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BRUNOL4蛋白在小鼠植入前胚的表达和作用

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BRUNOL4蛋白在小鼠植入前胚的表达和作用

作者：钟玉环福建医科大学

学位级别：硕士

目的:研究小鼠植入前胚中BRUNOL4蛋白的定位及mRNA表达,并通过显微注射BRUNOL4抗体观察小鼠植入前的发育,初步阐明BRUNOL4在小鼠植入前胚中的作用。方法:***小鼠(♀KM×♂KM)合笼以获取不同时期的植入前胚,结合免疫荧光染色和激光共聚... 详细信息

目的:研究小鼠植入前胚中BRUNOL4蛋白的定位及mRNA表达,并通过显微注射BRUNOL4抗体观察小鼠植入前的发育,初步阐明BRUNOL4在小鼠植入前胚中的作用。方法:***小鼠(♀KM×♂KM)合笼以获取不同时期的植入前胚,结合免疫荧光染色和激光共聚焦扫描显微观察BRUNOL4蛋白在小鼠植入前胚各阶段的表达。2.收集KM小鼠各阶段的植入前胚,利用Real-Time PCR技术观察Brunol4mRNA的表达水平。3.收集KM小鼠1-细胞胚(hCG后18h),置于KSOM培养液中预孵育3h后,选择具有明显雌、雄原核的植入前胚进行相应处理,分为以下3组:KSOM培养组(空白对照组)、无关IgG(100μg/ml)注射组(阴性对照组)和BRUNOL4抗体(100μg/ml)注射组,收集3组植入前胚进行体外培养,并观察后续发育情况。4.于hCG后50h收集3组发育至2-细胞胚的细胞,检测ZGA相关的标志基因MuERV-L、Zscan4d、Hsp70.1、eIF1A的mRNA表达情况。5.于hCG后96h收集3组发育至桑葚胚的细胞,检测干细胞转录因子Sox2、Oct4以及分化相关因子Cdx2基因表达的变化。结果:1.免疫荧光结果显示,在卵母细胞和植入前胚早期,BRUNOL4蛋白呈颗粒状弥散表达,在8-细胞胚阶段,其蛋白颗粒显著变粗,至桑葚胚阶段,BRUNOL4荧光强度达到最强,之后开始降低,在晚期囊胚阶段降到最低水平。***-Time PCR检测结果显示,Brunol4 mRNA在成熟的卵母细胞(MII卵)中表达水平最高,受精后表达水平逐渐下降,8-细胞胚至囊胚阶段几乎检测不到。3.显微注射BRUNOL4抗体后,囊胚腔化率显著低于KSOM培养组(空白对照组)和无关IgG注射组(阴性对照组)(P0.05)。5.显微注射BRUNOL4抗体后,桑葚胚中Sox2与Oct4 mRNA与对照组相比无显著差异,Cdx2 mRNA表达水平明显下降(P<0.05)。结论:BRUNOL4蛋白在小鼠植入前胚胞质内的阶段特异性表达提示其可能对植入前胚发育起到一定的作用。Brunol4 mRNA在成熟的卵母细胞(MII卵)中表达水平最高,提示其可能为母源效应基因。采用特异性抗体显微注射封闭BRUNOL4的功能后,四个ZGA相关标志基因eIF1A、MuERV-L、Zscan4d、Hsp70.1以及干细胞转录因子Sox2、Oct4的mRNA表达水平均无显著差异,但可引起桑葚胚内Cdx2 mRNA表达下调,提示BRUNOL4可能通过调控Cdx2的表达从而参与滋养层形成过程,进而影响囊胚的发育。

关键词： BRUNOL4 RNA结合蛋白植入前胚显微注射

欧前胡素和异欧前胡素对人和大鼠肝微粒体细胞色素P450酶活性的抑制作用

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中国中药杂志 2013年第8期38卷 1237-1241页

作者：曹艳钟玉环原梅李桦赵春杰军事医学科学院毒物药物研究所北京100850 沈阳药科大学辽宁沈阳110016

欧前胡素(IM)和异欧前胡素(ISOIM)是伞形科常用中药的主要有效成分,在临床上广泛应用。该文研究了IM和ISOIM对人和大鼠肝微粒体细胞色素P450酶(CYP)活性的抑制作用,并评价它们的相互作用潜能。在体外将系列浓度的IM和ISOIM与人和大鼠肝... 详细信息

欧前胡素(IM)和异欧前胡素(ISOIM)是伞形科常用中药的主要有效成分,在临床上广泛应用。该文研究了IM和ISOIM对人和大鼠肝微粒体细胞色素P450酶(CYP)活性的抑制作用,并评价它们的相互作用潜能。在体外将系列浓度的IM和ISOIM与人和大鼠肝微粒体孵育30 min,以非那西丁、安非他酮、甲苯磺丁脲、S-美芬妥英、右美沙芬和咪达唑仑为CYP探针底物,应用LC-MS/MS定量检测各探针底物的代谢产物生成量,计算得到的IC50,评价两药对人肝CYP1A2,2B6,2C9,2C19,2D6,3A4酶,以及大鼠肝CYP1A2,2B6,2D2,3A1/2酶的抑制活性,并对抑制强度进行分级。在人肝微粒体中,IM和ISOIM对6个CYP同工酶均有不同程度的抑制作用。它们是1A2和2B6的强抑制剂,抑制1A2的IC50分别为0.05,0.20μmol.L-1;抑制2B6的IC50分别为0.18,1.07μmol.L-1。两药还是2C19的中等抑制剂,以及2C9,2D6,3A4的弱抑制剂。在大鼠肝微粒体中,IM和ISOIM是1A2的中等抑制剂,IC50分别为1.95,2.98μmol.L-1。它们分别是2B6的中等和弱抑制剂,IC50为6.22,21.71μmol.L-1。两药还是2D2,3A1/2的弱抑制剂。结果表明IM,ISOIM对人肝CYP酶有广泛的抑制作用,它们是CYP1A2和2B6酶的强抑制剂,临床用药时应注意因CYP酶抑制引起的相互作用。

关键词：欧前胡素异欧前胡素细胞色素P450酶肝微粒体药物相互作用

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同位素稀释-高效液相色谱-质谱联用技术检测大鼠血浆中的芥子气水解产物

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分析化学 2012年第10期40卷 1567-1572页

作者：李春正陈佳钟玉环钟玉绪谢剑炜李桦军事医学科学院毒物药物研究所

应用同位素稀释-高效液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS),建立了同时定量检测血浆中芥子气水解代谢产物硫二甘醇(TDG)和二羟乙基亚砜(TDGO)的方法。应用甲醇和乙腈混合溶剂沉淀染毒大鼠血浆中蛋白,采用ZORBAX-C18色谱柱(100 mm×3.0 mm,3.... 详细信息

应用同位素稀释-高效液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS),建立了同时定量检测血浆中芥子气水解代谢产物硫二甘醇(TDG)和二羟乙基亚砜(TDGO)的方法。应用甲醇和乙腈混合溶剂沉淀染毒大鼠血浆中蛋白,采用ZORBAX-C18色谱柱(100 mm×3.0 mm,3.5μm),以5 mmol/L甲酸铵-甲醇梯度洗脱分离待测物。以d8-TDG为内标,在正离子多反应监测模式下定性和定量分析TDG和TDGO。方法学验证结果表明,TDG在5～800μg/L和TDGO在0.5～80.0μg/L范围内均呈良好的线性关系(r2>0.991),定量限分别为5和0.5μg/L,加标回收率在101%～118%之间,方法的日内和日间精密度(RSD)均小于10%。对SD大鼠(n=6)采用皮下注射方式进行染毒后采样测定,代谢动力学参数计算结果显示,TDG和TDGO的达峰时间(tmax)分别为30和60 min,峰值浓度(cmax)为(1724±227)μg/L和(301±115)μg/L,血浆浓度-时间曲线下面积(AUC)为(3286±249)μg.h/L和(1010±363)μg.h/L。

关键词：芥子气硫二甘醇二羟乙基亚砜液质联用血浆毒代动力学

来源：博看期刊

超高效液相串联质谱法同时定量检测6个细胞色素P450酶探针代谢产物

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分析化学 2013年第4期41卷 488-493页

作者：沈国林钟玉环原梅庄笑梅李桦军事医学科学院毒物药物研究所

应用超高效液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS),建立了同时定量测定6个细胞色素P450酶(CYP)探针代谢产物的方法。用甲醇和乙腈混合溶剂沉淀肝微粒体孵育液中的蛋白,在ZORBAX-C18色谱柱(100 mm×4.6 mm,3.5μm)上,以5 mmol/L甲酸铵和0.1%甲... 详细信息

应用超高效液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS),建立了同时定量测定6个细胞色素P450酶(CYP)探针代谢产物的方法。用甲醇和乙腈混合溶剂沉淀肝微粒体孵育液中的蛋白,在ZORBAX-C18色谱柱(100 mm×4.6 mm,3.5μm)上,以5 mmol/L甲酸铵和0.1%甲酸-乙腈为流动相,梯度分离待测物。在串联质谱正离子多反应监测模式下定量检测待测物。方法学验证结果表明,6个代谢产物在1.0～1000.0μg/L的范围内均呈良好的线性关系(r2>0.994);定量限为1μg/L;方法的日内和日间精密度(RSD)均小于12%;加标回收率为92.8%～104.4%;不同储存条件下样品稳定性实验的浓度偏差(RSD)小于10%。人肝微粒体活性测定的结果显示CYP1A2和CYP3A4的酶活性最强,分别为(466.1±32.1)和(694.3±11.7)pmole/(***),与最低的CYP2C19酶活性分别相差27.7和41.3倍。本方法简便、快速、灵敏,适用于大量化合物CYP酶诱导和抑制评价的酶活性测定。

关键词：细胞色素P450酶探针底物代谢产物液相色谱-质谱联用肝微粒体

补骨脂素和异补骨脂素在大鼠和人肝微粒体的酶促动力学

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中国药理学与毒理学杂志 2015年第6期29卷 924-930页

作者：阳海鹰钟玉环陈琳李桦庄笑梅抗毒药物与毒理学国家重点实验室军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

目的研究中药有效成分补骨脂素和异补骨脂素的细胞色素P450(CYP)酶促动力学特征,比较其结构和种属差异,为体内药代动力学特征的预测提供科学依据。方法建立补骨脂素和异补骨脂素的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测方法,在优化人和大鼠肝... 详细信息

目的研究中药有效成分补骨脂素和异补骨脂素的细胞色素P450(CYP)酶促动力学特征,比较其结构和种属差异,为体内药代动力学特征的预测提供科学依据。方法建立补骨脂素和异补骨脂素的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测方法,在优化人和大鼠肝微粒体孵育体系和评价体外代谢稳定性的基础上,进行了代谢稳定性和酶促动力学研究,应用非线性回归法计算最大反应速率(V_(max))和米氏常数(K_m)。结果应用建立的LC-MS/MS检测方法,补骨脂素、异补骨脂素在肝微粒体孵育液中定量范围为0.1~50.0μmol·L^(-1),线性关系良好,精密度和准确度等满足检测要求。体外代谢稳定性研究显示,当底物浓度为1μmol·L^(-1),蛋白浓度为0.5 g·L^(-1),孵育40 min内,补骨脂素和异补骨脂素在大鼠和人肝微粒体呈线性消除,体外半衰期分别为74.5,95.0,74.5和173.3 min。补骨脂素在大鼠和人肝微粒体中的V_(max)分别为:(1.140±0.080)μmol·min-1·g-1蛋白,(0.620±0.060)μmol·min-1·g-1蛋白;K_m分别为(12.9±0.3)μmol·L^(-1)和(7.4±1.3)μmol·L^(-1)。异补骨脂素在大鼠和人肝微粒体中的V_(max)分别为(0.251±0.012)μmol·min-1·g-1蛋白和(0.103±0.014)μmol·min-1·g-1蛋白;K_m分别为:(3.0±0.4)μmol·L^(-1)和(3.4±0.7)μmol·L^(-1)。结论补骨脂素和异补骨脂素的CYP酶促动力学特征及代谢稳定性具有一定的种属和结构差异,在大鼠两者基于CYP酶的代谢清除过程可能相似。而在人体,异补骨脂素的CYP代谢清除可能慢于补骨脂素,导致药代动力学特征的差异。

关键词：补骨脂素异补骨脂素肝微粒体细胞色素P450酶系统药代动力学

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双减背景下初中英语课堂提质增效的路径研究

双减背景下初中英语课堂提质增效的路径研究

大鼠稳态脑分布模型评价药物的血脑屏障通透性

广东省教师继续教育学会《教育与创新融合》研讨会

作者：钟玉环山东省菏泽市牡丹区第二十二初级中学

2021年7月24日中共中央办公厅、国务院办公厅《关于进一步减轻义务教育阶段学生作业负担和校外负担的意见》一是全面压减作业总量和时长,减轻学生过重作业负担,二是提升学校课后服务水平,满足学生多样化需求。双减的提出就是对教育怪圈... 详细信息

2021年7月24日中共中央办公厅、国务院办公厅《关于进一步减轻义务教育阶段学生作业负担和校外负担的意见》一是全面压减作业总量和时长,减轻学生过重作业负担,二是提升学校课后服务水平,满足学生多样化需求。双减的提出就是对教育怪圈的一个质的改变,让教育回归自然,回归课堂,回归实践。初中英语是学生学习生涯当中的基础阶段,也是重要环节,在这个阶段学生容易出现分化,所以双减下初中英语高效课堂的实施不能只立足于课堂,应立足与课前、课中、课后,使初中英语课堂提质增效,课前准备,课中实践,课后巩固,它们相互依赖、相辅相成。因此,重构传统教学模式(我将使用牡丹区二十二中"四环七步"教学范式和"英语五课型"模式,以下简称四环七步和英语五课型)吸收大单元备课研究策略,利用新课标下与教学目标相匹配的、适当的课后辅助性预设与实施,减少学生学习时长,让课堂以学生为主体,点燃学生内驱力,发挥学生自主学习能力,顺应教育教学自然规律,创设温馨的教育氛围,实现和谐、绿色教育,以便推动初中英语课堂教学的发展。

关键词：双减初中英语

来源： cnki会议评论

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国际药学研究杂志 2015年第5期42卷 625-629页

作者：原梅阳海鹰钟玉环庄笑梅李桦抗毒药物和毒理学国家重点实验室军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

目的建立大鼠稳态脑分布模型用于评价安替比林、阿替洛尔和ZZB系列新药候选化合物的稳态脑分布和血脑屏障通透性。方法大鼠静脉推注负荷剂量的药物后恒量输注使血药浓度达到稳态,取血和脑组织样品,LC-MS/MS定量测定血浆和脑组织药物浓度... 详细信息

目的建立大鼠稳态脑分布模型用于评价安替比林、阿替洛尔和ZZB系列新药候选化合物的稳态脑分布和血脑屏障通透性。方法大鼠静脉推注负荷剂量的药物后恒量输注使血药浓度达到稳态,取血和脑组织样品,LC-MS/MS定量测定血浆和脑组织药物浓度,计算稳态脑血比值(Kp值)。在Caco-2单层细胞体外模型上评价受试药物的双向跨膜通透性,计算表观通透系数(Papp)。结果安替比林和阿替洛尔分别为已知的血脑屏障易通透和难通透药物。安替比林的平均稳态脑分布浓度为(2561±125)ng/g,Kp值为0.93±0.04。阿替洛尔则分别为(20.1±0.8)ng/g和0.015±0.002。安替比林的Kp值约为阿替洛尔的60倍。ZZB系列化合物的结构相似,但Kp值的差异较大,从0.044到6.41,并与Caco-2细胞模型的Papp值不相关。结论建立的大鼠稳态脑分布模型可快速形成稳态血浆浓度,适用于药物血脑屏障通透程度的评价,方法简单、可靠且经济。

关键词：血脑屏障通透性稳态脑分布

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提高生活垃圾焚烧发电厂总热效率的措施研究

中国科技期刊数据库工业A 2021年第7期 17-18页

作者：钟玉环中山市长青环保热能有限公司广东中山528400

随着近年来经济的不断发展,我国对于电力能源的需求量在不断增加。除此之外,生活垃圾的处理已经成为经济高速发展中大中型城市的重要难题。相关工作人员认为将两者进行有机的结合,能够在燃烧生活垃圾的同时提高生活垃圾焚烧发电厂的总... 详细信息

随着近年来经济的不断发展,我国对于电力能源的需求量在不断增加。除此之外,生活垃圾的处理已经成为经济高速发展中大中型城市的重要难题。相关工作人员认为将两者进行有机的结合,能够在燃烧生活垃圾的同时提高生活垃圾焚烧发电厂的总热效率,这是我国未来研究的主要方向。在进行燃烧时,能够有助于将垃圾的体积减小并且减轻垃圾的质量,同时还能够利用燃烧产生的热能再次产生经济效益,生活垃圾焚烧发电在目前的各个环境中得到了极大的应用。自1988年起,我国建立了第1座垃圾焚烧发电站,在近30年的时间内发展极为迅速,所以相关工作人员想要使生活垃圾焚烧的整体质量得到提升。首先需要对生活垃圾焚烧发电厂建设过程中的问题进行分析,并不断对一系列的内容进行优化,这样才能有助于起到节能降耗,并且提高发电厂总热效率。

关键词：生活垃圾焚烧发电厂总热效率提升问题与措施

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压纹印刷涂料纸生产的几点体会

华东纸业 1987年第2期 38-40+9页

作者：钟玉环沈阳市造纸厂

我厂生产的压纹印刷涂料纸是一九七九年开始研制,于一九八○年初拿出试制样品,后经不断改进于一九八二年进行了试生产。一九八二年从日本蝶理株式会社,东谷铁工所引进了一台型号为EMO—A2—1300型单面压花机。这样,由原来已有的调备料... 详细信息

我厂生产的压纹印刷涂料纸是一九七九年开始研制,于一九八○年初拿出试制样品,后经不断改进于一九八二年进行了试生产。一九八二年从日本蝶理株式会社,东谷铁工所引进了一台型号为EMO—A2—1300型单面压花机。这样,由原来已有的调备料、涂布及超级压光,分切等工序就构成了一条完整的压纹印刷涂料纸的生产线。

关键词：压纹机印刷涂料纸挺度纸张原纸几点体会