+CD25+Treg细胞比例明显升高(P<0.01)。重组Galectin-9腺病毒组IL-10、TGF-β1的含量明显高于对照组及空腺病毒组(P<0.01)。结论重组Galectin-9腺病毒能促进体内CD4+CD25+Treg细胞的分化与增殖,明显提高小鼠心脏移植物的生存时间。

关键词： Galectin-9 调节性T淋巴细胞心脏移植细胞分化细胞增殖

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雷公藤内酯醇下调P53基因甲基化抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖

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中国肿瘤生物治疗杂志 2011年第3期18卷 270-274页

作者：吴瑛刘芳郭文渊肖亮阳揭宇谢江平丁国善解放军第85医院药剂科上海200235 第二军医大学长征医院器官移植科上海200003

目的:研究雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响以及对P53基因的去甲基化作用。方法:MTT法检测TP对SMMC-7721细胞增殖的影响,甲基特异性PCR检测TP对SMMC-7721细胞P53基因甲基化的影响,RT-PCR检测SMMC-7721细胞... 详细信息

目的:研究雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响以及对P53基因的去甲基化作用。方法:MTT法检测TP对SMMC-7721细胞增殖的影响,甲基特异性PCR检测TP对SMMC-7721细胞P53基因甲基化的影响,RT-PCR检测SMMC-7721细胞甲基转移酶DNMT1、DNMT3a、DNMT3bmRNA的表达,Western blotting检测SMMC-7721细胞中P53蛋白的表达。结果:TP剂量依赖性抑制SMMC-7721细胞的增殖(P<0.05),40 ng/ml时的抑制率达(73.5±3.02)%,其半数抑制浓度(IC50)约为20 ng/ml。TP显著抑制SMMC-7721细胞中DNMT1、DNMT3a、DNMT3bmRNA的表达(P<0.05,P<0.01);TP作用后P53基因的高甲基化被逆转,并呈剂量依赖性;TP可显著增强SMMC-7721细胞中P53蛋白的表达。结论:TP可通过抑制甲基转移酶使P53基因去甲基化,促进P53蛋白的表达,从而抑制SMMC-7721细胞的增殖。

关键词：雷公藤内酯醇 P53基因甲基化 SMMC-7721细胞甲基转移酶

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***标记ICOS-Ab荧光示踪技术评估小鼠心脏移植术后急性排斥反应

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第二军医大学学报 2012年第7期33卷 721-726页

作者：阳揭宇傅宏王全兴刘芳施晓敏郭闻渊宋少华李瑞东傅志仁丁国善第二军医大学长征医院器官移植科上海200003 第二军医大学基础部免疫学教研室上海200433

目的探讨以T细胞活化表达的可诱导共刺激分子(inducible co-stimulatory molecule,ICOS)为基础的荧光示踪技术无创诊断小鼠心脏移植后急性排斥反应的可行性。方法以小鼠颈部异位心脏移植为模型,分为同系移植、同种移植、同种移植+他克莫... 详细信息

目的探讨以T细胞活化表达的可诱导共刺激分子(inducible co-stimulatory molecule,ICOS)为基础的荧光示踪技术无创诊断小鼠心脏移植后急性排斥反应的可行性。方法以小鼠颈部异位心脏移植为模型,分为同系移植、同种移植、同种移植+他克莫司(tacrolimus,FK506)治疗(同种移植治疗组)及同种移植治疗后停药组,分别在移植术后1、3、5、7d,采用荧光染料***标记抗小鼠ICOS抗体(***-ICOS-Ab)经尾静脉注入移植小鼠,用荧光实时显像仪观察移植物荧光图像变化;同时用流式细胞仪检测各组小鼠脾脏T细胞表面ICOS表达,H-E染色分析心脏移植物病理改变。结果同系移植及同种移植治疗组小鼠移植术后各时间点基本不显影;同种移植术后1d,移植物荧光图像无明显变化,但术后3、5、7d荧光逐渐增强,术后7d时荧光强度最明显;同种移植治疗后停药组停药3d移植物荧光强度逐渐增强,停药5、7d后强度明显增强。H-E染色表明:各时间点同系移植及同种移植治疗组小鼠心脏移植物无明显排斥反应;同种移植及同种移植治疗后停药组在术后(或停药后)1d移植物无明显排斥反应,术后3、5、7d排斥反应逐渐出现并加重。流式细胞仪检测显示:术后1d,各组脾脏T细胞表达ICOS水平无明显差异;同系移植及同种移植治疗组在各时间点基本不表达ICOS,但同种移植及同种移植治疗后停药组在术后(或停药后)3、5、7dICOS表达逐渐增加(P<0.05)。结论 ICOS表达强度与心脏移植后排斥反应强度有关,荧光标记的ICOS抗体可能有助于无创评估移植术后急性排斥反应的发生及程度。

关键词：心脏移植可诱导共刺激分子移植物排斥他克莫司荧光抗体技术

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肝胆管结石患者肝部分切除术后腹腔感染危险因素分析

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中国普通外科杂志 2022年第8期31卷 1024-1030页

作者：阳揭宇陆芝林林益坤中国人民解放军九一八一一部队门诊部广东潮州521000 中国人民解放军海军陆战队医院普通外科广东潮州521000

背景与目的:腹腔感染是肝胆管结石患者肝部分切除术后常见的并发症,将增加患者痛苦和治疗费用,延长住院时间,甚至造成感染性休克,危及生命。本研究通过回顾性分析探讨此类患者肝部分切除术后腹腔感染发生的危险因素,为预防术后腹腔感染... 详细信息

背景与目的:腹腔感染是肝胆管结石患者肝部分切除术后常见的并发症,将增加患者痛苦和治疗费用,延长住院时间,甚至造成感染性休克,危及生命。本研究通过回顾性分析探讨此类患者肝部分切除术后腹腔感染发生的危险因素,为预防术后腹腔感染提供依据。方法:回顾性分析2017年3月—2021年2月中国人民解放军海军陆战队医院收治的54例行肝部分切除术治疗肝胆管结石患者的临床资料,对可能导致术后腹腔感染发生的危险因素先进行单因素分析,将有统计学意义的因素进一步应用多因素Logistic回归分析。结果:54例患者中,8例(14.8%)患者术后发生腹腔感染并发症,无再手术病例,均治愈。单因素分析显示年龄≥60岁(χ^(2)=7.091,P=0.008)、术前血清白蛋白(ALB)水平<35 g/L(χ^(2)=7.858,P=0.005)、术野冲洗水量<2 L(χ^(2)=6.291,P=0.012)与术后腹腔感染并发症发生有关;进一步Logistic回归分析显示,高龄(P=0.025)、术前低ALB水平(P=0.044)、术野冲洗水量<2 L(P=0.019)是术后腹腔感染并发症发生的独立危险因素。结论:肝内胆管结石患者肝部分切除术后腹腔感染发生率较高,高龄(≥60岁)、术前低ALB水平(<35 g/L)、术野冲洗水量不足(<2 L)是其发生的独立危险因素,因此,改善术前ALB水平及术中充分冲洗术野有利于预防术后腹腔感染的发生。

关键词：胆石症肝切除术腹腔内感染危险因素

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冲击下铁的各向异性对晶界附近相变的影响

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物理学报 2024年第3期73卷 217-224页

作者：张学阳胡望宇戴雄英湖南工程学院计算科学与电子学院湘潭411104 湖南大学材料科学与工程学院长沙410082

由于铁在国防和工业领域扮演着重要的角色,因此研究其动态高压下的行为有着重要的意义.本文拟采用大规模非平衡分子动力学方法研究冲击加载下铁的各向异性在双晶铁中对相变的影响,通过追踪模型的局域结构、剪切应力分布和冲击后的形貌特... 详细信息

由于铁在国防和工业领域扮演着重要的角色,因此研究其动态高压下的行为有着重要的意义.本文拟采用大规模非平衡分子动力学方法研究冲击加载下铁的各向异性在双晶铁中对相变的影响,通过追踪模型的局域结构、剪切应力分布和冲击后的形貌特点,分析影响晶界两侧冲击响应的因素.研究表明,沿非中心对称晶向冲击可造成对称晶界两侧的相变阈值、相变路径和相变模式出现较大的差异,考虑到该类型晶界两侧微观结构的对称性,这种不对称的冲击响应与人们的惯性认知存在着偏差.本文揭示了晶格的各向异性对冲击加载下晶界两侧的相变有重要的影响,可以为多晶金属和合金的冲击实验提供一定的理论支持.

关键词：非平衡分子动力学相变晶界

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肝移植术后环孢素微乳剂与他克莫司疗效比较Meta分析

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第二军医大学学报 2008年第6期29卷 663-670页

作者：肖亮傅宏倪之嘉丁国善施晓敏郭闻渊谢江平刘炜阳揭宇高晓刚马钧王正昕傅志仁第二军医大学长征医院肝移植科上海200003

目的:评价肝移植术后以环孢素微乳剂(Neoral)或他克莫司(FK506)为基础的免疫抑制治疗的疗效差异。方法:根据纳入标准.摘录15篇文献中有关试验设计、研究对象特征、研究结果等内容,用RevMan4.2.8软件进行分析。结果:两组的患者/移植物存... 详细信息

目的:评价肝移植术后以环孢素微乳剂(Neoral)或他克莫司(FK506)为基础的免疫抑制治疗的疗效差异。方法:根据纳入标准.摘录15篇文献中有关试验设计、研究对象特征、研究结果等内容,用RevMan4.2.8软件进行分析。结果:两组的患者/移植物存活率、肾毒性和感染发生率差别无统计学意义,RR(95%CI,P)分别为:0.99(0.96～1.02,0.37),0.97 (0.92～1.03,0.30).0.99(0.87～1.13,0.86).1.08(0.97～1.20,0.16);FK506组高血压、急性排斥反应发生率相对较低,而急性排斥反应严重程度无差别,RR(95%CI,P)分别为:1.34(1.15～1.55,0.0001),1.15(1.06～1.26,0.001),1.00(0.92～1.22,0.98);FK506组术后1年的糖尿病发病率显著较高,1年后差异不明显,RR(95%CI,P)分别为:0.72(0.62～0.83,<0.0001),1.47(0.98～2.20,0.06)。结论:两组患者/移植物存活率、肾毒性、感染发生率无显著差异;FK506相对于Neoral能减少急性排斥反应发生,但并不能减轻其严重程度;肝移植术后对于糖尿病患者推荐使用Neoral,高血压患者则以FK506为宜。

关键词：环孢素微乳剂他克莫司肝移植 Meta分析

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基于渐进式认知发现的新型配电网故障定位方法

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高电压技术 2024年第3期50卷 1156-1164,I0022页

作者：刘畅宇王小君尚博阳刘曌北京交通大学电气工程学院北京100044

在“双碳”目标下,持续接入分布式电源的新型配电网对运行可靠性提出了更高的要求,如何在渗透率变化的场景下提高现有故障定位方法的适应能力成为亟需解决的问题。为此,采用元学习特有的学会学习机制,提出了一种基于渐进式认知发现的新... 详细信息

在“双碳”目标下,持续接入分布式电源的新型配电网对运行可靠性提出了更高的要求,如何在渗透率变化的场景下提高现有故障定位方法的适应能力成为亟需解决的问题。为此,采用元学习特有的学会学习机制,提出了一种基于渐进式认知发现的新型配电网故障定位方法。首先,基于现有场景数据采用网络结构搜索算法构建当前场景个性化定位模型;然后,利用元学习算法提取模型构建过程中的知识因子,组成故障定位认知发现库;进而,在数据流和知识流的共同作用下,故障定位模型渐进地实现场景持续变化下的自主进化;最后,在PSCAD仿真平台对所提方法进行了验证。结果表明:所提方法具有定位精度高、鲁棒性强的优点,且在不同渗透率的故障场景下有着良好的泛化能力。研究结果可为基于人工智能的定位方法在实际系统中的应用提供技术支持。

关键词：新型配电网故障定位网络结构搜索元学习渐进式认知发现自主进化

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基于桥梁响应的高速列车横向摇摆力取值研究

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铁道工程学报 2024年第5期41卷 28-33,40页

作者：李奇揭崇清石龙同济大学上海200092 高速铁路轨道技术国家重点实验室北京100081

研究目的:列车的横向摇摆力是桥梁结构横向刚度设计的重要影响因素,然而现行设计横向摇摆力取值未充分考虑动力作用。本文采用车桥耦合仿真分析方法,分析列车车速、桥梁跨度和墩高对横向动力响应的影响。结合移动荷载列过桥理论,研究桥... 详细信息

研究目的:列车的横向摇摆力是桥梁结构横向刚度设计的重要影响因素,然而现行设计横向摇摆力取值未充分考虑动力作用。本文采用车桥耦合仿真分析方法,分析列车车速、桥梁跨度和墩高对横向动力响应的影响。结合移动荷载列过桥理论,研究桥梁横向基频与横向动力响应之间的关系,得到桥梁横向共振发生条件。根据运营活载动效应不大于设计活载动效应的原则,通过设计横向摇摆力乘以横向动力放大系数的方式来更全面地考虑横向摇摆力的动力作用。研究结论:(1)在特定的速度范围内,桥梁结构的横向动力响应超过了设计横向摇摆力计算得出的静力响应,现行设计横向摇摆力取值偏于不安全;(2)简支梁的横向动力响应与跨度之间没有明显的相关性,墩高的影响更加显著,横向动力峰值出现的速度区间随着墩高的增加而减小;(3)对于横向基频在3.5~5 Hz范围内的简支梁,横向动力放大系数可取1.44,而在其他频率范围内,可以不考虑动力放大系数修正;(4)本研究可为高速列车横向摇摆力设计取值提供参考与借鉴。

关键词：车桥耦合高速铁路横向摇摆力共振

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***标记ICOSAb的荧光示踪技术诊断小鼠移植心脏急性排斥反应的研究

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2012中国器官移植大会

作者：阳揭宇傅宏王全兴刘芳施晓敏郭闻渊宋少华李瑞东傅志仁丁国善上海第二军医大学长征医院器官移植科上海第二军医大学基础部免疫教研室

【目的】研究以T细胞活化表达的可诱导共刺激分子(inducible co-stimulatory molecule,ICOS)为基础的小动物成像系统无创诊断移植后急性排斥反应可能性。【方法】以小鼠颈部异位心脏移植为模型,建立同系移植、同种移植、同种移植加他克...

【目的】研究以T细胞活化表达的可诱导共刺激分子(inducible co-stimulatory molecule,ICOS)为基础的小动物成像系统无创诊断移植后急性排斥反应可能性。【方法】以小鼠颈部异位心脏移植为模型,建立同系移植、同种移植、同种移植加他克莫司(tacrolimus,FK506)治疗及同种移植治疗后停药组,分别在1、3、5、7天,采用荧光染料***标记抗小鼠ICOS抗体(***-ICOSAb)尾静脉注入移植小鼠,荧光实时显像观察移植物荧光图像变化;同时以流式细胞仪检测脾脏T细胞表面ICOS表达和HE染色分析心脏移植物病理改变。

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