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桦木醇NO供体通过线粒体自噬—凋亡交叉对话抑制MCF-7细胞增殖的研究

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桦木醇NO供体通过线粒体自噬—凋亡交叉对话抑制MCF-7细胞增殖的...

作者：闫晓宁广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:乳腺癌严重威胁女性身心健康,现有的化疗药物仍然存在一些不足,例如对非靶细胞的毒性损伤等。桦木醇为五环三萜类化合物,具有多种抗肿瘤活性,但由于其溶解性差、生物利用度低,影响临床治疗效果,限制了其在临床上的使用。为解决这... 详细信息

目的:乳腺癌严重威胁女性身心健康,现有的化疗药物仍然存在一些不足,例如对非靶细胞的毒性损伤等。桦木醇为五环三萜类化合物,具有多种抗肿瘤活性,但由于其溶解性差、生物利用度低,影响临床治疗效果,限制了其在临床上的使用。为解决这些问题,本课题组通过对桦木醇C-3及C-28位置进行化学结构修饰,合成了一系列桦木醇NO供体衍生物。前期研究表明,在所合成的桦木醇NO供体衍生物中,3,28-二-(2-硝氧基-乙酰氧基)-桦木醇(NBT)的抗肿瘤活性最强,其能明显抑制肝癌及乳腺癌细胞的增殖。在此基础上,本论文在体内外水平上深入研究NBT对乳腺癌的抗肿瘤作用,并从线粒体凋亡/自噬途径探讨其作用机制,为开发新的抗肿瘤药物提供实验依据。方法:***对人乳腺癌细胞增殖的影响采用CCK-8法检测NBT与BT对人乳腺癌细胞系MCF-7、人肝癌细胞系A549和人宫颈癌细胞系Hela的抗增殖作用,由此确定NBT作用的细胞系及其给药时间和给药浓度;利用流式细胞术检测NBT对MCF-7细胞周期分布的影响;实时定量PCR检测Cyclin D1 mRNA水平;Western Blot技术检测Cyclin D1蛋白表达水平。***对人乳腺癌细胞凋亡的影响首先,采用Hoechst 33258染色和流式细胞术、分光光度法以及Western Blot技术分别检测NBT对MCF-7细胞凋亡形态和凋亡率的影响、Caspase-9活性以及凋亡蛋白PARP表达情况,研究NBT对MCF-7细胞凋亡的影响。其次,通过流式细胞术检测NBT对MCF-7细胞线粒体膜电位的影响,Western Blot技术检测Bcl-2、Bax、Cyt C蛋白水平,以确定细胞凋亡途径。最后,通过Western Blot技术检测Drp 1、Fis 1与Mfn 2蛋白表达水平,探讨NBT对MCF-7细胞线粒体分裂融合的影响。***对人乳腺癌细胞自噬的影响采用透射电子显微镜观察NBT对MCF-7细胞超微结构的影响;Western Blot技术检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B、p62的表达变化,观察NBT是否能够诱导MCF-7细胞发生自噬。***与自噬抑制剂联用对人乳腺癌细胞凋亡的影响NBT与自噬抑制剂CQ联用后,采用流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡;WesternBlot技术检测线粒体凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Cyt C、PARP及线粒体分裂融合蛋白Drp 1、Fis 1、Mfn 2的表达水平;透射电镜观察自噬体形态;Western Blot技术检测Beclin-1、LC3B、p62蛋白表达水平,以期探索NBT与自噬抑制剂联用对人乳腺癌细胞凋亡影响的具体机制。***对人乳腺癌细胞MCF-7移植肿瘤模型的影响将5X107/mL MCF-7细胞悬液以0.2 mL/只接种于雌性裸小鼠左前肢腋下,复制MCF-7移植肿瘤模型,分别对各组肿瘤移植小鼠采用生理盐水、氟尿嘧啶(5-Fu,22 mg/kg)、NBT(100 mg/kg)、BT(100 mg/kg)进行腹腔注射给药两周,考察NBT体内的抗肿瘤效果。记录并统计裸小鼠体重、瘤体积。通过试剂盒检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、尿酸(UA)含量,观察NBT对裸小鼠血液生化指标的影响。HE染色法观察NBT对MCF-7肿瘤组病理织的影响;Tunel细胞凋亡检测试剂盒检测MCF-7肿瘤组织的凋亡情况。结果:***抑制人乳腺癌细胞增殖并影响细胞周期分布经NBT、BT给药48 h后,CCK-8结果表明NBT对MCF-7、A549和Hela细胞的抗增殖效果明显高于BT,且MCF-7细胞对NBT最为敏感,因此,本课题选用MCF-7细胞为研究对象;NBT作用于MCF-7细胞24、48 h后,IC50值分别为26.53 μM、10.83 μM,根据此结果确定NBT的给药浓度为0、6、12、24 μM,给药时间为24 h。流式细胞术结果表明,NBT诱导MCF-7细胞阻滞于G0/G1期;实时定量PCR及Western Blot技术检测结果表明,NBT可抑制MCF-7细胞中周期蛋白Cyclin D1基因及蛋白的表达。以上结果提示NBT可能通过抑制MCF-7细胞Cyclin D1的表达,阻滞细胞周期从G1期进入S期,从而达到抑制MCF-7细胞增殖的效果。***通过线粒体凋亡途径诱导人乳腺癌细胞凋亡实验结果表明,NBT可诱导MCF-7细胞形态发生改变,出现核固缩凋亡典型特征,凋亡率显著性增高,呈剂量依赖性;分子水平上,与对照组比较,NBT给药组细胞Bcl-2表达降低、Bax表达升高、胞浆内细胞色素C表达升高、Caspase-9表达升高、PARP蛋白被剪切、线粒体膜电位降低,且具有剂量依赖性。另外,与对照组比

关键词： NBT 乳腺癌线粒体分裂融合凋亡自噬

批判话语视角下的格里菲斯《孙子兵法》英译研究

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批判话语视角下的格里菲斯《孙子兵法》英译研究

作者：闫晓宁上海师范大学

学位级别：硕士

《孙子兵法》是中国古典文化遗产中的璀璨瑰宝，也是世界上最古老、最杰出的兵书之一。作为一部中国经典之作，《孙子兵法》在全世界散发着一种独特的魅力。据我们所知，它已有27种文字的译本在各国广泛流传。《孙子兵法》全书不足六千... 详细信息

《孙子兵法》是中国古典文化遗产中的璀璨瑰宝，也是世界上最古老、最杰出的兵书之一。作为一部中国经典之作，《孙子兵法》在全世界散发着一种独特的魅力。据我们所知，它已有27种文字的译本在各国广泛流传。《孙子兵法》全书不足六千汉字，却在全世界产生着广泛而深刻的影响。因此该文本引起作者关注并最终决定予以研究。本篇论文“批判话语视角下格里菲斯《孙子兵法》英译研究”是以批判话语分析学科在翻译研究领域中的应用为基础的。批判话语分析(CDA)是一门跨学科研究话语的理论，它认为语言是社会实践的一种形式，旨在通过文本和话语的批判性分析揭示隐藏其中的意识形态和权利关系。本文以费氏三维模式为理论框架，从描述、阐述、解释三个层面对格里菲斯译本进行了分析。描述阶段主要分析文本的言语特征;阐述阶段牵涉文本生产、分配和消费的过程;解释阶段探讨导致形成该话语的意识形态根源。分析结果显示，格里菲斯译本以用词准确、句子通顺、文章充满强烈的军事气息为特色。分析结果还指出，格里菲斯译本的这些特点并非其任意为之，而是有意识、有目的的选择和创造的结果。本文试图阐明翻译中语言和意识形态的关系，揭露文本中隐藏着的意识形态，最终确定译者是否将自己的意识强加于翻译之中。

关键词：《孙子兵法》批判性话语分析描述阐述解释

杨凌土壤剖面中根瘤菌的分布和遗传多样性研究

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杨凌土壤剖面中根瘤菌的分布和遗传多样性研究

作者：闫晓宁西北农林科技大学

学位级别：硕士

土壤剖面中的根瘤菌分布和多样性研究对于各种工程扰动土壤和去表皮土壤的肥力恢复具有很重要的意义,但目前这方面的研究仍未涉及到,本文通过刺槐捕捉试验首次对杨陵农耕土壤垂直剖面0-300cm中（0-5、5-10、10-20、20-40、40-60、60-80... 详细信息

土壤剖面中的根瘤菌分布和多样性研究对于各种工程扰动土壤和去表皮土壤的肥力恢复具有很重要的意义,但目前这方面的研究仍未涉及到,本文通过刺槐捕捉试验首次对杨陵农耕土壤垂直剖面0-300cm中（0-5、5-10、10-20、20-40、40-60、60-80、80-100、100-120、120-150、150-200、200-250、250-300 cm）12个层次的根瘤菌分布、遗传多样性和系统发育进行了研究。种植刺槐90天后,结果显示刺槐根瘤数量并未随着土壤剖面呈现一定规律的,表明根瘤的分布与土壤剖面营养元素无直接关系。其次,不同剖面土壤肥力因子变化趋势为:全氮含量在0-120cm呈下降,120-150cm不变,150-300cm升高;水解氮在0-20cm升高,20-40cm下降,60-300cm升高;速效钾在0-20cm深度下降,20-300cm升高;速效磷含量总体呈下降趋势;有机质含量总体呈上升趋势;pH由8.5-9下降至8-8.5,总体呈微小下降趋势。从土壤剖面12个层次中,共捕获得到50株根瘤菌,16S rDNA序列分析结果表明,这些菌株归属于4个属,包括Mesorhizobium、Sinorhizobium/Ensifer、Rhizobium、Bosea。其中,在0-5cm表皮土壤中,主要为Mesorhizobium和Rhizobium,其中Rhizobium占65%,Mesorhizobium占35%;5-10cm主要为Mesorhizobium72%,Rhizobium18%,Bosea10%;10-20cm主要为Mesorhizobium50%和Rhizobium50%;20-40cm、60-80cm和80-100cm主要为Mesorhizobium。40-60cm主要为Mesorhizobium 35%和Rhizobium65%;100-120cm主要为Sinorhizobium/Ensifer和Rhizobium,分别占60%和40%。120-150cm没有分离出根瘤菌。150-200cm主要为Mesorhizobium、Ensifer和Rhizobium,分布比例相同;200-250cm主要为Ensifer;250-300cm主要为Mesorhizobium和Rhizobium,分别占67%和33%。另外,菌株2-7-1与根瘤菌目、慢生根瘤菌科的Bosea vestrisii首次聚在一起,以前从未在植物根瘤中发现这个菌。结瘤基因nodA序列分析结果表明,剖面土壤的根瘤菌的nodA基因存在一定的多样性,与Mesorhizobium、Rhizobium、Sinorhizobium模式菌株形成3个类群,绝大多数与Mesorhizobium聚为一群。其中,菌株12-3的nodA基因与Mesorhizobium在同一大分支上,然而在16S rDNA系统发育树上,该菌归属于Sinorhizobium/Ensifer,菌株10-1-1、10-1-2的nodA基因与Sinorhizobium聚在了一起,然而在16S rDNA系统发育树上,该菌归属于Rhizobium。这一现象表明这几株菌可能在进化过程中,其共生基因可能在不同种属之间发生了基因水平转移现象。

关键词：根瘤菌土壤剖面多样性系统发育

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冰片对血肿瘤屏障通透性的影响及机制

中国中西医结合杂志 2016年第6期36卷 696-702页

作者：邢燕梅闫晓宁郭军洽张荣广州中医药大学临床药理研究所广州510405

目的观察天然冰片对体外血肿瘤屏障（blood tumor barrier,BTB）模型通透性和丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPKs）信号转导通路相关激酶表达与激活的影响。方法大鼠C6脑胶质瘤细胞与人脐静脉内皮细胞（human ... 详细信息

目的观察天然冰片对体外血肿瘤屏障（blood tumor barrier,BTB）模型通透性和丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPKs）信号转导通路相关激酶表达与激活的影响。方法大鼠C6脑胶质瘤细胞与人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）共培养建立BTB模型后,设空白组,冰片低、中、高剂量组（25、50、100μg/m L）,每组7个时点（0、10、30、60、120、180、240 min）,每个时点3个样本。空白组在冰片组给药同时更换空白培养基,冰片组给不同剂量冰片,给药后不同时间点收集细胞。辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）流量测定BTB通透性,Western blot检测细胞外信号调节激酶（extracellular signal regulated protein kinase,ERK）,磷酸化ERK（phosphorylation extracellular signal regulated protein kinase,P-ERK）,P38MAPK,磷酸化P38MAPK（phosphor-P38,P-P38MAPK）,氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）和磷酸化JNK（phosphorylation c-Jun N-terminal kinase,P-JNK）的表达。结果与本组0 min比较,低、中、高剂量组各时间点通透率升高（P〈0.01）,P-ERK表达先升高,在30 min达极高值,逐渐恢复初始水平（P〉0.05）。与空白组比较,低剂量组10~240 min HRP通透率升高（P〈0.01）,30、60 min PERK蛋白表达升高（P〈0.05）,低、中、高剂量组180 min P-JNK表达升高（P〈0.05）,240 min P-JNK表达降低（P〈0.05）。与低剂量组比较,中剂量组10~180 min P-ERK表达升高（P〈0.05）,30~180 min通透率升高（P〈0.05）,180 min和240 min P-JNK表达降低（P〈0.05）。与中剂量组比较,高剂量组10~180 min通透率升高（P〈0.05）,10~180 min P-ERK表达升高（P〈0.05）,180 min和240 min P-JNK表达降低（P〈0.05）。结论冰片通过激活MAPKs信号通路的ERK磷酸化进而可逆性下调相关蛋白的表达,达到调节可逆性BTB开放的效果。

关键词：天然冰片丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路血肿瘤屏障

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小学语文教学中口语交际能力的培养方法

新课程教学（电子版） 2023年第10期 118-119页

作者：闫晓宁山东省邹城市千泉小学

小学是学生语言能力培养的关键阶段,口语交际能力的有效培养,可让学生将内心所思所想流利地表达出来,对学生未来成长至关重要。语文教师在实际教学中,应提升对口语交际能力培养的重视度,采取科学的培养手段,不断创新教法,使得学生可切... 详细信息

小学是学生语言能力培养的关键阶段,口语交际能力的有效培养,可让学生将内心所思所想流利地表达出来,对学生未来成长至关重要。语文教师在实际教学中,应提升对口语交际能力培养的重视度,采取科学的培养手段,不断创新教法,使得学生可切实提升口语交际能力。本文针对这些问题提出相关建议,以期为同行提供参考。

关键词：小学语文口语交际能力培养方法

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浅析个性化护理在肝胆外科围手术期中的效果

健康之路 2016年第3期 136-137页

作者：闫晓宁山东大学附属肿瘤医院

目的:浅析个性化护理在肝胆外科围手术期中的效果。方法:选取2014年1月至2015年12月本院接受的100例肝胆外科手术患者为研究资料,随机分成两组,50位患者为观察组,另外50位患者为对照组,对观察组的患者实施个性化护理,对照组中的患者实... 详细信息

目的:浅析个性化护理在肝胆外科围手术期中的效果。方法:选取2014年1月至2015年12月本院接受的100例肝胆外科手术患者为研究资料,随机分成两组,50位患者为观察组,另外50位患者为对照组,对观察组的患者实施个性化护理,对照组中的患者实施常规的护理方式,观察比较两组护理效果上的差异。结果:个性化护理在肝胆外科围手术期中的护理应用效果比常规护理效果好,观察组护理的总满意度为98%,对照组护理的总满意度为76%,组间护理效果比较具有明显差异,p<0.05。结论:个性化护理在肝胆外科围手术期护理中效果非常显著,值得大规模推广使用。

关键词：个性化护理肝胆外科围手术期

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如何避免图像领域发明专利申请修改超范围

电视技术 2012年第S2期36卷 106-109页

作者：谢佳妮闫晓宁陈罡冯骥国家知识产权局专利局专利审查协作北京中心北京100190

在发明专利申请的审批过程中,为克服新颖性或创造性的缺陷而对申请文件进行修改是大多数发明专利申请不得不面对的问题。本文结合电视图像领域的实际案例与中国国家知识产权局在实质审查中的修改超范围判断标准进行分析,对该领域的申请... 详细信息

在发明专利申请的审批过程中,为克服新颖性或创造性的缺陷而对申请文件进行修改是大多数发明专利申请不得不面对的问题。本文结合电视图像领域的实际案例与中国国家知识产权局在实质审查中的修改超范围判断标准进行分析,对该领域的申请人在撰写及修改申请文件时应注意的问题提出建议。

关键词：电视图像修改超范围专利法三十三条

食品微生物检验菌落总数测定中不同检测方法的应用分析

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食品安全导刊 2021年第19期 185-186页

作者：闫晓宁李承睿渭南职业技术学院陕西渭南714026 杭州娃哈哈启力食品集团有限公司浙江杭州310000

目的:分析计数琼脂平板法、TTC培养基法以及菌落总数测试片检测法在食品微生物检验中的应用。方法:对随机选择的200份食品样品分别采取计数琼脂平板法、TTC培养基法及菌落总数测试片检测法进行微生物检验菌落总数测定,比较3种方法对菌... 详细信息

目的:分析计数琼脂平板法、TTC培养基法以及菌落总数测试片检测法在食品微生物检验中的应用。方法:对随机选择的200份食品样品分别采取计数琼脂平板法、TTC培养基法及菌落总数测试片检测法进行微生物检验菌落总数测定,比较3种方法对菌落总数超标食品样品的检出率差异。结果:TTC培养基法在食品微生物检验中对不合格样品超标检出率21.0%高于计数琼脂平板法的样品超标检出率10.5%和菌落总数测试片检测法的样品超标检出率7.0%菌落总数测试片检测法(P<0.05)。结论:TTC培养基法相较于计数琼脂平板法和菌落总数测试片检测法在食品微生物检验菌落总数测定中有更高的样品超标检出率。

关键词：食品微生物计数琼脂平板法 TTC培养基法菌落总数测试片检测法

足三里穴位敷贴联合耳穴按压减轻肝癌术后腹胀程度的效果

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