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重组蜂毒素-基因变构IL-2的纯化与生物活性

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中国生物制品学杂志 2006年第6期19卷 623-626页

作者：刘明军王斌钱冬萌丁守怡闫志勇宋旭霞青岛大学医学院微生物学教研室

目的制备纯化重组蜂毒素-基因变构IL-2(Melittin-88ArgIL-2)嵌合蛋白,并检测其生物活性。方法将含表达载体的大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达。表达产物经离子交换层析与亲和层析进行纯化,SDS-PAGE鉴定,MTT染色法检测嵌合蛋白对Hela细胞... 详细信息

目的制备纯化重组蜂毒素-基因变构IL-2(Melittin-88ArgIL-2)嵌合蛋白,并检测其生物活性。方法将含表达载体的大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达。表达产物经离子交换层析与亲和层析进行纯化,SDS-PAGE鉴定,MTT染色法检测嵌合蛋白对Hela细胞增殖的抑制作用。结果所表达的可溶性蛋白,纯化后纯度达95%,蛋白浓度0.5g/L。纯化后的嵌合蛋白在体外能抑制Hela细胞的增殖。结论已成功地制备并纯化了重组melittin-88ArgIL-2嵌合蛋白,该蛋白具有生物活性,为中试放大和纯化工艺研究奠定了基础。

关键词：蜂毒素-基因变构IL-2 层析生物活性

26肽蜂毒素与基因变构IL-2嵌合蛋白的原核表达、纯化及活性测定

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中国生物工程杂志 2004年第10期24卷 56-58页

作者：钱冬萌侯伟闫志勇赵百慧付强王斌青岛大学医学院微生物教研室青岛266021

在E .coliDH5α中表达 2 6肽蜂毒素与基因变构人白细胞介素 2的嵌合体蛋白 ,并进行初步纯化和抗原性检测。利用剪接式重叠延伸 (splicedoverlapextension ,SOE)技术在 2 6肽蜂毒素与基因变构IL 2的基因之间导入四个易形成空间结构的氨... 详细信息

在E .coliDH5α中表达 2 6肽蜂毒素与基因变构人白细胞介素 2的嵌合体蛋白 ,并进行初步纯化和抗原性检测。利用剪接式重叠延伸 (splicedoverlapextension ,SOE)技术在 2 6肽蜂毒素与基因变构IL 2的基因之间导入四个易形成空间结构的氨基酸残基组成的连接肽 (Gly4Ser) 3 ,构建嵌合体蛋白的基因 ,克隆到原核表达载体pGEX4T 2中 ,重组质粒转化宿主菌DH5α,经IPTG诱导表达目的融合蛋白 ,纯化蛋白经Thrombin酶切后进行SDS PAGE与Western blot鉴定。

关键词：蜂毒素蛋白基因 IL-2 抗原性 DH 嵌合体纯化 IPTG 剪接

新生儿高胆红素血症与先天性巨细胞病毒感染的相关性研究

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现代生物医学进展 2012年第16期12卷 3147-3149页

作者：张玲钱冬萌刘海婷郑淑芳王斌青岛大学山东青岛266021 淄博市妇幼保健院山东淄博255029

目的:探讨新生儿高胆红素血症与巨细胞病毒(HCMV)感染的相关性及临床意义。方法:对170例疑为高胆红素血症新生儿血清标本分别检测HCMV的IgG和IgM及血清总胆红素(TBIL)。排除高胆红素血症新生儿血清标本100例为正常对照。结果:高胆红素... 详细信息

目的:探讨新生儿高胆红素血症与巨细胞病毒(HCMV)感染的相关性及临床意义。方法:对170例疑为高胆红素血症新生儿血清标本分别检测HCMV的IgG和IgM及血清总胆红素(TBIL)。排除高胆红素血症新生儿血清标本100例为正常对照。结果:高胆红素血症患者血清HCMV-IgG、IgM阳性率高于正常对照组,两者比较有统计学意义。结论:巨细胞病毒感染与新生儿高胆红素血症相关性大,是引起高胆红素血症的主要病原之一。

关键词：高胆红素血症巨细胞病毒IgG IgM 血清总胆红素(TBIL)

沙蚕消化道D2菌株胞外蛋白酶对EMT6细胞增殖的影响

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公共卫生与临床医学 2009年第1期5卷 23-25页

作者：徐莉莉王斌闫志勇钱冬萌丁守怡宋旭霞李鹏郑旭青岛大学医学院微生物学教研室青岛市医药生物技术重点实验室山东青岛266021

目的研究沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株胞外蛋白酶对鼠乳腺癌细胞EMT6增殖的影响。方法选用鼠乳腺癌细胞EMT6作为靶细胞，用0．0043～43μmol／L浓度的沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株胞外蛋白酶（D2蛋白酶），通过体外细胞培养法进行细胞增殖抑... 详细信息

目的研究沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株胞外蛋白酶对鼠乳腺癌细胞EMT6增殖的影响。方法选用鼠乳腺癌细胞EMT6作为靶细胞，用0．0043～43μmol／L浓度的沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株胞外蛋白酶（D2蛋白酶），通过体外细胞培养法进行细胞增殖抑制检测，测其吸光度（OD）值，计算细胞增殖抑制率，与阳性对照组（紫杉醇组）比较。结果实验组OD值低于空白对照组，且存在时间和剂量依赖关系。结论沙蚕消化道产蛋白酶菌D2株胞外蛋白酶对鼠乳腺癌细胞EMT6的增殖存在抑制作用，显示出一定的抗肿瘤活性。

关键词：海洋药物海洋抗肿瘤药物蛋白酶 D2蛋白酶 EMT6细胞

染料木黄酮抑制HCMV感染人星形胶质细胞的机制

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青岛大学医学院学报 2016年第3期52卷 260-264页

作者：徐敬国李玲于向民魏艳王斌钱冬萌青岛大学医学院组织学与胚胎学教研室山东青岛266071 青岛大学医学院病原微生物学教研室山东青岛266071

目的探讨染料木黄酮（Gen）抑制人巨细胞病毒（HCMV）感染人星形胶质细胞的效果及机制。方法实验设立空白对照组（C组）、Gen对照组（G组）、HCMV组（V组）、HCMV＋Gen组（V＋G组）及Gen＋HCMV组（G＋V组）。采用CCK-8筛选合适的药物浓... 详细信息

目的探讨染料木黄酮（Gen）抑制人巨细胞病毒（HCMV）感染人星形胶质细胞的效果及机制。方法实验设立空白对照组（C组）、Gen对照组（G组）、HCMV组（V组）、HCMV＋Gen组（V＋G组）及Gen＋HCMV组（G＋V组）。采用CCK-8筛选合适的药物浓度。采用反转录-实时定量PCR技术检测各组病毒即刻早期蛋白编码基因IE1和IE2、宿主hsa-miR-200家族及病毒miR-UL112的表达;采用染色质免疫共沉淀法检测与HCMV主要即刻早期启动子（MIEP）结合的组蛋白H3乙酰化的变化。结果筛选出实验用药物浓度为10μmol/L。与V组相比,G＋V组和V＋G组IE1、IE2基因的表达下调（F=14.790~126.000,P〈0.05）,在部分时间段内hsa-miR-200家族及miR-UL112表达上调（F=3.041~4 638.724,P〈0.05）,与病毒MIEP结合的组蛋白H3的乙酰化降低（F=18.184~32.848,P〈0.05）。结论 Gen能一定程度抑制HCMV感染人星形胶质细胞所致的增殖异常,其机制可能为Gen能一定程度抑制IE1和IE2基因的表达以及与病毒MIEP结合的组蛋白H3的乙酰化,并上调部分宿主hsa-miR-200microRNA及病毒miR-UL112的表达。

关键词：巨细胞病毒小神经胶质细胞染料木黄酮微RNAs 免疫沉淀法

核因子κB、肿瘤坏死因子α及白细胞介素6在大肠癌中的表达及其意义

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肿瘤研究与临床 2012年第10期24卷 656-658页

作者：李绪彤卢琳赵清叶钱冬萌王斌青岛大学医学院病原生物教研室 266071 青岛大学医学院第二附属医院肿瘤科

目的探讨核因子κB（NF—κB）、肿瘤坏死因子仪（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）在大肠癌组织中的表达，及其与大肠癌发生、发展的关系。方法收集60例大肠癌组织及36例结肠腺瘤组织，以癌旁正常肠黏膜组织为对照，应用免疫组织化学SAB... 详细信息

目的探讨核因子κB（NF—κB）、肿瘤坏死因子仪（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）在大肠癌组织中的表达，及其与大肠癌发生、发展的关系。方法收集60例大肠癌组织及36例结肠腺瘤组织，以癌旁正常肠黏膜组织为对照，应用免疫组织化学SABC法检测NF-κB、TNF-α及IL-6的蛋白表达情况，并分析其与大肠癌临床病理特征的相关关系。结果在大肠癌组织、癌旁正常组织及结肠腺瘤组织中NF—κB的阳性表达率分别为76．7％（46／60）、46．7％（28／60）、83．3％（30／36），TNF—α的阳性率分别为70．0％（42／60）、36．7％（22／60）、66．7％（24／36），IL-6蛋白阳性率分别为80．0％（48／60）、43．3％（26／60）、61．1％（22／36），在不同组织中的表达差异均具有统计学意义（均P〈0．05）；大肠癌组织中NF-κB的表达与TNF-α及IL-6的表达密切相关；NF—κB、TNF-α的表达与脉管受侵、淋巴结转移及分期相关，IL-6的表达与淋巴结转移及分期相关。结论NF-κB及下游的炎症因子的高表达与大肠癌的临床病理特征密切相关，NF—κB途径在大肠癌的发生、发展中起着重要作用。

关键词：结直肠肿瘤核因子κB 肿瘤坏死因子α 白细胞介素6

黄芩素对HCMV感染人神经干细胞的作用及机制

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青岛大学医学院学报 2016年第2期52卷 160-163,168页

作者：魏艳李玲于向民徐敬国王斌钱冬萌青岛大学医学院组织胚胎学教研室山东青岛266071 青岛大学医学院病原微生物学教研室山东青岛266071

目的探讨黄芩素（BAI）对人巨细胞病毒（HCMV）体外感染的人神经干细胞的作用及其可能机制。方法体外培养人神经干细胞,给予HCMV感染和不同浓度的BAI处理24、48、72h,观察其形态学变化,采用MTT法检测BAI对HCMV感染人神经干细胞增殖的影... 详细信息

目的探讨黄芩素（BAI）对人巨细胞病毒（HCMV）体外感染的人神经干细胞的作用及其可能机制。方法体外培养人神经干细胞,给予HCMV感染和不同浓度的BAI处理24、48、72h,观察其形态学变化,采用MTT法检测BAI对HCMV感染人神经干细胞增殖的影响,采用实时荧光定量PCR技术检测BAI对HCMV感染人神经干细胞中miR-200和miR-UL112-3p表达的影响。结果在病毒感染后24h,HCMV组细胞出现明显的细胞病变效应（CPE）,10μmol/L BAI＋HCMV组细胞CPE不明显。HCMV感染后24、48、72h,10μmol/L BAI＋HCMV组细胞MTT检测吸光度值均高于HCMV组（F=18.61-22.57,P〈0.05）。HCMV感染人神经干细胞后24、48、72h,miR-200和miR-UL112-3p表达下调,10μmol/L BAI＋HCMV组和HCMV＋10μmol/L BAI组细胞miR-200和miR-UL112-3p表达明显高于HCMV组（F=2.37~19.26,P〈0.05）。结论一定浓度BAI能够抑制HCMV感染人神经干细胞的增殖,这可能与其上调细胞内miR-200和miR-UL112-3p的表达有关。

关键词：黄芩素巨细胞病毒神经干细胞微RNAs

利用SELDI-TOF-MS技术研究巨细胞病毒感染致婴儿肝炎综合征的血清蛋白标志物

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世界华人消化杂志 2005年第21期13卷 2549-2553页

作者：张妍刘华林王斌钱冬萌闫志勇丁守怡宋旭霞宋广辉青岛大学医学院医药生物技术重点实验室山东省青岛市266021 青岛市妇女儿童医疗保健中心内二科山东省青岛市266011

目的:用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术研究人巨细胞病毒(hCMV)感染致婴儿肝炎综合征患儿血清蛋白质谱的差异表达,寻找特异性蛋白标志物,为研究hCMV感染引起婴儿肝炎综合征的蛋白质组学发病机制奠定基础.方法:... 详细信息

目的:用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术研究人巨细胞病毒(hCMV)感染致婴儿肝炎综合征患儿血清蛋白质谱的差异表达,寻找特异性蛋白标志物,为研究hCMV感染引起婴儿肝炎综合征的蛋白质组学发病机制奠定基础.方法:实验组为hCMV感染所致的婴儿肝炎综合征患儿20例;对照组Ⅰ为感染hCMV但未发生婴儿肝炎者5例;对照组Ⅱ为hCMV感染阴性的婴儿肝炎10例;对照组Ⅲ为健康对照10例.采集全血,分离血清,用SELDI-TOF-MS技术和WCX2芯片检测各组蛋白质谱的表达.结果:hCMV感染引起的婴儿肝炎综合征组与其他对照组比较,血清中有4个蛋白质表达水平发生明显变化,分别为Mr4349.8、Mr5808.7、Mr7935.6和Mr8885.9的蛋白峰.hCMV感染的两个组与未感染的对照组婴儿比较,血清中共有5个蛋白质表达水平发生明显变化,分别为Mr3266.8、Mr5638.5、Mr5909.1、Mr7771.4和Mr15835.6的蛋白峰.hCMV感染但未发生婴儿肝炎组与其他组婴儿比较,血清中有2个蛋白质表达水平发生明显变化,分别为Mr4600.1和Mr5704.3的蛋白峰.两个婴儿肝炎组与肝功能正常的另两组婴儿比较,血清中有4个蛋白质表达水平发生明显变化,分别为Mr7567.0、Mr13744.8、Mr15100.7和Mr15915.0的蛋白峰.结论:一些特定的血清蛋白质分子如肝再生增强因子、前白蛋白和结合珠蛋白是与肝功能密切相关的因子;细胞因子β-防御素31,β-防御素8和巨细胞源性趋化因子等,可能与hCMV感染、感染后发病及感染后保护相关.

关键词： SELDI—TOF—MS 蛋白质组学婴儿肝炎综合征先天性巨细胞病毒感染

HSV-1感染对神经胶质瘤细胞NGF和BDNF表达变化的研究

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实用医学杂志 2011年第7期27卷 1132-1134页

作者：侯云王斌李玲胡明辛晓妮钱冬萌闫志勇赵巍宋旭霞青岛大学医学院青岛市医药生物技术重点实验室266071

目的:探讨单纯疱疹病毒1型(HSV-1)感染时神经胶质细胞内源性神经生长因子(NGF)和脑源性神经生长因子(BDNF)的表达变化。方法:采用RT-PCR法检测HSV-1糖蛋白D(gD)基因扩增,RT-PCR法和Westernblotting法检测正常培养和感染HSV-1的神经胶质... 详细信息

目的:探讨单纯疱疹病毒1型(HSV-1)感染时神经胶质细胞内源性神经生长因子(NGF)和脑源性神经生长因子(BDNF)的表达变化。方法:采用RT-PCR法检测HSV-1糖蛋白D(gD)基因扩增,RT-PCR法和Westernblotting法检测正常培养和感染HSV-1的神经胶质瘤(U251)细胞的NGF和BDNF。结果:HSV-1可感染U251细胞;正常U251细胞可表达NGF和BDNF;HSV-1感染U251细胞后,NGF和BDNF在感染后第6小时达高峰,之后随感染时间延长逐渐降低。结论:HSV-1可诱导U251细胞中的NGF和BDNF表达异常。

关键词：神经胶质瘤单纯疱疹病毒1型神经生长因子脑源性神经生长因子