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作者：阚晓溪安徽中医药大学

学位级别：硕士

目的：对瑞香狼毒抗肿瘤活性组分进行体内外药效学筛选和验证，并从细胞周期阻滞的角度探讨瑞香狼毒提取物抗肿瘤的作用机制。方法：(1)通过用不同浓度的乙醇对瑞香狼毒提取物进行梯度柱层析，依次得到HH，H18，JH，J18共16个组分，对... 详细信息

目的：对瑞香狼毒抗肿瘤活性组分进行体内外药效学筛选和验证，并从细胞周期阻滞的角度探讨瑞香狼毒提取物抗肿瘤的作用机制。方法：(1)通过用不同浓度的乙醇对瑞香狼毒提取物进行梯度柱层析，依次得到HH，H18，JH，J18共16个组分，对其以100μg/mL的浓度分别处理BEL-7402，SK-HEP-1，A549，NCI-H157细胞株，进行初筛。通过磺基罗丹明(SRB)法，检测各组分作用48h后对四株细胞的增殖抑制率，选择抑制率较好的组分及较敏感细胞株进行药效学验证。将各组分分别以6.2500μg/mL作用于敏感株细胞，分别作用24h，48h，72h后，以SRB法检测各组分对各细胞株的增殖抑制率，计算各组分的IC，并对其主要化学成分进行UPLC-MS分析。 (2)在上述实验的基础上合并40%00%乙醇提取物，分别用旋转蒸发仪和冷冻干燥机对其进行干燥，得到瑞香狼毒提取物旋蒸粉和冻干粉。然后将其以1.562500μg/mL分别作用于A549，NCI-H157，NCI-H460，BEL-7402，SK-HEP-1细胞株，作用24h，48h，72h后，以SRB法检测其对各细胞株的增殖抑制率，计算IC，选出敏感细胞株用于下一步的机制研究并且比较不同干燥工艺对其抗肿瘤活性的影响，选择作用较优的一种干燥粉研究其对H22移植瘤的作用及不同给药途径对其抑瘤作用的影响。建立小鼠H22移植瘤模型后，给药10d。每天称体重，给药期间每日密切观察小鼠的外观毛色、精神状态、活动及饮食等情况。于末次给药24h后，计算荷瘤小鼠胸腺和脾指数以及抑瘤率。用全血分析仪分析小鼠血液中白细胞数和血小板数的变化，按组织切片要求留取肿瘤组织标本并制作石蜡切片，光镜观察肿瘤细胞的形态。 (3)光学显微镜下观察瑞香狼毒提取物干预后敏感细胞株形态的变化，免疫荧光染色后，激光共聚焦显微镜观察细胞骨架变化;碘化丙啶(PI)染色，采用流式细胞术检测药物干预后细胞周期的变化;瑞香狼毒提取物25，50，100μg/mL作用于敏感细胞株6h和36h后，采用RT-PCR和Western Blot方法检测其对细胞S期周期蛋白cyclinE1核酸转录水平和蛋白表达水平的影响，根据结果，用RT-PCR方法观察NF-κB通路相关细胞因子DR5，TNF-α，TNFR，IL-1β的mRNA水平，初步探索瑞香狼毒提取物影响肿瘤细胞的作用机理和潜在作用靶点。结果：(1)各组分对不同肿瘤细胞株抑制作用相差较大，总体对肺癌细胞的抑制率高于肝癌细胞，J5，J6和H8对各细胞株的抑制率较高，且作用具有浓度和时间依赖性，作用72h，50，100μg/mL各受试药对各肺癌细胞株的抑制率为(60.573.83)%%，IC为(9.61±0.79)μg/mL。其主要成分为双二氢黄酮类化合物。 (2)瑞香狼毒提取物的冻干粉和旋蒸粉对A549，NCI-H157，NCI-H460，BEL-7402，SK-HEP-1细胞株的抑制率无明显差别。对NCI-H157的抑制率最高，最高为80.39±4.01%，而SK-HEP-1的IC最小，最小为49.00±3.85μg/mL。不同浓度瑞香狼毒提取物旋蒸粉灌胃给药均能显著抑制H22荷瘤小鼠的生长，抑瘤率分别达到29.68%、44.00%、59.02%，阳性药的抑瘤率达到84.28%，而腹腔注射组的抑瘤率则达到25.98%。与溶剂组相比，灌胃组对荷瘤小鼠的脾指数无明显影响，灌胃大剂量组能够降低荷瘤小鼠的胸腺指数(P＜0.05)，而腹腔注射组能够降低荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数(P＜0.05);灌胃大剂量组和阳性药卡培他滨片均可显著性降低荷瘤小鼠血中白细胞和血小板的数目(P＜0.05);与腹腔注射溶剂组相比，腹腔注射组可显著降低H22荷瘤小鼠血中血小板的数目(P＜0.05)，而对白细胞的影响较小，但各给药组小鼠的白细胞数和血小板数均仍处于正常范围内。光镜结果显示：在此实验中，灌胃溶剂对照组肿瘤细胞的异型性高，侵袭性强，细胞数量多，排列不规则;阳性药、大剂量组肿瘤细胞异型性、凋亡及坏死较对照组明显减轻;中剂量组肿瘤细胞的异型性也明显减轻(P<0.05)，坏死、凋亡具有减轻趋势(P<0.1)，表现为一定的抑瘤作用;小剂量组肿瘤细胞的异型性、凋亡及坏死病变较对照组有所减轻，但无统计学差异。腹腔注射溶剂组肿瘤细胞的异型性与灌胃溶剂对照组相比无明显差异，腹腔注射组肿瘤细胞的异型性、凋亡和坏死等病变与对照组比较未见明显差异。 (3)对SK-HEP-1细胞进行瑞香狼毒提取物干预后，光学显微镜下观察细胞数量变少，形状变圆，荧光染色后，细胞骨架F-actin蛋白发生重排;流式细胞术结果表明：25μg/mL，50μg/mL，100μg/mL的瑞香狼毒提取物处理SK-HEP-1细胞后，S期的细胞显著增加，与阴性对照组相

关键词：瑞香狼毒 SRB H22移植瘤细胞周期 cyclinE1 NF-κB 细胞骨架

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瑞香狼毒醇提物的抗肿瘤活性研究

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中国中药杂志 2013年第8期38卷 1219-1225页

作者：阚晓溪王志鑫杨乾栩王娅杰杨庆巩仔鹏朱晓新安徽中医学院药学院安徽合肥230031 中国科学院大连化学物理研究所辽宁大连116023 中国中医科学院中药研究所北京100700

目的:筛选瑞香狼毒抗肿瘤活性组分及确定敏感细胞株。方法:通过用不同浓度的乙醇对瑞香狼毒醇提物进行梯度柱色谱,依次得到HH,H1～H8,JH,J1～J8共16个组分,对其进行初筛。设溶剂对照组、各受试药分组、阳性对照组、空白调零组,各受试药... 详细信息

目的:筛选瑞香狼毒抗肿瘤活性组分及确定敏感细胞株。方法:通过用不同浓度的乙醇对瑞香狼毒醇提物进行梯度柱色谱,依次得到HH,H1～H8,JH,J1～J8共16个组分,对其进行初筛。设溶剂对照组、各受试药分组、阳性对照组、空白调零组,各受试药组以100 mg.L-1分别处理BEL-7402,SK-HEP-1,A549,NCI-H157细胞株,通过磺基罗丹明(SRB)法,检测各组分作用48 h后对4株细胞的增殖抑制率,选择抑制率较好的组分及较敏感细胞株进行2次筛选。2次筛选时分组情况同初筛。将各组分分别以6.25,12.5,25,50,100 mg.L-1作用于敏感株细胞,分别作用24,48,72 h后,以SRB法检测各组分对各细胞株的增殖抑制率,计算各组分的IC50,并对其主要化学成分进行UPLC-MS分析。结果:各组分对不同肿瘤细胞株抑制作用相差较大,总体对肺癌细胞的抑制率高于肝癌细胞,J5,J6和H8对各细胞株的抑制率较高,且作用具有浓度和时间依赖性,作用72 h,50,100 mg.L-1各受试药对各肺癌细胞株的抑制率在(60.57±3.83)%～(96.66±0.51)%,IC50在(9.61±0.79)～(55.76±2.31)mg.L-1。其主要成分为双二氢黄酮类化合物。结论:瑞香狼毒醇提物中的双二氢黄酮类化合物对肺癌细胞具有明显抑制作用。

关键词：瑞香狼毒 SRB 抗肿瘤筛选

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中药在逆转肿瘤多药耐药中的作用及研究现状

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中国中药杂志 2014年第24期39卷 4693-4698页

作者：王娅杰李琦李玉洁杨庆陈颖翁小刚阚晓溪陈熹朱晓新中国中医科学院中药研究所北京100700

肿瘤多药耐药(multi-drug resistance,MDR)是目前肿瘤临床化疗失败的主要原因之一,中药具有低毒高效和多阶段性作用的特点,其优势已在逆转肿瘤MDR的研究中逐步受到重视。目前已发现多种中药中具有逆转肿瘤MDR的作用,该文对近年来中药在... 详细信息

肿瘤多药耐药(multi-drug resistance,MDR)是目前肿瘤临床化疗失败的主要原因之一,中药具有低毒高效和多阶段性作用的特点,其优势已在逆转肿瘤MDR的研究中逐步受到重视。目前已发现多种中药中具有逆转肿瘤MDR的作用,该文对近年来中药在逆转肿瘤MDR领域的现状进行分析及并对最新研究成果进行综述。

关键词：多药耐药中药肿瘤研究

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呼吸系统感染性疾病与组织“损伤-修复”平衡——病理特征、治疗与中医药特色

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中国中药杂志 2021年第24期46卷 6366-6376页

作者：杨满丽杜欣珂阚晓溪郝腾腾冉庆森南京中医药大学江苏南京210023 中国中医科学院博士后科研流动站北京100700 中国中医科学院中医临床基础医学研究所北京100700 中国中医科学院中药研究所北京100700 中国中医科学院西苑医院北京100091

呼吸系统感染性疾病是引发重大突发公共安全事件的重要病种,构成了生命健康和社会发展的巨大威胁。对其有效管控、科学施治,是保证人类健康命运共同体行稳致远的关键基础。呼吸系统病毒感染性疾病虽病原多样,进程复杂,但其发病的共通病... 详细信息

呼吸系统感染性疾病是引发重大突发公共安全事件的重要病种,构成了生命健康和社会发展的巨大威胁。对其有效管控、科学施治,是保证人类健康命运共同体行稳致远的关键基础。呼吸系统病毒感染性疾病虽病原多样,进程复杂,但其发病的共通病理基础以病灶免疫微环境"损伤-修复"的功能失衡为突出特征,继而引发后续的重要器官结构功能破坏。于是,在治疗上则自然应以抗病毒与调免疫并重,加强免疫损伤保护,促进病损组织功能修复为核心。上述论断是宿主导向疗法(host-directed therapies,HDT)的科学内核,也与中医药"人-病同治,正-邪互作"的理论不谋而合。在中西医理论的共同支持下,将呼吸系统病毒感染性疾病中"感染-免疫-损伤"完整病理链条与中医药的"正-邪"的动态变化进行整合,将治疗视角从人得的病转向得病的人,通过加强人因干预,维系免疫稳态,加强组织器官损伤保护,促进病损组织修复新生,便能够从根本上修正疾病状态下"损伤-修复"的失衡状态,改变疾病滋生的土壤,实现患者受益。该篇文章将专注呼吸系统感染性疾病共通关键的病理学过程,特别以病毒感染引发的免疫损伤为聚焦,寻求有效的防治策略,总结相关理论进展,梳理有效候选药物,提示未来研发方向,进而凸显中医药的治疗特色。

关键词：呼吸系统感染疾病 “损伤-修复”平衡宿主导向疗法中医药治疗

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活性数据离散分布下的瑞香狼毒抗肿瘤活性成分筛选研究

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药学学报 2014年第6期49卷 927-931页

作者：杨乾栩程孟春王莉阚晓溪朱晓新肖红斌中国科学院大连化学物理研究所、中国科学院分离分析化学重点实验室辽宁大连116023 中国中医科学院中药研究所北京100700

研究活性数据离散分布下的瑞香狼毒抗肿瘤活性部位和成分的筛选、提取及验证。分别采用HPD大孔树脂柱和聚酰胺柱获得具有成分差异的瑞香狼毒部位，并用MTT法考察不同部位对人肺癌细胞A549的抑制活性。结果显示，不同部位的A549抑制活性... 详细信息

研究活性数据离散分布下的瑞香狼毒抗肿瘤活性部位和成分的筛选、提取及验证。分别采用HPD大孔树脂柱和聚酰胺柱获得具有成分差异的瑞香狼毒部位，并用MTT法考察不同部位对人肺癌细胞A549的抑制活性。结果显示，不同部位的A549抑制活性呈现离散分布。权重分析表明，色谱保留时间33．97min成分及30-39min部位对A549抑制作用较大。活性实验表明，30-39rain部位要优于瑞香狼毒醇提物，33．97min成分在100gg·mL-1水平内，与阳性药顺铂作用相当，但作用方式完全不同。在离散活性条件下，权重分析方法对中药活性成分或部位，具有较好的筛选效果。

关键词：瑞香狼毒离散活性数据权重分析活性成分抗肿瘤

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参莲提取物对兔颈总动脉低剪应力模型血流及血管病理形态的影响

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中国中药杂志 2013年第10期38卷 1595-1600页

作者：周淑媛王迎寒李玉洁杨庆巩仔鹏阮从潇阚晓溪张瑞杰朱晓新中国中医科学院中药研究所北京100700 承德医学院中药研究所河北承德067000

血流动力学的改变对脂质沉积和血管内皮的影响与动脉粥样硬化(artherosclerosis,As)的发生密切相关。本实验以颈总动脉套管和高脂饵食法建立家兔局部低剪切应力As模型,通过检测造模2,4,8周的血流量、切应力、血脂水平及血管病理形态,发... 详细信息

血流动力学的改变对脂质沉积和血管内皮的影响与动脉粥样硬化(artherosclerosis,As)的发生密切相关。本实验以颈总动脉套管和高脂饵食法建立家兔局部低剪切应力As模型,通过检测造模2,4,8周的血流量、切应力、血脂水平及血管病理形态,发现颈总动脉套管法在近心端可形成局部低剪应力;阿托伐他汀和参莲提取物呈时间依赖性和剂量依赖性地增加近心端血流量(P<0.05),降低血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(lowdensity lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平(P<0.05),减少As模型家兔近心端血管病变程度。本研究首次证实了参莲提取物(丹参和穿心莲组成)对As斑块形成的抑制作用与改善血流有关。

关键词：动脉粥样硬化参莲提取物剪切应力血流动力学

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复方银杏叶颗粒改善人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的作用及其机制研究

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中国中药杂志 2016年第4期41卷 722-727页

作者：李琦陈熹阚晓溪李玉洁杨庆王娅杰陈颖翁小刚蔡维艳黄鹤飞朱晓新中国中医科学院中药研究所北京100700 首都医科大学中医药学院北京100069

该实验于体外使用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与复方银杏叶颗粒(80,160,320,640 mg·L-1)预孵育,合并使用H2O2(1 200μmol·L-1)建立氧化应激损伤模型。采用MTT法研究药物对HUVEC细胞增殖情况的影响,检测细胞培养上清中的LDH,MDA,NO含量及... 详细信息

该实验于体外使用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与复方银杏叶颗粒(80,160,320,640 mg·L-1)预孵育,合并使用H2O2(1 200μmol·L-1)建立氧化应激损伤模型。采用MTT法研究药物对HUVEC细胞增殖情况的影响,检测细胞培养上清中的LDH,MDA,NO含量及SOD活性,判断药物对内皮细胞的保护作用。通过Casepase-3活性检测以及Annexin V-FITC/PI流式细胞术,检测药物对细胞凋亡的保护作用。使用Western blot法测定凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。研究发现1 200μmol·L-1H2O2能够诱导内皮细胞产生氧化应激损伤,使细胞存活率降低,且细胞增殖抑制程度与H2O2的作用时间呈正相关。而80,160,320,640 mg·L-1的复方银杏叶颗粒能够明显减轻该模型下内皮细胞的氧化应激损伤,恢复细胞正常增殖水平,改善细胞状态,抑制细胞凋亡,同时能够上调Bcl-2的表达以及下调Bax的蛋白表达。该实验证明了复方银杏叶颗粒对H2O2诱导的内皮细胞氧化应激损伤及细胞凋亡具有一定的保护作用,其机制可能与复方银杏叶颗粒抑制了内皮细胞凋亡的线粒体途径有关。

关键词：复方银杏叶颗粒 H2O2 HUVEC 内皮细胞损伤细胞凋亡

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颈总动脉套管法与颈外动脉结扎法建立局部低切应力动脉粥样硬化兔模型的比较

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中国实验方剂学杂志 2013年第10期19卷 166-169页

作者：周淑媛王迎寒巩仔鹏阮从潇阚晓溪朱晓新中国中医科学院中药研究所北京100700 承德医学院中药研究所河北承德067000

目的:通过对比颈总动脉套管法与颈外动脉结扎法建立动脉粥样硬化兔模型的试验研究,比较2种方法在制模时间,模型稳定性方面的差异。方法:雄性新西兰兔30只,随机分成空白组(n=6);套管组(n=8);结扎组(n=8);高脂组(n=8)。所有试验兔在高脂... 详细信息

目的:通过对比颈总动脉套管法与颈外动脉结扎法建立动脉粥样硬化兔模型的试验研究,比较2种方法在制模时间,模型稳定性方面的差异。方法:雄性新西兰兔30只,随机分成空白组(n=6);套管组(n=8);结扎组(n=8);高脂组(n=8)。所有试验兔在高脂喂养前、后分别检测血脂水平,于第8周处死动物,取套管近心端与结扎近心端血管行病理学检查。结果:高脂组饲养8周形成明显的高脂血症;与高脂组相比,单纯套管法颈动脉内膜脂质沉积较轻,但内膜明显增厚,内膜、中膜、外膜均出现不同程度的坏死;结扎法病变比套管法轻,但仍严重于正常组。结论:与单纯高脂饲养法相比,单纯套管法试验兔8周也可形成明显的动脉粥样性血管病变,套管近心端可形成局部低切应力模型,模型稳定性好。

关键词：动脉粥样硬化动物模型颈总动脉套管颈总动脉结扎

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戊己丸不同配伍方对炎症后肠易激综合征模型大鼠结肠运动及5-羟色胺含量的影响

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世界华人消化杂志 2013年第13期21卷 1226-1233页

作者：王迎寒周淑媛王娅杰巩仔鹏杨庆阚晓溪阮从潇张瑞杰朱晓新中国中医科学院中药研究所北京市100700 承德医学院中药研究所河北省承德市067000

目的:评价戊己丸不同配伍方对炎症后肠易激综合征(post-infectious irritable bowelsyndrome,PI-IBS)模型大鼠结肠运动功能的作用,并从5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)角度初步探讨其作用机制.方法:采用乙酸灌肠加束缚应激建立PI-IB... 详细信息

目的:评价戊己丸不同配伍方对炎症后肠易激综合征(post-infectious irritable bowelsyndrome,PI-IBS)模型大鼠结肠运动功能的作用,并从5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)角度初步探讨其作用机制.方法:采用乙酸灌肠加束缚应激建立PI-IBS大鼠模型,应用戊己丸不同配伍方进行干预,应用BIOPAC MP150型多导生理记录仪描记大鼠结肠运动曲线,计算结肠运动指数和运动指数变化率,同时利用高效液相法检测血清、结肠、海马、下丘脑和额叶中5-HT的含量及5-HT转化率,甲苯胺蓝染色法计算结肠肥大细胞数目和脱颗粒率.结果:经戊己丸治疗后,中、高剂量组PI-IBS模型大鼠结肠运动指数(1770.10、1504.97、1700.64、1467.22 vs 2112.15)和运动指数变化率(68.10、40.16、59.97、39.33 vs 104.69)均显著下降(P<0.01).结肠组织中5-HT含量显著下降(3493.38、2640.41、2086.08、3255.63、2688.69、2129.13 vs 4168.36),血清中5-HT转化率(3.20、4.60、6.61、2.86、3.40、4.05 vs2.08)明显升高(P<0.05,P<0.01).中、高剂量组中枢边缘系统中5-HT含量(243.16、295.03、250.28、303.61 vs 124.42;303.51、397.30、339.94、353.02 vs 198.58;260.87、302.75、254.65、298.92 vs 166.71)显著升高(P<0.01),5-HT转化率(134.69、98.61、130.57、95.87vs 281.91;209.43、184.55、189.56、186.75vs 262.01;109.36、86.52、115.41、88.47 vs268.36)明显下降(P<0.05,P<0.01).结肠黏膜肥大细胞数目(6.40、5.11、6.48、5.57 vs 10.47)和脱颗粒率(23.81、17.94、23.25、19.19 vs34.10)亦明显下降(P<0.01).结论:戊己丸不同配伍方改善PI-IBS模型大鼠结肠运动功能的作用机制可能是通过改善5-HT含量及肥大细胞的异常状态,从而调节脑-肠轴功能实现的.

关键词：戊己丸不同配伍方炎症后肠易激综合征结肠运动 5-HT 肥大细胞脑-肠轴

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参莲提取物对PM_(2.5)染毒RAW264.7细胞损伤的保护作用

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中国中药杂志 2015年第10期40卷 1977-1983页

作者：刘栩岑李玉洁王娅杰李琦杨庆翁小刚陈颖蔡维艳郭琰阚晓溪陈熹黄鹤飞朱晓新首都医科大学中医药学院北京100069 中国中医科学院中药研究所北京100700

观察中药参莲(SL)提取物对PM2.5染毒RAW264.7细胞损伤的保护作用。建立PM2.5染毒致RAW264.7细胞损伤模型。以细胞生长、细胞损伤标记物、氧化应激相关因子及炎性细胞因子为观察指标,评价SL提取物对PM2.5染毒RAW264.7细胞损伤的保护作用... 详细信息

观察中药参莲(SL)提取物对PM2.5染毒RAW264.7细胞损伤的保护作用。建立PM2.5染毒致RAW264.7细胞损伤模型。以细胞生长、细胞损伤标记物、氧化应激相关因子及炎性细胞因子为观察指标,评价SL提取物对PM2.5染毒RAW264.7细胞损伤的保护作用。结果表明,PM2.550 mg·L-1作用4,24 h时可致细胞颗粒沉积,抑制细胞生长,可显著增加细胞上清中LDH,NO释放量及细胞内活性氧(ROS)水平。在SL提取物50,25,10 mg·L-1干预作用下,RAW264.7细胞颗粒沉积减轻,细胞上清中LDH,NO,IL-1β,MCP-1释放量显著下降,SOD活性显著有所增加。表明SL提取物对PM2.5染毒RAW264.7细胞损伤有明显保护作用,其作用可能与对细胞的直接保护作用、减少氧化应激及炎症损伤有关。

关键词： PM2.5 RAW264.7 参莲提取物

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