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鱼类自主pogo转座子的挖掘、进化及活性验证

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鱼类自主pogo转座子的挖掘、进化及活性验证

作者：钟继汉扬州大学

学位级别：硕士

Tc1转座子超家族广泛分布于细菌、真菌及昆虫等各种生物中,有些Tc1转座子超家族成员已经被开发为重要的遗传育种操作工具,如SB转座子已经作为基因治疗和转基因的介导载体得到广泛应用。pogo转座子是Tc1转座子超家族的重要成员,但对其分... 详细信息

Tc1转座子超家族广泛分布于细菌、真菌及昆虫等各种生物中,有些Tc1转座子超家族成员已经被开发为重要的遗传育种操作工具,如SB转座子已经作为基因治疗和转基因的介导载体得到广泛应用。pogo转座子是Tc1转座子超家族的重要成员,但对其分布、进化和活性研究报道很少。本研究通过硬骨鱼转座组注释,并在脊椎动物中针对Tc1转座子超家族的重要成员pogo转座子进行分布、进化和活性研究,以挖掘活性pogo转座子,研发自主知识产权的遗传操作工具,为动物转基因和基因治疗等研究提供技术支撑。主要研究内容如下:(1)通过生物信息学手段对9种硬骨鱼转座组进行注释。结果表明9种硬骨鱼类转座组大小和构成差异显著,其转座组含量从高到低分别为斑马鱼、矛尾鱼、青鳉鱼、花斑剑尾鱼、大西洋鳕鱼、三刺鱼、金娃娃、罗非鱼和红鳍东方鲀,转座子含量和基因组大小呈正相关。DNA转座子在硬骨鱼类中具有多样性高和含量差异大的特点(0.50%-38.37%),是硬骨鱼类转座组差异的主要决定因素,其中hAT和Tc/Mariner超家族是硬骨鱼类主要的DNA转座子。RNA转座子在硬骨鱼类中也具有多样性高的特点,其中LINE转座子占硬骨鱼类基因组0.53%-5.66%,共检测到 12 个(I、CR1、L1、L2、R1、R2、Jockey、RTE 和Rex)超家族分布,其中L1、L2、RTE和Rex转座子扩增较为明显,LTR转座子除了在斑马鱼和三刺鱼中含量达到、5.58%和2.51%,在大多硬骨鱼类基因组中的含量低于2%,在硬骨鱼类中共检测到6个LTR转座子(Copia、DIRS、ERV、Gypsy、Ngaro和Pao)超家族分布,其中扩增最为明显的是Gypsy。而SINE转座子在硬骨鱼类中扩增最弱,仅在斑马鱼和矛尾鱼中分别达到3.28%和5.64%,在其它7个品种中低于1%。SINE中tRNA、5S和MIR三个超家族在部分硬骨鱼类中有一定程度扩增。本研究表明硬骨鱼类转座组具有多样性丰富、差异大的特点,转座组差异与硬骨鱼基因组大小有很强的相关,转座组是决定硬骨鱼基因组大小的重要因素。(2)通过TBLAST程序对NCBI数据库中脊椎动物基因组比对发现pogo转座子主要分布在鱼类基因组中,其中在28个鱼物种中发现了 pogo转座子的分布,在2种两栖动物(西方爪蛙和高山蛙)和4种爬行动物中发现了 pogo转座子的分布,在鸟类和哺乳动物未能发现者典型的pogo转座子结构。pogo转座子在进化中衍生出POGK和POGZ功能基因,POGZ在脊椎动物中分布广泛,而POGK主要分布在哺乳动物中。POGK和POGZ功能基因含有保守的pogo转座酶DBD和DDE结构域,且DDE氨基酸残基高度保守,提示POGK和POGZ可能具有DNA酶活性。(3)为验证人源POGK和POGZ在哺乳动物细胞上的活性,构建了 pogo转座子介导的新霉素报告基因表达质粒pPG-PGK-NEO,及转座酶表达质粒pT2-CMV-POGK和pT2-CMV-POGZ,同时构建斑马鱼pogo转座酶表达质粒pT2-CMV-Pgase。将pPG-PGK-NEO与分别上述三个转座酶表达质粒共转染Hela细胞,通过G418筛选获得稳定表达Neo-基因的阳性细胞,阳性细胞克隆数比较表明,pT2-CMV-POGK和pT2-CMV-POGZ组显著高于对照组,而pT2-CMV-Pgase组显著高于POGK、POGZ和对照组,提示pogo转座酶、POGK、POGZ基因均具有转座活性。(4)为了进一步明确斑马鱼pogo转座酶PGase转座子时空表达特性,以PGase正、反义RNA为探针,对不同发育阶段的斑马鱼胚胎进行原位杂交,结果表明,PGase在胚胎早期发育各阶段具有表达活性,正向表达水平明显高于反向,且表达无明显组织特异性,本研究表明,pogo转座子主要分布在鱼类、两栖类和爬行类动物中,具有较高的转座活性,且其衍生基因POGK和POGZ也具有转座活性。

关键词：转座子进化转座活性斑马鱼硬骨鱼

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兴办农民医疗保险　保障农民身体健康

中国农村卫生事业管理 1996年第7期16卷 20-21页

作者：葛维智窦吉有张玲钟继汉江苏省铜山县卫生局

兴办农民医疗保险保障农民身体健康葛维智，窦吉有，张玲，钟继汉（江苏省铜山县卫生局２２１１１２）近年来，为了适应农村经济体制改革的新形势，我们在县委、县政府领导下，在上级卫生行政部门的指导下，积极推行农民医疗保险制度，... 详细信息

兴办农民医疗保险保障农民身体健康葛维智，窦吉有，张玲，钟继汉（江苏省铜山县卫生局２２１１１２）近年来，为了适应农村经济体制改革的新形势，我们在县委、县政府领导下，在上级卫生行政部门的指导下，积极推行农民医疗保险制度，取得了良好的效果，为解决农民的防病...

关键词：医疗保险医疗费用保险社会保险乡镇卫生院农民劳动者村卫生室身体健康

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关于农业气象为防灾减灾服务的思路

农业灾害研究 2021年第9期11卷 35-36页

作者：钟继汉于都县气象局江西于都342300

随着科学技术领域的不断进步,气象学相关讯息服务也为人民群众带来了极大便利,在农事指导方面也做出了巨大贡献。精准及时的气象资料能为各项农业活动提供技术性帮助,可以有效避免因恶劣天气或自然灾害等影响农作物正常生长发育。为此,... 详细信息

随着科学技术领域的不断进步,气象学相关讯息服务也为人民群众带来了极大便利,在农事指导方面也做出了巨大贡献。精准及时的气象资料能为各项农业活动提供技术性帮助,可以有效避免因恶劣天气或自然灾害等影响农作物正常生长发育。为此,从农业气象在防灾减灾服务中的重要性出发,提出了农业气象为防灾减灾服务的工作思路,以期为气象工作者以及农业人员提供参考。

关键词：农业气象防灾减灾气象服务思路

核定位信号肽和转运肽对斑马鱼转基因效率的影响

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河南农业科学 2017年第6期46卷 142-146页

作者：钟继汉沈丹陈才高波宋成义扬州大学农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009

为了探讨核定位信号肽S413-PV和转运肽Tp10这2种融合肽对转基因效率的影响,将S413-PV和Tp10与线性化质粒分别以质量比50∶1、100∶1、200∶1混合制成转染液,注射斑马鱼单细胞期胚胎,分别检测转染24 h、120 h后胚胎的阳性率和成活率。结... 详细信息

为了探讨核定位信号肽S413-PV和转运肽Tp10这2种融合肽对转基因效率的影响,将S413-PV和Tp10与线性化质粒分别以质量比50∶1、100∶1、200∶1混合制成转染液,注射斑马鱼单细胞期胚胎,分别检测转染24 h、120 h后胚胎的阳性率和成活率。结果表明:与对照组相比,转染24 h后,S413-PV组胚胎阳性率极显著上升,胚胎成活率均下降,但差异不显著;Tp10组阳性率均呈上升趋势,200∶1组差异极显著,其他组差异不显著,胚胎成活率均显著下降;转染120 h后,S413-PV组胚胎阳性率均极显著上升,胚胎成活率均呈下降趋势,100∶1、200∶1组差异极显著;Tp10组胚胎阳性率上升,200∶1组差异显著,胚胎成活率均极显著下降。以上结果表明,S413-PV可显著提高斑马鱼转基因效率,对胚胎毒性较小;Tp10对转基因效率影响不显著,且对胚胎毒性较强。

关键词：核定位信号肽转运肽基因转移斑马鱼

BMPMP3、BMPBMP10、BMPBMP15基因在雏鸡和成年鸡主要器官中的表达特性研究

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中国家禽 2016年第4期38卷 5-9页

作者：王赛赛王亚丽沈丹薛松磊钱跃史云强陈才钟继汉刘帅军高波扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009

骨形态发生蛋白(BMP)是转化生长因子超家族中的重要成员,其信号通路控制着诸如中胚层形成、神经系统分化、牙齿和骨骼发育以及癌症发生等许多重要的生物学过程。研究旨在分析BMP家族中的BMP3、BMP10、BMP15在雏鸡和成年鸡主要器官中表... 详细信息

骨形态发生蛋白(BMP)是转化生长因子超家族中的重要成员,其信号通路控制着诸如中胚层形成、神经系统分化、牙齿和骨骼发育以及癌症发生等许多重要的生物学过程。研究旨在分析BMP家族中的BMP3、BMP10、BMP15在雏鸡和成年鸡主要器官中表达水平。采用RT-PCR方法分析BMP3、BMP10、BMP15在雏鸡、成年鸡主要器官中的表达情况,并分析这3个基因在雏鸡和成年鸡心脏中的表达差异性。结果表明:BMP3、BMP10在雏鸡和成年鸡两阶段主要器官中均可表达,BMP15在成年鸡母鸡各器官均有表达,公鸡仅肝中有表达;BMP3在雏鸡心脏中表达水平显著高于成年鸡(P0.05),BMP15在成年鸡表达水平显著高于雏鸡(P<0.05)。研究结果为BMP信号通路研究提供参考。

关键词：鸡 BMP基因表达特性

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M公司研发人员激励机制研究

M公司研发人员激励机制研究

作者：钟继立西南科技大学

学位级别：硕士

M公司是技术创新型国有企业,具有悠久的历史底蕴,但近年来公司针对研发人员的激励不足,导致公司研发人员工作效率低下、流失率较高。在M公司该种环境背景下,本文采用了激励机制经典理论中的委托代理理论作为本论文的“根理论”进行研究... 详细信息

M公司是技术创新型国有企业,具有悠久的历史底蕴,但近年来公司针对研发人员的激励不足,导致公司研发人员工作效率低下、流失率较高。在M公司该种环境背景下,本文采用了激励机制经典理论中的委托代理理论作为本论文的“根理论”进行研究分析,通过建立M公司研发人员的委托代理模型,分析出影响公司研发人员工作积极性、主动性的两大主要因素,即:研发团队中个人的风险规避程度、研发团队中成员之间的协作程度,该研究弥补了在企业研发人员激励机制中关于委托代理方式的研究空白。同时,本文采用文献研究、调查问卷、调研访谈等方法深入剖析了M公司研发人员激励机制现状,总结出公司当前在研发人员激励机制方面存在着物质激励力度不够、平均主义现象严重、分配方式单一等问题。根据上述的研究及分析,本文提出了M公司研发人员的激励机制改进方案,该方案作为重要的决策类参考依据,对完善M公司研发人员激励机制提供了有力的支撑和借鉴。

关键词：技术创新研发人员委托代理激励机制改进方案

服役条件下车-设备耦合的地铁车辆横向振动特性

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交通运输工程学报 2024年第4期24卷 161-170页

作者：文永蓬吴俊汉钟硕乔宗志祥周慧上海工程技术大学城市轨道交通学院上海201620 上海工程技术大学上海市轨道交通振动与噪声控制技术工程研究中心上海201620 上海地铁维护保障有限公司车辆分公司上海200235

为了降低车体的横向振动,提高长期服役过程中的地铁车辆乘坐舒适性,建立了含车下设备的地铁车辆横向动力学模型,调研了车辆行驶速度分布以及反映轮轨接触状态的等效锥度在服役条件下的动态变化规律,获得了车-设备耦合下的横向振动特性,... 详细信息

为了降低车体的横向振动,提高长期服役过程中的地铁车辆乘坐舒适性,建立了含车下设备的地铁车辆横向动力学模型,调研了车辆行驶速度分布以及反映轮轨接触状态的等效锥度在服役条件下的动态变化规律,获得了车-设备耦合下的横向振动特性,形成了车-设备耦合的车体横向减振参数设计方法。研究结果表明:地铁车辆的服役条件会随着车辆的行驶速度和等效锥度改变而动态改变,逐渐增大的轮轨接触等效锥度会导致车辆临界速度降低,加剧车辆的横向振动,横向振动的特征频率会随行驶速度和等效锥度的提高而线性增大,其数值集中在低频1~3 Hz范围;车体与设备在横向发生振动耦合时,设备的质量与弹性悬挂刚度存在最优匹配关系,选取合适的悬挂刚度能显著降低车体的横向振动,适当增加车下设备宽度和侧滚惯量,有助于降低车体的横向振动,为了抑制车-设备的横向振动,要重视横向悬挂刚度的选取,建议选取6.0×10^(4)N·m^(-1);车下设备与车体之间采用合适的弹性悬挂连接,让设备横向振动频率与车体的横向振动频率接近,利用车-设备的同频耦合振动,能够降低车体的横向振动,有利于车辆运行品质的提升。

关键词：车辆工程地铁车辆车下设备蛇行运动横向振动弹性悬挂耦合振动

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SB转座子介导的斑马鱼增强子捕获注解分析

生物技术通报 2017年第5期33卷 153-158页

作者：刘帅军沈丹钟继汉陈伟王伟张丽陈才杨昆仑高波宋成义扬州大学动物科学与技术学院扬州大学农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225009

为了建立斑马鱼增强子捕获突变体库及研究功能基因的表达调控模式,制备了SB转座子介导的增强子捕获转基因斑马鱼(F0),通过繁育建立了组织或器官特异表达报告基因绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)的品系(F1)。选择F1代的SK-3... 详细信息

为了建立斑马鱼增强子捕获突变体库及研究功能基因的表达调控模式,制备了SB转座子介导的增强子捕获转基因斑马鱼(F0),通过繁育建立了组织或器官特异表达报告基因绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)的品系(F1)。选择F1代的SK-3系(脑部特异表达GFP)与野生型TU系斑马鱼交配,收集受精卵(F2),于24 hpf(Hour post fertilization)、2 dpf(Day post fertilization)、3 dpf、4 dpf、5 dpf、7 dpf 6个发育阶段检测报告基因绿色荧光蛋白的表达模式;然后通过Splinkerette PCR(SP-PCR)方法检测SB转座子在斑马鱼基因组中的插入位置,从而确定捕获的增强子和功能基因;最后通过胚胎原位杂交验证内源基因表达模式。结果表明,在F2代胚胎不同发育阶段,GFP表达具有明显的时空特性,前期在前脑,中脑,后脑三个部位均高水平表达,后期表达部位呈后移趋势,各个发育期表达强度基本无变化,结果提示该捕获增强子具有脑部表达特性。sp-PCR结果分析表明增强子位于基因组1号染色体35、914、498-35、914、621位置,在内源性基因ednraa位点附近。原位杂交结果表明该基因在胚胎24 hpf阶段具有转录活性。本研究结果提示SB转座子介导的增强子捕获技术可高效获得插入突变斑马鱼,对研究基因功能和获得具有自主知识产权的新基因具有重要作用。

关键词：增强子捕获注解 SB 斑马鱼

SB,PB和Tol2转座子介导基因捕获效率比较

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SB,PB和Tol2转座子介导基因捕获效率比较