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大鼠酒精性肝病的实验性研究及低分子肝素的干预治疗作用

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大鼠酒精性肝病的实验性研究及低分子肝素的干预治疗作用

作者：阎春英山东大学

学位级别：硕士

目的：通过复制大鼠酒精性肝病模型,观察酒精性肝病发生发展过程中的病理及超微结构改变,检测瘦素含量、肝功血脂水平及氧化抗氧化指标在这一过程中的变化,并给予低分子肝素对酒精性肝病进行干预治疗,以进一步探讨酒精性肝病的发病... 详细信息

目的：通过复制大鼠酒精性肝病模型,观察酒精性肝病发生发展过程中的病理及超微结构改变,检测瘦素含量、肝功血脂水平及氧化抗氧化指标在这一过程中的变化,并给予低分子肝素对酒精性肝病进行干预治疗,以进一步探讨酒精性肝病的发病机制并为临床治疗提供实验依据。方法：成年雄性Sprague-Dawley大鼠45只,体重（180±20）g,正常喂养一周后随机分为两组,即造模组与对照组,前一组30只,后一组15只。造模组采用酒精灌胃复制动物模型,以56%乙醇溶液灌胃,酒精用量分别为2g/kg,3g/kg,4g/kg,5g/kg,6g/kg,7g/kg,8g/kg,两天为一阶段,每日2次灌胃至第2周末,然后以8g/kg作为维持剂量持续灌胃至第10周末,诱导产生酒精性肝病模型,对照组大鼠灌服等体积生理盐水。造模组随机抽取大鼠2只,行病理学检查,见肝组织内有弥散性脂肪空泡,提示酒精性肝病模型初步形成。此时将造模组随机分为低分子肝素干预治疗组和酒精性肝病模型组两组,两组均继续给予56%酒精8g/Kg灌胃,其中低分子肝素干预治疗组每日给予低分子肝素100IU/kg皮下注射;同时将对照组随机平均分为两组,均继续灌服等体积生理盐水,其中一组给予低分子肝素100IU/kg皮下注射,即正常对照组与低分子肝素药物对照组,共4周。4周后大鼠采用戊巴比妥0.1mL/100g腹腔注射麻醉,剖腹抽取下腔静脉血,取血清测定肝功血脂;酶联免疫吸附法测定血清瘦素水平;测定大鼠体重及肝湿重,计算肝／体比,即肝指数;分光光度法测定血清及肝组织匀浆MAD,SOD,GSH-PX水平;光镜和电镜下观察肝脏组织结构变化。结果：和对照组相比,14周时酒精性肝病模型组大鼠血清生化指标ALT,AST,ALP,TG,TC,LDL等均明显升高（P＜0.05）,血清和肝组织MDA含量显著增加,SOD及GSH-PX活力明显降低（P＜0.05）,血清瘦素水平明显升高（P＜0.05）;低分子肝素干预治疗组各项指标均明显改善（和模型组相比,P＜0.05）;正常对照组与药物对照组之间对比,各项指标无明显差异（P＞0.05）。酒精性肝病大鼠模型组在造模10周后出现广泛的细胞内小泡性脂肪变性,14周后部分大鼠出现酒精性肝炎的表现。电镜表现的肝组织超微结构变化和肝功生化指标及病理改变相一致,酒精性肝病模型组可见明显脂滴,线粒体膜断裂或溶解;低分子肝素干预治疗组可见脂滴较模型组减少,线粒体形态基本正常。结论： 1.酒精灌胃14周,成功复制了大鼠酒精性肝病模型。 2.瘦素含量的增加及氧化应激与酒精性肝病的发生发展相关。 3.低分子量肝素能够减少肝脏脂质浸润,延缓肝脏慢性炎症及纤维化的发生,其作用机制可能是改善脂肪代谢、抑制氧化应激及降低瘦素的表达。 4.低分子肝素对正常大鼠无不良影响,保证了药物的安全性。

关键词：酒精性肝病低分子肝素瘦素氧化应激

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现代检验医学杂志 2023年第2期38卷 7-12页

作者：李新强阎春英宗伟张蓉陕西省人民医院重症医学科西安710068 陕西省人民医院消化内一科西安710068

目的探究微小核糖核酸(microRNA,miR)-328-3p表达水平与乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭(hepatitis B virus-related acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)严重程度及预后的关系。方法选取2018年12月~2021年12月陕西省人民医院收治的HBV-ACLF患者120例(HBV-ACLF组)、慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者120例(CHB组),另选取同期健康体检者120例为健康组。比较三组一般资料及血清miR-328-3p表达水平,比较不同分期HBV-ACLF患者血清miR-328-3p表达水平;分析HBV-ACLF患者血清miR-328-3p表达水平与终末期肝病模型(model for end-stage liver disease,MELD)评分的相关性;比较不同预后HBV-ACLF患者基线资料及血清miR-328-3p表达水平;评估血清miR-328-3p和MELD评分对HBV-ACLF患者预后的预测价值;COX回归分析HBV-ACLF患者预后的影响因素。结果健康组、CHB组和HBV-ACLF组血清miR-328-3p(1.03±0.34,1.85±0.62和2.76±0.92)表达水平比较,差异有统计学意义(F=200.241,P<0.05);早期、中期、晚期组HBV-ACLF患者血清miR-328-3p(2.30±0.58,2.88±0.72和3.63±0.91)表达水平逐渐升高,差异有统计学意义(F=28.023,P<0.05);HBV-ACLF患者血清miR-328-3p表达水平与MELD评分、血清天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotranferase,AST)、总胆红素(total serum bilirubin,TBIL)和丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)呈正相关(r=0.598,0.418,0.375,0.339,均P<0.05);死亡组HBV-ACLF患者MELD评分(28.62±5.72)和血清miR-328-3p(3.34±0.67)表达水平均高于生存组(21.14±4.23,2.32±0.46),差异有统计学意义(t=8.237,9.878,均P<0.05);血清miR-328-3p和MELD评分预测HBV-ACLF患者预后的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.861(95%CI:0.791~0.932),0.853(95%CI:0.781~0.925),且二者联合预测HBV-ACLF患者预后的AUC为0.945(95%CI:0.902~0.989),高于miR-328-3p和MELD评分单独预测(Z=1.991,2.137,均P<0.05),且其敏感度和特异度分别为96.2%,86.8%;回归分析显示,MELD评分[OR(95%CI)=2.532(1.635~3.920)]和miR-328-3p[OR(95%CI)=2.928(1.836~4.668)]均是HBV-ACLF患者死亡的危险因素(均P<0.05)。结论HBV-ACLF患者血清miR-328-3p表达水平较高,与HBV-ACLF疾病严重程度和预后显著相关,且血清miR-328-3p与MELD评分联合能较为有效地预测HBV-ACLF患者预后,有一定临床参考价值。

关键词：乙型肝炎病毒微小核糖核酸-328-3p 慢加急性肝衰竭

肠内营养对结直肠癌放疗并发症及免疫功能的影响研究

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现代消化及介入诊疗 2023年第2期28卷 156-159页

作者：王雪张蓉阎春英牛璐金燕陕西省人民医院医院感染管理办公室 710068 陕西省人民医院消化内科 710068

目的探讨肠内营养对结直肠癌放疗并发症及免疫功能的影响。方法选取2020年3月至2022年3月陕西省人民医院收治的结直肠癌放疗病人80例,随机分为肠外营养组(40例)和肠内营养组(40例),肠外营养组采用肠外营养治疗,肠内营养组采用肠内营养... 详细信息

目的探讨肠内营养对结直肠癌放疗并发症及免疫功能的影响。方法选取2020年3月至2022年3月陕西省人民医院收治的结直肠癌放疗病人80例,随机分为肠外营养组(40例)和肠内营养组(40例),肠外营养组采用肠外营养治疗,肠内营养组采用肠内营养治疗。比较治疗后两组病人术后恢复情况和放疗并发症发生情况,治疗前后转铁蛋白(TRF)、白蛋白(ALB)、前白蛋白(PA)、白介素-1(IL-1)、白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)水平。结果治疗后,肠内营养组首次排气时间、首次排便时间以及住院时间均短于肠外营养组,差异有统计学意义(P<0.05);肠内营养组TRF、ALB、PA水平高于肠外营养组,差异有统计学意义(P<0.05);肠内营养组IL-1、IL-8、TNF-α水平低于肠外营养组,差异有统计学意义(P<0.05);肠内营养组IgA、IgG、IgM水平高于肠外营养组,差异有统计学意义(P<0.05);肠内营养组并发症发生率为10.00%,低于肠外营养组的27.50%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对于结直肠癌放疗病人,采用肠内营养可以缩短术后胃肠功能恢复进程,提高营养状态,抑制炎症反应,增强免疫功能,降低并发症发生率。

关键词：肠内营养结直肠癌放疗并发症免疫功能

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缺氧诱导巨噬细胞来源外泌体的提取与鉴定

山西医科大学学报 2022年第9期53卷 1103-1107页

作者：张蓉阎春英高淑娟王雪单虎商博鑫陕西省人民医院消化内科西安710068 西安交通大学第二附属医院呼吸内科

目的分析缺氧诱导巨噬细胞分泌产生外泌体,并对外泌体的形态特征进行分析鉴定。方法首先采用佛波酯诱导THP-1细胞促使其分化成为巨噬细胞,分别收集缺氧干预0,12,24 h的巨噬细胞源性外泌体,通过BCA方法提取外泌体蛋白,使用Western blot... 详细信息

目的分析缺氧诱导巨噬细胞分泌产生外泌体,并对外泌体的形态特征进行分析鉴定。方法首先采用佛波酯诱导THP-1细胞促使其分化成为巨噬细胞,分别收集缺氧干预0,12,24 h的巨噬细胞源性外泌体,通过BCA方法提取外泌体蛋白,使用Western blot方法测定分析外泌体阴性对照蛋白Histone和外泌体表面标志蛋白CD63和HSP70的表达。利用透射电子显微镜及Nanosight NS300仪分析外泌体的形态、特征及粒径大小。结果与缺氧干预0 h及12 h相比,缺氧干预24 h所得的巨噬细胞源性外泌体蛋白含量、CD63及HSP70的表达升高(P<0.05),而三组外泌体中均未检出Histone蛋白。外泌体呈形态均一的类圆形,表面有完整的双层模型结构,大多数外泌体颗粒的粒径集中在154 nm左右。结论成功从缺氧干预巨噬细胞的细胞培养上清液中分离提取出外泌体,通过检测其特异性标志蛋白及形态学分析显示提取的外泌体含量及纯度较高。

关键词：缺氧巨噬细胞外泌体

胃癌细胞中TWIST慢病毒表达载体的构建及鉴定

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癌症进展 2022年第18期20卷 1876-1879,1883页

作者：郭雪艳蔺敏刘贵生金燕阎春英高淑娟陕西省人民医院消化内科西安710068 宝鸡市人民医院呼吸内科陕西宝鸡721000

目的探讨胃癌细胞中TWIST慢病毒表达载体的构建及构建。方法参考Genbank的人TWIST基因序列设计出1对TWIST全基因扩增引物,从人胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR中扩增TWIST基因,聚合酶链反应(PCR)产物线性化克隆入慢病毒表达载体GV341中,构... 详细信息

目的探讨胃癌细胞中TWIST慢病毒表达载体的构建及构建。方法参考Genbank的人TWIST基因序列设计出1对TWIST全基因扩增引物,从人胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR中扩增TWIST基因,聚合酶链反应(PCR)产物线性化克隆入慢病毒表达载体GV341中,构建重组载体GV341-TWIST。将重组载体GV341-TWIST转染至人胃癌293T细胞包装病毒,免疫荧光检测293T细胞形态改变,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞TWIST表达水平,实时PCR法检测病毒滴度。结果成功构建了GV341-TWIST慢病毒表达载体,经限制性酶切后出现651 bp的条带,DNA测序分析证实重组慢病毒载体GV341-TWIST的插入序列有近100%的正确率,重组慢病毒载体转染293T细胞后,Western blot检测TWIST融合蛋白为25 kD。实时PCR测定重组慢病毒载体GV341-TWIST病毒滴度2.00E+8 TU/ml。结论本实验成功构建了人重组慢病毒载体GV341-TWIST慢病毒表达载体,在人胃癌293T细胞中高效表达了TWIST蛋白。

关键词： TWIST 慢病毒载体胃癌

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在探索中前进

宁夏教育 2000年第1期 20-21页

作者：阎春英银川市新城区第六小学

重症溃疡性结肠炎患者血清闭锁小带蛋白-1、GATA结合蛋白-3表达与预后有关

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内科急危重症杂志 2023年第4期29卷 290-292,348页

作者：阎春英宗伟张蓉金燕高淑娟王雪张玲娟李新强陕西省人民医院消化内科陕西西安710068 陕西省人民医院重症医学科陕西西安710068

目的:检测重症溃疡性结肠炎(UC)患者血清中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、GATA结合蛋白-3(GATA-3)水平,探讨其与重症UC患者预后相关性。方法:收集重症UC患者97例为重症组,并根据患者预后情况将其分为预后良好组68例和预后不良组29例;另选取轻... 详细信息

目的:检测重症溃疡性结肠炎(UC)患者血清中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、GATA结合蛋白-3(GATA-3)水平,探讨其与重症UC患者预后相关性。方法:收集重症UC患者97例为重症组,并根据患者预后情况将其分为预后良好组68例和预后不良组29例;另选取轻症UC患者50例为轻症组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组患者血清ZO-1、GATA-3水平,Pearson法分析ZO-1、GATA-3水平与Mayo评分的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清ZO-1、GATA-3对重症UC患者预后不良的预测价值。结果:与轻症组比较,重症组患者血清ZO-1水平显著降低,血清GATA-3水平、Mayo评分显著升高(P均<0.05);相关性分析显示,重症UC患者血清ZO-1水平与Mayo评分呈负相关(r=-0.650,P<0.05),GATA-3水平与Mayo评分呈正相关(r=0.474,P<0.05);与预后良好组比较,预后不良组患者血清ZO-1水平显著降低,血清GATA-3水平、Mayo评分显著升高(P均<0.05);血清ZO-1、GATA-3及Mayo评分联合预测重症UC患者预后不良的曲线下面积为0.966,灵敏度为93.75%,特异性为92.31%。结论:重症UC患者血清ZO-1水平降低、GATA-3水平升高,且与患者疾病严重程度和预后有关,可能作为预测重症UC患者预后不良的潜在标志物。

关键词：闭锁小带蛋白-1 GATA结合蛋白-3 重症溃疡性结肠炎预后

血清纤溶酶原激活物抑制剂-1、单核细胞趋化蛋白-1水平升高有助于诊断重症急性胰腺炎并发胰腺感染

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内科急危重症杂志 2023年第1期29卷 34-36,45页

作者：李新强阎春英宗媛宗伟张怡李博玲牛丹荆成桥陕西省人民医院重症医学科陕西西安710068 陕西省人民医院消化内一科陕西西安710068

目的:探究重症急性胰腺炎(SAP)患者血清纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达水平对SAP并发胰腺感染的诊断价值。方法:选取132例SAP患者,根据发病2周后是否并发胰腺感染分为感染组(40例)和非感染组(92例)。采... 详细信息

目的:探究重症急性胰腺炎(SAP)患者血清纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达水平对SAP并发胰腺感染的诊断价值。方法:选取132例SAP患者,根据发病2周后是否并发胰腺感染分为感染组(40例)和非感染组(92例)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测所有患者入院次日血清中PAI-1、MCP-1水平。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清PAI-1、MCP-1水平对SAP并发胰腺感染的诊断价值。采用Logistic回归分析影响SAP并发胰腺感染的危险因素。结果:与非感染组比较,感染组住院天数较长,死亡率、手术率、血清PAI-1水平及MCP-1水平较高(P均<0.05);ROC显示,血清PAI-1、MCP-1水平单独诊断SAP并发胰腺感染的曲线下面积(AUC)为0.796、0.760,二者联合诊断SAP并发胰腺感染的AUC为0.845(95%CI:0.773~0.917),敏感度、特异性分别为85.00%、76.10%。Logistic分析显示,PAI-1、MCP-1是重症胰腺炎并发胰腺感染的危险因素(P均<0.05)。结论:SAP并发胰腺感染患者血清PAI-1、MCP-1水平上升,PAI-1联合MCP-1有助于SAP并发胰腺感染早期诊断。

关键词：重症急性胰腺炎纤溶酶原激活物抑制剂-1 单核细胞趋化蛋白-1 胰腺感染诊断价值

热休克蛋白90联合甲胎蛋白在肝细胞癌早期诊断中的价值

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世界华人消化杂志 2021年第21期29卷 1215-1221页

作者：阎春英付佐君刘贵生李江孙晨曦陕西省人民医院消化内一科陕西省西安市710000 陕西省人民医院肿瘤外科陕西省西安市710000

背景肝细胞癌是全球第六大常见癌症,早期诊断主要依靠血清学检查,随着热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)对于肝细胞癌分子研究的深入,本研究创新性采用HSP90联合甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)的方法,探究联合诊断对于肝细... 详细信息

背景肝细胞癌是全球第六大常见癌症,早期诊断主要依靠血清学检查,随着热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)对于肝细胞癌分子研究的深入,本研究创新性采用HSP90联合甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)的方法,探究联合诊断对于肝细胞癌的诊断价值.目的评估HSP90联合甲胎蛋白AFP在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的诊断价值.方法选取2017-08/2020-07原发性肝癌、病毒性肝炎后肝硬化(乙型、丙型)、健康体检者共383位,采用电化学法检测AFP血清浓度,ELLISA法检测HSP90血清浓度,并使用统计学软件对结果进行处理及分析.结果单独分析AFP及HSP90对HCC的诊断价值,敏感度HSP90>AFP,特异度AFP>HSP90,AFP联合HSP90的灵敏度和特异度达到87.8%和91.2%.结论AFP联合HSP90建立新型HCC诊断模型能显著提高HCC诊断价值.

关键词： HSP90 AFP 肝癌诊断肝细胞癌