检索结果-南通市图书馆

牛病毒性腹泻病毒感染牛外周血单核细胞对CD80和CD86 mRNA转录的影响

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中国兽医学报 2012年第3期32卷 378-382页

作者：韩猛立黄新钟发刚新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室新疆石河子832000

用非致细胞病变(noncytopathic,NCP)和致细胞病变(cytopathic,CP)型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染临床健康BVDV检测阴性的荷斯坦奶牛外周血单核细胞(PBMC),利用实时荧光定量PCR技术对感染后共刺激分子CD80和CD86mRNA转录水平的变化进行定... 详细信息

用非致细胞病变(noncytopathic,NCP)和致细胞病变(cytopathic,CP)型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染临床健康BVDV检测阴性的荷斯坦奶牛外周血单核细胞(PBMC),利用实时荧光定量PCR技术对感染后共刺激分子CD80和CD86mRNA转录水平的变化进行定量分析。结果表明,在NCP型BVDV感染牛PBMC后CD80在4h(P<0.05)和12,24h(P<0.01)出现2次转录高峰,CD86在6h(P<0.05)出现转录高峰;CP型BVDV感染后,CD80在24h(P<0.05)出现转录高峰,CD86在6h(P<0.05)出现转录高峰。尽管CD80在NCP型BVDV感染后呈现较复杂的动态变化,但结果提示NCP型和CP型BVDV感染均可导致牛PBMC的共刺激分子CD80和CD86基因转录在感染早期明显受到抑制,PBMC的抗原呈递能力受到影响。

关键词：牛病毒性腹泻病毒外周血单核细胞 CD80 CD86 实时荧光定量PCR

流产布鲁氏杆菌RB51疫苗对性成熟公牛和怀孕青年母牛的生物安全性试验

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中国奶牛 2001年第3期 22-24页

作者：钟发刚王新华新疆农垦科学院牧医所石河子市832000

选用 6头 3岁娟姗公牛和 7头怀孕中期杂种青年母牛，采用标准幼牛剂量的流产布鲁氏杆菌 RB51(RSB51)疫苗免疫后，检测菌落和菌群的情况。结果表明：试验牛中无一头分离出流产布鲁氏杆菌 (SRB51)疫苗菌体，公牛的配种可靠性正常，母牛的... 详细信息

选用 6头 3岁娟姗公牛和 7头怀孕中期杂种青年母牛，采用标准幼牛剂量的流产布鲁氏杆菌 RB51(RSB51)疫苗免疫后，检测菌落和菌群的情况。结果表明：试验牛中无一头分离出流产布鲁氏杆菌 (SRB51)疫苗菌体，公牛的配种可靠性正常，母牛的怀孕状态正常。宰杀剖检后，从公牛、母牛包括胎儿的任何组织中均分离不到 (SRB51)疫苗菌种，但血清学分析可检测到 SRB51特异性抗体。 (Am J Vet Res 1999;60:722－ 725)

关键词：性成熟公牛怀孕青年母牛流产布鱼氏杆菌RB51疫苗生物安全性

牛共刺激分子CD80和CD86实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2010年第9期40卷 953-958页

作者：韩猛立何延华黄新宋天增薄新文钟发刚新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室新疆石河子832000 石河子大学动物科技学院新疆石河子832003

根据GenBank中牛CD80和CD86基因的序列,在保守区设计并合成各自的特异引物,并以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR GreenⅠ染料以建立一种检测牛共刺激分子CD80和CD86的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。将CD80基因和CD86... 详细信息

根据GenBank中牛CD80和CD86基因的序列,在保守区设计并合成各自的特异引物,并以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR GreenⅠ染料以建立一种检测牛共刺激分子CD80和CD86的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。将CD80基因和CD86基因克隆至pMD18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验。结果表明,CD80基因、CD86基因和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×102～1×108 copies/μL范围均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,特异性和重复性较好。证实,所建立的牛共刺激分子CD80和CD86荧光定量RT-PCR检测方法适用于临床样品的检测。

关键词： SYBR GreenⅠ 实时荧光定量聚合酶链反应牛 CD80 CD86

牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的鉴定

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中国兽医科技 2002年第8期32卷 24-25页

作者：沈敏钟发刚王新华温建新新疆农垦科学院畜牧兽医研究所新疆石河子832000

筛选建立了 8株牛病毒性腹泻病毒 (BVDV )单克隆抗体杂交瘤细胞 ,通过对其染色体的分析、单克隆抗体免疫球蛋白类型及病毒中和活性等指标的检测 ,表明 8株单克隆抗体杂交瘤细胞的染色体数目均接近两亲本细胞的染色体数目之和 ;单克隆抗... 详细信息

筛选建立了 8株牛病毒性腹泻病毒 (BVDV )单克隆抗体杂交瘤细胞 ,通过对其染色体的分析、单克隆抗体免疫球蛋白类型及病毒中和活性等指标的检测 ,表明 8株单克隆抗体杂交瘤细胞的染色体数目均接近两亲本细胞的染色体数目之和 ;单克隆抗体免疫球蛋白类型均为IgG ,其中 6株为IgG1,2株为IgG2a ,且对BVDV具有不同程度的中和能力。

关键词：牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株鉴定染色体

牛病毒性腹泻病毒玛纳斯株E2基因的克隆及其主要抗原表位区的分段表达

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中国兽医科学 2009年第4期39卷 321-326页

作者：黄新王新华钟发刚新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室新疆石河子832000

应用RT-PCR方法扩增了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)新疆玛纳斯分离株的E2基因,应用软件对序列进行分析,预测了可能存在的抗原表位;分别扩增了包含预测抗原位点的片段(1～118)-(144～340)-(100～300)-(1～345),并将其克隆到pMD18-T Si mple载... 详细信息

应用RT-PCR方法扩增了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)新疆玛纳斯分离株的E2基因,应用软件对序列进行分析,预测了可能存在的抗原表位;分别扩增了包含预测抗原位点的片段(1～118)-(144～340)-(100～300)-(1～345),并将其克隆到pMD18-T Si mple载体中;将重组质粒pMD-(1～118)、pMD-(144～340)、pMD-(100～300)、pMD-(1～345)的HindⅢ+BamHI双酶切产物分别插入pET28a(+),构建了原核表达载体pET-(1～118)、pET-(144～340)、pET-(100～300)、pET-(1～345)。将这些原核表达载体分别导入BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE分析,结果显示,4个重组质粒在BL21(DE3)中均成功表达,表达融合蛋白的分子质量分别为18.6、28.2、29.2和43.9 ku,与预测蛋白质分子质量一致,Western-blot分析结果表明,28.2、29.2和43.9 ku的融合蛋白可被牛抗BVDV阳性血清识别。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2基因克隆抗原表位表达

猪圆环病毒2型XJ-SW株全基因组的克隆与序列分析

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中国兽医科学 2012年第5期42卷 461-466页

作者：黄新康立超韩猛立何延华钟发刚新疆农垦科学院畜牧兽医研究所新疆石河子832000

应用PCR方法对采集自新疆沙湾地区某猪场的疑似仔猪多系统衰竭综合征病料猪圆环病毒2型(PCV2)全基因组进行了扩增,确定了2份病料中的PCV2的分子特征,命名为XJ-SW1、XJ-SW2(Gen-Bank登录号:JN639856,JN639857)。经对阳性样品进行克隆、测... 详细信息

应用PCR方法对采集自新疆沙湾地区某猪场的疑似仔猪多系统衰竭综合征病料猪圆环病毒2型(PCV2)全基因组进行了扩增,确定了2份病料中的PCV2的分子特征,命名为XJ-SW1、XJ-SW2(Gen-Bank登录号:JN639856,JN639857)。经对阳性样品进行克隆、测定,并应用软件进行全基因组核苷酸序列比对分析。结果显示,2株病毒的基因组全长均为1 768nt;XJ-SW1株与我国山东DE株(GenBank登录号:HM142897)的同源性最高(为97.91%);XJ-SW2株与韩国G2284株(GenBank登录号:JF317587)的同源性最高(为97.51%)。PCV2全基因组序列的进化分析表明,2株病毒为PCV2e基因亚型;对2株病毒与5个不同基因亚型的15株病毒的ORF2氨基酸序列进行比较,结果显示,XJ-SW1、XJ-SW2在ORF2的氨基端与PCV2d同源性较高,在羧基端与PCV2e同源性较高。表明,在新疆沙湾猪场流行的PCV2毒株为PCV2e,该毒株的ORF2存在一定变异。

关键词：猪圆环病毒2型基因组克隆序列分析

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犊牛肺炎的诊断观察

中国兽医杂志 2015年第3期51卷 40-42页

作者：黄新马辉韩猛立何延华钟发刚新疆农垦科学院新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室新疆石河子832000 新疆石河子北泉镇农林牧局新疆石河子832011

牛病毒性腹泻病（Bovine viral diarrhea,BVD）是由牛病毒性腹泻病毒（BVDV）引起的,主要特征为黏膜发炎、糜烂、坏死和腹泻等症状.国内自李佑民等[1] （1984）首次分离到毒株以来,已有十几个省市地区的畜群存在BVDV的感染[2-4].钟发刚... 详细信息

牛病毒性腹泻病（Bovine viral diarrhea,BVD）是由牛病毒性腹泻病毒（BVDV）引起的,主要特征为黏膜发炎、糜烂、坏死和腹泻等症状.国内自李佑民等[1] （1984）首次分离到毒株以来,已有十几个省市地区的畜群存在BVDV的感染[2-4].钟发刚等[5-6]研究结果表明,BVDV感染在新疆大部分地区广泛存在,但大多为BVDVlb亚型和BVDVlc亚型.牛支原体主要引起牛的肺炎、关节炎、乳房炎等[7].该病的存在与流行能够给养牛业带来较大的经济损失[8-10].国内辛九庆等（2008）首次从患肺炎的犊牛肺脏中分离到的,后来已经从多个省市有报道[11-13].

关键词：牛肺炎牛病毒性腹泻病毒诊断 BVDV 经济损失 c亚型支原体关节炎