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靶向c-Met的CAR-T细胞构建及其对人NSCLC细胞的体内外杀伤作用

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靶向c-Met的CAR-T细胞构建及其对人NSCLC细胞的体内外杀伤作用

作者：闵静婷蚌埠医学院

学位级别：硕士

背景:非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是全球范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一,多数患者确诊时已属晚期,传统疗法难以显著延长病人的生存周期;嵌合抗原受体T细胞(Chimeric antigen receptor T cell,CAR-T)技术通... 详细信息

背景:非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是全球范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一,多数患者确诊时已属晚期,传统疗法难以显著延长病人的生存周期;嵌合抗原受体T细胞(Chimeric antigen receptor T cell,CAR-T)技术通过DNA重组使T细胞精准靶向肿瘤,近些年取得了巨大突破;由于细胞间质上皮转换因子(cellular-mesenchymal epithelial transition factor,c-Met)多见于肝脏、卵巢、胃、肺等多种实体肿瘤细胞表面,而在正常组织细胞表面低表达或不表达,因此c-Met是一个有较高应用价值的肿瘤靶向治疗分子。综上,靶向c-Met的CAR-T细胞在治疗实体瘤方面具有较大的研究潜力。目的:构建靶向c-Met的CAR-T细胞,在体外验证其靶向杀伤NSCLC的能力;建立裸鼠A549细胞移植瘤模型,观察靶向c-Met的CAR-T细胞在体内抑制A549细胞移植瘤的有效性和安全性。方法:1、将含c-Met抗体sc Fv片段的CAR序列插入慢病毒质粒中,包被慢病毒。用酶切质粒电泳,检测目的基因正确性;利用倍比稀释后的慢病毒感染HEK293T细胞的阳性率计算病毒滴度;通过慢病毒感染的方式制作c-Met CAR-T细胞,用Retro Nectin提高感染效率,感染体系中按MOI值=5添加慢病毒,感染体系:1×10/m L T细胞、病毒、促感染试剂trans A;通过q PCR、weastern blot验证CAR序列的表达。通过流式细胞术检测c-Met CAR-T细胞的阳性率、细胞亚型。2、通过流式细胞术验证NSCLC细胞A549和H1975中c-Met蛋白的阳性表达和卵巢癌细胞株A2780中c-Met蛋白的阴性表达。利用A549细胞提供c-Met抗原,刺激c-Met CAR-T细胞,采用CCK-8法评估其扩增速度,以A2780细胞设立Non target对照;采用LDH释放法检测c-Met CAR-T细胞、活化T细胞在效靶比为1:1、1:5、1:10、1:20时对A549、H1975细胞的杀伤作用,以A2780细胞设立Non target对照;ELISA检测c-Met CAR-T细胞和活化T细胞在靶抗原刺激下,细胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ的释放情况,以A2780细胞设立Non target对照。3、使用荧光素酶标记的A549细胞按3×10/只的数量注射到裸鼠皮下,成瘤后分别给予c-Met CAR-T细胞、活化T细胞和PBS三种治疗,通过肿瘤体积、重量测量结合肿瘤体内成像评估c-Met CAR-T细胞于体内对NSCLC的抑制作用。对裸鼠肝、脾、肺、肾四种脏器进行HE染色,评估c-Met CAR-T细胞在体内是否会出现脱靶毒性;剥离瘤体,通过Tunel染色法检测肿瘤组织中靶细胞凋亡、免疫组化的方式检验肿瘤组织中增殖蛋白的表达和靶抗原c-Met蛋白的表达。结果:1、成功合成c-Met CAR慢病毒重组质粒,经酶切后监测电泳条带,结果提示条带位置符合理论值;基因测序结果符合原设计序列,并成功包装慢病毒;Western blot和q PCR结果提示结果显示:CAR分子存在于慢病毒感染后的T细胞中,c-Met CAR-T细胞构建成功;流式细胞术测得c-Met CAR-T细胞阳性率可达38.4%,且在慢病毒感染过后CD8T细胞比例有所上调。2、经流式细胞术验证,NSCLC细胞A549、H1975均有较强的c-Met蛋白表达,可作为靶细胞,卵巢癌细胞A2780 c-Met蛋白表达阴性,可作为Non target对照;CCK-8实验结果提示,在靶抗原的刺激下c-Met CAR-T细胞的数量较对照组上升更快(p<0.01);LDH释放实验提示,c-Met CAR-T细胞的抗肿瘤作用随效靶比的提升而增强。当效靶比为20:1时,c-Met CAR-T细胞对A549和H1975细胞的杀伤比例最高,杀伤率达到43.58%和51.12%;ELISA检测结果显示当有靶细胞存在时,与活化T细胞相比,c-Met CAR-T细胞能释放出更多的IL-2、TNF-α和IFN-γ,在Non target组内,c-Met CAR-T细胞、活化T细胞释放细胞因子量无明显差异。3、c-Met CAR-T细胞可以明显抑制裸鼠皮下肿瘤组织的生长,且对裸鼠正常的肝、脾、肺、肾四种脏器没有明显的脱靶毒性。Tunel染色结果显示c-Met CAR-T细胞治疗可加速A549细胞凋亡,免疫组化结果显示c-Met CAR-T细胞治疗后增殖相关蛋白Ki67表达减少,靶抗原c-Met表达减少。结论:1、设计二代c-Met CAR分子,成功构建能稳定表达CAR序列的c-Met CAR-T细胞

关键词：嵌合抗原受体 c-Met 非小细胞肺癌

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非病毒CAR-T开发工艺的研究进展

细胞与分子免疫学杂志 2024年

作者：李海鹏朱启宇朱家良闵静婷蚌埠医科大学精神卫生学院蚌埠医科大学生命科学学院蚌埠医科大学临床医学院蚌埠医科大学基础医学院人体解剖学教研室

嵌合抗原受体T(CAR-T)淋巴细胞是过继性免疫疗法中的研究热点，这项技术将肿瘤免疫治疗的应用前景推至巅峰。CAR-T对淋巴起源的血液肿瘤已经取得了极佳的疗效，并为实体瘤治疗提供了可能性。CAR-T制备工艺目前以病毒载体转染T细胞为主... 详细信息

嵌合抗原受体T(CAR-T)淋巴细胞是过继性免疫疗法中的研究热点，这项技术将肿瘤免疫治疗的应用前景推至巅峰。CAR-T对淋巴起源的血液肿瘤已经取得了极佳的疗效，并为实体瘤治疗提供了可能性。CAR-T制备工艺目前以病毒载体转染T细胞为主，但产生病毒载体的过程长、成本高，同时病毒载体载荷量低且伴随插入不稳定性。因此目前急需努力寻找更便捷、更精确的非病毒基因传递方法。本文综述了目前最有前途的非病毒基因传递技术的现状，成簇规律间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白9（CRISPR/Cas9）基因编辑、转座子系统，如睡美人(SB)和piggyBac(PB)和mRNA，并对非病毒载体CAR-T的未来发展条做出展望。

关键词：非病毒载体嵌合抗原受体T(CAR-T) 转座子 CRISPR/Cas9 综述

靶向c-Met的嵌合抗原受体T细胞制备及其对非小细胞肺癌的杀伤作用

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中华肿瘤杂志 2023年第4期45卷 322-329页

作者：闵静婷张露龙赤荣樊红莲李正红蚌埠医学院基础医学院蚌埠233017 蚌埠医学院生命科学院蚌埠233017

目的:制备靶向c-Met蛋白的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T),并检测其对人非小细胞肺癌(NSCLC)H1975细胞的体外杀伤作用。方法:将含c-Met抗体scFv片段的CAR序列插入慢病毒质粒中,用酶切质粒电泳,检测目的基因正确性。质粒转染工具为HEK293细胞... 详细信息

目的:制备靶向c-Met蛋白的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T),并检测其对人非小细胞肺癌(NSCLC)H1975细胞的体外杀伤作用。方法:将含c-Met抗体scFv片段的CAR序列插入慢病毒质粒中,用酶切质粒电泳,检测目的基因正确性。质粒转染工具为HEK293细胞,收集浓缩慢病毒,通过慢病毒感染的方式制备第二代c-Met CAR-T,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot验证CAR序列的表达,采用流式细胞术检测c-Met CAR-T的阳性率、细胞亚型,流式细胞术验证NSCLC细胞H1975中c-Met蛋白的阳性表达并选择c-Met蛋白阴性表达的卵巢癌细胞A2780作为对照,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测c-Met CAR-T在效靶比为1∶1、1∶5、1∶10、1∶20时对H1975细胞的杀伤作用。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测c-Met CAR-T在靶抗原刺激下,细胞因子白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IFN-γ的释放情况。结果:成功合成c-Met CAR慢病毒重组质粒,酶切条带位置符合理论值。基因测序结果符合原设计序列,并成功包装慢病毒。Western blot和qRT-PCR结果显示,CAR分子存在于慢病毒感染后的T细胞中,c-Met CAR-T构建成功。c-Met CAR-T阳性率可达38.4%以上,且在慢病毒感染过后CD8 + T细胞比例有所上调。流式细胞术验证结果显示,NSCLC细胞H1975有较强的c-Met蛋白表达,卵巢癌细胞A2780 c-Met蛋白表达阴性。LDH释放实验提示,c-Met CAR-T的抗肿瘤作用随效靶比的提升而增强,且均高于对照组,当效靶比为20∶1时杀伤率达到51.12%。ELISA检测结果显示,与对照组比较,在靶细胞刺激下c-Met CAR-T能释放出更多的IL-2、TNF-α和IFN-γ,而Non target组无此效应。结论:c-Met在NSCLC细胞系H1975中表达,可以作为NSCLC免疫治疗的靶点;靶向c-Met的CAR-T能对c-Met阳性肺癌细胞产生较强的体外杀伤作用。

关键词：肺肿瘤嵌合抗原受体 c-Met

3-溴丙酮酸通过糖酵解抑制人肺腺癌H1975细胞增殖及诱导凋亡研究

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中国药理学通报 2020年第11期36卷 1520-1526页

作者：樊红莲闵静婷吴胜男李正红蚌埠医学院基础医学院安徽蚌埠233030

目的探究3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BP)对肺腺癌H1975细胞抑制增殖和诱导凋亡的影响。方法采用3-BP(0、10、20、40、80、160μmol·L^-1)处理H1975细胞,使用MTT检测3-BP对肺腺癌H1975细胞增殖的影响。采用集落克隆实验观察低浓度的3... 详细信息

目的探究3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BP)对肺腺癌H1975细胞抑制增殖和诱导凋亡的影响。方法采用3-BP(0、10、20、40、80、160μmol·L^-1)处理H1975细胞,使用MTT检测3-BP对肺腺癌H1975细胞增殖的影响。采用集落克隆实验观察低浓度的3-BP(0、5、10、20μmol·L-1)对H1975细胞的增殖抑制作用。划痕和Transwell小室实验检测不同浓度3-BP(0、25、50、75μmol·L^-1)3-BP对H1975细胞迁移能力的影响。Annexin V-FITC/PI双染法检测3-BP对肺腺癌H1975细胞凋亡的影响。试剂盒检测3-BP对H1975细胞内活性氧及ATP水平的改变。Western blot检测3-BP对H1975细胞糖酵解及凋亡相关蛋白的影响。结果3-BP对肺腺癌H1975细胞具有明显的增殖抑制作用并明显降低了H1975细胞的迁移能力。3-BP可以明显增加肺腺癌H1975细胞的凋亡并在此过程中伴随着ATP水平的下降和活性氧水平的增高。Western blot检测表明3-BP上调了促凋亡蛋白Bax的表达,抑制了抑凋亡蛋白Bcl-2、糖酵解相关蛋白MCT1、HK-Ⅱ的表达。结论3-BP可以通过抑制糖酵解抑制人肺腺癌H1975细胞增殖并诱导肺腺癌细胞发生凋亡。

关键词：肺腺癌 3-溴丙酮酸糖酵解细胞凋亡细胞增殖能量代谢

姜黄素通过抑制TXNIP/TRX-1/GPX4通路介导的铁死亡减轻脓毒症小鼠肺损伤

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南方医科大学学报 2024年第9期44卷 1805-1813页

作者：陈凯孟兆菲闵静婷王佳慧李正红高琴胡俊锋蚌埠医科大学第一附属医院呼吸与危重症医学科安徽蚌埠233000 蚌埠医科大学呼吸系病临床基础安徽省重点实验室安徽蚌埠233000 蚌埠医科大学心脑血管基础与临床重点实验室安徽蚌埠233000

目的探究姜黄素(Cur)是否通过调控TXNIP/TRX-1/GPX4通路抑制铁死亡减轻脓毒症肺损伤。方法雄性C57BL/6小鼠随机分为Sham组、脓毒症(盲肠结扎穿孔术,CLP)组、CLP+各浓度Cur(50、100和200 mg/kg)组、CLP+Cur(200 mg/kg)+TRX-1抑制剂PX-12(25 mg/kg)组,10只/组,检测各组小鼠肺组织炎症因子及铁死亡关键因子MDA、MPO、GSH水平。Beas-2B细胞分为Con组、脂多糖组(LPS,1μg/mL)、LPS+各浓度Cur(2.5、5、10μmol/L)及LPS+Cur(10μmol/L)+PX-12(5μmol/L)组,检测MDA和Fe^(2+)水平,DHE染色评估ROS变化。Western blotting检测肺组织和Beas-2B细胞TXNIP、TRX-1、GPX4和X-CT蛋白表达水平。结果与Sham组相比,CLP组小鼠肺损伤严重,IL-6、IL-1β、TNF-α、MDA、MPO含量增加,GSH含量下降(P<0.01);与CON组相比,LPS组MDA、Fe^(2+)、ROS水平升高;CLP组肺组织和LPS组Beas-2B细胞TXNIP蛋白表达增加,TRX-1、GPX4及X-CT蛋白表达减低(P<0.01);与CLP组相比,CLP+Cur各浓度组肺损伤减轻,炎症因子和脂质过氧化因子含量降低,GSH水平升高;与LPS组相比,LPS+Cur各浓度组Fe^(2+)、MDA和ROS水平下降(P<0.05);TXNIP蛋白表达降低,TRX-1、GPX4及X-CT蛋白表达增加(P<0.01)。PX-12干预后,取消了Cur对脓毒症肺组织和Beas-2B细胞的保护作用(P<0.05)。结论姜黄素通过升高TRX-1、GPX4,降低TXNIP抑制铁死亡,减轻脓毒症肺损伤。

关键词：脓毒血症肺损伤姜黄素铁死亡 TXNIP/TRX-1/GPX4通路

3-溴丙酮酸通过抑制糖酵解阻止A549肺腺癌细胞增殖并诱导其凋亡

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第4期37卷 322-329页

作者：储菲樊红莲闵静婷吴胜男于影李正红蚌埠医学院第一附属医院药剂科安徽蚌埠233004 蚌埠医学院生理教研室安徽蚌埠233030

目的探究3-溴丙酮酸(3-BP)对人肺腺癌A549细胞的增殖和凋亡的影响及机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测(10、20、40、80、160)μmol/L3-BP处理24、48 h,对肺腺癌A549细胞存活率的影响;采用(0、50、100、150)μmol/L 3-BP处理肺腺癌A549细... 详细信息

目的探究3-溴丙酮酸(3-BP)对人肺腺癌A549细胞的增殖和凋亡的影响及机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测(10、20、40、80、160)μmol/L3-BP处理24、48 h,对肺腺癌A549细胞存活率的影响;采用(0、50、100、150)μmol/L 3-BP处理肺腺癌A549细胞24 h,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染法结合流式细胞术检测A549细胞的凋亡率;试剂盒检测A549细胞ATP水平、2′,7′-二氯二氢荧光黄二乙酸酯(DCFH-DA)染色结合流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平变化,Western blot法检测糖酵解及凋亡相关蛋白己糖激酶2(HK-2)、单羧酸转运蛋白1(MCT1)、丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)和凋亡相关B细胞淋巴瘤分子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)的表达。近红外荧光蛋白(iRFP)和荧光素酶双标记的A549细胞接种至裸鼠皮下,当皮下肿瘤体积达到100 mm^(3)时,将所有裸鼠随机分成PBS组、5 mg/kg顺铂(DDP)组、7 mg/kg 3-BP组;每组5只,采用腹腔注射方式进行给药。HE染色检测肿瘤病变情况,免疫组织化学染色检测KI-67抗原(ki67)表达确定对肿瘤细胞增殖的影响,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡情况,评估3-BP的体内抗肿瘤效果并进行肝肾功能检测确定3-BP肝肾毒性。结果3-BP可以抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡;与对照组相比,3-BP处理组ATP水平明显下降,ROS水平明显升高,HK-2、MCT1、PDK1、Bcl2蛋白表达明显降低,BAX表达明显增加。动物模型结果显示,与PBS组相比,3-BP可以抑制裸鼠肺腺癌移植瘤的生长,3-BP可以抑制肿瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,3-BP对裸鼠肝肾毒性较为轻微,安全性较高。结论3-BP通过抑制糖酵解抑制A549人肺腺癌细胞增殖并诱导其凋亡,对荷肺癌裸鼠的抗肿瘤效果较好且肝肾毒性较低。

关键词：肺腺癌 3-溴丙酮酸(3-BP) A549细胞糖酵解细胞增殖细胞凋亡

嵌合抗原受体T细胞治疗实体瘤的研究进展和挑战

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现代肿瘤医学 2020年第18期28卷 3271-3275页

作者：闵静婷李正红蚌埠医学院病理生理实验室安徽蚌埠233030

随着嵌合抗原受体疗法在血液系统癌症中的惊人疗效,研究者们也在实体瘤方面展开探索。我们将回顾近年来嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)治疗卵巢癌、肺癌、肝癌等实体瘤的研究进展;还将对CAR-T细胞治疗实体瘤的局限性,即抗原特异性问题、CAR-... 详细信息

随着嵌合抗原受体疗法在血液系统癌症中的惊人疗效,研究者们也在实体瘤方面展开探索。我们将回顾近年来嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)治疗卵巢癌、肺癌、肝癌等实体瘤的研究进展;还将对CAR-T细胞治疗实体瘤的局限性,即抗原特异性问题、CAR-T细胞贩运问题以及肿瘤微环境问题结合相应对策进行综述。

关键词：嵌合抗原受体T细胞实体瘤过继性免疫治疗

分泌型PD-1抗体可提高c-Met CAR-T细胞对胰腺癌细胞的杀伤作用

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南方医科大学学报 2024年第10期44卷 1976-1984页

作者：闵静婷彭上杜娜娜安然甄翔程曹佳威周陈航李正红蚌埠医科大学基础医学院安徽蚌埠233000 蚌埠医科大学公共基础学院安徽蚌埠233000 蚌埠医科大学临床医学院安徽蚌埠233000 蚌埠医科大学口腔医学院安徽蚌埠233000 蚌埠医科大学生命科学学院安徽蚌埠233000

目的设计并制备能够分泌PD-1抗体和靶向c-Met的CAR-T细胞,以消除肿瘤对CAR-T细胞的免疫抑制作用,从而提高CAR-T细胞对胰腺癌的治疗效果。方法采用Kaplan-Meier Plotter、GEPIA和Timer2.0生物信息学数据库,分析c-Met在胰腺癌中的表达、... 详细信息

目的设计并制备能够分泌PD-1抗体和靶向c-Met的CAR-T细胞,以消除肿瘤对CAR-T细胞的免疫抑制作用,从而提高CAR-T细胞对胰腺癌的治疗效果。方法采用Kaplan-Meier Plotter、GEPIA和Timer2.0生物信息学数据库,分析c-Met在胰腺癌中的表达、生存期及免疫浸润。免疫组化检测胰腺癌临床样本c-Met和PD-L1表达,流式细胞术验证胰腺癌细胞Aspc-1 c-Met和PD-L1表达通过基因编辑将PD-1分泌型抗体和HIS标签连接至2代c-Met CAR分子后,构建PD-1/c-Met CAR质粒并包被慢病毒,慢病毒感染至活化T细胞内,通过流式细胞技术检测CAR-T阳性率和细胞亚群;Western blotting检测分泌型PD-1抗体在细胞上清液中的存在;体外功能试验中,通过LDH释放实验检测CAR-T对靶细胞的杀伤效率,CCK-8检测靶细胞存在下PD-1抗体对CAR-T增殖的促进作用。ELISA检测PD-1/c-Met CAR-T和c-Met CAR-T活化后细胞因子的分泌量。结果生信分析结果显示,胰腺癌组织c-Met表达高于正常组织(P<0.01);c-Met表达水平与胰腺癌患者生存期呈负相关(P<0.01)。c-Met的表达可能与多种免疫细胞浸润成正相关。免疫组化结果显示,胰腺癌c-Met和PD-L1表达均高于癌旁组织(P<0.01);流式细胞术结果显示,Aspc-1细胞c-Met和PD-L1表达量为90.7%和57.7%,琼脂糖凝胶电泳显示成功制备四代PD-1/c-Met CAR分子;流式细胞术和Western blotting显示,成功构建PD-1/c-Met CAR-T且PD-1抗体可顺利分泌。体外功能验证中LDH结果显示,PD-1/c-Met CART对肿瘤细胞杀伤效率在效靶比为20:1时高于c-Met CAR-T(P<0.01);CCK-8实验结果显示,靶细胞刺激72 h后增殖效率高于c-Met CAR-T(P<0.01);ELISA结果显示,PD-1/c-Met CAR-T分泌的细胞因子IL-2和TNF-α高于c-Met CAR-T(P<0.01)。结论PD-1抗体分泌型c-Met CAR-T可成功构建,并在体外胰腺癌细胞上显示出优于c-Met CAR-T肿瘤杀伤效率和增殖效率。

关键词：嵌合抗原受体T细胞 c-Met PD-1分泌型抗体胰腺癌

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双荧光标记的肺癌皮下移植裸鼠模型的建立

中华肿瘤杂志 2019年第11期41卷 820-825页

作者：樊红莲刘明珠闵静婷李红俊杨小淮李永海李正红蚌埠医学院生理教研室 233030 蚌埠医学院第一附属医院泌尿外科 233004

目的建立荧光素酶(Luc)和近红外荧光蛋白(iRFP)双标记的肺癌皮下移植裸鼠模型.方法采用Gateway法构建表达Luc和iRFP的慢病毒载体,经酶切测序验证后,制备慢病毒,感染肺癌A549细胞.嘌呤霉素筛选阳性A549细胞(即mA549细胞)并进行扩增,荧... 详细信息

目的建立荧光素酶(Luc)和近红外荧光蛋白(iRFP)双标记的肺癌皮下移植裸鼠模型.方法采用Gateway法构建表达Luc和iRFP的慢病毒载体,经酶切测序验证后,制备慢病毒,感染肺癌A549细胞.嘌呤霉素筛选阳性A549细胞(即mA549细胞)并进行扩增,荧光显微镜下观察Luc和iRFP的表达,免疫荧光检测细胞表面c-Met蛋白的表达.将A549和mA549细胞分别接种至裸鼠皮下,每组6只,采用活体成像技术观察瘤体生长和荧光表达情况,HE染色和免疫组化染色评估成瘤状况.结果成功构建了稳定表达Luc和iRFP的mA549细胞系.荧光显微镜下观察到mA549细胞中iRFP与Luc成功表达.免疫荧光检测显示,A549细胞和mA549细胞均可表达c-Met蛋白.mA549细胞接种裸鼠后,模型生长周期适中,成瘤率为100%;mA549细胞移植瘤的生长趋势与A549细胞移植瘤无明显差异(P>0.05).HE染色显示,mA549与A549细胞移植瘤的细胞形态和组织结构相同.免疫组化染色显示,A549和mA549细胞移植瘤均表达c-Met蛋白.结论成功构建了稳定的、可实时监测的iRFP-Luc-A549肺癌细胞裸鼠模型.

关键词：肺肿瘤动物模型荧光素酶近红外蛋白活体成像