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江浙蝮蛇毒镇痛组分药理学及其机理研究

江浙蝮蛇毒镇痛组分药理学及其机理研究

作者：阮叶萍浙江中医学院

学位级别：硕士

江浙蝮蛇毒镇痛组分药理学及其机理研究目的江浙蝮蛇毒中分离纯化筛选出镇痛组分，并对其进行毒理学、各种疼痛刺激试验及其机理的探讨。方法 ①江浙蝮蛇毒经过单一柱很难将其组分分离纯化。利用其电荷性及分子量的差异性，... 详细信息

江浙蝮蛇毒镇痛组分药理学及其机理研究目的江浙蝮蛇毒中分离纯化筛选出镇痛组分，并对其进行毒理学、各种疼痛刺激试验及其机理的探讨。方法 ①江浙蝮蛇毒经过单一柱很难将其组分分离纯化。利用其电荷性及分子量的差异性，采用三步分离法，即先用离子交换柱初分离，再用二种型号分子筛继续分离纯化。将分离的各组分，进行小鼠镇痛实验，以确定最佳镇痛组分，并对其作理化性质的分析。②对筛选出的镇痛组分进行急性毒性、身体依赖性、耐受性实验来评价其安全性。③不同剂量蛇毒组分采用肌肉注射给药方法，评价该药物对热刺激、化学刺激、机械刺激所致疼痛的镇痛作用。④通过阿托品实验、利血平实验、纳络酮实验观察其镇痛作用途径;小鼠侧脑室给药实验、大鼠足跖定压刺激实验及大鼠脊髓化实验区分其作用于中枢或外周;同时通过蛇毒组分对不同脑区内源性阿片肽的分布情况，探讨其中枢作用的部位。结果 ①最后分离出单一色谱峰，纯度为97.5％。分子筛的分离效果，主要取决于组分的分子量差异。在分离中，其主要影响因子为洗脱液的流速。实验表明，0.5ml／min流速为对于本分离柱最合适的流速，利用三步分离法可将江浙蝮蛇毒中主要组分分离纯化。阳离子交换后再经分子筛分离后的4号主峰有明显的镇痛作用，可基本确定为江浙蝮蛇毒镇痛组分，编号为C4(为阳离子交换柱分离的4号峰)。其分子量为16.6Kda，等电点为pIS.8，属碱性组分。②镇痛c4组分肌肉注射的LD50 为13.6mg/kg，相当于临床用量的35倍，提示C4组分在一定剂量范围内是安全有效的;通过身体依赖性实验也证明了该组分本身无阿片样依赖性特征。并且在连续用药7天后均无耐受性现象，提示该药物无耐受性。③镇痛C4组分对热刺激、化学刺激、机械刺激所致疼痛均有一定程度的抑制作用，C4组分三个剂量组的痛闭提高率均明显高于生理盐水组，有显著性差异(p<0.05)。c4组分镇痛作用达到高峰的时间是在给药后 6Omin前后，与阳性对照药颅痛定相比，蛇毒组分起效慢但持续时间久。④通过实验表明C4组分镇痛不作用于乙酞胆碱受体，利血平对C4组分具有提高痛闭的作用，纳络酮对C4组分的镇痛作用具有部分拮抗效应。C4组分镇痛作用是通过调节中枢起效，丘脑、尾状核、红核为C4组分可能作用的主要中枢部位。结论镇痛c4组分分离纯化方法明确，重现性强，毒性小，无身体依赖性;有良好的镇痛作用，且镇痛作用主要通过中枢起效，值得进一步深入开发和研究。

关键词：江浙蝮蛇毒分离纯化毒性试验药效学镇痛机理

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冬瓜提取物抗小鼠胃溃疡活性研究

食品科学 2005年第4期26卷 243-246页

作者：夏明阮叶萍浙江中医学院药学系浙江杭州310053

冬瓜(B. hispida)是中国的一种常见的蔬菜,本文探讨了冬瓜的不同提取物在抑制乙酰水杨酸所致的小鼠实验性胃溃疡上的活性。冬瓜首先经过脱水再用甲醇萃取并将提取物真空浓缩,然后将提取物中可溶于正丁醇和水的部分分离出来冷冻干燥后用... 详细信息

冬瓜(B. hispida)是中国的一种常见的蔬菜,本文探讨了冬瓜的不同提取物在抑制乙酰水杨酸所致的小鼠实验性胃溃疡上的活性。冬瓜首先经过脱水再用甲醇萃取并将提取物真空浓缩,然后将提取物中可溶于正丁醇和水的部分分离出来冷冻干燥后用于动物实验。口服不同剂量提取物的小鼠,溃疡的发生率明显的降低了。病理切片的结果表明这些提取物可以保护胃粘膜上皮细胞并抑制溃疡发生。由于冬瓜是一种常见的无毒植物,它与现有的抗胃溃疡的药物相比具有明显的优势,因而在功能食品方面的应用前景非常广阔。

关键词：冬瓜胃溃疡实验性溃疡乙酰水杨酸

基于BAS-GA-BP神经网络结合熵权法多指标优化风引汤提取工艺

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中国中药杂志 2020年第23期45卷 5686-5693页

作者：兰济乐阮叶萍邱璐琦浙江中医药大学药学院浙江杭州310053 浙江中医药大学附属第三医院浙江杭州310005

通过正交试验和天牛须搜索算法(beetle antennae search,BAS)-遗传算法(genetic algorithm,GA)-BP神经网络(back propagation neural network,BPNN)多指标优化风引汤的提取工艺参数。在单因素考察的基础上,以提取温度、乙醇体积、提取... 详细信息

通过正交试验和天牛须搜索算法(beetle antennae search,BAS)-遗传算法(genetic algorithm,GA)-BP神经网络(back propagation neural network,BPNN)多指标优化风引汤的提取工艺参数。在单因素考察的基础上,以提取温度、乙醇体积、提取时间、乙醇浓度作为正交试验考察因素,运用熵权法计算芦荟大黄素、甘草酸铵、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、桂皮醛、6-姜酚、浸膏得率及指纹图谱相似度的综合得分,再建立BAS-BP神经网络模型,以遗传算法进行寻优,预测最佳提取工艺。结果显示,BAS-BP神经网络优化得到风引汤醇提工艺为提取温度87℃,加9倍75%乙醇,提取47 min,综合得分为1.0529;正交设计所得最佳工艺参数为提取温度80℃,加10倍量75%乙醇,提取30 min,综合得分为1.0037;BAS-BP神经网络模型所得工艺的综合评分略优于正交试验,说明其优化所得工艺更加理想,故最终确定为风引汤最佳提取工艺。基于BAS-GA-BP神经网络优选所得工艺提取效率高、稳定性良好,为风引汤后续开发及质量控制提供参考。

关键词：风引汤提取工艺 BP神经网络天牛须搜索算法遗传算法正交试验熵权法指纹图谱

聚山梨醇-80修饰的神经毒素纳米粒经大鼠鼻腔给药后体内分布研究

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中草药 2015年第17期46卷 2599-2602页

作者：周荣金铭沈淼山阮叶萍浙江中医药大学浙江杭州310053

目的制备异硫氰酸荧光素(FITC)标记的经聚山梨醇-80(P-80)修饰的神经毒素纳米粒(P-80-NT-NP),分析其经鼻腔给药后在大鼠体内组织分布规律。方法制备FITC标记的P-80-NT-NP和神经毒素纳米粒(NT-NP),经大鼠鼻腔给药后,于5、15、30、60、120... 详细信息

目的制备异硫氰酸荧光素(FITC)标记的经聚山梨醇-80(P-80)修饰的神经毒素纳米粒(P-80-NT-NP),分析其经鼻腔给药后在大鼠体内组织分布规律。方法制备FITC标记的P-80-NT-NP和神经毒素纳米粒(NT-NP),经大鼠鼻腔给药后,于5、15、30、60、120、240 min采集血样,采集脑、心、肝、脾、肺、肾组织样品,以FITC标记的神经毒素(FITC-NT)为指标成分,采用荧光分光光度计分析手段,考察NT-NP经P-80修饰前后药物在大鼠体内各组织中分布状况的差异。结果P-80-NT-NP和NT-NP经鼻腔黏膜给药后5、15、30、60、120、240 min,药物在血浆、心、肝、脾、肺、肾和脑中均有分布,其中以肝组织中分布最高,肾组织其次。给药后120 min P-80-NT-NP给药组血浆、脑中NT的质量浓度高于NT-NP组,而在肝组织中低于NT-NP组,差异均显著(P<0.05)。结论 P-80可有效增加NT-NP经鼻腔吸收入脑的药量,为脑靶向制剂的进一步开发应用提供依据。

关键词：神经毒素纳米粒异硫氰酸荧光素标记体内分布鼻腔给药聚山梨醇-80

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中药治疗癫痫的成方规律分析

中成药 2020年第8期42卷 2156-2160页

作者：兰济乐丁舒飞邱璐琦阮叶萍浙江中医药大学浙江杭州310053

目的分析抗癫痫中药成方规律。方法收集中国方剂数据库中的抗癫痫方剂,通过Microsoft Excel 2019软件统计中药频次,SPSS Modeler 18.0软件中的Apriori算法进行关联规则分析,SPSS Statistics 25软件进行聚类分析、因子分析及决策树分析... 详细信息

目的分析抗癫痫中药成方规律。方法收集中国方剂数据库中的抗癫痫方剂,通过Microsoft Excel 2019软件统计中药频次,SPSS Modeler 18.0软件中的Apriori算法进行关联规则分析,SPSS Statistics 25软件进行聚类分析、因子分析及决策树分析。结果得到有效方剂669首,涉及495味中药,核心药物有朱砂、麝香、牛黄、人参、全蝎,常用类型为平肝熄风药、补虚药、安神药、清热药、化痰止咳平喘药。关联规则分析得到7个药对、8个药组,聚类分析得到2个药对、11个药组,因子分析提取17个公因子,朱砂为因变量的决策树筛选出麝香、雄黄、琥珀3味中药。结论数据挖掘技术能全面探究抗癫痫方剂的成方规律,有助于开发相关药物和指导中医临床实践。

关键词：中药癫痫成方规律数据挖掘技术

江浙蝮蛇毒C_4组分的分离纯化及药理性质研究

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中华中医药学刊 2015年第1期33卷 86-88,I0008页

作者：金铭周荣阮叶萍浙江中医药大学浙江杭州310053

目的:分离筛选江浙蝮蛇毒的C4组分,研究其毒性、机体耐受性和依赖性等药理学性质。方法:采用离子交换和分子筛,以柱层析法分离蛇毒C4组分,并用急性毒性实验和自然戒断实验、耐受性实验考察其毒性、依赖性和耐受性。结果:经分离筛选后得... 详细信息

目的:分离筛选江浙蝮蛇毒的C4组分,研究其毒性、机体耐受性和依赖性等药理学性质。方法:采用离子交换和分子筛,以柱层析法分离蛇毒C4组分,并用急性毒性实验和自然戒断实验、耐受性实验考察其毒性、依赖性和耐受性。结果:经分离筛选后得到C4组分,并获得蛇毒C4组分的毒性作用、机体耐受性和依赖性等性质。结论:C4组分作为江浙蝮毒中的一个有效组分,在一定剂量范围内安全性良好,未发现耐受性和依赖性,值得进一步开发利用。

关键词：江浙蝮蛇毒镇痛C4组分分离纯化依赖性耐受性

聚山梨酯80修饰的神经毒素纳米粒跨血脑屏障转运及细胞毒性

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药学学报 2010年第10期45卷 1312-1316页

作者：赵燕敏夏爱晓魏颖慧阮叶萍李范珠浙江中医药大学药学院浙江杭州310053

研究聚山梨酯80修饰的神经毒素纳米粒(polysorbate-80modified neurotoxin nanoparticle,P-80-NT-NP)在血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)体外模型上的通透性及细胞毒性。采用SD大鼠大脑分离培养脑微血管内皮细胞(rat brain microvascular endothelial cells,rBMECs)建立BBB体外模型,以神经毒素(neurotoxin,NT)组、空白纳米粒(nanoparticle,NP)组和未修饰的神经毒素纳米粒(neurotoxin nanoparticle,NT-NP)组作为对照,MTT法考察P-80-NT-NP对rBMECs的细胞毒性;采用Millicell insert培养rBMECs,荧光分光光度法测定P-80-NT-NP在基底侧中NT浓度,计算其表观通透系数。结果显示,当NT质量浓度≤200ng·mL-1时,NT组、NP组、NT-NP组和P-80-NT-NP组均无细胞毒性;NT质量浓度>200ng·mL-1时,NP组、NT-NP组和P-80-NT-NP组的细胞毒性显著大于NT组(P0.05)。当NT质量浓度为150ng·mL-1时,NT-NP组和P-80-NT-NP组的转运量均显著大于NT组(P200ng·mL-1时,对rBMECs产生细胞毒性,为脑靶向纳米粒跨BBB转运的机制研究奠定基础。

关键词：聚山梨酯80 神经毒素纳米粒血脑屏障体外转运细胞毒性

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益气补肾方对胃癌细胞侵袭转移能力的影响

中医杂志 2012年第2期53卷 148-150,159页

作者：阮叶萍刘云霞姚立浙江中医药大学药学院杭州市滨江区滨文路548号310053 杭州市第三人民医院肿瘤科

目的探讨益气补肾方对胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力的影响。方法将胃癌SGC-7901细胞接种于RP-MI-1640培养液中,益气补肾方水溶液配制成1、2、4、8、16、32、64mg/ml7个终浓度,设肿瘤细胞为空白对照组,在96孔板内每个剂量6个平行孔,重复... 详细信息

目的探讨益气补肾方对胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力的影响。方法将胃癌SGC-7901细胞接种于RP-MI-1640培养液中,益气补肾方水溶液配制成1、2、4、8、16、32、64mg/ml7个终浓度,设肿瘤细胞为空白对照组,在96孔板内每个剂量6个平行孔,重复3次,37℃、5%CO2培养箱孵育48h。采用MTT法检测不同浓度益气补肾方对SGC-7901细胞增殖的抑制率;采用RT-PCR法检测其对SGC-7901细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制酶-2(TIMP-2)的基因表达活性的影响。结果不同浓度的益气补肾方对SGC-7901细胞都有一定的抑制作用,以16mg/ml和32mg/ml浓度抑瘤作用较好,抑制率分别为53.17%和56.47%;MMP-2 mRNA在32mg/ml组同空白对照比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论益气补肾方能明显抑制胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力,且以32mg/ml浓度最好。

关键词：益气补肾方肿瘤转移胃癌细胞基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶抑制酶-2

壳聚糖神经毒素纳米粒鼻腔给药对血脑屏障开放性的影响

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中草药 2017年第12期48卷 2461-2465页

作者：沈淼山张苏宏邱璐琦阮叶萍浙江中医药大学浙江杭州310053

目的制备壳聚糖神经毒素纳米粒(CS-NT-NP),研究其鼻腔给药对大鼠血脑屏障(BBB)开放性及小鼠血清中S100β蛋白的影响。方法采用甲酰胺提取-紫外分光光度法测定不同给药途径及不同神经毒素(NT)制剂给药后大鼠脑组织中伊文思蓝(EB)的浓度;... 详细信息

目的制备壳聚糖神经毒素纳米粒(CS-NT-NP),研究其鼻腔给药对大鼠血脑屏障(BBB)开放性及小鼠血清中S100β蛋白的影响。方法采用甲酰胺提取-紫外分光光度法测定不同给药途径及不同神经毒素(NT)制剂给药后大鼠脑组织中伊文思蓝(EB)的浓度;荧光显微镜定性分析EB在脑组织中的荧光强度及分布;ELISA法测定不同NT制剂鼻腔给药后小鼠血清中S100β蛋白量的变化。结果分别与壳聚糖(CS)组和NT水溶液组比较,CS-NT-NP能明显增加大鼠脑内EB浓度,有一定时效关系,且在120 min时达到高峰(P<0.01);而鼻腔给药相较于ip和im给药,EB入脑量明显增加(P<0.01),且达峰时间短,荧光检测结果表现出相同的趋势,CS-NT-NP鼻腔给药后不同时间小鼠血清S100β蛋白水平显著升高。结论 CS-NT-NP鼻腔给药能显著增加BBB的开放性,进一步提高脑内NT的浓度,壳聚糖纳米粒是大分子药物入脑的良好载体。

关键词：神经毒素纳米粒壳聚糖鼻腔给药血脑屏障伊文思蓝 S100β蛋白