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HCV核心蛋白与HBV X蛋白协同反式激活作用的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2003年第1期17卷 70-72页

作者：刘妍成军邵得志王琳钟彦伟董菁李克李莉解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的　探讨HCV核心蛋白与HBVX蛋白的协同反式激活作用。方法　构建表达HCV核心蛋白的重组质粒pcDNA3 .1( )core和表达HBVX蛋白的重组质粒pcDNA3 .1( )X ;转染HepG2 细胞 ,从转录和翻译水平鉴定病毒基因的瞬时表达 ;与报告质粒pSV lacZ... 详细信息

目的　探讨HCV核心蛋白与HBVX蛋白的协同反式激活作用。方法　构建表达HCV核心蛋白的重组质粒pcDNA3 .1( )core和表达HBVX蛋白的重组质粒pcDNA3 .1( )X ;转染HepG2 细胞 ,从转录和翻译水平鉴定病毒基因的瞬时表达 ;与报告质粒pSV lacZ共转染HepG2 细胞 ,检测 β 半乳糖苷酶表达活性 ,酶的活性反映了表达的肝炎病毒蛋白对SV40病毒早期启动子增强子功能的影响。结果　构建成HCV核心蛋白及HBVX蛋白的重组表达载体pcDNA3 .1( )core、pcDNA3 .1( )X ;在HepG2 细胞均能瞬时表达相应的肝炎病毒蛋白 ;单独共转染试验中pcDNA3 .1( )core、pcDNA3 .1( )X组的 β 半乳糖苷酶的表达分别是对照的 4.9、3 .5倍 ,两种质粒共同转染时酶的表达是对照的 9倍 ;表达质粒对 β 半乳糖苷酶表达的激活作用呈剂量依赖性。结论　HepG2 细胞中表达的HCV核心蛋白和HBVX蛋白均具有反式激活SV40早期启动子增强子的功能 ,并且两种蛋白的反式激活功能具有协同特性。本试验有助于解释HCV、HBV感染 ,尤其是共同感染的致病

关键词：丙型肝炎病毒病毒核心蛋白类乙型肝炎病毒反式激活启动区

丙型肝炎病毒非结构区NS3基因在大肠埃希菌中的可诱导性表达

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中华实验和临床病毒学杂志 2002年第1期16卷 85-87页

作者：成军钟彦伟刘妍董菁杨继珍杨守纯解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

目的　构建丙型肝炎病毒 (HCV)NS3基因的原核细胞表达载体 ,实现在大肠埃希菌中的可诱导性表达。方法　应用聚合酶链反应 (PCR)技术 ,以美国HCV H株全长cDNA质粒为模板 ,扩增获得NS3基因片段 ,克隆到原核表达载体pET 30C(+)中 ,构建原... 详细信息

目的　构建丙型肝炎病毒 (HCV)NS3基因的原核细胞表达载体 ,实现在大肠埃希菌中的可诱导性表达。方法　应用聚合酶链反应 (PCR)技术 ,以美国HCV H株全长cDNA质粒为模板 ,扩增获得NS3基因片段 ,克隆到原核表达载体pET 30C(+)中 ,构建原核表达载体pET NS3,转化BL2 1(DE3)宿主菌 ,以IPTG诱导 ,获得NS3蛋白的可诱导性表达 ,以HCVNS3的单链可变区抗体 (ScFv)证实表达的NS3蛋白的特异性。结果　以HCVNS3基因序列特异性引物 ,PCR扩增获得 1893bp的NS3DNA片段 ,插入pET 30C(+)表达载体。转化BL 2 1(DE3)受体菌 ,经培养、IPTG诱导 ,获得了重组HCVNS3蛋白的表达 ,以HCVNS3的ScFv证实了表达的重组蛋白HCVNS3的特异性。

关键词：丙型肝炎病毒 NS3 基因表达聚合酶链反应大肠埃希菌

专利药品可及性的现实困境和制度优化——兼评药品专利池组织的运营

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中国新药杂志 2024年第9期33卷 864-867页

作者：皇甫洁琼钟彦国家知识产权局专利局专利审查协作广东中心广州510535 国家知识产权局北京100088

为了解决中低收入国家的药物可及性问题,国际药品采购机构创建了药品专利池组织(Medicines Patent Pool, MPP),但一直未将中国纳入许可销售的范围内。本文对MPP的运营机制、MPP对我国的影响开展了研究,探讨我国可与MPP合作的前景和具体... 详细信息

为了解决中低收入国家的药物可及性问题,国际药品采购机构创建了药品专利池组织(Medicines Patent Pool, MPP),但一直未将中国纳入许可销售的范围内。本文对MPP的运营机制、MPP对我国的影响开展了研究,探讨我国可与MPP合作的前景和具体方式,将有助于为国内制药企业提供更多国际竞争和国际合作的可能,扩展我国药物在中低收入国家的市场占有率和使用率,为我国开拓提高国际影响力的途径提供借鉴。

关键词：药品专利池药物专利可及性

筛选肝细胞p53启动子结合蛋白的噬菌体表面展示技术

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环境与健康杂志 2011年第7期28卷 588-591页

作者：吴顺华钟彦伟成军郑玉建新疆医科大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学教研室新疆乌鲁木齐830011 解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心北京地坛医院传染病研究所

目的筛选p53启动子结合蛋白,探讨p53对肝细胞调节的分子生物学机制。方法应用噬菌体表面展示技术,以p53作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DN... 详细信息

目的筛选p53启动子结合蛋白,探讨p53对肝细胞调节的分子生物学机制。方法应用噬菌体表面展示技术,以p53作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA测序和生物信息学分析。结果噬菌体经5轮富集后,成功构建了噬菌体p53展示文库,该文库包含与p53结合的肝细胞蛋白有17种。其中2个克隆编码未知功能蛋白;其余的克隆分别编码人α2HS糖蛋白(AHSG)、人D4、锌指蛋白家族2(DPF2)、凋亡反应锌指基因(REQ)、Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制因子结合蛋白、氨基甲酰磷酸合成酶1、磷酸化酶激酶、酪氨酸氨基转移酶、酪蛋白激酶细胞周期素激酶、谷胱甘肽过氧化物酶、组蛋白结合蛋白3、跨膜蛋白2、血清黏蛋白2、有核红细胞白血病病毒癌基因2、毛细管扩张失调症突变基因,涉及到细胞发育和代谢、细胞外基质、细胞周期调控、信号转导、细胞凋亡以及原癌基因。结论噬菌体表面展示技术成功筛选出了肝细胞p53启动子结合的多种类型和功能蛋白。

关键词：噬菌体表面展示技术 p53 肝细胞

抗HBsAg单链抗体靶向干扰素的构建及原核表达

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中华肝脏病杂志 2002年第1期10卷 28-30页

作者：夏小兵成军杨继珍钟彦伟王刚方宏清刘妍李克董菁中国人民解放军第三O二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039 中国人民解放军第三O二医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039 军事医学科学院生物工程研究所

目的构建抗ＨＢｓＡｇ人源单链抗体与人干扰素α的融合分子－抗ＨＢｓＡｇ单链抗体靶向干扰素，并在大肠杆菌中表达出活性融合蛋白。方法利用限制性内切酶分别从含有抗ＨＢｓＡｇ人源单链抗体与人干扰素α的质粒中切出目的基因，连接... 详细信息

目的构建抗ＨＢｓＡｇ人源单链抗体与人干扰素α的融合分子－抗ＨＢｓＡｇ单链抗体靶向干扰素，并在大肠杆菌中表达出活性融合蛋白。方法利用限制性内切酶分别从含有抗ＨＢｓＡｇ人源单链抗体与人干扰素α的质粒中切出目的基因，连接到ｐＥＴ２２ｂ质粒中，构建成单链抗体靶向干扰素表达载体。利用ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳、竞争性抑制实验与抗病毒实验对表达产物进行分析鉴定。结果构建出含有抗体靶向干扰素融合基因的表达质粒，诱导１２ｈ后，在ＳＤＳ—ＰＡＧＥ上可以观察到相对分子质量约４５×１０４的目的蛋白，竞争性抑制实验与抗病毒实验表明表达的融合蛋白保留了单链抗体的ＨＢｓＡｇ特异结合活性与干扰素的抗病毒活性。结论抗ＨＢｓＡｇ单链靶抗体靶向干扰素融合分子的构建及在大肠杆菌中的表达是成功的。

关键词：融合蛋白靶向干扰素α 单链抗体构建抗HBsAg单链抗体原核肿瘤基因治疗

血清HBV RNA预测慢性乙型肝炎患儿HBeAg血清学转换作用研究

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中华肝脏病杂志 2023年第11期31卷 1182-1186页

作者：徐娇娇史策洪雪琦储芳白青魁王晶史艳敏郭子鑫张芯蕊王福川张敏常晓彤张秀昌钟彦伟河北北方学院张家口075000 解放军总医院第五医学中心北京100039 河南中医药大学第一附属医院郑州450000

目的探讨血清乙型肝炎病毒RNA(HBV RNA)预测慢性乙型肝炎患者HBeAg血清学转换的作用。方法175例1~17岁慢性乙型肝炎患者接受干扰素α(IFNα)治疗48周。根据治疗48周时是否发生HBeAg血清学转换将患者分为HBeAg血清学转换组和未转换组。... 详细信息

目的探讨血清乙型肝炎病毒RNA(HBV RNA)预测慢性乙型肝炎患者HBeAg血清学转换的作用。方法175例1~17岁慢性乙型肝炎患者接受干扰素α(IFNα)治疗48周。根据治疗48周时是否发生HBeAg血清学转换将患者分为HBeAg血清学转换组和未转换组。组间比较分别采用t检验和Mann-Whitney U检验;分类变量组间频数比较采用χ^(2)检验或Fisher确切概率法;采用Pearson相关进行指标间相关性分析;单因素和多因素logistics回归分析判断HBeAg血清学转换的独立预测因素;受试者操作特征曲线比较HBV RNA、HBV DNA及HBsAg对HBeAg血清学转换的预测价值。结果48周时HBeAg血清学转换率为36.0%(63/175)。HBeAg血清学转换组HBV RNA水平从基线到抗病毒治疗第12、24、36、48周的下降幅度均明显大于未转换组,两组比较,差异有统计学意义(P1.385 log10拷贝/ml,对HBeAg血清转换的阳性预测值为53.2%,阴性预测值为72.2%,敏感度为77.4%,特异度为57.9%。结论抗病毒治疗第12周时HBV RNA水平下降可作为慢性乙型肝炎患者HBeAg血清学转换的早期预测指标。

关键词：儿童慢性乙型肝炎 HBeAg血清转换 HBV RNA

早期血清前S1抗原(PreS1)对干扰素α治疗的HBeAg阳性慢性乙型肝炎儿童HBsAg阴转的预测价值

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临床肝胆病杂志 2023年第8期39卷 1825-1831页

作者：樊佩瑶王福川高银杰徐志强董漪闫建国曹丽丽冯丹妮钟彦伟张敏北京大学三〇二临床医学院北京100191 解放军总医院第五医学中心肝病学部北京100039

目的探讨血清前S1抗原(PreS1)水平作为预测干扰素α(IFN-α)治疗48周的HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)儿童HBsAg转阴指标的价值。方法纳入2016年6月—2020年1月接受IFN-α治疗48周的88例1~16岁HBeAg阳性CHB患儿,每3个月评估患儿的HBsAg定量... 详细信息

目的探讨血清前S1抗原(PreS1)水平作为预测干扰素α(IFN-α)治疗48周的HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)儿童HBsAg转阴指标的价值。方法纳入2016年6月—2020年1月接受IFN-α治疗48周的88例1~16岁HBeAg阳性CHB患儿,每3个月评估患儿的HBsAg定量(qHBsAg)、HBV DNA定量、ALT等,并采用磁微粒化学发光免疫分析法(双抗体夹心法)检测PreS1水平。根据IFN-α治疗48周终点时HBsAg是否转阴分为转阴组(n=17)和未转阴组(n=71)。计量资料的两组间比较采用Mann-Whitney U检验,计数资料的两组间比较采用χ^(2)检验或Fisher精确检验。用Spearman秩相关检验评估PreS1水平和其他生物标志物之间的关系。用受试者工作特征曲线下面积(AUC)评估不同标志物对IFN-α治疗48周终点HBsAg转阴的预测价值。结果PreS1水平与血清qHBsAg、HBV DNA水平呈正相关(r值分别为0.912、0.535,P值均<0.05)。基线时,PreS1/qHBsAg比值(AUC=0.694)较PreS1水平(AUC=0.530)和qHBsAg水平(AUC=0.514)具有较好的48周HBsAg转阴预测价值。治疗12周的PreS1水平(AUC=0.867,P<0.001)和PreS1/qHBsAg比值下降量(AUC=0.800,P=0.002)均对48周终点时HBsAg转阴有很好的预测作用。治疗24周的PreS1水平、qHBsAg水平和HBV DNA均可有效预测第48周的HBsAg转阴,AUC分别为0.917、0.949和0.762(P值均<0.001)。结论治疗12周时血清PreS1水平和PreS1/qHBsAg比值下降量是预测IFN-α治疗期间CHB患儿HBsAg转阴的候选标志物。

关键词： PreS1 生物标记乙型肝炎,慢性儿童干扰素α

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Aβ单链抗体基因腺相关病毒的包装和纯化

基础医学与临床 2009年第10期29卷 1035-1038页

作者：蔡炯钟彦伟李方王世真中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院核医学科北京100073 解放军302医院基因治疗中心北京100039

目的包装和纯化携带Aβ单链抗体基因的腺相关病毒,为阿尔茨海默病的基因治疗创造条件。方法用Li-pofectamine2000将pSNAV2.0-Abeta-scFv质粒转染BHK-21细胞,并用G418筛选稳定细胞系。培养稳定细胞系,用辅助病毒HSV1-rc/ΔUL2感染包装携... 详细信息

目的包装和纯化携带Aβ单链抗体基因的腺相关病毒,为阿尔茨海默病的基因治疗创造条件。方法用Li-pofectamine2000将pSNAV2.0-Abeta-scFv质粒转染BHK-21细胞,并用G418筛选稳定细胞系。培养稳定细胞系,用辅助病毒HSV1-rc/ΔUL2感染包装携带Aβ单链抗体基因的腺相关病毒。用氯仿-PEG/NaCl-氯仿法和离子交换层析法纯化重组腺相关病毒,SDS-PAGE和PCR方法检测纯化的病毒。用地高辛标记探针测定重组腺相关病毒的物理滴度。利用水迷宫测试重组病毒对转基因阿尔茨海默病小鼠模型的治疗效果。结果带Aβ单链抗体基因的腺相关病毒的纯度为98%,物理滴度为1×1012vg/mL。经过治疗的小鼠模型潜伏期明显缩短。结论利用HSV1系统成功包装和纯化了携带Aβ单链抗体基因的腺相关病毒,动物实验表明对阿尔茨海默病具有治疗作用。

关键词：阿尔茨海默病腺相关病毒 Aβ单链抗体

丙型肝炎病毒包膜蛋白E2人源单链可变区抗体的筛选与鉴定

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解放军医学杂志 2003年第1期28卷 53-54页

作者：钟彦伟成军施双双王刚陈菊梅解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心北京100039

采用噬菌体表面展示技术 ,以重组的HCV结构蛋白E2为固相包被抗原 ,从半合成的噬菌体单链可变区抗体库中经过 3轮“吸附洗脱扩增”筛选过程 ,获得抗原特异性和结合活性较强的HCVE2人源单链可变区抗体 (ScFv)片段 ,片段为 771bp,阳性克... 详细信息

采用噬菌体表面展示技术 ,以重组的HCV结构蛋白E2为固相包被抗原 ,从半合成的噬菌体单链可变区抗体库中经过 3轮“吸附洗脱扩增”筛选过程 ,获得抗原特异性和结合活性较强的HCVE2人源单链可变区抗体 (ScFv)片段 ,片段为 771bp,阳性克隆 ,对其进行免疫学检测 ,并对HCVE2特异性ScFv的编码基因序列进行测定分析。结果筛选得到的HCVE2ScFv片段 (771bp)

关键词：丙型肝炎病毒包膜蛋白E2 人源单链可变区抗体筛选鉴定