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1997-2002年山东省HIV-1流行株env基因序列测定和亚型分析

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齐鲁医学杂志 2005年第5期20卷 385-388页

作者：宋旭霞钱冬萌傅继华方荣吴虹王斌青岛大学医学院微生物学教研室山东青岛266021 山东省CDC艾滋病中心

①目的对1997～2002年间山东地区HIV-1各亚型分离株进行基因分型,了解各亚型的分布及其与传播途径的相互关系.②方法采集1997～2002年间山东省38例HIV-1感染者的抗凝全血标本,用巢式PCR技术扩增外周血单个核细胞中HIV-1前病毒env基因C2... 详细信息

①目的对1997～2002年间山东地区HIV-1各亚型分离株进行基因分型,了解各亚型的分布及其与传播途径的相互关系.②方法采集1997～2002年间山东省38例HIV-1感染者的抗凝全血标本,用巢式PCR技术扩增外周血单个核细胞中HIV-1前病毒env基因C2～V3区,并对C2～V3区的核苷酸序列进行测定和分析.③结果山东省38例HIV-1分离株中存在亚型和重组毒株4种(A、B、C、A/E).其中A亚型5株,B亚型22株(其中包括泰国B亚型11株),C亚型10株,A/E重组毒株1株.各亚型内的离散率有差异,A、B、C亚型内基因离散率分别为1.5%、8.6%和1.9%.在性乱人群和静脉吸毒人群中以A亚型和C亚型为主;在职业献血和不安全血制品使用者中以B亚型为主.④结论 1997～2002年间山东省HIV-1流行特点为A、B、C亚型共存,伴有重组毒株;传播途径复杂,基因变异较大,B亚型仍然为主要流行株.

关键词： HIV-1 基因 env 序列分析

乌鸡白凤丸对Aβ_(1-40)诱导的大鼠海马神经元凋亡的保护作用

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青岛大学医学院学报 2007年第1期43卷 1-4页

作者：钱冬萌谢俊霞青岛大学医学院生理学教研室山东青岛266021

目的研究乌鸡白凤丸(BFP)对β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)诱导体外培养大鼠海马神经元凋亡的保护作用以及可能的作用机制。方法体外培养新生Wistar大鼠海马神经元,MTT法检测不同浓度Aβ1-40的细胞毒作用,选择出现显著细胞毒性的剂量为使... 详细信息

目的研究乌鸡白凤丸(BFP)对β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)诱导体外培养大鼠海马神经元凋亡的保护作用以及可能的作用机制。方法体外培养新生Wistar大鼠海马神经元,MTT法检测不同浓度Aβ1-40的细胞毒作用,选择出现显著细胞毒性的剂量为使用剂量。同时给予BFP(100 mg/L)干预。用原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡情况,用半定量RT-PCR技术检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3基因mRNA的表达水平。结果10μmol/L Aβ1-40与海马神经元共孵育24 h有明显的细胞毒作用,并可诱导神经元凋亡,加入BFP干预后凋亡指数降低。Aβ1-40可使bcl-2基因表达下调,bax基因表达上调,caspase-3基因的表达增强。加入BFP干预后,部分拮抗了Aβ1-40诱导的bcl-2基因的表达变化,从而使caspase-3基因的表达降低。结论BFP可通过调控bcl-2/bax的比值、降低caspase-3基因mRNA的表达来阻断Aβ1-40所诱导的海马神经元凋亡,具有神经保护作用。

关键词：乌鸡白凤丸淀粉样β蛋白细胞凋亡海马神经元基因 bcl-2 bax caspase-3

肾移植术后HCMV感染与淋巴细胞亚群及肾功能的相关性

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现代生物医学进展 2013年第25期13卷 4921-4924页

作者：刘鹏钱冬萌王桐梅宋旭霞王斌青岛大学病原生物学教研室山东青岛266071 解放军第401医院山东青岛266071

目的:肾移植患者由于术前透析及术后服用免疫抑制剂,显著增加了人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)原发感染和潜伏感染被激活的机会。观察HCMV感染情况与血T淋巴细胞亚群及肾功能的变化,以探讨其相关性及临床意义。方法:跟踪收... 详细信息

目的:肾移植患者由于术前透析及术后服用免疫抑制剂,显著增加了人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)原发感染和潜伏感染被激活的机会。观察HCMV感染情况与血T淋巴细胞亚群及肾功能的变化,以探讨其相关性及临床意义。方法:跟踪收集40例肾移植患者术前、术后血标本,应用RT-PCR技术检测HCMV,流式细胞术检测淋巴细胞亚群,结合肾功能判断是否发生急性排斥或移植肾功能恢复延迟。结果:肾移植术后HCMV感染率为52.5%,10例出现症状性感染(25%),出现阳性时间35.7±15.3天。症状性感染组CD3+、CD4+的水平和CD4+/CD8+的比值较无活动性感染组和正常对照组均降低,CD8+水平较其他组升高,差异有显著性意义(P<0.05)。无症状性活动感染者与无活动性感染者各指标比较差异无显著性。活动性感染组急性排斥或移植肾功能恢复延迟发生8例(38.1%),无活动性感染组发生1例(5.2%),差异具有统计学意义(x2=6.15,P<0.05)。结论:肾移植术后HCMV感染能显著引起T淋巴细胞亚群变化,尤其是CD4+/CD8+。并与急性排斥或移植肾功能恢复延迟密切相关联,在其发生发展中可能起着重要的作用。三者相互联系、相互作用、互为因果,对进一步机制的研究及临床诊断治疗、预后方面有一定意义。

关键词： HCMV 肾移植淋巴细胞亚群 IE2

下调ATF5基因表达对神经胶质瘤细胞增殖及巨细胞病毒复制的影响

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青岛大学学报（自然科学版） 2017年第1期30卷 51-55页

作者：赵丹风钱冬萌王斌青岛大学生命科学院青岛266071 青岛大学青岛大学医学院青岛266071

采用慢病毒介导的小RNA干扰技术,靶向干扰神经胶质瘤U87细胞中ATF5基因的表达,构建ATF5基因下调稳定表达的细胞株,并用Real-time PCR检测ATF5基因的下调表达效率。CCK8实验检测下调ATF5基因表达后对U87细胞增殖的影响;Semi-quantitative... 详细信息

采用慢病毒介导的小RNA干扰技术,靶向干扰神经胶质瘤U87细胞中ATF5基因的表达,构建ATF5基因下调稳定表达的细胞株,并用Real-time PCR检测ATF5基因的下调表达效率。CCK8实验检测下调ATF5基因表达后对U87细胞增殖的影响;Semi-quantitative RT-PCR及Western-blot分别在mRNA、蛋白水平上检测下调ATF5的表达后对感染的HCMV复制的影响。研究结果显示,下调ATF5基因的表达可以抑制U87细胞的增殖,并且可以分别在mRNA、蛋白水平上抑制HCMV的复制。抑制U87细胞的增殖可以减慢神经胶质瘤的增长速度,抑制HCMV的复制可以减慢或者阻止神经胶质瘤恶性转化过程。由此可以推断出,下调ATF5基因的表达不仅可以直接抑制神经胶质瘤细胞的生长,还可以间接的抑制神经胶质瘤的发生发展。因此,下调ATF5的表达可能成为治疗神经胶质瘤的新的方法。

关键词：人巨细胞病毒恶性神经胶质瘤U87细胞新型细胞转录因子ATF5

过表达迁移侵袭抑制蛋白基因对人巨细胞病毒转染U87细胞特性影响

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临床军医杂志 2018年第3期46卷 292-294,297页

作者：赵鹏钱冬萌胡明王斌青岛大学病原生物学教研室山东青岛266071 青岛大学附属医院检验科山东青岛266555

目的探讨过表达迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)基因对人巨细胞病毒(HCMV)感染的神经胶质母细胞瘤U87细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法采用过表达的MIIP基因慢病毒转染HCMV感染的U87细胞,通过Western-blot检测其转染效率,并将细胞分为为实... 详细信息

目的探讨过表达迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)基因对人巨细胞病毒(HCMV)感染的神经胶质母细胞瘤U87细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法采用过表达的MIIP基因慢病毒转染HCMV感染的U87细胞,通过Western-blot检测其转染效率,并将细胞分为为实验组(U87+HCMV/MIIP)、对照组(U87+HCMV/CMV4)和空白组(U87+HCMV)。采用CCK-8检测过表达的MIIP基因对HCMV转染的U87细胞增殖情况的作用;采用Transwell迁移实验检测对细胞迁移情况的影响;采用Transwell体外侵袭实验检测对细胞侵袭能力的影响。结果实验组细胞的MIIP蛋白表达量与对照组和空白组比较,明显上调(P<0.05);细胞的增殖能力与对照组和空白组比较,明显降低(P<0.05);细胞的侵袭力与对照组和空白组比较,明显减弱,且细胞数显著下调(P<0.05);迁移能力与对照组和空白组比较,显著降低(P<0.05)。结论 HCMV感染的U87细胞在MIIP基因过表达后增殖、侵袭及迁移能力均受抑制。

关键词：人巨细胞病毒恶性神经胶质瘤U87细胞迁移侵袭迁移侵袭抑制蛋白基因

Differential Proteomics in Malignant and Normal Liver Cell Lines

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Chinese Journal of Cancer Research 2007年第2期19卷 94-99页

作者：刘志军王斌闫志勇钱冬萌宋旭霞丁守怡白志强 Department of Microbiology Qingdao Key Laboratory of Medicine and Biotechnology Qingdao University Medical College

Objective： To detect differential protein expression in malignant and normal liver cell lines in vitro using the SELDI ProteinChip platform, for investigating the pathogenesis of liver cancer. Methods： Two cell lines, human normal liver cell line L02 and hepatoma cell line SMMC-7721 were cultured routinely, harvested in good condition and lysed. After quantification, the supernatant of the lysate was tested by IMAC3 （Immobilized Mental Affinity Capture） and WCX2 （Weak Cation Exchange） chips on the SELDI-TOF-MS ProteinChip reader. Results： Protein expression differed between the malignant and normal liver cell lines. A total of 20 differentially expressed proteins were found, among which, 7 were captured by the IMAC3 chip and 14 by the WCX2 chip. Peaks at 5,419, 7,979 and 11,265 Da were higher and at 8,103, 8,492, 10,160 and 11,304 Da lower in SMMC-7721 cells by the IMAC3 chip; peaks at 7,517, 7,945 and 7,979 Da were higher and at 5,061, 5,551, 5,818, 7,439, 9,401,10,100, 10,312, 11,621, 11,662, 11,830 and 12,772 Da lower in SMMC-7721 cells by the WCX2 chip. Interestingly, both chips captured the 7,979 Da peak. In addition, the 11,081 Da peak corresponded precisely with the molecular mass of the calcium binding protein S100A10, which may participate in the formation of liver cancer in association with p36. Conclusion： Detecting differential protein expression in malignant and normal liver cell lines using the SELDI ProteinChip platform was simple, sensitive and repeatable. The results we obtained can serve as a basis for investigating the pathogenesis of liver cancer and aid the discovery of new therapeutic targets.

关键词： SELDI ProteinChip Liver cancer cell line SMMC-7721 Normal liver cell line L02 Protein expression

蛋白质芯片飞行质谱技术检测体外培养的肝癌细胞株与转染HBV的肝癌细胞株蛋白质的差异表达

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世界华人消化杂志 2005年第14期13卷 1684-1687页

作者：丁守怡钱冬萌闫志勇宋旭霞牟文凤王斌青岛大学医学院微生物教研室山东省青岛市266021

目的:运用SELDI蛋白质芯片技术检测体外培养的肝癌细胞株(HepG2)与转染乙肝病毒的肝癌细胞株(HepG2.2.15)蛋白质的差异表达,从而为进一步研究肝癌的发病机制奠定基础. 方法:常规培养上述两种细胞,细胞状态良好时收集细胞,裂解细胞后采用... 详细信息

目的:运用SELDI蛋白质芯片技术检测体外培养的肝癌细胞株(HepG2)与转染乙肝病毒的肝癌细胞株(HepG2.2.15)蛋白质的差异表达,从而为进一步研究肝癌的发病机制奠定基础. 方法:常规培养上述两种细胞,细胞状态良好时收集细胞,裂解细胞后采用SELDI—TOF—MS技术用WCX2 芯片检测HepG2、HepG2.2.15蛋白质组学的差异. 结果:WCX2芯片共捕获91个蛋白,其中HepG2、HepG 2.2.15细胞差异蛋白共19个,9个蛋白在HepG2 细胞中表达量增高,10个蛋白在HepG2细胞中表达量降低.通过在Swiss蛋白数据库中搜索,发现Mr 11 081 蛋白与钙结合蛋白S100 A10相符,其他几种蛋白暂时寻找不到. 结论:SELDI蛋白芯片技术检测肝癌细胞株与转染乙肝病毒的肝癌细胞株蛋白质的差异表达方法简便,敏感性高,重复性好,本文发现的这些组织特异性蛋白生物标记对我们从血清或组织标本中筛选和鉴定不同型别肝癌细胞之间的标志蛋白有重要意义.

关键词：蛋白质芯片飞行质谱技术检测体外培养肝癌转染HBV 肝癌细胞株蛋白质差异表达

GST-IL-21融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其活性测定

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生物技术通讯 2006年第2期17卷 177-179页

作者：钱冬萌王斌丁守怡王静青岛大学医学院医药技术重点实验室山东青岛266021

目的:克隆人白细胞介素21(IL-21)编码区的cDNA,在大肠杆菌中得以表达,并检测其促进人外周血单核细胞(PBMC)增殖的生物学活性。方法:利用基因工程技术,以植物血凝素(PHA)刺激的人扁桃体细胞cDNA文库为模板,经PCR扩增获得IL-21的编码基因... 详细信息

目的:克隆人白细胞介素21(IL-21)编码区的cDNA,在大肠杆菌中得以表达,并检测其促进人外周血单核细胞(PBMC)增殖的生物学活性。方法:利用基因工程技术,以植物血凝素(PHA)刺激的人扁桃体细胞cDNA文库为模板,经PCR扩增获得IL-21的编码基因,并将其重组于表达载体pGEX4T-2中,转化大肠杆菌DH5α进行诱导表达,纯化得到GST-IL-21重组融合蛋白;MTT法检测其对促进PBMC增殖的功能。结果:获得了IL-21编码区的cDNA克隆;SDS-PAGE显示经IPTG诱导表达的该融合蛋白相对分子质量为41000;纯化后的GST-IL-21融合蛋白在体外具有显著的促进PBMC增殖的作用。结论:GST-IL-21融合蛋白在原核表达系统中可以有效表达,并具有较好的生物学活性。

关键词：人白细胞介素21 原核表达生物学活性

海洋放线菌F1发酵条件优化及抑菌物质性质的初步研究

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中国海洋药物 2014年第3期33卷 43-48页

作者：邵光灿钱冬萌宋旭霞陈豪秦盼盼王轶王斌青岛大学医学院病原生物学教研室山东青岛266071

目的对筛选出的海洋放线菌F1的发酵培养基及条件进行优化,并对菌株F1分泌的有活性的次级代谢产物的特性进行了初步研究。方法采用单因素实验和正交试验的方法对发酵培养基及发酵条件进行优化,观察pH值、温度、光照、紫外线、储藏温度对... 详细信息

目的对筛选出的海洋放线菌F1的发酵培养基及条件进行优化,并对菌株F1分泌的有活性的次级代谢产物的特性进行了初步研究。方法采用单因素实验和正交试验的方法对发酵培养基及发酵条件进行优化,观察pH值、温度、光照、紫外线、储藏温度对抑菌物质稳定性的影响,了解抑菌物质的极性及疏水特性。结果优化的最佳培养基为：可溶性淀粉20.0g,NaCl 1.0g,胰蛋白胨0.5g,Yeast Extract 2.0g,K2HPO4·3H2O 0.5g,MgSO4·7H2O 0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g,陈海水1000mL,pH 7.4~7.6,固体培养基加1.5%的琼脂粉。摇瓶装量30%,接种量10%,发酵时间168h时抑菌抑菌圈最大,抑菌物质有较好的热、光、紫外线及储藏温度稳定性,pH值在3~12有活性,在强酸环境中失活,耐碱不耐酸,活性物质溶于石油醚和乙酸乙酯,不溶于正丁醇。结论通过优化实验确定了菌株F1最优发酵培养基及发酵条件,抑菌物质有较好的稳定性,有较大极性和水溶性。

关键词：海洋放线菌F1 发酵优化活性物质