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基于噬菌体展示技术醛固酮特异性抗体的筛选

新乡医学院学报 2024年第3期41卷 214-220页

作者：王素娟田晓平赵巧辉王天云郑州伊美诺生物技术有限公司河南郑州450016 新乡医学院河南新乡453003

目的利用噬菌体展示技术及重组抗体构建技术筛选出特异性醛固酮(ALD)抗体,为ALD诊断试剂盒的研发提供原材料。方法取5只健康清洁级新西兰大白兔,将抗原ALD-血蓝蛋白(KLH)稀释至2 mg·L^(-1),采用背部多点注射方法对5只新西兰大白兔进行... 详细信息

目的利用噬菌体展示技术及重组抗体构建技术筛选出特异性醛固酮(ALD)抗体,为ALD诊断试剂盒的研发提供原材料。方法取5只健康清洁级新西兰大白兔,将抗原ALD-血蓝蛋白(KLH)稀释至2 mg·L^(-1),采用背部多点注射方法对5只新西兰大白兔进行首次免疫,免疫剂量为每只1 mg;每隔2周进行1次免疫,且免疫剂量减少50%;从第3次免疫开始,每次免疫1周后采集大白兔耳缘静脉血,使用包被0.25 mg·L^(-1) ALD-BSA抗原的化学发光板,采用间接法和竞争法测定血清滴度;第5次免疫后选取血清效价高、特异性好的大白兔,取其脾脏和骨髓等组织。将脾脏组织研磨,采用TRIzol试剂一步法提取RNA,获取轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因序列。通过连接肽连接成单链片段(ScFv)并构建至噬菌粒载体Pcomb3xss中;然后,通过电转化方法将其导入大肠杆菌TG1,完成ALD ScFv噬菌体展示库构建。对文库进行3~5轮富集筛选,并挑取单克隆进行噬菌体上清制备,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)竞争法鉴定后送测,获得高竞争性克隆序列;将筛选得到的克隆序列插入至pCMV3表达载体,提取质粒后使用瞬时转染方法进行HEK293细胞转染;1周后,收取上清,应用亲和层析纯化及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳鉴定其纯度及表达量。结果5只大白兔在第5次免疫后,间接法检测其血清效价结果显示,4#、5#大白兔血清在稀释32000倍后,效价仍>10000。竞争法检测结果显示,5#大白兔血浆样本低值与高值的比值为2:1,优于其他大白兔。选取5#大白兔进行噬菌体文库构建。使用常规聚合酶链反应扩增出VL及VH基因片段,经搭桥拼接成ScFv(VL+VH)后,琼脂凝胶电泳分析可看到750 bp左右大小条带,与最初设计的片段大小一致。ScFv经酶切连接电转至大肠杆菌TG1中,构建一个库容为4.73×10^(8) cfu·mL^(-1)的噬菌体文库。经3轮淘洗出库平皿挑取300个单克隆,制备单克隆噬菌体,ELISA结果显示,300个克隆中阳性率达100%,校准品竞争检测阳性克隆42个,筛出率14%;42个阳性克隆进一步进行临床样本竞争检测,筛出16株单克隆符合要求,将16株进行复测,2次检测结果一致;测序后优选6条抗体序列进行构建表达,纯化后SDS-PAGE还原胶电泳结果显示,在重链50000及轻链25000位置均有条带,获得6株高亲和力、竞争性的兔ALD单抗。结论通过噬菌体展示技术成功筛选出6株高亲和力、竞争性的兔ALD抗体,这为小分子抗体的发现提供了一种参考方法。筛选出的AD185、AD277抗体在校准品及临床样本竞争中,均表现出比阳性对照高出2倍的竞争优势,这为ALD检测试剂盒原材料的开发提供了可能性。

关键词：噬菌体展示醛固酮抗体蛋白A亲和纯化

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HECW2基因与肿瘤的研究进展

医学综述 2024年第10期30卷 1189-1193页

作者：冯润林王天云奎翔谢文波昆明医科大学第二附属医院病理科昆明650101 昆明医科大学第二附属医院消化科昆明650101

含HECT,C2和WW域E3泛素蛋白连接酶2(HECW2)基因通过调节蛋白质的泛素化和降解过程参与细胞周期调控、信号转导以及细胞死亡等关键的生物学过程。既往有关HECW2基因的研究多聚焦于神经发育障碍与智力障碍等非肿瘤方面,而关于其在肿瘤发... 详细信息

含HECT,C2和WW域E3泛素蛋白连接酶2(HECW2)基因通过调节蛋白质的泛素化和降解过程参与细胞周期调控、信号转导以及细胞死亡等关键的生物学过程。既往有关HECW2基因的研究多聚焦于神经发育障碍与智力障碍等非肿瘤方面,而关于其在肿瘤发生发展中的作用机制的报道较少。近年研究认为HECW2基因在多种肿瘤类型中异常表达,并在肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭过程中发挥重要功能,可影响肿瘤的生物学行为,这为后续探索肿瘤的分子机制提供了新的视角,为肿瘤的个性化靶向治疗奠定了前期基础。

关键词：肿瘤含HECT,C2和WW域E3泛素蛋白连接酶2 E3泛素蛋白连接酶

稀土金属有机配合物的合成、结构和力致发光性质

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大学化学 2024年第5期39卷 363-370页

作者：陈天云肖瑞麟顾欣晟邵云一卢求钧长沙学院生物与化学工程学院长沙410022

力致发光材料因其具有外力作用诱导产生发光的独特性质,其在冲击力、应力、张力或压力等作用力的传感,以及显示、照明、成像等领域具有巨大应用潜力,近年来引起了人们广泛关注。实验以二苯甲酰甲烷(DBM)、Eu(NO_(3))_(3)和三乙胺(TEA)... 详细信息

力致发光材料因其具有外力作用诱导产生发光的独特性质,其在冲击力、应力、张力或压力等作用力的传感,以及显示、照明、成像等领域具有巨大应用潜力,近年来引起了人们广泛关注。实验以二苯甲酰甲烷(DBM)、Eu(NO_(3))_(3)和三乙胺(TEA)为原料,通过共沉淀法快速合成了离子型Eu^(3+)配合物Eu(DBM)_(4)TEA。采用紫外-可见吸收光谱、红外吸收光谱和X射线衍射谱对配合物的结构进行表征,并测定配合物的荧光性质和力致发光性能。本实验是在现有科研成果的基础上开发的包含稀土金属有机配合物合成、产物仪器表征和产物性能模块化综合化学实验,实现了科教融合;实验原料廉价、实验操作简单,模块化的设计机动灵活,能满足基础实验、综合实验和趣味科普实验等不同层次本科教学需求;实验现象可视,有助于激发学生学习兴趣,提升学生专业认同感。

关键词：力致发光铕离子配合物综合化学实验

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先天性肺囊性腺瘤样畸形的影像特征及误诊分析

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临床误诊误治 2024年第8期37卷 10-14,19页

作者：焦振华刘连锋郭文文秦琛琛李天云咸阳市中心医院影像中心陕西咸阳712000 咸阳市中心医院病理科陕西咸阳712000 空军军医大学西京医院放射科西安710032

目的探讨先天性肺囊性腺瘤样畸形(CCAM)的影像特征,并分析误诊原因,总结防范误诊措施。方法回顾性分析2020年5月—2023年11月收治经手术和病理检查证实的CCAM 9例的临床资料。结果本组5例主要表现为间断性咳嗽、咳痰、痰中带血、发热及... 详细信息

目的探讨先天性肺囊性腺瘤样畸形(CCAM)的影像特征,并分析误诊原因,总结防范误诊措施。方法回顾性分析2020年5月—2023年11月收治经手术和病理检查证实的CCAM 9例的临床资料。结果本组5例主要表现为间断性咳嗽、咳痰、痰中带血、发热及气短等,3例为住院期间常规查体发现肺部异常,1例为常规体检发现肺部异常。术前首诊确诊2例,误诊7例。误诊为支气管源性肺囊肿3例,肺脓肿、囊性支气管扩张伴感染、肺隔离征和先天性大叶性肺气肿各1例。误诊时间8 d~2周。9例CT检查4例为大囊型,CT表现为占据胸腔的较大含气体或液体的囊腔,囊内见弯曲细线样分隔或气液平面;5例为小囊型,CT表现为局限于一侧肺叶多发薄壁小囊,部分呈蜂窝状改变,部分见短小气液平面。9例皆行单操作孔电视胸腔镜肺叶或肺段切除术,病理检查示4例大囊型为StockerⅠ型,5例小囊型为StockerⅡ型。9例出院后随访0.5~1.0年,均预后良好。结论CCAM因病理分型不同而影像学特征各异,虽易误诊,但仍具有一定影像学特征,确诊需病理学检查。

关键词：囊性腺瘤样畸形肺先天性体层摄影术,螺旋计算机病理检查误诊囊肿肺脓肿

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脉动热管太阳能集热器传热性能实验研究

暖通空调 2024年第7期54卷 133-137页

作者：商福民阎天海巨海娇刘栋曹欣刘建红长春工程学院长春130012 吉林省热管理技术校企联合创新实验室长春

以真空玻璃管为载体、石蜡为相变储热材料、脉动热管和铜管为传热元件,对比分析了充液率φ=50.0%的脉动热管太阳能集热器与铜管太阳能集热器在相同辐照度下的集热性能。研究结果表明,当辐照度大于0 W/m^(2)时,脉动热管太阳能集热器相比... 详细信息

以真空玻璃管为载体、石蜡为相变储热材料、脉动热管和铜管为传热元件,对比分析了充液率φ=50.0%的脉动热管太阳能集热器与铜管太阳能集热器在相同辐照度下的集热性能。研究结果表明,当辐照度大于0 W/m^(2)时,脉动热管太阳能集热器相比于铜管太阳能集热器管壁温度提高了40℃;相较于铜管太阳能集热器,热源温度越高,脉动热管太阳能集热器吸热能力越强,传热效果越好;在相同的辐照度下,相比于铜管太阳能集热器,脉动热管太阳能集热器内的石蜡达到熔点的时间缩短了13%;脉动热管太阳能集热器输出的热量比铜管太阳能集热器高0.5 kJ,随着辐照度的增强,热量差值将会更大;脉动热管蒸发段和冷凝段壁面与其相接触的传热工质会形成一种准平衡态,蒸发段与冷凝段的传热能力呈反比关系,当蒸发段传热能力下降时,冷凝段传热能力上升,保证了集热器的稳定运行。

关键词：太阳能集热器相变储热材料脉动热管铜管传热性能

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硫铁矿焙烧系统中三氧化硫含量与pH的关系

广州化工 2024年第15期52卷 146-148,157页

作者：水海华林天云许立信万超铜陵有色金属集团股份有限公司铜冠冶化分公司安徽铜陵244001 安徽工业大学化学与化工学院安徽马鞍山243032

硫铁矿是重要的冶金原料之一,在冶炼工业中应用广泛,它的主要化学成分为二硫化亚铁,是一种重要的化学矿物原料,常用来制造硫酸,其矿渣可用来炼铁、炼钢,若炉渣含硫量较高,含铁量不高时,可以用作水泥的附属原料;硫铁矿也会用于制造硫磺... 详细信息

硫铁矿是重要的冶金原料之一,在冶炼工业中应用广泛,它的主要化学成分为二硫化亚铁,是一种重要的化学矿物原料,常用来制造硫酸,其矿渣可用来炼铁、炼钢,若炉渣含硫量较高,含铁量不高时,可以用作水泥的附属原料;硫铁矿也会用于制造硫磺或者其他含硫的化合物。在实际生产过程中,转化氛围对产品性能和过程能耗有显著影响,基于此,本文主要研究了硫铁矿焙烧中pH-硫酸浓度之间的关系,为硫酸类溶液体系的pH和酸碱度分析提供了试验依据和预测理论模型。

关键词：硫铁矿三氧化硫 pH 焙烧二氧化硫

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筋滞骨错手法在膝骨关节炎治疗中的运用探析

中医研究 2024年第8期37卷 7-11页

作者：樊巧王楠楚天云刘晓莹寇赵淅张向东赵明宇湖南中医药大学湖南长沙410000 河南省洛阳正骨医院(河南省骨科医院) 河南郑州450016 河南中医药大学河南郑州450046

膝骨关节炎是指膝关节软骨发生退行性改变,导致关节肿痛、活动受限的疾病。筋滞骨错手法是一种在平乐正骨“筋滞骨错”理论指导下用于治疗膝骨关节炎的方法,在治疗中关注脊柱整体变化,通过整体辨证、筋骨并重、以骨为先、结构与功能兼... 详细信息

膝骨关节炎是指膝关节软骨发生退行性改变,导致关节肿痛、活动受限的疾病。筋滞骨错手法是一种在平乐正骨“筋滞骨错”理论指导下用于治疗膝骨关节炎的方法,在治疗中关注脊柱整体变化,通过整体辨证、筋骨并重、以骨为先、结构与功能兼顾治疗下肢疾病。对基于平乐正骨“筋滞骨错”理论、以骨为先、采用筋滞骨错手法治疗膝骨关节炎进行探讨,以期更好地指导临床。

关键词：膝骨关节炎筋滞骨错手法病因病机验案

基于改进YOLOv8n损失函数的克氏原螯虾体特征识别算法

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渔业现代化 2024年第5期51卷 72-80页

作者：耿春新王爱民阎天宇郁傲男张昊轩张武肖阳程刘兴国朱浩顾夕章李进峰邵鹏盐城工学院信息工程学院江苏盐城224051 盐城工学院海洋与生物工程学院江苏盐城224051 盐城工学院优集学院江苏盐城224051 中国水产科学研究院渔业机械仪器研究所上海200092 射阳六和饲料有限公司江苏射阳224300 江苏进峰农业科技有限公司江苏建湖224700 盐城市上水环境生物科技工程有限公司江苏盐城224051

克氏原螯虾(Procambarus clarkii)产业发展迅速,然而仍面临智能化水平偏低的问题,在养殖及加工过程中主要通过人工肉眼观察克氏原螯虾规格及完整性并作出相关判断。为解决克氏原螯虾的智能识别问题,提出基于YOLOv8n识别克氏原螯虾的虾... 详细信息

克氏原螯虾(Procambarus clarkii)产业发展迅速,然而仍面临智能化水平偏低的问题,在养殖及加工过程中主要通过人工肉眼观察克氏原螯虾规格及完整性并作出相关判断。为解决克氏原螯虾的智能识别问题,提出基于YOLOv8n识别克氏原螯虾的虾体、虾尾及螯足的算法。通过将原有损失函数CIoU替换为MPDIoU,并引入尺度因子ratio控制辅助边框的尺度大小用于计算损失,与MPDIoU损失函数相结合,提高边界框回归的准确性和效率,实现对克氏原螯虾虾体、虾尾及螯足的精准识别,为研究其分级智能化提供思路。结果显示,在YOLOv8n模型中加入Inner-MPDIoU的算法训练结果相比原有的CIoU损失函数识别率有所提高,mAP从83.7%提高到了90.8%。研究表明,该算法模型有助于对克氏原螯虾的主要部位实现精准识别,对研究克氏原螯虾的智能化精准分级具有推动作用。

关键词：克氏原螯虾图像识别 YOLOv8 MPDIoU 深度学习

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震动排痰仪在慢阻肺患者治疗中的应用效果研究进展

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中国老年保健医学 2024年第2期22卷 101-104页

作者：计全月李苏婷赵紫琪刘天云许坤云南中医药大学护理学院 650504 云南省第三人民医院护理部 650011

慢性阻塞性肺疾病是一种严重的呼吸系统疾病,主要症状包括呼吸困难和痰液潴留。传统的痰液排除方法包括药物治疗和物理疗法,但效果有限。震动排痰仪通过振动有效地帮助患者排除痰液,减轻呼吸困难,从而改善呼吸功能,还能减少痰液潴留,降... 详细信息

慢性阻塞性肺疾病是一种严重的呼吸系统疾病,主要症状包括呼吸困难和痰液潴留。传统的痰液排除方法包括药物治疗和物理疗法,但效果有限。震动排痰仪通过振动有效地帮助患者排除痰液,减轻呼吸困难,从而改善呼吸功能,还能减少痰液潴留,降低呼吸道感染的风险和急性加重的频率,以改善慢性阻塞性肺疾病患者的生活质量。本文旨在阐述震动排痰仪在慢性阻塞性肺疾病患者治疗中的应用效果研究进展,从震动排痰仪的工作原理和技术特点、痰液清除的重要性、震动排痰仪的临床应用以及优化与改进等方面进行研究。本研究发现虽然震动排痰仪在改善患者生活质量和减轻疾病症状方面显示出了巨大的潜力,但震动排痰仪仍然面临诸多挑战,还需要进一步的研究来明确最佳的应用方法和解决相关问题,以确保其在临床实践中的有效性和可持续性。

关键词：震动排痰仪慢性阻塞性肺疾病痰液