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PRRSV N基因原核双基因表达载体与毕赤酵母表达载体的构建及其表达研究

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PRRSV N基因原核双基因表达载体与毕赤酵母表达载体的构建及其表...

作者：钱洪喜四川农业大学

学位级别：硕士

本研究以RT-PCR分别扩增了PRRSV美洲型N基因(以N表示)和欧洲型N基因(以N表示),并开展了以下两方面的研究:(1)将N和N基因片段同时插入pET-32a(+)中构建了双基因融合表达载体pET-32a(+)-N-N,并进行了表达研究;(2)将N和N基因片段分别插入... 详细信息

本研究以RT-PCR分别扩增了PRRSV美洲型N基因(以N表示)和欧洲型N基因(以N表示),并开展了以下两方面的研究:(1)将N和N基因片段同时插入pET-32a(+)中构建了双基因融合表达载体pET-32a(+)-N-N,并进行了表达研究;(2)将N和N基因片段分别插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中构建了pPIC9K-N和pPIC9K-N,并进行了表达研究。本研究为深入研究N蛋白的结构与功能、制备诊断试剂及开展分型诊断等奠定了基础,对PRRS的防控具有重要的意义。 1.双基因融合表达载体pET-32a(+)-N-N的构建及其表达研究针对美洲型和欧洲型PRRSV N基因设计两对特异性引物,以RT-PCR扩增获得N和N基因,分别插入pMD19-T simple载体中,构建了pMD19-T-N和pMD19-T-N,并对两重组质粒进行了测序鉴定。将pMD19-T-N和pET-32a(+)经NcoⅠ& EcoRⅠ双酶切后连接构建了pET-32a(+)-N重组质粒;再将pET-32a(+)-N和pMD19-T-N经EcoRⅠ& NotⅠ双酶切后连接构建了双基因融合表达载体pET-32a(+)-N-N。pET-32a(+)-N-N经PCR和不同双酶切鉴定均得到预期大小的片段,结果表明成功构建了双基因融合表达载体pET-32a(+)-N-N。将pET-32a(+)-N-N转化大肠杆菌BL21进行了表达,IPTG最佳诱导浓度为1.0mM/L,最佳诱导时间为3h;经SDS-PAGE分析表达的融合N蛋白(N-N蛋白)大小约为49kD;经Western blotting表明,该融合N蛋白具有良好的反应原性。 2.毕赤酵母表达载体pPIC9K-N和pPIC9K-N的构建及其表达研究针对N基因重新设计一对引物(只更换酶切位点)扩增获得了N基因,插入pMD19-T simple载体中构建了pMD19-T-N。将pMD19-T-N和pMD19-T-N经EcoRⅠ& NotⅠ双酶切后回收N和N基因片段,分别插入经EcoRⅠ& NotⅠ双酶切处理的pPIC9K中构建了毕赤酵母表达载体pPIC9K-N和pPIC9K-N,并分别对两种重组质粒进行了PCR和双酶切鉴定。pPIC9K-N和pPIC9K-N经PCR鉴定和不同双酶切鉴定均得到预期大小的片段,结果表明成功构建pPIC9K-N和pPIC9K-N。将pPIC9K-N和pPIC9K-N经SacⅠ线性化后分别电转化毕赤酵母宿主菌GS115,再经G-418/YPD筛选获得高拷贝数重组子;重组子经表型鉴定为Mut,且PCR鉴定为阳性。阳性重组子经甲醇诱导表达,在96h表达产物量最大,SDS-PAGE显示表达产物大小均约为15kD,Dot blotting表明表达的两型N蛋白均能与相应型阳性血清发生反应,具有良好的反应原性。

关键词： PRRSV N基因大肠杆菌毕赤酵母表达

红色荧光粉CaWO_(4)∶Eu^(3+),Bi^(3+)的制备和光学性能的研究

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人工晶体学报 2024年第5期53卷 833-840页

作者：蔡小勇姜洪喜黑龙江科技大学研究生学院哈尔滨150022 嘉应学院梅州514015

本文采用高温固相法合成了一系列红色荧光粉CaWO_(4)∶Eu^(3+),Bi^(3+)。通过X射线衍射仪、扫描电子显微镜和荧光分光光度计等手段,对样品的晶体结构、微观形貌、光学性能、能量传递方式、荧光寿命和热稳定性进行了表征。结果表明,当Eu^... 详细信息

本文采用高温固相法合成了一系列红色荧光粉CaWO_(4)∶Eu^(3+),Bi^(3+)。通过X射线衍射仪、扫描电子显微镜和荧光分光光度计等手段,对样品的晶体结构、微观形貌、光学性能、能量传递方式、荧光寿命和热稳定性进行了表征。结果表明,当Eu^(3+)和Bi^(3+)的掺杂浓度分别为7%和2%时(摩尔分数),荧光粉红色发光(615 nm)最强,理论计算得到荧光粉的平均颗粒尺寸为50.27 nm,这与电子显微镜观察结果相符合。能量传递方式以电偶极-电四极相互作用为主,对CaWO_(4)∶7%Eu^(3+),yBi^(3+)(y=0~6%)系列荧光粉进行了荧光寿命测量,发现它们荧光寿命基本相同,都在0.56 ms左右。对CaWO_(4)∶7%Eu^(3+),2%Bi^(3+)荧光粉在不同温度下的光谱进行比较,并且计算相应的色度坐标,当温度升高时,色度坐标整体左移,发光强度有所变弱,但整体来说热稳定性较好。较好的热稳定性和明亮红光发射表明该荧光粉可以作为潜在商用红光荧光粉。

关键词： CaWO_(4) 掺Eu^(3+) 掺Bi^(3+) 高温固相法荧光粉敏化剂荧光寿命热稳定性

红色荧光粉CaWO:Eu，Bi的制备和光学性能的研究

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人工晶体学报 2024年

作者：蔡小勇姜洪喜黑龙江科技大学研究生学院

本文采用高温固相法合成了一系列红色荧光粉CaWO4:Eu3+，Bi3+。通过X射线衍射仪、扫描电子显微镜和荧光分光光度计等手段，对样品的晶体结构、微观形貌、光学性能、能量传递方式、荧光寿命和热稳定性进行了表征。结果表明，当Eu3+和Bi3... 详细信息

本文采用高温固相法合成了一系列红色荧光粉CaWO4:Eu3+，Bi3+。通过X射线衍射仪、扫描电子显微镜和荧光分光光度计等手段，对样品的晶体结构、微观形貌、光学性能、能量传递方式、荧光寿命和热稳定性进行了表征。结果表明，当Eu3+和Bi3+的掺杂浓度分别为7%和2%时(摩尔分数)，荧光粉红色发光(615 nm)最强，理论计算得到荧光粉的平均颗粒尺寸为50.27 nm，这与电子显微镜观察结果相符合。能量传递方式以电偶极-电四极相互作用为主，对CaWO4:7%Eu3+，xBi3+(x = 0～6%)系列荧光粉进行了荧光寿命测量，发现它们荧光寿命基本相同，都在0.56 ms左右。对CaWO4:7%Eu3+，2%Bi3+荧光粉在不同温度下的光谱进行比较，并且计算了相应的色度坐标，当温度升高时，色度坐标整体左移，发光强度有所变弱，但整体来说热稳定性较好。较好的热稳定性和明亮红光发射表明该荧光粉可以作为潜在商用红光荧光粉。

关键词： CaWO 掺Eu 掺Bi 高温固相法荧光粉敏化剂荧光寿命热稳定性

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商事规避行为的法效果判定进路

江西财经大学学报 2024年第2期 105-118页

作者：林少伟洪喜琪西南政法大学民商法学院重庆401120

商事规避行为的法效果取决于其与实质法秩序的匹配性,应当从认识论与工具论分别发力,脱离商事规避行为法效果裁判标准不一的囹圄。在认识论上,商事规避行为法效果判定牵涉的价值元素及次序排位均有别于民事规避行为,法院应当相应匹配不... 详细信息

商事规避行为的法效果取决于其与实质法秩序的匹配性,应当从认识论与工具论分别发力,脱离商事规避行为法效果裁判标准不一的囹圄。在认识论上,商事规避行为法效果判定牵涉的价值元素及次序排位均有别于民事规避行为,法院应当相应匹配不同裁判思维,更为审慎地作出负面评价。在工具论上,加强立法供给并非最优解,应转从司法技术入手,构筑统一的司法裁判范式以限缩裁量空间。对此,宜建立以比例原则为内核的二阶衡平模型。考虑实然法存在价值倒错可能,应当先行运用比例原则对商事强制性规范作出一阶评价。对于“负向评价的法”,规避行为应认定为合法有效。对于“正向评价的法”,规避行为的法效果仍需运用比例原则对其有效边界做出二阶评价。对于满足目的正当性、效果必要性以及手段适当性三要素的规避行为,应判定为有效。

关键词：商事规避行为商事强制性规范效力标准二阶衡平模型

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轻量化氧化铝孔结构特征对材料性能的影响

钢铁研究学报 2024年

作者：郭童双丁军邓承继余超祝洪喜武汉科技大学省部共建耐火材料与冶金国家重点实验室

为研究轻量化过程中气孔对材料性能的影响，制备了具有不同孔结构参数的多孔氧化铝，并利用压汞仪和CT扫描技术对材料孔结构进行表征，采用灰色理论研究了孔结构变化对材料性能的影响。结果表明，随着材料气孔率的提高，其体积密度逐渐... 详细信息

为研究轻量化过程中气孔对材料性能的影响，制备了具有不同孔结构参数的多孔氧化铝，并利用压汞仪和CT扫描技术对材料孔结构进行表征，采用灰色理论研究了孔结构变化对材料性能的影响。结果表明，随着材料气孔率的提高，其体积密度逐渐下降，且多孔氧化铝的耐压强度和导热系数显著降低。不同孔径区间对材料性能影响存在较大差异，孔径分布小于1.5 μm的孔对材料耐压强度和导热系数影响最大，而孔径分布大于150 μm的孔对材料的性能影响最小。因此，在材料轻量化的过程中，提高孔径分布在小于1.5 μm孔的占比更有利于提升材料的综合性能。

关键词：轻量化多孔氧化铝 CT扫描技术孔径分布灰色理论

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后备母猪入群后流行性腹泻的防控

今日养猪业 2021年第1期 41-43页

作者：张冰韦剑锋钱洪喜陈希文四川铁骑力士实业有限公司绵阳师范学院

2020年是缺种猪的一年,猪场为了满产、复养会引自不同猪场、不同品种的后备猪,尤其是三元母猪,加上很多养猪企业为了防控非洲猪瘟进行“静默管理”导致基础管理缺失,各类疾病频发。本文主要探讨后备猪入群后流行性腹泻的防控策略。

关键词：流行性腹泻后备猪非洲猪瘟后备母猪养猪企业防控策略管理缺失种猪

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凉山彝区天府肉猪生态养殖技术

四川畜牧兽医 2020年第8期47卷 45-46,48页

作者：黄志秋张谊李凤琴钱洪喜刘利春西昌学院动物科学学院四川西昌615013 四川御咖食品有限公司四川喜德616750

天府肉猪是由四川铁骑力士牧业科技有限公司历时近20年选育形成的适宜西南地区生长环境的优质瘦肉型猪品种,是四川省首个自主选育的猪配套系。2016年以来,铁骑力士牧业科技有限公司旗下全资子公司——四川御咖食品有限公司和西昌学院合... 详细信息

天府肉猪是由四川铁骑力士牧业科技有限公司历时近20年选育形成的适宜西南地区生长环境的优质瘦肉型猪品种,是四川省首个自主选育的猪配套系。2016年以来,铁骑力士牧业科技有限公司旗下全资子公司——四川御咖食品有限公司和西昌学院合作引进了天府肉猪在四川凉山州饲养,发现其适合在凉山彝区养殖。当前,我们根据凉山扶贫攻坚和乡村振兴战略,结合凉山彝区养猪较为落后的现状,积极开展天府肉猪在凉山彝区的生态养殖研究,以促进凉山贫困彝区农牧民脱贫致富。

关键词：瘦肉型猪生态养殖牧业科技配套系肉猪乡村振兴战略四川凉山州合作引进

小学数学单元整体教学策略探究——以“多边形的面积”为例

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数学学习与研究 2024年第5期 86-88页

作者：钱洪贵州省遵义市播州区尚嵇镇茶山小学贵州遵义563156

在新课标背景下,小学数学教学应转变以往关注课时设计的情况,根据教学主题和单元内容,运用核心素养理念,设定单元整体教学目标,展开教学环节设计,发展学生的核心素养.课标要求的变化使教学设计趋向于呈单元化特点.教师要做好课程整体结... 详细信息

在新课标背景下,小学数学教学应转变以往关注课时设计的情况,根据教学主题和单元内容,运用核心素养理念,设定单元整体教学目标,展开教学环节设计,发展学生的核心素养.课标要求的变化使教学设计趋向于呈单元化特点.教师要做好课程整体结构的优化工作,通过单元整体教学设计完成教学目标.文章以“多边形的面积”单元内容为研究对象,探讨单元整体教学设计思路,以供参考.

关键词：小学数学多边形的面积单元整体教学

概念图和思维导图在初中语文教学设计中的应用

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中文科技期刊数据库（全文版）教育科学 2024年第4期 129-132页

作者：钱洪长春北湖学校吉林长春130000

随着我国新课程改革的不断深入,初中语文教学也在不断地改革创新,为学生的全面发展提供有力支持。新课改倡导初中语文教师要积极探索多样化的教学方法,将概念图和思维导图应用到初中语文教学中,有效地促进学生理解与掌握知识,提高学生... 详细信息

随着我国新课程改革的不断深入,初中语文教学也在不断地改革创新,为学生的全面发展提供有力支持。新课改倡导初中语文教师要积极探索多样化的教学方法,将概念图和思维导图应用到初中语文教学中,有效地促进学生理解与掌握知识,提高学生的学习效率。但是就目前情况来看,初中语文教学中还存在一些问题,严重影响了学生学习兴趣的提升和学习效率的提高。因此,在初中语文教学中,教师应积极应用概念图和思维导图等方式,引导学生将所学知识进行整理、归纳和总结,从而提升学生学习效率。基于此,本文对概念图和思维导图在初中语文教学中的应用策略进行了探讨。

关键词：概念图思维导图初中语文教学设计