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hFIX双筛选定点整合系统的研究及两个整合相关蛋白的初步探索

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hFIX双筛选定点整合系统的研究及两个整合相关蛋白的初步探索

作者：阮婕复旦大学

学位级别：硕士

血友病B(hemophilia B)是人凝血IX因子(human clotting factor Ⅸ, hFⅨ)缺乏所引起的一种出血性疾病。基因治疗是遗传型疾病根本的治疗方法。然而遗传病基因治疗的应用依然面临两难的局面。免疫原性风险[1-4]和遗传安全性[1-4]为其应... 详细信息

血友病B(hemophilia B)是人凝血IX因子(human clotting factor Ⅸ, hFⅨ)缺乏所引起的一种出血性疾病。基因治疗是遗传型疾病根本的治疗方法。然而遗传病基因治疗的应用依然面临两难的局面。免疫原性风险[1-4]和遗传安全性[1-4]为其应用中首先需要解决的问题。在前期成功使用rep-RBE定点整合转基因方法通过小鼠尾静脉注射方法获得hFIX长时间表达的实验基础上,本研究构建一种含CMV启动子-RBE元件-TK1基因的筛选标记的人凝血因子IX表达框架的质粒pCMV-RBE-TK1-N2-EFlα-hFIXml。该质粒和rep表达质粒共转染哺乳动物细胞可用于构建定点整合于AAVS1位点表达人类凝血因子Ⅸ的稳定细胞。特点为：携带有RBE顺式元件可以介导rep蛋白依赖的AAVS1位点整合;Neo正筛选基因可以用G418筛选获得整合细胞;RBE元件位于TK1基因和启动子之间,可以用阿昔洛韦去除没有RBE参与的非定点整合细胞;最后获得定点整合于AAVS1位点稳定表达人凝血因子IX的细胞。使用该质粒制备稳定表达人类凝血因子IX的稳定细胞,一方面正负双重筛选可以防止细胞随机突变导致的非整合细胞耐药对转基因细胞群纯净度的影响,提高表达效率;另一方面可以有效预防插入突变导致的基因突变和癌蛋白表达风险。通过常规分子生物学方法取代人类凝血因子IX表达框架可以构建表达其它基因的具有定点整合以及正负筛选的质粒。目的：筛选靶向调控ZNF403基因的microRNAs。方法：利用生物信息学miRNA靶基因预测软件miRWalk,预测能调控ZNF403的miRNAs。构建ZNF403基因3’UTR荧光素酶报告载体,通过双荧光素酶活性测定,初步分析可能调控ZNF403基因表达的niRNAs。使用Real-time PCR方法,在mRNA水平检测miRNAs对ZNF403基因表达的调控作用。结果：]miRNA靶基因预测软件miRWalk针对ZNF4033’UTR预测能调控ZNF403的miRNAs有65个;根据生物信息预测结果和文献分析筛选出4个miRNAs:miR-23, miR-135, miR-199, let-7。然后针对这4个候选miRNAs与ZNF403 3’UTR荧光素酶报告质粒共转染HEK293细胞,双荧光素酶活性测定结果显示实验组与对照组无显著差异,无统计学意义。Real-time PCR结果与荧光素酶实验结果一致。结论：niR-23, miR-135, miR-199, let-7g对ZNF403没有抑制功能,ZNF4033’UTR不存在这4种microRNA的靶点。后期促进复合体／细胞周期体(Anaphase-Promoting Complex/Cyclosome, APC/C)是一种泛素连接酶,在有丝分裂结束时以及细胞周期G1期,APC/C靶向细胞周期调节蛋白的降解[1,2]。共激活因子Cdc20结合到关键有丝分裂底物上,经APC/C将其泛素化而诱导降解。Sp100作为PML-NBs结构的重要组成蛋白,参与了抗病毒,转录调控,细胞凋亡等重要的细胞活动。我们先前的研究发现Cdc20介导Sp100通过泛素-蛋白酶体途径降解,且Sp100中的D-box在底物识别过程中具有重要作用。然而,在PML和DAXX中都存在典型的D-box序列,但是,这两种蛋白都不能被Cdc20所识别降解,提示了D-box可能还需要一些特异性的侧翼序列才能被Cdc20识别,而且Sp100的D-box在物种问并不保守。本研究中,我们构建了一系列含D-box的Sp100截断体和点突变来探讨Cdc20底物识别的必要序列。研究发现GFP-Sp100(152-182 aa)截断体包含D-box但是不能被APC/C-Cdc20降解。GFP-Sp100(151K→G)突变体将潜在泛素结合位点突变后,Sp100降解显著受到抑制。但是,远离D-box的潜在泛素化位点破坏后对Sp100降解没有影响。我们的结果表明,Sp100蛋白中D-box附近泛素化位点(151K)在Cdc20介导的蛋白降解中是必要的。

关键词：人凝血因子IX 血友病B 基因治疗定点整合 ZNF403 microRNA 3’UTR Cdc20 泛素结合位点 Sp100 截断体

高校基层党支部组织力提升对策研究——基于体验学习理论视角

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改革与开放 2020年第13期 59-62页

作者：阮婕中山大学新华学院

党的十九大报告指出,基层党组织建设“要以提升组织力为重点,突出政治功能”。高校基层党支部应立足于实际,以体验学习理论为框架,以实践活动为基点,以体验学习圈为核心,通过发挥政治引领主体作用、创新主题实践活动形式、划分“党员责... 详细信息

党的十九大报告指出,基层党组织建设“要以提升组织力为重点,突出政治功能”。高校基层党支部应立足于实际,以体验学习理论为框架,以实践活动为基点,以体验学习圈为核心,通过发挥政治引领主体作用、创新主题实践活动形式、划分“党员责任区”,切实推进高校党支部组织力建设进一步发展。

关键词：高校党支部组织力体验学习

红色文化融入大学生社会责任感培育的现实意义及路径选择——以广州红色文化为例

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文化创新比较研究 2023年第13期7卷 186-191页

作者：阮婕林静君广州城市职业学院广东广州510000

红色文化是社会责任感的生动体现,是提升大学生责任感的重要依托。当前大学生正处于一个多重文化冲击的大环境之中,主流意识形态面临严峻挑战,这一定程度上导致了当代大学生思想上的困惑与迷茫,缺失社会责任感。该文通过分析红色文化与... 详细信息

红色文化是社会责任感的生动体现,是提升大学生责任感的重要依托。当前大学生正处于一个多重文化冲击的大环境之中,主流意识形态面临严峻挑战,这一定程度上导致了当代大学生思想上的困惑与迷茫,缺失社会责任感。该文通过分析红色文化与社会责任感的逻辑关联,深入分析了红色文化融入大学生社会责任感培育的现实意义,提出了红色文化融入大学生社会责任感培育的路径选择,通过搭建新媒体传播平台、推进校园文化育人、开展实践活动等方式提升大学生社会责任感,并逐步建立能够有效引导的长效机制。

关键词：社会责任感红色文化大学生广州培育实践

网络舆论视域下高校辅导员媒介素养的现实困境及出路

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湖北开放职业学院学报 2020年第13期33卷 106-107,110页

作者：阮婕中山大学新华学院广东东莞523000

良好的媒介素养已成为新媒体背景下辅导员进行网络思想政治教育的必备条件,也成为辅导员从事全方位、全过程育人工作的必要素养。本文从"网络舆论"的角度分析高校辅导媒介素养的内涵,依据辅导员在突发事件中舆论介入能力减弱,话语权削... 详细信息

良好的媒介素养已成为新媒体背景下辅导员进行网络思想政治教育的必备条件,也成为辅导员从事全方位、全过程育人工作的必要素养。本文从"网络舆论"的角度分析高校辅导媒介素养的内涵,依据辅导员在突发事件中舆论介入能力减弱,话语权削弱等现状,提出要从搭建四级网络监管体系、提升网络传播影响力等途径进行探索,建立媒介素养提升的长效机制。

关键词：网络舆论辅导员媒介素养

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试论中学口语交际教学的目标及对策

课程教育研究 2017年第3期 9-10页

作者：阮婕华南师范大学

本文围绕中学口语教学的现状,提出了口语交际应达到的三大目标:合理展开谈话、能够随即应变、生成独特的交际风格。并根据目标提出了课内、课外的提升策略。这种教学应回归了对语言功能的思考,将"交际"放在一个至关重要的位置上,培养学... 详细信息

本文围绕中学口语教学的现状,提出了口语交际应达到的三大目标:合理展开谈话、能够随即应变、生成独特的交际风格。并根据目标提出了课内、课外的提升策略。这种教学应回归了对语言功能的思考,将"交际"放在一个至关重要的位置上,培养学生高效、和谐的沟通能力,适应社会的发展。

关键词：口语交际目标策略

外部刺激及感知价值对消费者功能性食品购买行为的影响——以燕麦食品为例

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外部刺激及感知价值对消费者功能性食品购买行为的影响——以燕麦...

作者：阮文婕西北农林科技大学

学位级别：硕士

全民健康是国家经济建设和人民生活幸福感提升的重要基础,而不良的饮食习惯是除遗传外致病的最重要因素。随着国民收入增加与消费意识的转变,人们的饮食需求也逐步从“吃饱”向“吃好”转变,饮食的安全健康问题得到了全民关注。对此,十... 详细信息

全民健康是国家经济建设和人民生活幸福感提升的重要基础,而不良的饮食习惯是除遗传外致病的最重要因素。随着国民收入增加与消费意识的转变,人们的饮食需求也逐步从“吃饱”向“吃好”转变,饮食的安全健康问题得到了全民关注。对此,十九大提出了“健康中国”战略,国务院也加大了实施“合理膳食行动”的力度,从国家政策层面突出对居民健康的重视。功能性食品种类繁多,在选购上需具备一定的专业素养,燕麦食品作为杂粮产品中的功能性食品,兼具功能性食品对人体机能的调节作用,及杂粮产品独有的膳食纤维等对降低心血管疾病有明显抑制作用的功能,是全球最为普及的杂粮食品之一。相较于主粮食品在我国的消费而言,燕麦食品的市场份额较低,且人均消费较低,仅为英国的2.46%;但随着健康饮食热潮的兴起,燕麦食品市场规模保持持续增长,以早餐燕麦市场的增速最快,根据Euromonitor数据可知,2019年我国早餐燕麦市场规模四年间复合增长率达11.23%;且纵向对比中国人均燕麦片消费额,四年间复合增长率为8.45%,有巨大的增长潜力。厘清消费者燕麦购买行为机制,对于进一步促进燕麦产业发展和提升居民饮食健康具有重要意义。已有研究重点关注了消费者个体特征、对食品的认知能力、支付意愿及购买行为之间的关系、影响食品消费的因素、个体特征对相关食品认知及行为的影响等,忽视了营销环境、营销组合以及消费者感知等消费者主观心理因素对其食品消费意愿和行为的综合作用。尤其是在燕麦消费领域,现有研究大多仅从营销学角度为促进燕麦消费提出相关策略。本文基于外部刺激及感知价值,在计划行为理论、S-O-R理论、感知价值理论等多维理论的指导下,对国内外相关领域的文献进行总结梳理,利用在山西省、甘肃省、河北省、内蒙古、吉林省的651份消费者微观调研数据进行研究。在行文逻辑上,首先对样本特征的个体信息数据进行描述性统计分析;其次,对外部刺激和感知价值进行指标体系的构建,采用因子分析法提取指标;再次,运用多元线性回归考察了外部刺激对感知价值的影响、通过有序Logit模型、贯序检验和Sobel检验实证分析了外部刺激、感知价值、消费者燕麦食品购买行为之间的关系;最后,在实证分析的基础上,提出了提振以燕麦食品为代表的功能性食品消费的对策建议。本文研究结论如下:(1)通过对消费者关于燕麦认知情况及消费现状的分析,发现消费者对燕麦食品的认知程度总体偏低。样本地区消费者燕麦购买量较少、购买频率较低,进一步对不同性别和不同教育背景消费者的燕麦食品购买行为加以分析,发现样本地区的女性消费者比男性消费者更倾向于选购燕麦食品,在购买习惯上喜欢“少量多次”购买燕麦食品;从教育背景角度观察,学历更高的消费者在购买数量、购买频率上均比教育水平低的消费者积极。(2)建立了外部刺激及感知价值的指标体系,并运用因子分析法对各指标特征进行计算,经过测算得出常规营销、活动营销、环境刺激、感知利益、感知成本5个公因子。同时对外部刺激及感知价值的原始表征指标进行分析与总结,结果表明所有指标的KMO值均大于0.6,累积方差贡献率均大于60%,证明样本数据的分析可以进行。(3)外部刺激对消费者燕麦食品感知价值具有影响且存在异质性,通过实证研究发现:外部刺激中的营销刺激和环境刺激均能显著正向影响消费者的感知利益;营销刺激显著负向影响消费者的感知成本,而环境刺激对感知成本的影响不显著。(4)对于消费者的燕麦食品购买行为来说,外部刺激及感知成本对其产生不同的影响。具体来说,营销刺激对购买数量呈负向影响;环境刺激对消费者购买频率起正向作用;而感知成本负向影响购买频率。(5)营销刺激对消费者燕麦食品购买频率产生影响时,感知成本及感知利益均对其产生显著的中介效应;环境刺激对消费者燕麦购买频率产生影响时,感知成本对其产生显著的中介效应;感知利益在环境刺激对消费者燕麦购买频率的行为影响中无中介效应;在外部刺激影响消费者燕麦食品购买数量影响时,感知价值均无中介效应。

关键词：消费行为 S-O-R模型外部刺激感知价值燕麦食品

你我手拉手——记石泉县城关第一小学关爱留守儿童行动

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少年月刊 2008年第9期 8-10页

作者：阮婕

现在,很多成年人都会外出打工,把年迈的老人和上学的孩子留在家里。这些留在家里的人就被叫做留守人员。他们往往面临着这样那样的问题,其中,留守儿童的家庭教育问题和父母关爱的缺失,给他们幼小的心灵带来了一定影响。

关键词：家庭教育问题石泉县你我留守人员队会体验生活广播室中心小学班主任老师课外书

勃拉姆斯《g小调钢琴狂想曲》Op.79No.2的音乐特征及演奏诠释

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勃拉姆斯《g小调钢琴狂想曲》Op.79No.2的音乐特征及演奏诠释

作者：阮梦婕江西师范大学

学位级别：硕士

约翰尼斯·勃拉姆斯（Johannes Brahms,1833-1897）的一生创作了大量的音乐作品,创作范围也非常广泛,分别有协奏曲、室内乐、艺术歌曲、钢琴曲、交响曲等等。虽然勃拉姆斯出生在浪漫主义时期,但他却忠于古典主义音乐风格,写作手法上传... 详细信息

约翰尼斯·勃拉姆斯（Johannes Brahms,1833-1897）的一生创作了大量的音乐作品,创作范围也非常广泛,分别有协奏曲、室内乐、艺术歌曲、钢琴曲、交响曲等等。虽然勃拉姆斯出生在浪漫主义时期,但他却忠于古典主义音乐风格,写作手法上传统严谨。显而易见,在他的音乐创作中夹杂了许多前卫的音乐元素,并对此进行了创新。同时也给很多新兴的作曲家在创作上带来了更多可借鉴的范本,所以他被称为是音乐中的改革者,对当时的音乐社会影响甚多。勃拉姆斯在他创作鼎盛时期写下的钢琴小品—《g小调钢琴狂想曲》Op.79No.2,写作手法上规整严谨,内涵又十分丰富,在他的音乐创作风格中勃拉姆斯尽显了他的个人魅力。本次研究从曲目的历史创作背景进行分析,从多个维度进行入手,再结合钢琴演奏技法以及自身演奏经验,通过这些分类对该作品的演奏分析进行阐述。为如何更好的诠释这个作品提供一点思路。文章以三个章节进行了研究,第一章,作品概述,对作曲家的个人生平进行简介,阐述《狂想曲》创作背景;第二章,对《狂想曲》进行了音乐本体分析,进行了简单的曲式分析,对这首曲子的古典主义和浪漫主义的双重性特征进行了分析;第三章,对《狂想曲》的演奏技巧做了简单的阐述,主要分为四点:音乐表情术语对演奏的影响、四四拍背景下舞蹈性节奏型的演奏处理、音色与触键的展现及踏板的演奏处理。最后,得出相关研究结论。

关键词：勃拉姆斯古典浪漫狂想曲

常规心电图与动态心电图检测对小儿心律失常及心率变异性诊断价值比较

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中国基层医药 2017年第10期24卷 1504-1507页

作者：阮婕沈洪丽杭州市儿童医院心电图室浙江省杭州310000

目的比较常规心电图与动态心电图在小儿心律失常及心率变异性诊断中的应用价值.方法对收治的小儿心律失常患儿分别采取常规心电图与动态心电图检查,比较两种检查方法对心律失常的检出率,并分析小儿心律失常与心率变异性之间的关系.结果... 详细信息

目的比较常规心电图与动态心电图在小儿心律失常及心率变异性诊断中的应用价值.方法对收治的小儿心律失常患儿分别采取常规心电图与动态心电图检查,比较两种检查方法对心律失常的检出率,并分析小儿心律失常与心率变异性之间的关系.结果动态心电图在室上性心动过速（13.33%）、室性心动过速（5.56%）、室性期前收缩（21.11%）、房性期前收缩（14.44%）、传导阻滞（12.22%）等心律失常检出率均明显优于常规心电图检查,差异均有统计学意义（χ^2=11.93、4.56、9.22、10.74、11.55,均P〈0.05）.室性心律失常患儿的心率变异性与非室性心律失常患儿相比较[（78.85±0.88）、（4.68±2.43）、（24.78±2.56）、（21.66±0.94）]差异有统计学意义（t=10.88、11.79、9.84、9.92,均P〈0.05）.结论与常规心电图相比,动态心电图对于小儿心律失常具有较好的诊断价值,对室上性心动过速、室性心动过速、室性期前收缩、房性期前收缩、传导阻滞等心律失常检出率具有明显优势,而且其测定心率变异性有助于评估病情.

关键词：心电描计术动态心电图心律失常心率变异性儿童