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基于Cleaved Caspase-9探讨丹酚酸B对肝纤维化-肝癌细胞凋亡的影响

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基于Cleaved Caspase-9探讨丹酚酸B对肝纤维化-肝癌细胞凋亡的影响

作者：阚悦安徽医科大学

学位级别：硕士

目的1.制备二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine,DEN)诱导的小鼠肝纤维化-肝癌模型,模拟肝纤维化-肝癌发生及发展过程。2.观察丹酚酸B(salvianolic acid B,SalB)对二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)诱导小鼠肝纤维化-肝癌进程病理的改... 详细信息

目的1.制备二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine,DEN)诱导的小鼠肝纤维化-肝癌模型,模拟肝纤维化-肝癌发生及发展过程。2.观察丹酚酸B(salvianolic acid B,SalB)对二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)诱导小鼠肝纤维化-肝癌进程病理的改变。3.观察丹酚酸B对DEN诱导小鼠纤维化及癌变肝组织中细胞凋亡的影响。4.观察丹酚酸B对DEN诱导的小鼠肝组织中Cleaved Caspase-9蛋白表达水平的影响。5.观察丹酚酸B对TGF-β(Transforming grow factor beta 1,TGF-β)干预的肝纤维化-肝癌细胞(HSC-T/HepG/SMMC-7721/Bel-7402)凋亡和周期的影响。6.观察丹酚酸B对TGF-β干预的肝纤维化细胞(HSC-T)中Cleaved caspase9蛋白表达水平的影响。7.观察丹酚酸B对TGF-β干预的肝癌细胞(Bel-7402)中Cleaved caspase9蛋白表达水平的影响。方法1.制备DEN诱导的肝纤维化-肝癌模型昆明种的小鼠♂100只,随机分为五组:正常对照组、模型组、Sal B低、高剂量(15,30 mg·kg)组、阳性药物秋水仙碱(0.2 mg·kg)组,每组20只,正常组小鼠注射无菌生理盐水,其他四组注射1.0%DEN溶液诱导肝纤维化-肝癌模型,依照体质量10mL·kg注射给药(1次/周)。于造模当天开始,SalB组小鼠分别给予15、30 mg·kg·d SalB灌胃,阳性药物组给予0.2 mg·kg·d秋水仙碱灌胃,正常对照组则给予相应的溶媒灌胃,连给药至16周末。于造模12周、16周处死小鼠。***染色法检测病理学改变Hoechst33258荧光染色细胞观察组织中细胞凋亡分布情况对应HE染色的同一部位,常规方法采用Hoechst33258进行荧光染色,分别于荧光显微镜低、高倍镜下观察组织中纤维化、癌细胞凋亡情况。3.体外培养HepG/HSC-T/SMMC-7721/Bel-7402细胞株,FCM(Flow cytometr y)检测细胞凋亡率和周期分布体外培养肝纤维化-肝癌细胞(HepG/HSC-T/SMMC-7721/Bel-7402)细胞株至对数生长期。实验分六组:Control组、TGF-β组、药物组(Sal B 25,50,100μmol·L+TGF-β 9 pmol·L)组、药物对照组(SalB 50μmol·L),待六孔板内细胞单层铺展面积达到70%-80%,更换为无血清的DMEM培养基,培养24h,配置SalB溶液,于药物组、药物对照组加入相应浓度的SalB,继续培养24h,终止培养前6h于TGF-β组和药物组加入TGF-β(9 pmol·L)。FCM(Flow cytome try)分别检测各细胞株的凋亡率,PI单染法周期检测试剂盒处理肝纤维化-肝癌细胞,FCM检测每种细胞株各组的周期分布。*** blot法检测小鼠肝纤维化-肝癌时期组织中Cleaved Caspase-9的表达常规方法提取小鼠12周、16周肝组织中的总蛋白,采用山羊抗Cleaved Cas pase-9和兔抗GAPDH检测Cleaved caspase-9表达*** blot法检测肝纤维化-肝癌细胞中Cleaved caspase-9的蛋白表达肝纤维化细胞选取肝星状细胞HSC-T,肝癌细胞选取Bel-7402,丹酚酸B药物组选取50μmol·L的药物浓度,常规方法提取HSC-T/Bel-7402中的总蛋白,采用山羊抗Cleaved Caspase-9和兔抗GAPDH检测Cleaved Caspase-9的表达。结果1.丹酚酸B对DEN诱导的小鼠12周肝组织病理学改变12周时,光镜下观察正常组小鼠的切片,可见肝组织的结构正常,肝小叶结构清晰。模型组肝组织纤维化程度明显,肝小叶被分隔成假小叶,细胞核染色变深,结合本课题组前期实验结果,提示12周为肝纤维化时期。丹酚酸B低、高剂量组纤维化程度,核异型性均轻与模型组,未形成假小叶结构。2.丹酚酸B对DEN诱导的小鼠16周肝组织病理学改变16周时,光镜下观察模型组肝小叶结构紊乱,肝小叶被分割成假小叶,可以观察到具有癌细胞样的肝细胞,表现为细胞体积变大,大小不一致,肝细胞的细胞核染色变深,结合本课题组前期实验结果,提示16周为癌前病变期。丹酚酸B低、高剂量组纤维化程度,肝细胞坏死,核异型性均轻与模型组。3.丹酚酸B对DEN诱导的小鼠肝纤维化时期组织中细胞凋亡的影响正常组呈现呈弥散均匀的蓝色荧光,细胞核形态正常;与模型组12周相比,丹酚酸B低、高剂量组在纤维化病变区域浓染的碎片状亮点较多,提示凋亡细胞增多,丹酚酸B低高剂量能够促进纤维化细胞即HSC凋

关键词：凋亡 TGF-β1 Cleaved Caspase-9 肝纤维化肝癌丹酚酸B

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三江源区生物多样性保护法律制度研究

三江源区生物多样性保护法律制度研究

作者：阚宏悦西南政法大学

学位级别：硕士

生物多样性是人类赖以生存和发展的物质基础,是社会经济可持续发展的战略性资源,具有多方面的价值,在提供食物、工业原料、医药等来源,维系自然界物质循环、能量转换、净化环境、改良土壤、控制病虫害、涵养水源、保持水土、调节小气候... 详细信息

生物多样性是人类赖以生存和发展的物质基础,是社会经济可持续发展的战略性资源,具有多方面的价值,在提供食物、工业原料、医药等来源,维系自然界物质循环、能量转换、净化环境、改良土壤、控制病虫害、涵养水源、保持水土、调节小气候、促进生物进化和自然演替等方面发挥着重要的作用。但事实上,全球生物多样性保护的现状是不容乐观的。据有关数据表明,全球60%的生态系统遭到破坏,而生态系统是生物多样性保护的基础,与生物多样性保护有密切的联系。由于工业化和城市化进程的加快、资源的不合理利用、种植和养殖品种单一化、外来物种入侵、气候变化等原因,中国的生物多样性也面临着严峻的威胁。全国90%左右的草原存在不同程度的退化、沙化;全国40%的重要湿地面临严重退化的威胁,特别是沿海滩涂和红树林遭受严重破坏。物种资源丧失的问题很突出,江河渔业资源严重衰退。遗传资源丧失的问题也很突出。例如,20世纪50年代,中国各地农民种植水稻地方品种达46000多个,至2006年,全国种植水稻品种仅1000多个,且基本为育成品种和杂交稻品种。而三江源国家级自然保护区地处青藏高原腹地,位于长江、黄河和澜沧江的源头地区。总面积15.23万平方公里,平均海拔4000多米,是目前我国面积最大、世界高海拔地区生物多样性最集中的自然保护区,也是我国海拔最高的天然湿地和三江生态系统最敏感的地区。三江源地区素有"中华水塔"之美誉,据科学家初步计算,长江总水量的25%、黄河总水量的49%和澜沧江总水量的15%都来自这一地区。三江源保护区地理位置和生态环境独特、地形地貌复杂,自然环境类型多样,是生物多样性最丰富、最集中的地区,动植物中有许多保护种和特有种;同时,三江源保护区也是生态系统最敏感的地区,近几十年来,由于自然和人类活动的双重作用,生态环境逐渐退化,生物多样性种类和数量锐减,生物多样性保护刻不容缓。只有加强科学管理和生态建设,恢复和重建三江源保护区生态系统和栖息地环境,才能使三江源区生物多样性得到有效保护。本文首先对生物多样性保护的基本问题和生物多样性保护的国际法律制度进行了详细介绍,其次,从我国生物多样性保护的理论与实践出发,分析三江源区生物多样性面临的问题及原因,在此基础上提出构建三江源区生物多样性保护法制化的具体制度,最后具体介绍了生态补偿机制法治化这个问题。

关键词：生物多样性法律制度生态补偿生物资源产权

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轴承保持架表面润滑改性研究

轴承保持架表面润滑改性研究

作者：阚悦铭哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

随着高性能、长寿命、高可靠航空飞行器的发展需求,航空轴承常常在高温、高压、高转速等非常恶劣的环境中使用,其产品寿命和可靠性会直接影响飞机正常运转及飞行安全。目前,随着轴承材料、制造工艺及热表处理技术的不断发展,轴承的疲劳... 详细信息

随着高性能、长寿命、高可靠航空飞行器的发展需求,航空轴承常常在高温、高压、高转速等非常恶劣的环境中使用,其产品寿命和可靠性会直接影响飞机正常运转及飞行安全。目前,随着轴承材料、制造工艺及热表处理技术的不断发展,轴承的疲劳寿命已有所提高,但由于润滑不良造成的磨损加速等已成为导致轴承失效的主要原因。本文通过主要研究了分析不同工艺参数、不同线速度、不同名义接触应力对摩擦磨损行为的影响,最终确定了航空轴承保持架涂层的表面润滑设计参数。采用对比试验,分析试验件外观、组织结构、厚度、结合力、表面粗糙度等检测结果,分别研究镀银和磷化两种工艺中最重要的工艺参数对其银镀层和磷化膜的影响,并最终形成最优镀银工艺和磷化工艺。在摩擦仪上进行模拟银镀层、磷化膜与M50钢球在实际工况条件下的摩擦磨损试验,分别分析了镀银和磷化的不同工艺参数、不同名义接触应力和不同线速度对银镀层和磷化膜层摩擦磨损行为的影响规律。由于在摩擦磨损性能方面,银镀层远远优于磷化膜层,从摩擦系数、磨痕宽度、磨损形貌等试验结果看出,双脉冲镀银形成的银镀层优于直流电镀形成的银镀层。最后将双脉冲镀银在轴承保持架上的工程化应用验证。采用试验器模拟断油工况对双脉冲镀银保持架进行性能验证。选取某型航空轴承保持架进行双脉冲镀银,其通过三次30s滑油断油试验考核,说明双脉冲镀银保持架在轴承断油过程中起到良好的润滑作用,最终确定双脉冲镀银方式、工艺设备及主要工艺参数,并最终应用到轴承保持架工程制造中。双脉冲镀银形成的银镀层优于直流电镀形成的银镀层和磷化膜层。

关键词：轴承保持架 M50钢镀银磷化摩擦磨损

玄参提取物对糖尿病视网膜病变微血管内皮细胞损伤的影响及其作用机制

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世界中医药 2024年第12期19卷 1757-1765页

作者：阚悦铭张珊珊山东中医药大学第一临床医学院济南250355 山东中医药大学第一附属医院内分泌科济南250355

目的:探讨玄参提取物抑制微小RNA-646(miR-646)改善微血管内皮细胞损伤缓解糖尿病视网膜水肿的影响及其作用机制。方法:根据简单随机化法将人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)细胞分为对照组、模型组(30 mmol/L葡萄糖)、观察组(30 mmol/L葡... 详细信息

目的:探讨玄参提取物抑制微小RNA-646(miR-646)改善微血管内皮细胞损伤缓解糖尿病视网膜水肿的影响及其作用机制。方法:根据简单随机化法将人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)细胞分为对照组、模型组(30 mmol/L葡萄糖)、观察组(30 mmol/L葡萄糖+100μg/mL玄参提取物组)、模型+Anti-NC(转染Anti-NC+30 mmol/L葡萄糖)、模型+Anti-miR-646(转染Anti-miR-646+30 mmol/L葡萄糖)组;将30只小鼠根据简单随机化法分为对照组、模型组(60 mg/kg的链脲佐菌素)、观察组(60 mg/kg的链脲佐菌素+100 mg/kg-的玄参提取物),每组10只。比较各组细胞增殖,迁移及miR-646、血管内皮生长因子A(VEGFA)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)表达;比较各组小鼠视网膜组织ICAM-1、CD31表达及视网膜组织水肿情况。结果:细胞实验结果显示,与对照组比较,模型组细胞miR-646、ICAM-1表达显著升高,VEGFA、CD31表达显著下降(均P<0.05);与模型组比较,观察组细胞miR-646、ICAM-1表达显著降低,VEGFA、CD31表达显著升高(均P<0.05);与模型+Anti-NC组比较,模型+Anti-miR-646组细胞增殖率、迁移细胞数及VEGFA表达显著增加,miR-646表达及凋亡率显著降低(均P<0.05)。动物实验结果显示,与对照组比较,模型组小鼠视网膜组织中miR-646、ICAM-1表达显著升高,VEGFA、CD31表达显著下降(均P<0.05),同时小鼠视网膜组织水肿情况加重;与模型组比较,观察组小鼠网膜组织中miR-646、ICAM-1表达显著降低,VEGFA、CD31表达显著升高(均P<0.05),同时小鼠视网膜组织水肿明显得到缓解。结论:玄参提取物可能通过miR-646/VEGFA机制调节HRMEC细胞增殖、迁移和凋亡,改善缓解糖尿病视网膜水肿。

关键词：糖尿病视网膜病变糖尿病视网膜水肿玄参提取物 miR-646 视网膜微血管内皮细胞增殖凋亡迁移

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如火如荼的“网红经济”

中国科技期刊数据库科研 2016年第11期 62-63页

作者：阚悦大众点评网福建厦门361005

“网红”“直播”等名字正在渗透人们的社交生活。近两年直播市场一片红海,随之而来的网红经济也逐渐浮出水面,而其变现能力也正遭受着市场的大洗牌。到底网红、直播是一种全新的互联网产业,还是昙花一现?

关键词：网红经济个人品牌内容

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论环境法中的公众参与原则

知识经济 2009年第3期 30-31页

作者：阚宏悦西南政法大学经济与贸易法学院 400031

环境与人类生存、发展息息相关,但当今经济的飞速发展带来了严重的环境污染。各种公害事件不断发生,人类生存的环境不断遭到破坏。保护、改善环境既是国家的责任也是每个公民应尽的义务,为了更有效地开展环境保护工作,仅靠扩大公众参与... 详细信息

环境与人类生存、发展息息相关,但当今经济的飞速发展带来了严重的环境污染。各种公害事件不断发生,人类生存的环境不断遭到破坏。保护、改善环境既是国家的责任也是每个公民应尽的义务,为了更有效地开展环境保护工作,仅靠扩大公众参与是不够的,重要的是如何让公民有序、有效地参与到环保中来。本文拟从公众参与的理论依据、目前我国公众参与存在的问题以及如何保障公众参与的有效实施几方面展开分析,重点探讨公众有序参与的问题。

关键词：公众参与环境权环境正义公众有序参与

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中国旅游业与西班牙旅游业比较研究

商业文化 2022年第12期 104-106页

作者：阚悦铭杜贺吉林外国语大学

旅游业是当今世界最重要的经济支柱之一,随着时代的变迁,旅游业的发展日益成熟,能够满足人们日益增长的物质、文化需求,同时对世界经济的发展也做出了巨大的贡献。旅游业促进了世界经济的发展,带动了社会的就业,也一定程度上丰富了世界... 详细信息

旅游业是当今世界最重要的经济支柱之一,随着时代的变迁,旅游业的发展日益成熟,能够满足人们日益增长的物质、文化需求,同时对世界经济的发展也做出了巨大的贡献。旅游业促进了世界经济的发展,带动了社会的就业,也一定程度上丰富了世界文化。西班牙是世界上游客最多的国家之一,也是世界上的第四大旅游国。而中国已经超越了西班牙,坐上了世界第三旅游大国的位置。本文将重点叙述西班牙和中国现代旅游业的发展历程,分析其发展特点,总结两国旅游业的发展经验,探索西班牙和中国旅游业发展成功的原因,并结合我国旅游业的发展现况,为我国旅游业的发展提出一些建议。

关键词：旅游大国旅游业的发展西班牙经济的发展就业游客

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影响我国经济提升因素的实证分析

当代经济 2014年第8期31卷 61-63页

作者：阚悦赵浩源吉林财经大学统计学院吉林长春130117

本文采用经济增长模型和多元线性回归分析方法对1988—2011年中国经济增长因素进行研究,分析了物质资本、劳动力、消费对国内生产总值的影响,建立计量经济模型,寻求这些变量与中国国民产出的数量关系,进行定量分析,对模型进行检验。

关键词：经济提升参数估计多重共线性检验自相关检验

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商业银行开展互联网金融业务的机遇与挑战

银行家 2020年第1期 74-76页

作者：逯晓玮阚悦中国邮政储蓄银行总行资产保全部

随着国内经济转型,商业银行需要大力发展零售和小微企业金融业务,而互联网金融业务成为大多数银行首先考虑开展的领域。鼓励商业银行致力互联网金融业务,既是满足更多个人客户、小微企业对小额、分散的互联网贷款需求,也是对当前互联网... 详细信息

随着国内经济转型,商业银行需要大力发展零售和小微企业金融业务,而互联网金融业务成为大多数银行首先考虑开展的领域。鼓励商业银行致力互联网金融业务,既是满足更多个人客户、小微企业对小额、分散的互联网贷款需求,也是对当前互联网P2P平台清理整顿进入深水区和关键期的必要且有效的弥补。同时,合作机构客户信息来源合法性、外包催收服务合规性等问题也给银行互联网金融业务发展带来巨大挑战。

关键词：互联网金融业务清收处置商业银行机遇与挑战