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作者：门丽杰泰山医学院

学位级别：硕士

研究背景慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)是常见血液肿瘤的之一,可在各年龄段发病,其特点是髓细胞的生产过剩导致其不受控制的生长和费城染色体阳性。尽管当今各种治疗手段不断发展,慢性粒细胞白血病的患者的症状得... 详细信息

研究背景慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)是常见血液肿瘤的之一,可在各年龄段发病,其特点是髓细胞的生产过剩导致其不受控制的生长和费城染色体阳性。尽管当今各种治疗手段不断发展,慢性粒细胞白血病的患者的症状得到极大的改善,但却不能根治本病,也不能阻滞其发展,因此寻找有效抑制白血病的靶标则至关重要。肿瘤的发生发展很是复杂和繁琐,涉及各种遗传学的变化。进入二十一世纪来,伴随分子生物学及遗传学的不停发展,肿瘤在基因方面的研究在想有一个全新的突破。采用小干扰片段、普通质粒载体和慢病毒载体等方法将相关研究的靶基因干扰片段载入目的细胞,上调或下调靶基因的表达,从而检测干扰后基因表达的变化及生物学行为的改变。G蛋白偶联受体家族(GPCR)是迄今为止最大的膜蛋白家族且参与信号传导,肿瘤细胞通过挟制GPCRs的正常生理功能,使恶性肿瘤细胞得以存活、增殖,进而逃掉免疫系统的监视,增加血管形成,侵袭周围组织或转移到其他器官。本研究通过慢病毒介导,靶向沉默慢性粒细胞白血病细胞株K562中的GPR137基因,初步探讨沉默G蛋白偶联受体137(GPR137)基因对慢性粒细胞白血病细胞株K562的增殖、克隆、周期及凋亡等生物学行为的影响,进而为慢性粒细胞白血病的治疗提供新靶点和新思路。目的第一部分探讨慢病毒介导shRNA感染慢性粒细胞白血病细胞株K562是否成功沉默GPR137基因;第二部分主要探讨通过慢病毒介导shRNA感染K562细胞从而沉默GPR137基因以后对K562细胞的增殖、周期分布、克隆形成及凋亡等各种生物学特征的影响。方法1、构建Lv-shGPR137慢病毒载体,用人肾上皮细胞(293T)包装浓缩生成病毒液,感染慢性粒细胞白血病K562细胞。本实验将细胞分为三组:空白对照组(未转染组),阴性对照组(转染无效干扰片段组)和GPR137基因沉默组(转染了shGPR137片段组)。荧光显微镜观察慢病毒载体介导shRNA感染K562细胞的效果。2、采取实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法Western-blot检测慢病毒感染后GPR137基因的干扰效率。3、采取CCK-8法观察慢性粒白血病K562细胞体外生长情况;采取PI法使用流式细胞仪检测慢性粒白血病K562细胞周期的变化;采取克隆形成试验观察慢性粒细胞白血病K562细胞体外克隆形成情况。4、采取Annexin V-APC/7AAD法使用流式细胞仪检测慢性粒白血病K562细胞的凋亡情况。结果1、荧光显微镜下绿色荧光蛋白GFP显示,慢病毒Lv-shGPR137载体感染慢性粒细胞白血病K562细胞,其效率达90%左右。2、Real-timePCR检测GPR137基因沉默组慢性粒白血病细胞K562的GPR137mRNA的表达明显降低[(2.01±3.71)%vs(88.82±0.97)%、(86.81±3.83)%,P<0.01]。Western blotting证实GPR137基因沉默组慢性粒细胞白血病细胞K562中GPR137蛋白含量明显下调。其中GPR137基因沉默组相对表达水平显著低于空白对照组及阴性对照组[(69.09±5.46)%vs(111.18±4.45)%、(95.19±2.54)%,P<0.01],差异有统计学意义。3、CCK-8结果显示,与两个对照组比较,沉默GPR137基因后,K562生长受到明显抑制。感染120h后,GPR137基因沉默组K562细胞的增殖明显低于空白对照组和阴性对照组[(60.89±2.89)%vs(90.27±1.99)%,P<0.01]。克隆形成试验显示,GPR137基因沉默组细胞的集落形成能力明显低于空白对照组及阴性对照组[(10.60±0.40)%vs(24.40±0.40)%(25.10±0.70)%,P<0.01]。流式细胞仪显示,其GPR137基因沉默组的细胞周期G0/G1期细胞比例较空白对照组及阴性对照组相比明显增加,提示沉默该基因使细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05)。4、流式细胞仪显示其GPR137基因沉默组凋亡率比空白对照组及阴性对照组明显增加,[(24.47±0.28)%vs(10.19±0.22)%、(10.10±0.07)%,P<0.01]提示沉默GPR137基因可促进细胞的凋亡。结论1、慢病毒介导shRNA感染慢性粒白血病细胞K562后成功沉默GPR137基因2、GPR137基因的沉默可抑制慢性粒白血病细胞K562的增殖,阻滞细胞周期于G1期,抑制细胞的集落形成。3、GPR137基因的沉默可促进慢性粒白血病细胞K562的凋亡。4、GPR137基因或许可以作为慢性粒白血病诊断的一个新的肿瘤标志物,不久的将来或许可以作为慢性粒细胞白血病治疗的新靶点。

关键词：慢性粒白血病 GPR137 细胞增殖细胞凋亡

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三元阵被动测距浅海试验及后置处理

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声学学报 2009年第3期34卷 217-222页

作者：周伟惠俊英梅继丹门丽杰赵安邦哈尔滨工程大学水声工程学院哈尔滨150001 大连测控技术研究所大连67号信箱大连116013

为改进三元阵被动测距性能,采用了滑动窗互相关器估计时延,与常规互相关器相比时延估计性能有较大提高;采用的方位和距离的改进计算公式,在近程有很高的测距精度。针对实验结果瑕点多的现象,提出了在线自动跟踪剔除瑕点的方法,能稳健有... 详细信息

为改进三元阵被动测距性能,采用了滑动窗互相关器估计时延,与常规互相关器相比时延估计性能有较大提高;采用的方位和距离的改进计算公式,在近程有很高的测距精度。针对实验结果瑕点多的现象,提出了在线自动跟踪剔除瑕点的方法,能稳健有效自动地筛选出高质量的数据,称之为"圆筛"。并引入了"动态滤波",将其与"圆筛"结合作为后置处理模块。介绍了浅水、近程的三元阵被动测距海试结果,目标船分别为摩托艇和中型双体船,测距结果与精度为20 cm的差分GPS定位结果比较,表明"圆筛"和"动态滤波"相结合的后置处理方法,可显著改善测距效果。

关键词：被动测距后置处理三元阵差分GPS定位试验浅海互相关器估计性能

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浅海三元阵近程被动定位实验研究

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哈尔滨工程大学学报 2009年第5期30卷 547-551页

作者：周伟门丽杰梅继丹翟春平哈尔滨工程大学水声技术国防科技重点实验室黑龙江哈尔滨150001 大连测控技术研究所辽宁大连116013

为改进三元阵被动测距性能,采用了滑动窗互相关器估计代替常规的互相关器测时延,与常规互相关器相比时延计性能明显提高,当常规的互相器无法测得相关峰时,滑动窗互相关器仍然能较准确地测得时延;采用的适用于近程的方位和距离的改进计... 详细信息

为改进三元阵被动测距性能,采用了滑动窗互相关器估计代替常规的互相关器测时延,与常规互相关器相比时延计性能明显提高,当常规的互相器无法测得相关峰时,滑动窗互相关器仍然能较准确地测得时延;采用的适用于近程的方位和距离的改进计算公式,在近程有很高的精度.利用浅海、近程的三元阵被动测距海试数据,对所采用的改进方法进行了验证,目标船为摩托艇,将测距结果与精度为20 cm的差分GPS定位结果比较,表明二者吻合较好,相对误差在米量级.

关键词：浅海近程三元阵被动定位

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miR-451靶向调控c-Myc抑制多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞的增殖侵袭和迁移

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中华肿瘤杂志 2020年第7期42卷 560-564页

作者：鹿军门丽杰李弹弹孙玲吴希锋山东第一医科大学附属济南人民医院济南市人民医院血液科271100

目的:探讨miR-451对多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:将体外培养的RPMI-8226细胞分为空白对照组(未转染)、阴性对照组(转染miR-451模拟物阴性对照)和miR-451组(转染miR-451模拟物),采用实时定量PCR... 详细信息

目的:探讨miR-451对多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:将体外培养的RPMI-8226细胞分为空白对照组(未转染)、阴性对照组(转染miR-451模拟物阴性对照)和miR-451组(转染miR-451模拟物),采用实时定量PCR检测各组细胞中miR-451的表达,采用四甲基偶氮唑蓝法和克隆形成实验检测细胞的增殖情况,Transwell小室实验检测细胞的侵袭和迁移情况,Western blot检测c-Myc、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-451和c-Myc的靶向关系。结果:miR-451组和空白对照组细胞中miR-451的表达水平分别为2.85±0.27和1.02±0.06,细胞存活率分别为(47.28±3.15)%和(93.65±6.52)%,克隆形成率分别为(15.03±1.34)%和(28.48±2.12)%,侵袭细胞数分别为(86.65±5.58)个和(135.47±9.85)个,迁移细胞数分别为(106.36±6.48)个和(165.28±11.05)个,c-Myc蛋白的表达水平分别为0.35±0.03和0.66±0.05,MMP-2蛋白的表达水平分别为0.20±0.02和0.48±0.03,MMP-9蛋白的表达水平分别为0.28±0.03和0.59±0.06,差异均有统计学意义(均P0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,c-Myc为miR-451的潜在靶基因。结论:miR-451可通过靶向c-Myc抑制RPMI-8226细胞的增殖、侵袭和迁移。

关键词： miR-451 多发性骨髓瘤增殖迁移侵袭 c-Myc

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MiR-543对人白血病细胞株K562增殖与凋亡的调控及其机制研究

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中国实验血液学杂志 2019年第3期27卷 763-768页

作者：孙玲鹿军李弹弹门丽杰李传翠莱芜市人民医院血液科

目的:探讨miR-543对人白血病细胞株K562增殖与凋亡的调控作用及其机制。方法:选择2018年2月-2018年9月在本院接受治疗的CML患者46例(男性27例,女性19例)作为CML组,同时选择30例同期体检健康者作为对照组。利用Lipofectamine 2000脂质体... 详细信息

目的:探讨miR-543对人白血病细胞株K562增殖与凋亡的调控作用及其机制。方法:选择2018年2月-2018年9月在本院接受治疗的CML患者46例(男性27例,女性19例)作为CML组,同时选择30例同期体检健康者作为对照组。利用Lipofectamine 2000脂质体将miR-543模拟物(mimic)及阴性对照mimic转染至K562细胞后,应用CCK8方法检测miR-543对K562细胞增殖的影响,荧光素酶报告法分析miR-543对Wnt基因的靶向关系,流式细胞术检测miR-543对白血病细胞凋亡影响,Western blot方法检测Wnt、β-catenin、BCL-2、C-Myc及BAX表达水平。结果:慢性髓系白血病患者的miR-543水平显著低于健康对照组(P <0.05);miR-543 mimic组的miR-543的表达水平显著高于空白对照组(P <0.05);miR-543 mimic组的Wnt基因mRNA水平显著低于空白对照组(P <0.05)。miR-543 mimic可降低Wnt野生质粒的荧光素酶表达水平(P <0.05);miR-543 mimic对Wnt突变质粒的荧光素酶表达水平无抑制作用(P <0. 05)。miR-543 mimic组K562细胞增殖水平显著低于空白对照组及阴性对照scramble mimic组(P <0. 05)。miR-543 mimic组K562细胞凋亡水平显著高于空白对照组及阴性对照scramble mimic组(P <0. 05)。miR-543 mimic组细胞的Wnt、β-catenin、BCL-2及C-Myc蛋白水平均显著低于空白对照组及阴性对照(scramble mimic)组(P <0.05);miR-543 mimic组的BAX蛋白水平高于空白对照组及阴性对照(scramble mimic)组(P <0.05)。结论:miR-543可靶向Wnt蛋白,抑制Wnt信号通路活性,从而抑制白血病细胞的增殖能力,提高细胞凋亡水平。

关键词： miR-543 白血病 K562细胞 Wnt信号通路

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基于水平直线阵舰船目标近距离定位方法

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大连海事大学学报 2010年第2期36卷 91-94,99页

作者：翟春平于沨门丽杰惠俊英大连测控技术研究所辽宁大连116013 哈尔滨工程大学水声工程学院哈尔滨150001

为弥补聚焦波束形成声图测量方法定位精度受限的不足,提出通过修改声图测量网格及测量频率来实现舰船目标近距离精确定位的方法.海试结果表明,在舰船目标距离直线阵400 m内,定位误差可小于5 m.

关键词：舰船目标近距离定位水平直线阵聚焦波束声图网格

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“社区明星党小组”为党建添活力 001

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鸡西日报

作者：门丽杰吴天雯

本报讯　日前，在滴道区东兴街道党工委组织召开的创建“社区明星党小组”表彰会上，3个社区党小组和3名社区党小组组长成为了“明星”，走上领奖台。这是东兴街道党工委为规范和推进社区党小组工作，充分发挥社区党小组凝聚党员、服务

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有限元方法在传递路径识别中的应用研究

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第十四届船舶水下噪声学术讨论会

作者：王晓峰韩德宝门丽杰大连测控技术研究所

文章采用一种全新的方法来验证传递路径获取方法的有效性。应用有限元软件ANSYS,建立一个复杂的水下结构体,事先设置好传递通道,并利用其输出结果,验证频谱能量分析方法所获得传递路径与事先设置的路径是否一致。实践表明,该验证方法简... 详细信息

文章采用一种全新的方法来验证传递路径获取方法的有效性。应用有限元软件ANSYS,建立一个复杂的水下结构体,事先设置好传递通道,并利用其输出结果,验证频谱能量分析方法所获得传递路径与事先设置的路径是否一致。实践表明,该验证方法简单准确,适合于工程应用。

关键词：传递路径有限元频谱能量分析

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沉默G蛋白偶联受体137基因对白血病K562细胞增殖的影响

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中华血液学杂志 2016年第6期37卷 525-528页

作者：门丽杰陈海英刘继筑张丽刘国珍肖太武王景霞陈双峰李光耀聊城市人民医院泰山医学院聊城临床学院山东聊城252000

慢性髓性白血病（CML）是一种起源于异常造血干细胞克隆的骨髓增殖性疾病，是常见的慢性白血病之一，可在各个年龄段发病，其特点是髓细胞的生产过剩“’。尽管近年来各种治疗手段不断发展，但仅可以改善患者症状，不能根治本病，也不... 详细信息

慢性髓性白血病（CML）是一种起源于异常造血干细胞克隆的骨髓增殖性疾病，是常见的慢性白血病之一，可在各个年龄段发病，其特点是髓细胞的生产过剩“’。尽管近年来各种治疗手段不断发展，但仅可以改善患者症状，不能根治本病，也不能阻断其发展，寻找有效抑制白血病的靶标则至关重要。

关键词：慢性髓性白血病 K562细胞增殖 G蛋白偶联受体骨髓增殖性疾病基因慢性白血病细胞克隆生产过剩

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骨髓增殖性肿瘤患者血清金属蛋白酶抑制剂-1、基质金属蛋白酶-9、血管内皮生长因子与骨髓纤维化程度的相关性

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实用临床医药杂志 2024年第11期28卷 34-40页

作者：孙玲李弹弹吴希锋门丽杰贾梅艳鹿军山东省济南市人民医院血液科山东济南271199

目的探讨骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者血清血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)与骨髓纤维化(MF)分级的关系。方法选择90例费城染色体阴性(Ph-)MPN初诊患者为MPN组。根据世界卫生组织(WHO)2016年... 详细信息

目的探讨骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者血清血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)与骨髓纤维化(MF)分级的关系。方法选择90例费城染色体阴性(Ph-)MPN初诊患者为MPN组。根据世界卫生组织(WHO)2016年骨髓纤维化分级标准将MPN患者分为纤维化前期或早期组54例和明显纤维化期组36例;另选取健康志愿者50例作为对照组。采用酶联免疫吸附实验检测血清VEGF、MMP-9、TIMP-1水平并计算TIMP-1与MMP-9比值(TIMP-1/MMP-9)。采用Spearman秩相关检验分析VEGF、MMP-9、TIMP-1、TIMP-1/MMP-9与MF分级的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标单独或联合诊断MPN或区分MF分级的预测价值。结果与对照组相比,MPN组血清VEGF、MMP-9和TIMP-1均升高,差异有统计学意义(P<0,05)。VEGF、MMP-9、TIMP-1、TIMP-1/MMP-9诊断MPN的曲线下面积(AUC)分别为0.834、0.745、0.923、0.618;VEGF、MMP-9和TIMP-1联合诊断MPN的AUC为0.960;当最佳截断值为0.627时,敏感度为85.56%,特异度为92.00%。与纤维化前期或早期组相比,明显纤维化期组患者血清VEGF、TIMP-1、TIMP-1/MMP-9均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,VEGF(r=0.378,P=0.001)、TIMP-1(r=0.512,P<0.001)、TIMP-1/MMP-9(r=0.353,P=0.001)与MPN患者MF分级呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,VEGF、MMP-9、TIMP-1、TIMP-1/MMP-9区分纤维化前期或早期患者和明显纤维化期患者的AUC分别为0.723、0.523、0.802、0.708;VEGF、TIMP-1和TIMP-1/MMP-9联合区分纤维化前期或早期患者和明显纤维化期患者的AUC为0.838;当最佳截断值为0.530时,敏感度为72.22%,特异度为85.19%。结论血清VEGF、TIMP-1和TIMP-1/MMP-9均可反映MPN患者MF进展,各指标联合检测可预测MPN患者MF程度。

关键词：骨髓增殖性肿瘤骨髓纤维化血管内皮生长因子基质金属蛋白酶-9 金属蛋白酶抑制剂-1 细胞外基质胶原沉积

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