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检测β-CTX和N-MID水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法的建立和评价

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吉林大学学报（医学版） 2021年第3期47卷 770-776页

作者：毛骞陈翠翠梁焕坤刘鹏娥钟树海李来庆北华大学附属医院内分泌科吉林吉林132001 广州优迪生物科技股份有限公司广东广州510663

目的:研制一种检测β胶联降解产物(β-CTX)和骨钙素N端中分子片段(N-MID)水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法(TRFIA)并评价其检测性能。方法:将抗β-CTX和N-MID的4E5和2B7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体包被在96孔培养板,采用铕离子(Eu... 详细信息

目的:研制一种检测β胶联降解产物(β-CTX)和骨钙素N端中分子片段(N-MID)水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法(TRFIA)并评价其检测性能。方法:将抗β-CTX和N-MID的4E5和2B7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体包被在96孔培养板,采用铕离子(Eu^(3+))和钐离子(Sm^(3+))分别标记2G6和5A3 MAb作为检测抗体,建立双抗体夹心TRFIA分析法并制备成试剂盒。通过试剂盒的灵敏度、准确度(稀释回收率)、特异性、精密度、稳定性和临床样本比对等实验评价其检测性能。结果:制备的双标记TRFIA试剂盒对β-CTX的检测灵敏度为0.025μg·L^(-1),线性范围为0.025~5.000μg·L^(-1),对N-MID的检测灵敏度为0.5μg·L^(-1),线性范围为0.5~200.0μg·L^(-1)。β-CTX平均稀释回收率为102.13%,N-MID平均稀释回收率为103.02%,与其他常见骨检测指标无明显交叉反应,特异性较强。β-CTX批内变异系数(CV)为5.81%~7.82%,批间CV为5.97%~8.02%;N-MID批内CV为6.05%~8.32%,批间CV为6.14%~8.56%;TRFIA试剂盒可在4℃稳定保存6个月,37℃稳定保存7 d。结论:建立的双标记TRFIA方法具有高灵敏度、高特异度、高准确率和方便快捷等优点,适用于大批量临床样品的检测。

关键词： β胶联降解产物 N端中分子片段骨质疏松症双抗体夹心双标记时间分辨免疫荧光分析

非洲猪瘟病毒抗体时间分辨免疫荧光方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2022年第3期44卷 284-288,319页

作者：陈翠翠钟树海赖宏锐梁焕坤郭桂玲李来庆广州优迪生物科技股份有限公司广东广州510663

为建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体的时间分辨荧光免疫法(TRFIA),本研究将原核表达的ASFV重组P54蛋白(rP54)包被酶联板,并将Eu^(3+)标记rP54蛋白,经各反应条件的优化建立了双抗原夹心TRFIA。并确定该方法的cut-off值,绘制其标准曲线。... 详细信息

为建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体的时间分辨荧光免疫法(TRFIA),本研究将原核表达的ASFV重组P54蛋白(rP54)包被酶联板,并将Eu^(3+)标记rP54蛋白,经各反应条件的优化建立了双抗原夹心TRFIA。并确定该方法的cut-off值,绘制其标准曲线。结果显示,rP54最佳包被浓度为4μg/mL,100μL/孔;用150μL Eu^(3+)标记试剂标记1 mg抗原;反应体系为30μL标准品(即不同浓度的ASFV P54蛋白MAb)或待测样品+200μL/孔Eu^(3+)标记抗原+200μL/孔增强液。利用该方法检测100份健康猪血清样品得出该方法的cut off值为2.52 ng/mL。建立的标准曲线结果显示,ASFV P54抗体的线性范围为0.1 ng/mL~1000 ng/mL,R^(2)=0.9930,表明该检测方法具有良好的剂量-反应效应。通过特异性、敏感性、重复性、稳定性试验评估了该方法的检测性能。将23份疑似ASF患病猪和20份健康猪口鼻咽拭子/血清样品同时采用本TRFIA、PCR法及ELISA方法检测,分别计算配对卡方检验(McNemar test)P值和一致性检验(Kappa test)的Kappa值,分析它们之间的一致性。采用该方法检测P54 MAb标准品与其他常见猪病毒阳性血清,结果显示除了P54 MAb标准品检测为阳性结果外,其余均为阴性结果,无明显交叉反应,特异性较强;通过标准曲线方程得出该方法对ASFV P54抗体的检测下限为0.067 ng/mL,敏感性较高;重复性试验结果显示,该方法批内变异系数小于10%,回收率在95.80%~105.62%;批间变异系数小于15%,回收率在92.50%~108.97%。组装的TRFIA试剂盒在37℃可以稳定保存7 d。对23份疑似ASF患病猪和20份健康猪口鼻咽拭子/血清样品检测,结果显示,TRFIA和PCR法同时检测出4份ASFV阳性样品,其余均为阴性样品,该方法与常规PCR法检测结果的McNemar test P值为1.00,Kappa值为1.00,提示TRFIA法与PCR法检测结果的一致性较高(符合率100%),准确性高于ELISA法。本研究首次建立了基于ASFV P54抗体的双抗原夹心TRFIA,且其具有定量、准确、特异性强、敏感性高等优点,为ASF的快速、精准检测提供新的技术手段。

关键词：非洲猪瘟病毒抗体检测双抗原夹心时间分辨荧光免疫法

犬冠状病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用

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中国动物传染病学报 2023年第1期31卷 92-97页

作者：陈翠翠梁焕坤高浩维赖宏锐钟树海黎杰星李来庆广州优迪生物科技股份有限公司广州510663

探索建立犬冠状病毒(CCV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,并对试剂盒的性能进行初步的评价。本研究将抗CCV的单克隆抗体(MAb)8D6作为包被抗体,用Eu^(3+)标记的7E10 mAb作为检测抗体,制备双抗体夹心法TRFIA试剂盒,并对... 详细信息

探索建立犬冠状病毒(CCV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,并对试剂盒的性能进行初步的评价。本研究将抗CCV的单克隆抗体(MAb)8D6作为包被抗体,用Eu^(3+)标记的7E10 mAb作为检测抗体,制备双抗体夹心法TRFIA试剂盒,并对试剂盒的准确度、特异性、重复性、稳定性、临床样本检测等性能进行评估。本研究制备的CCV时间分辨免疫荧光试剂盒灵敏度为0.68 ng/mL;各浓度CCV标准品在不同水平的稀释度回收率在94.6%~105.6%;同步检测CPV、CD、CPIV、CAV-1标准品均为阴性,特异性好;批内CV为1.91%~5.03%,批间CV为1.82%~6.03%,重复性好;试剂盒在4℃保存6个月,37℃保存7 d后,试剂盒各项性能均无明显变化;临床样本检测结果与RT-PCR方法结果一致。本研究制备的CCV TRFIA试剂盒具有灵敏度、准确度高,重复性、稳定性良好的优点,能够对CCV的临床样本进行大量的筛查,为CCV患病犬的早期确诊提供了一种全新的技术手段。

关键词：犬冠状病毒双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析

化学发光免疫分析法快速检测血清登革热病毒NS1抗原方法的建立及初步应用评价

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现代检验医学杂志 2023年第3期38卷 176-179,194页

作者：陈翠翠梁焕坤钟树海陆嫣红李来庆广州优迪生物科技股份有限公司广州510663 济南市来德生物科技有限公司济南271100

目的建立一种化学发光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay,CLIA)用于血清中登革热病毒(dengue virus,DENV)NS1抗原的定量检测。方法先制备NS1单抗与吖啶酯发光剂的偶联物,同时活化磁珠并标记抗NS1的配对单抗,基于双抗体夹心检测... 详细信息

目的建立一种化学发光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay,CLIA)用于血清中登革热病毒(dengue virus,DENV)NS1抗原的定量检测。方法先制备NS1单抗与吖啶酯发光剂的偶联物,同时活化磁珠并标记抗NS1的配对单抗,基于双抗体夹心检测方法的技术原理构建定量检测血清中NS1抗原浓度的化学发光检测方法。通过对其灵敏度、特异度和参考区间等试验评估其检测性能。取85例临床确诊的登革热阳性血清样本和20份健康志愿者阴性血清样本,采用美国Cortez公司的登革热NS1快速检测试剂盒和该方法进行临床样本验证。结果该方法对血清中NS1抗原的检测灵敏度为1.12ng/ml,线性范围在0.1~1000ng/ml;与血清中常见干扰物质的交叉反应率均低于2%,检测特异度较好;参考区间的cut off值为3.66ng/ml;对临床样本的检测准确度较高,与Cortez公司NS1检测试剂盒比较无显著性差异(χ^(2)检验P=1.000,一致性检验,Kappa=0.876)。结论建立了一种可定量检测血清中登革热病毒NS1抗原的CLIA法,该方法具有高灵敏度、高准确度、操作简单和方便快捷等优点,有望为登革热临床样品的早期准确筛查提供一种新的选择。

关键词：登革热病毒 NS1抗原化学发光免疫分析法吖啶酯磁珠

犬细小病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2021年第2期43卷 165-170页

作者：陈翠翠梁焕坤赖宏锐钟树海黎杰星李来庆广州优迪生物科技股份有限公司广东广州510663

为建立犬细小病毒(CPV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,本实验采用抗CPV单克隆抗体(MAb)7D5作为包被抗体,Eu3+标记的MAb 2F7作为检测抗体,对各反应条件优化后制备双抗体夹心TRFIA试剂盒。并评价了其灵敏度、准确度、特... 详细信息

为建立犬细小病毒(CPV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,本实验采用抗CPV单克隆抗体(MAb)7D5作为包被抗体,Eu3+标记的MAb 2F7作为检测抗体,对各反应条件优化后制备双抗体夹心TRFIA试剂盒。并评价了其灵敏度、准确度、特异性、重复性和稳定性。利用该试剂盒与RT-PCR方法同时检测了疑似患病犬的临床粪便、呕吐物、血液样品(各60份)和CPV阴性犬这3种临床样品各10份,比较并计算二者的符合率。优化结果显示,最佳的TRFIA反应条件为:MAb 7D5的包被浓度为15μg/mL;Eu^(3+)标记试剂与标记MAb 2F7(2.5 mg/mL)最佳体积分别为70μL和30μL;反应体系为25μL CPV标准品或待测样品+200μL分析缓冲液+200μL Eu^(3+)-检测抗体+200μL增强液。灵敏度试验显示TRFIA方法对CPV灭活病毒检测灵敏度为0.83 ng/mL。准确度试验结果显示,不同浓度CPV标准品稀释(1:2、1:4、1:8)后的稀释回收率在89.25%~100.8%;特异性试验结果显示,该方法除对不同亚型CPV的检测结果均为阳性外,对犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒I型、犬冠状病毒、猫细小病毒、水貂肠炎病毒等检测均为阴性,无明显交叉反应;对高、中、低3种不同浓度CPV的重复性试验结果显示,批内变异系数为2.34%~4.76%,批间变异系数为2.38%~5.10%;稳定性试验结果显示,该试剂盒至少可在4℃稳定保存6个月,37℃保存7 d;临床样品的检测结果显示,利用该方法从大部分疑似患病犬的粪便、血液以及呕吐物中均检测到了CPV,而CPV阴性犬这3类样品的检测结果均为阴性。本研究建立的TRFIA法和RT-PCR法检测结果一致,符合率达到100%。上述结果表明,本研究制备的CPV TRFIA试剂盒灵敏度准确度高、特异性强、重复性、稳定性好,且可检测的临床样品种类多,为临床样品的检测提供有效技术手段。

关键词：犬细小病毒双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析

犬瘟热病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2020年第3期42卷 258-262页

作者：陈翠翠赖宏锐梁焕坤钟树海黎杰星李来庆广州优迪生物科技股份有限公司广东广州510663

为建立犬瘟热病毒(CDV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法,本研究将抗CDV的3H7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体,Eu3+标记2G4 MAb作为检测抗体,建立了检测CDV抗原的双抗体夹心TRFIA分析法,并初步制备成试剂盒。通过灵敏度、准确度(稀释回收... 详细信息

为建立犬瘟热病毒(CDV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法,本研究将抗CDV的3H7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体,Eu3+标记2G4 MAb作为检测抗体,建立了检测CDV抗原的双抗体夹心TRFIA分析法,并初步制备成试剂盒。通过灵敏度、准确度(稀释回收率)、特异性、精密度、稳定性、临床样本检测等实验评价其检测性能。结果显示,该双抗体夹心TRFIA分析法对CDV的检测灵敏度为0.58 ng/mL,线性范围在2.5 ng/mL^640 ng/mL,与荧光值有较强的剂量-反应关系;平均稀释回收率为100.48%,与其它常见病毒无明显交叉反应,特异性较强;批内CV值为5.60%~7.58%,批间CV值为5.67%~7.64%;TRFIA试剂盒可在4℃稳定保存半年,37℃稳定保存7 d。与RT-PCR法同时检测65份疑似CDV样本和15份健康样本,2种检测方法的符合率为100%。本研究建立的CDV TRFIA方法具有灵敏度高、特异性强、准确率好、方便快捷等优点,为大批量CDV临床样品的检测提供了可行技术手段。

关键词：犬瘟热病毒双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析

甲状腺素运载蛋白时间分辨免疫荧光试剂盒的制备和效能评价

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中国临床新医学 2020年第1期13卷 32-37页

作者：陈翠翠梁焕坤黎杰星钟树海李来庆张立成广州优迪生物科技股份有限公司广东510663 威海市立医院南院区山东264200

目的制备甲状腺素运载蛋白(transthyretin,TTR)的时间分辨免疫荧光(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)试剂盒并对其性能进行评价。方法将抗TTR的4H2单克隆抗体作为包被抗体包被至96孔板,用Eu^3+标记3E4单克隆抗体作为检测抗体,制... 详细信息

目的制备甲状腺素运载蛋白(transthyretin,TTR)的时间分辨免疫荧光(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)试剂盒并对其性能进行评价。方法将抗TTR的4H2单克隆抗体作为包被抗体包被至96孔板,用Eu^3+标记3E4单克隆抗体作为检测抗体,制备双抗体夹心TRFIA试剂盒,应用该试剂盒对42例川崎病(Kawasaki disease,KD)患儿及13名健康儿童的血清进行检测,以稀释回收率、准确度、精密度、稳定性等指标对试剂盒的效能进行评价。结果该研究制备的TTR TRFIA试剂盒与Western blot法同时检测42份KD临床样本和13份健康样本,两方法的结果符合率为100%,特异性强。试剂盒的最低检出浓度为0.05μg/ml,稀释回收率为88.00%~111.00%,分析内精密度为8.01%~9.17%,分析间精密度为8.88%~11.82%。稳定性实验表明该试剂盒可在4℃稳定保存6个月,37℃稳定保存7 d。结论该研究制备的TTR TRFIA试剂盒具有准确性高、方便快捷等优点,适用于大批量临床KD血清样品的TTR检测,为快速区分丙种球蛋白敏感型和无反应型的KD患儿提供了方法。

关键词：甲状腺素运载蛋白川崎病时间分辨免疫荧光分析

A-FPN算法及其在遥感图像船舶检测中的应用

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遥感学报 2020年第2期24卷 107-115页

作者：于野艾华贺小军于树海钟兴朱瑞飞中国科学院长春光学精密机械与物理研究所长春130033 中国科学院大学北京100049 长光卫星技术有限公司长春130102 长光卫星技术有限公司吉林省卫星遥感应用技术重点实验室长春130039

光学遥感图像船舶检测主要面临两个挑战:光学遥感图像背景复杂,船舶检测易受海浪、云雾及陆地建筑等多方面干扰;遥感图像分辨率低,船舶目标小,对于其分类与定位带来很大困难;针对上述问题,在FPN的基础上,提出一种融入显著性特征的卷积... 详细信息

光学遥感图像船舶检测主要面临两个挑战:光学遥感图像背景复杂,船舶检测易受海浪、云雾及陆地建筑等多方面干扰;遥感图像分辨率低,船舶目标小,对于其分类与定位带来很大困难;针对上述问题,在FPN的基础上,提出一种融入显著性特征的卷积神经网络模型A-FPN (Attention-Based Feature Pyramid Networks)。首先,利用卷积提取图像特征金字塔;然后,利用顶层金字塔逐级构建显著特征层,抑制背景信息,通过金字塔顶层的细粒度特征提高浅层特征的表达能力,构建自上而下的多级显著特征映射结构;最后利用Softmax分类器进行多层级船舶检测。A-FPN模型利用显著性机制引导不同感受下的特征进行融合,提高了模型的分辨能力,对遥感图像处理领域具有重要应用价值。实验阶段,利用公开的遥感目标检测数据集NWPU VHR-10中的船舶样本进行测试,准确率为92.8%,表明A-FPN模型适用于遥感图像船舶检测。

关键词：光学遥感船舶检测吉林一号卫星神经网络显著性特征

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具有窃电取证功能的防窃电表箱研究与应用

供用电 2016年第12期33卷 43-46页

作者：关长祥马虹钟树海张斌赵建军丛峰国网吉林省电力有限公司吉林长春130000 国网长春供电公司吉林长春130000

近年来,窃电行为从普通型向智能型、高科技手段发展。在供电服务过程中,对窃电行为取证工作异常艰难。针对上述问题,研发了一种具有窃电取证功能的防窃电表箱。表箱采用实时监测技术、摄像技术和无线通信技术,既能对窃电过程进行视频录... 详细信息

近年来,窃电行为从普通型向智能型、高科技手段发展。在供电服务过程中,对窃电行为取证工作异常艰难。针对上述问题,研发了一种具有窃电取证功能的防窃电表箱。表箱采用实时监测技术、摄像技术和无线通信技术,既能对窃电过程进行视频录制,又能监测高频、强磁信号干扰,保证计量装置正常工作,便于对违法侵权行为提供证据。

关键词：防窃电取证难合法取证