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肝基质和MNNG对日本血吸虫成虫培养细胞糖细胞化学作用的研究

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中国人兽共患病学报 2004年第Z1期21卷 84-85页

作者：明珍平钟沁萍董惠芬蒋明森武汉大学医学院人体寄生虫学教研室湖北武汉430071 武汉大学医学院人体寄生虫学教研室湖北武汉430071 武汉大学医学院人体寄生虫学教研室湖北武汉430071 武汉大学医学院人体寄生虫学教研室湖北武汉430071

　　本文主要研究肝基质和MNNG共同作用对日本血吸虫成虫培养细胞增殖及细胞内糖类物质的影响.方法:将虫龄为32天的日本血吸虫成虫细胞,分别接种于普通盖玻片(实验Ⅰ组)和铺敷有肝基质的盖玻片上(随机分为实验Ⅱ和Ⅲ组),细胞培养基为RPM... 详细信息

　　本文主要研究肝基质和MNNG共同作用对日本血吸虫成虫培养细胞增殖及细胞内糖类物质的影响.方法:将虫龄为32天的日本血吸虫成虫细胞,分别接种于普通盖玻片(实验Ⅰ组)和铺敷有肝基质的盖玻片上(随机分为实验Ⅱ和Ⅲ组),细胞培养基为RPMI-1640含20%小牛血清附加常量抗生素.培养第4天,实验Ⅰ组和Ⅲ组细胞分别在含3μg/ml MNNG的培养基中培养48小时,彻底清洗后继续用含20%小牛血清的RPMI-1640培养.实验Ⅱ组细胞用不含MNNG的培养基处理相同时间.……

关键词：肝基质日本血吸虫成虫培养细胞细胞培养基小牛血清实验盖玻片培养基处理细胞增殖糖类物质成虫细胞细胞内细胞分同作用抗生素清洗接种附加方法

β-巯基乙醇与肝基质对日本血吸虫培养细胞的影响

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中国地方病学杂志 2004年第4期23卷 307-310页

作者：彭延董惠芬蒋明森钟沁萍胡世全武汉大学医学院寄生虫病教研室血吸虫病研究室 430071 武汉市血吸虫病防治办公室

目的研究β鄄巯基乙醇与肝基质对日本血吸虫培养细胞的影响。方法将18d虫龄的日本血吸虫童虫细胞联合法接种于小盖玻片上。实验被随机分为4个组,分别为对照组、β鄄巯基乙醇组、肝基质组、β鄄巯基乙醇+肝基质联合处理组。培养第7天,对... 详细信息

目的研究β鄄巯基乙醇与肝基质对日本血吸虫培养细胞的影响。方法将18d虫龄的日本血吸虫童虫细胞联合法接种于小盖玻片上。实验被随机分为4个组,分别为对照组、β鄄巯基乙醇组、肝基质组、β鄄巯基乙醇+肝基质联合处理组。培养第7天,对各组细胞进行核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)与乳酸脱氢酶(LDH)细胞化学染色,并结合图像分析比较4个组培养细胞的AgNORs水平及LDH活性。结果与对照组比较,肝基质组、β鄄巯基乙醇组、β鄄巯基乙醇+肝基质联合处理组培养细胞的AgNORs颗粒数目、颗粒面积与核面积百分比、平均光密度以及LDH的平均光密度等4个参数均有不同程度升高(P0.05),其余组间3个参数两两比较差异均有显著意义(P<0.01或P<0.05)。结论β鄄巯基乙醇与肝基质均能促进日本血吸虫培养细胞的增殖、代谢,但β鄄巯基乙醇的作用比肝基质显著;二者联合使用对培养细胞的增殖无协同作用。

关键词： β-巯基乙醇肝基质日本血吸虫细胞培养核仁组织区嗜银蛋白乳酸脱氢酶

日本血吸虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的研究

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中国人兽共患病杂志 2004年第6期20卷 492-494,499页

作者：董惠芬彭延蒋明森明珍平钟沁萍武汉大学医学院人体寄生虫学教研室血吸虫病研究室武汉430071

目的通过研究日本血吸虫成虫与童虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)含量及β-巯基乙醇对培养细胞AgNORs的影响,探讨AgNORs能否作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的指标以及β-巯基乙醇对培养细胞的促增殖作用。方法联合法培养... 详细信息

目的通过研究日本血吸虫成虫与童虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)含量及β-巯基乙醇对培养细胞AgNORs的影响,探讨AgNORs能否作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的指标以及β-巯基乙醇对培养细胞的促增殖作用。方法联合法培养虫龄分别为18d和24d的日本血吸虫童虫与成虫,将童虫细胞随机分成对照组和实验组,对照组细胞与成虫细胞使用常规培养基培养,实验组在常规培养基中加入50μmoL/L β-巯基乙醇和1mmoL/L丙酮酸钠。培养第5d,运用胶银法染色,使用HPIAS-2000图像分析系统,计算培养细胞核内AgNORs颗粒数,测定银染颗粒面积与核面积的百分比和平均光密度。结果日本童虫培养细胞(对照组)的AgNORs颗粒数目、颗粒面积与核面积百分比、平均光密度均高于成虫培养细胞。统计学分析显示,两者之间的AgNORs颗粒数日,银染颗粒面积与核面积百分比、平均光密度两两比较均有统计学差异(P<0.01或P<0.05);实验组培养细胞与对照组比较,AgNORs颗粒数目明显增多颗粒面积与核面积百分比、平均光密度均显著升高。统计学分析可知,两组细胞三组参数之间均有统计学差异(P<0.01或P<0.05)。结论 AgNORs可作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的一个简便、敏感的指标。日本血吸虫童虫培养细胞较成虫培养细胞更具增殖潜能;

关键词：日本血吸虫细胞培养核仁组织区相关嗜银蛋白 β-巯基乙醇

甲基硝基亚硝基胍对日本血吸虫成虫培养细胞骨架作用的研究

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中国地方病学杂志 2001年第6期20卷 401-403页

作者：范虹董惠芬蒋明森明珍平钟沁萍武汉大学医学院寄生虫学教研室血吸虫病研究室湖北武汉430071

目的　通过观察 N-甲基 - N-硝基 - N-亚硝基胍 (MNNG)诱导日本血吸虫培养细胞后骨架的改变 ,研究 MNNG对培养细胞转化、增殖的作用。方法　将日本血吸虫成虫培养细胞接种于小盖玻片上 ,培养 1周时用浓度为 3mg/ L 的 MNNG处理 48h,然后... 详细信息

目的　通过观察 N-甲基 - N-硝基 - N-亚硝基胍 (MNNG)诱导日本血吸虫培养细胞后骨架的改变 ,研究 MNNG对培养细胞转化、增殖的作用。方法　将日本血吸虫成虫培养细胞接种于小盖玻片上 ,培养 1周时用浓度为 3mg/ L 的 MNNG处理 48h,然后用 RPMI- 16 40含 2 0 %小牛血清附加常量抗菌素的培养基培养 2周 ,再换用 RPMI- 16 40含 5 %小牛血清的培养基继续培养 ,用考马斯亮兰染色法和鬼笔环肽荧光染色法显示培养细胞骨架。结果　 MNNG诱导后 ,在培养第 4、5周时部分培养细胞骨架排列紊乱 ,微丝集聚于细胞边缘。结论　 MNNG有一定诱导日本血吸虫成虫培养细胞转化。

关键词：日本血吸虫成虫培养细胞 N-甲基-N-硝基-N亚硝基胍细胞骨架

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一种获得高纯度包涵体蛋白的简便方法

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第5期29卷 399-400,F0003页

作者：刘镕钟沁萍蒋明森董惠芬武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室武汉430071

以日本血吸虫SjBMP基因部分编码序列构建SjBMP-pET-28a(+)重组原核表达质粒,并转化至大肠埃希菌(***)BL21(DE3)进行原核表达。将经过鉴定的目的蛋白rSjBMP以包涵体形式表达的诱导菌样通过Ni2+-NTA Agarose亲和纯化和十二烷基硫酸钠-聚... 详细信息

以日本血吸虫SjBMP基因部分编码序列构建SjBMP-pET-28a(+)重组原核表达质粒,并转化至大肠埃希菌(***)BL21(DE3)进行原核表达。将经过鉴定的目的蛋白rSjBMP以包涵体形式表达的诱导菌样通过Ni2+-NTA Agarose亲和纯化和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)切胶再纯化。用该纯化蛋白制备免疫血清,用蛋白质印迹(Western blotting)检测其免疫反应性。结果显示,经Ni2+-NTA Agarose亲和纯化和SDS-PAGE切胶再纯化,获得高纯度的目的蛋白,回收率>11.0%。用该纯化蛋白免疫家兔制备免疫血清,获得的血清效价高于1∶1 280;Western blotting检测结果表明,用该免疫血清去识别表达的重组蛋白,出现特异的单一条带,表明该纯化蛋白仍保持其抗原性,可用于免疫学相关实验研究。因此,SDS-PAGE切胶纯化后电渗、透析回收是纯化重组包涵体蛋白有效、简便的方法。

关键词：重组蛋白原核表达包涵体纯化

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化学诱变剂对日本血吸虫成虫作用的初步研究

中国人兽共患病学报 2004年第Z1期21卷 83-84页

作者：明珍平董惠芬蒋明森易同寅钟沁萍武汉大学医学院人体寄生虫学教研室湖北武汉430071 武汉大学医学院人体寄生虫学教研室湖北武汉430071 武汉大学医学院人体寄生虫学教研室湖北武汉430071 武汉大学医学院人体寄生虫学教研室湖北武汉430071 武汉大学医学院人体寄生虫学教研室湖北武汉430071

　　化学诱变剂MNNG诱导对日本血吸虫成虫形态结构变化(畸变)具有一定的影响.本文主要对其影响程度进行初步研究.具体方法是将虫龄为28天的日本血吸虫成虫,随机分成二组.一组分别用不同浓度的MNNG(1、2、3、4、5、6μg/ml)诱导24hrs;另... 详细信息

　　化学诱变剂MNNG诱导对日本血吸虫成虫形态结构变化(畸变)具有一定的影响.本文主要对其影响程度进行初步研究.具体方法是将虫龄为28天的日本血吸虫成虫,随机分成二组.一组分别用不同浓度的MNNG(1、2、3、4、5、6μg/ml)诱导24hrs;另一组用不同浓度的MNNG(1,2,3μg/ml)分别诱导24,36、48hrs.随后均被彻底清洗,并用851培养基培养,每周在光镜下观察虫体形态结构、活力等的变化,记录虫体死亡率以及虫体畸变率,对畸变成虫拍照并做扫描电镜观察.……

关键词：化学诱变剂日本血吸虫成虫形态结构变化扫描电镜观察畸变率虫体培养基浓度镜下观察死亡率组分清洗拍照方法虫龄程度

日本血吸虫培养细胞SDH、AKP和ACP的组织化学观察

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中国公共卫生 2002年第5期18卷 557-558页

作者：刘晴董惠芬蒋明森钟沁萍明珍平武汉大学医学院人体寄生虫学教研室血吸虫病研究室武汉430071

目的　探讨日本血吸虫成虫培养细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)、碱性磷酸酶 (AKP)和酸性磷酸酶 (ACP)的组织化学变化。方法　应用组织化学染色方法显示日本血吸虫成虫培养细胞SDH、AKP和ACP。结果　日本血吸虫成虫培养细胞均具SDH、AKP、ACP活... 详细信息

目的　探讨日本血吸虫成虫培养细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)、碱性磷酸酶 (AKP)和酸性磷酸酶 (ACP)的组织化学变化。方法　应用组织化学染色方法显示日本血吸虫成虫培养细胞SDH、AKP和ACP。结果　日本血吸虫成虫培养细胞均具SDH、AKP、ACP活性 ,体积较大的细胞在胞膜附近和鞭毛细胞的鞭毛部位SDH活性最强 ;圆颗粒细胞、三角扇形细胞及合胞体的AKP活性细胞质较细胞核弱 ,团簇状排列的细胞主要分布在细胞质 ,而鞭毛形细胞则集中于细胞核和鞭毛部位 ;ACP的活性均较强 ,尤其是体积较大的培养细胞 ,活性部位集中分布在核周或弥散分布在细胞质中。结论　日本血吸虫培养细胞SDH、AKP和ACP的组化染色可做为简便易行、快速敏感的细胞培养条件优劣的评价指标。

关键词：血吸虫病日本血吸虫培养细胞 SDH AKP ACP 组织化学

日本血吸虫成虫培养细胞SDH和LDH细胞化学研究

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中国人兽共患病杂志 2002年第2期18卷 69-71页

作者：董惠芬蒋明森刘晴钟沁萍朱俊勇武汉大学医学院人体寄生虫学教研室血吸虫病研究室武汉430071

目的　研究日本血吸虫成虫培养细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)和乳酸脱氢酶 (LDH)含量、分布及变化规律 ,了解日本血吸虫成虫培养细胞的能量代谢类型。方法　将虫龄 2 6d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,培养于RPMI- 16 4 0含2 0 %小牛... 详细信息

目的　研究日本血吸虫成虫培养细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)和乳酸脱氢酶 (LDH)含量、分布及变化规律 ,了解日本血吸虫成虫培养细胞的能量代谢类型。方法　将虫龄 2 6d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,培养于RPMI- 16 4 0含2 0 %小牛血清附加常量抗生素的培养基中 ,定时运用Pearson法进行SDH和LDH染色 ,用Olympus-BH2 显微镜观察并拍照 ,用HPIAS - 2 0 0 0图像分析仪测量其含量 ,并作统计分析。结果　日本血吸虫成虫培养细胞均具有SDH和LDH活性 ,两者均分布在细胞质内。培养 1d细胞的SDH和LDH活性最强 ,随着培养时间延长 ,其活性逐渐减弱 ,其中SDH活性下降较快 ,培养 5d大部分细胞SDH活性已极弱 ;而LDH活性下降则较缓 ,培养 5 6d细胞仍具LDH活性。结论　体外培养的日本血吸虫成虫细胞的能量代谢类型与成虫相似 ,既存在三羧酸循环需氧型呼吸链 ,也具有无氧糖酵解 ,但以无氧糖酵解为主。

关键词：日本血吸虫成虫培养细胞琥珀酸脱氢酶乳酸脱氢酶细胞化学能量代谢

日本血吸虫培养细胞磷酸酶细胞化学的动态变化

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武汉大学学报（医学版） 2004年第6期25卷 617-620页

作者：蒋明森刘晴董惠芬朱俊勇钟沁萍武汉大学医学院人体寄生虫学教研室血吸虫病研究室武汉430071

目的 :研究体外培养的日本血吸虫成虫细胞碱性磷酸酶 (AKP)和酸性磷酸酶 (ACP)活性的变化规律。方法 :将虫龄 2 6d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,培养于RPMI16 4 0含 2 0 %小牛血清附加常量抗生素的培养基中 ,培养 7,14 ,2 1,3... 详细信息

目的 :研究体外培养的日本血吸虫成虫细胞碱性磷酸酶 (AKP)和酸性磷酸酶 (ACP)活性的变化规律。方法 :将虫龄 2 6d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,培养于RPMI16 4 0含 2 0 %小牛血清附加常量抗生素的培养基中 ,培养 7,14 ,2 1,35和 4 9d时 ,分别运用改良的Gomori钙 -钴法和Gomori硫化铅法进行AKP和ACP染色。结果 :随着培养时间延长 ,日本血吸虫成虫培养细胞的AKP和ACP活性均渐减弱。培养 2 1d后 ,所有培养细胞的AKP活性开始减弱 ;培养至 4 9d ,AKP阴性反应细胞所占比例增大 ,但仍有较多细胞具AKP活性 ;而ACP活性在培养 14d时 ,有的细胞显著增强 ,有的却明显减弱 ;培养至 35d ,所有细胞的ACP活性减弱 ,并出现ACP阴性反应的空泡状细胞 ;至 4 9d ,大部分细胞的ACP反应为阴性。结论 :随着培养时间延长 ,日本血吸虫培养细胞的AKP、ACP活性均减弱 ,AKP、ACP活性的强弱可以作为评价血吸虫细胞培养条件优劣的指标 ;培养细胞呈分批、逐步退化。

关键词：日本血吸虫培养细胞磷酸酶动态变化