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^(125)Ⅰ标记乙型肝炎病毒DNA探针的制备及应用

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微生物学通报 1989年第2期16卷 98-100页

作者：钟雄林王昌才马维芳第一军医大学分子生物学实验室

本文报道用国产~125I-碘化钠标记乙型肝炎病毒DNA制备探针,可得到较高比度的产物,一般稳定在10~7—10(?)cpm/μg DNA。用该探针对不标记的乙型肝炎病毒DNA进行点分子杂交。可检测到5pg左右DNA。对17例血液标本进行点分子杂交,结果与32p... 详细信息

本文报道用国产~125I-碘化钠标记乙型肝炎病毒DNA制备探针,可得到较高比度的产物,一般稳定在10~7—10(?)cpm/μg DNA。用该探针对不标记的乙型肝炎病毒DNA进行点分子杂交。可检测到5pg左右DNA。对17例血液标本进行点分子杂交,结果与32p-标记乙型肝炎病毒DNA探针杂交结果基本一致。

关键词：乙肝病毒 DNA探针碘标记

一个β地中海贫血复合δβ地中海贫血家系的表型与基因型分析

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中华医学遗传学杂志 2001年第4期18卷 310-313页

作者：李志琴莫秋华钟雄林刘兰平徐湘民第一军医大学细胞生物学和医学遗传学教研室广州510515 第一军医大学附属珠江医院检验科广州510515

目的　调查一种缺失型δβ地中海贫血 (简称地贫 )基因型与表型的关系 ,探索进行β地贫复合该缺失型突变高风险胎儿的快速产前诊断方法。方法　以表型和基因分型进行家系分析。表型分析采用红细胞指标和血红蛋白电泳分析 ;用跨越断裂点... 详细信息

目的　调查一种缺失型δβ地中海贫血 (简称地贫 )基因型与表型的关系 ,探索进行β地贫复合该缺失型突变高风险胎儿的快速产前诊断方法。方法　以表型和基因分型进行家系分析。表型分析采用红细胞指标和血红蛋白电泳分析 ;用跨越断裂点的三引物聚合酶链反应直接分析法检测δβ地贫缺失突变 ;用反向点杂交技术筛查β地贫基因突变 ;并对一例该型地贫高风险胎儿进行了产前基因诊断。结果　先证者 (重症地贫 )为一种缺失型δβ地贫与β地贫双重杂合子 ,其δβ地贫基因遗传自母方 ,在该家系 3代 9名成员中共检测到 4例携带了这一基因 ,其表型和基因型结果相互吻合 ;β地贫基因 (密码子 41- 42 - CTTT移码突变 )遗传自父方。对该家系的重症地贫高风险胎儿进行产前基因诊断的结果显示 ,胎儿的基因型完全正常。结论　在国内首次报告由缺失型δβ地贫基因与β地贫移码突变双重杂合导致的重症地贫高风险胎儿的产前诊断结果。采用的技术简便、快速。

关键词： β地中海贫血 δβ地中海贫血产前诊断基因缺失基因型分析

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恶性疟杂合45肽抗原基因的化学合成及克隆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1992年第2期10卷 82-85页

作者：裘敏燕闵永洁王启松钟雄林陈仕荣王昌才复旦大学遗传研究所第一军医大学分子生物学实验室广州510515

本文报道用固相亚磷酰胺法成功地合成了人恶性疟杂合抗原基因(Human Plasmodiumfalciparum antigen gene,HPFAG)。其全长为162bp,包含有三个裂殖子重复多肽(83kDa、55kDa、35kDa)和两个环子孢子表面重复多肽,以及两端的接头,共分成8个... 详细信息

本文报道用固相亚磷酰胺法成功地合成了人恶性疟杂合抗原基因(Human Plasmodiumfalciparum antigen gene,HPFAG)。其全长为162bp,包含有三个裂殖子重复多肽(83kDa、55kDa、35kDa)和两个环子孢子表面重复多肽,以及两端的接头,共分成8个大小不同的片段合成。分离纯化后的片段连接成完整的双链基因,与P-Blue script重组,转化*** JM109,经原位杂交和酶切分析,筛选出重组体,又经DNA序列分析测定,证明与所设计基因完全相同。

关键词：疟杂合45肽抗原基因 DNA化学合成

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抑癌基因DCC和MCC在大肠癌中的变化

中华内科杂志 1996年第7期35卷 444-446页

作者：周亚东周殿元袁爱力文斌王昌才钟雄林第一军医大学珠江医院消化内科南方医院消化内科

为了探讨ＤＣＣ和ＭＣＣ在中国人大肠腺瘤和大肠癌中的变化及其与大肠腺癌的分级、分期和大肠腺瘤的分级之间的关系，对３０例大肠腺瘤和３３例大肠癌患者用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法检测了ＤＣＣ基因的突变和用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方... 详细信息

为了探讨ＤＣＣ和ＭＣＣ在中国人大肠腺瘤和大肠癌中的变化及其与大肠腺癌的分级、分期和大肠腺瘤的分级之间的关系，对３０例大肠腺瘤和３３例大肠癌患者用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法检测了ＤＣＣ基因的突变和用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了ＭＣＣ的杂合缺失（ＬＯＨ）。结果为：在大肠腺瘤患者中，仅在重度不典型增生者中能检出ＤＣＣ的突变；在３３例大肠癌中检出７例突变，且随分化的减少和分期的增加而有频度增加的趋势。３０例腺瘤中有９例检出有ＭＣＣ的ＬＯＨ，其中轻、中、重度不典型增生者分别有２、３及４例；在３３例大肠癌中检出１８例ＭＣＣ的ＬＯＨ，且其发生的频度有明显的随分级、分期的严重而增加的趋势。结论：ＤＣＣ的变化可定位于腺瘤的中、晚期阶段；ＭＣＣ的变化可定位于正常组织与腺瘤之间，且与腺瘤至癌的演变有一定关联；以上结果支持大肠癌的发生、发展是一个多基因变化的过程这一学说。

关键词：大肠肿瘤抑癌基因 DCC基因 MCC基因

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简单快速分离纯化质粒脱氧核糖核酸的方法

南方医科大学学报 1985年第2期 114-116页

作者：王昌才钟雄林第一军医大学第一附属医院实验科

用溶菌酶和十二烷基磺酸钠(SDS)-NaOH裂解变性菌体,以醋酸钠沉淀变性染色体DNA和蛋白质,再经过Sepharose-2B柱分离RNA,得到凝胶电泳纯的质粒DNA。本法简单快速,没有细菌染色体DNA和RNA的污染,具有转化生物活性,可用于酶解分析,重组转化... 详细信息

用溶菌酶和十二烷基磺酸钠(SDS)-NaOH裂解变性菌体,以醋酸钠沉淀变性染色体DNA和蛋白质,再经过Sepharose-2B柱分离RNA,得到凝胶电泳纯的质粒DNA。本法简单快速,没有细菌染色体DNA和RNA的污染,具有转化生物活性,可用于酶解分析,重组转化等试验。

关键词：质粒脱氧核糖核酸琼脂糖凝胶-2B 核糖核酸

恶性疟口服活菌苗的免疫原性及安全性的初步研究

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第一军医大学学报 1995年第3期15卷 228-230页

作者：黄建生王昌才任大明李全贞钟雄林第一军医大学分子生物学研究所复旦大学遗传所国家重点实验室第一军医大学热带医学研究所

在减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬ３２６１中表达了人工合成的恶性疟杂合４５肽抗原基因，并在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠及家兔中诱发出一定水平的特异性体液免疫及细胞免疫。在减毒菌中表达的融合抗原ＧＺ－Ａ可特异地识别兔抗ＧＺ－Ａ血清、鼠抗Ｐｆ... 详细信息

在减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬ３２６１中表达了人工合成的恶性疟杂合４５肽抗原基因，并在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠及家兔中诱发出一定水平的特异性体液免疫及细胞免疫。在减毒菌中表达的融合抗原ＧＺ－Ａ可特异地识别兔抗ＧＺ－Ａ血清、鼠抗Ｐｆ血清及恶性疟患者血清，滴度分别为１：６４００、１：１０２４０及１：４。小鼠口服（ｐｏ）重组疫苗图ＳＬ３２６１（ｎＷＲＡ）后，细菌在肠道至少可寄生１月以上，且在体外仍然可以表达目的抗原。静脉注射（ｉｖ）活菌后首日可见菌血症。１０￣８ｃｆｕ量全身免疫（ｉｐ、ｉｖ）后可致小鼠死亡。ｉｐ、ｉｖ组脾脏肿大１～２倍，肝脏轻度肿大，而ｐｏ组则未见明显改变。清理切片显示肝脏轻度充血，汇管区有淋巴细胞聚集，枯否氏细胞轻度增生等；脾小体增生扩大，巨细胞明显增生等，上述改变以ｉｐ及ｉｖ组较为明显。结果说明，ＳＬ３２６１（ｐＷＲＡ）所表达的恶性疟原虫杂合抗原可特异地被抗Ｐｆ抗体所识别，活菌苗口服后可在肠道较长久地寄生，且不引起明显的毒副作用。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌减毒恶性疟原虫活菌苗

丙型肝炎病毒与恶性疟原虫复合多表位抗原基因在小鼠及家兔中免疫应答的研究

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中国免疫学杂志 2000年第10期16卷 533-534,538页

作者：黄建生解咏梅张潜沈先荣钟雄林张丽芸郭明秋任大明第一军医大学抗衰老研究室广州510515 复旦大学生命科学院上海200433

目的 :探讨丙型肝炎病毒 (HCV)及恶性疟原虫 (Pf)复合DNA疫苗的可行性。方法 :把HCV复合多表位抗原基因PCX与Pf复合基因AB克隆到带CMV启动子的真核表达载体pcDNA3中 ,构建真核表达载体pcDNA3 CAB ,肌肉注射免疫小鼠及家兔 ,检测其诱发... 详细信息

目的 :探讨丙型肝炎病毒 (HCV)及恶性疟原虫 (Pf)复合DNA疫苗的可行性。方法 :把HCV复合多表位抗原基因PCX与Pf复合基因AB克隆到带CMV启动子的真核表达载体pcDNA3中 ,构建真核表达载体pcDNA3 CAB ,肌肉注射免疫小鼠及家兔 ,检测其诱发特异性免疫应答水平及安全性。结果 :小鼠及家兔分别于免疫后第 6周及第 8周可检测到抗GZ PCX抗体 ,于第 10周达最高 ,滴度分别为 1:40 0及 1:3 2 0 0 ,但持续时间较短 ;免疫血清可识别Pf抗原 ;免疫动物还可产生针对GZ PCX融合蛋白的迟发性超敏反应 ;免疫后小鼠体重正常 ,肝脾脏未见明显肿大 ,具有良好的安全性。结论 :HCV Pf双价多表位DNA抗原基因在小鼠及家兔中可诱发特异性免疫应答 ,但抗体的持续时间较短。

关键词：丙型肝炎病毒恶性疟原虫多表位抗原 DNA疫苗

尿液N—乙酰—β—D氨基葡萄糖苷酶测定及其对肾脏疾病的诊断意义

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南方医科大学学报 1983年第3期 225-226页

作者：马维芳陈家芳钟雄林第一军医大学第一附属医院实验科

N—乙酰—β—D氨基萄葡糖苷酶(简称NAG)是一种重要的溶酶体酶,对细胞内外环境变化极为敏感,与许多生理、病理过程密切相关。近年来国内在对肾病、肝病、白血病、肿瘤的诊断以及妇女排卵期等方面作了NAG测定。国外近二十年做了广泛研究... 详细信息

N—乙酰—β—D氨基萄葡糖苷酶(简称NAG)是一种重要的溶酶体酶,对细胞内外环境变化极为敏感,与许多生理、病理过程密切相关。近年来国内在对肾病、肝病、白血病、肿瘤的诊断以及妇女排卵期等方面作了NAG测定。国外近二十年做了广泛研究。肯定尿液NAG活力变化是观察肾损伤、移植肾排异作用的重要手段。本文测了67例正常人尿中NAG,观察了56例各种肾脏疾病尿NAG活力升高与血尿素氮、肌酐和尿蛋白的关系,肯定了尿NAG测定对肾脏疾病的诊断意义。

关键词：肾脏疾病尿液 NAG 诊断意义

恶性疟原虫杂合45肽抗原基因重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在家兔免疫应答的初步研究

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第一军医大学学报 1995年第3期15卷 225-227页

作者：黄建生王昌才李全贞任大明钟雄林陈仕荣李英杰第一军医大学分子生物学研究所第一军医大学热带医学研究所第一军医大学复旦大学遗传所国家重点实验室

已经在减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬＳ３６１以融合蛋白的形式表达了人工合成的恶性疟原虫杂合抗原基因Ａ。活菌以２×１０￣９ｃｆｕ（ｃｏｎｏｌｙｆｏｒｍｕｎｉｔｓ）经口服免疫新西兰家兔，用ＥＬＩＳＡ法测定血清中抗体水平，结果于首... 详细信息

已经在减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬＳ３６１以融合蛋白的形式表达了人工合成的恶性疟原虫杂合抗原基因Ａ。活菌以２×１０￣９ｃｆｕ（ｃｏｎｏｌｙｆｏｒｍｕｎｉｔｓ）经口服免疫新西兰家兔，用ＥＬＩＳＡ法测定血清中抗体水平，结果于首次免疫或加强免疫后都可检测到一定水平的特异性抗体，并可诱发出针对融合蛋白和恶性疟原虫抗原的迟发性超敏反应（ＤＴＨ）。活菌苗免疫后未见明显的毒副作用。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌恶性疟原虫免疫应答活菌苗