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猪急性腹泻综合征冠状病毒分离鉴定和四种猪冠状病毒多重荧光定量PCR检测方法建立

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猪急性腹泻综合征冠状病毒分离鉴定和四种猪冠状病毒多重荧光定量...

作者：金雪明湖南农业大学

学位级别：硕士

冠状病毒是一类具有囊膜的正股单链RNA病毒,分为α、β、δ、γ四个属。不同属的冠状病毒均无交叉保护,其能够感染人、猪、其它哺乳类动物、家禽和鸟类,引起肠道或呼吸道疾病。其中,感染猪的冠状病毒种类多,危害范围广,致死率高,严重威... 详细信息

冠状病毒是一类具有囊膜的正股单链RNA病毒,分为α、β、δ、γ四个属。不同属的冠状病毒均无交叉保护,其能够感染人、猪、其它哺乳类动物、家禽和鸟类,引起肠道或呼吸道疾病。其中,感染猪的冠状病毒种类多,危害范围广,致死率高,严重威胁畜牧业的生产安全。在猪冠状病毒中,猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）、猪呼吸系统冠状病毒（Porcine respiratory corona virus,PRCV）、猪急性腹泻综合征冠状病毒（Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV）、猪肠道冠状病毒（Swine enteric coronavirus,Se CoV）属于α冠状病毒,猪血凝性脑脊髓炎病毒（Porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV）属于β冠状病毒,猪德尔塔冠状病毒（Porcine deltacoronavirus,PDCoV）属于δ冠状病毒,在临床上通常大多表现为仔猪的胃肠道症状。由于这几种猪冠状病毒通常在病毒形态上难以区分,单独一种冠状病毒或几种冠状病毒混合感染所导致的临床症状又十分相似,仅凭临床症状和病毒形态学无法对感染动物进行有效的鉴别诊断。因此,准确快速鉴别诊断不同冠状病毒对精准诊断猪病毒性腹泻有重要的临床应用价值。目的:分离鉴定一株SADS-CoV病毒分离株;运用荧光定量PCR检测技术建立一种能在短时间内同时检测多种猪冠状病毒的多重检测方法,该检测方法的建立有助于推动国内实验用猪病原微生物检测体系的标准建设,帮助完善实验用猪微生物学质量控制标准。方法:（1）取发病呈腹泻症状的病猪病料,冻融后取上清,在终浓度为5μg/m L的TPCK处理胰酶的维持液环境下感染Vero细胞,定期观察细胞病变状况。大部分细胞出现明显病变后,冻融收毒,经RT-PCR鉴定为阳性的病毒扩繁液检测病毒滴度,并对分离培养的SADS-CoV毒株进行全基因测序,将最终测序结果与其他毒株进行Blast比对。（2）本研究首先收集整理了Gen Bank中登录的国内外SADS-CoV、PEDV、PDCoV和PHEV流行毒株全基因组序列,运用生物学软件设计多重荧光定量PCR引物和探针。构建用于建立检测反应体系的猪冠状病毒质粒,运用方差分析法验证质粒标准品的均匀性。以质粒标准品为模板,分别进行针对SADS-CoV、PEDV、PDCoV和PHEV的单重荧光定量PCR反应,并检验每个单重反应的扩增效率、特异性、敏感性和重复性。（3）在单重荧光定量PCR检测方法的基础上,尝试建立同时检测四种猪冠状病毒的多重荧光定量PCR检测方法,并检验多重反应体系的扩增效率、特异性、敏感性和重复性。将相同的样品和引物使用PT-PCR方法检测,比较两种检测方法的性能。结果:（1）从临床病猪肠道内容物中分离和鉴定了SADS-CoV病毒,该病毒在Vero细胞上稳定增殖,出现了明显的细胞病变,病毒滴度为:10TCID/0.1m L。对分离培养的SADS-CoV毒株进行了全基因测序,测序结果经比对,结果可见:分离获得的SADS-CoV毒株为流行毒株。其致病性有待下一步建立攻毒模型。（2）分别建立了针对SADS-CoV、PEDV、PDCoV和PHEV的单重荧光定量PCR检测方法,单重体系中建立的标准曲线方程相关系数（R）可达0.99以上,方法具有良好的敏感性、特异性和重复性。（3）在单重荧光定量PCR检测方法的基础上,建立了同时检测四种猪冠状病毒的多重荧光定量PCR检测方法,每种病毒的扩增反应都具有良好的扩增效率,特异性实验结果显示特异性引物和探针仅对目标基因序列出现明显的扩增曲线,敏感性试验中可以检测出10～2copies/μL的病毒质粒,重复性实验中每种病毒的组内和组间变异系数均小于2%,证明建立的多重荧光定量PCR检测反应具有良好的特异性、敏感性和重复性。相比较于普通PCR检测方法,多重荧光定量PCR反应拥有更佳的方法性能。结论:本研究建立了针对SADS-CoV、PEDV、PDCoV和PHEV的单重、多重荧光定量PCR检测方法。这些检测方法能准确地对四种常见的猪冠状病毒进行快速检测,而多重荧光定量PCR体系可以同时检测和区分单一冠状病毒或混合感染情况,具有较强的应用价值,对于该类病原感染的早期疫情诊断和流行病学调查具有重要意义。

关键词：猪流行性腹泻病毒猪急性腹泻综合征冠状病毒猪血凝性脑脊髓炎病毒猪德尔塔冠状病毒多重荧光定量PCR检测

含吡啶有机配体配位聚合物的水热合成及其性能研究

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含吡啶有机配体配位聚合物的水热合成及其性能研究

作者：金雪明苏州大学

学位级别：硕士

水热合成金属配位聚合物是热门的研究课题。本论文采用3,5-二(x-吡啶)-1,2,4-三唑(x-Hpytz,x=2,3,4)为有机配体,通过水热合成方法进行配位聚合物的自组装的研究,得到了如下10个结构新颖的配合物。[Cd(2-pytz)Cl](1)(一维zig-zag),Fe(2-p... 详细信息

水热合成金属配位聚合物是热门的研究课题。本论文采用3,5-二(x-吡啶)-1,2,4-三唑(x-Hpytz,x=2,3,4)为有机配体,通过水热合成方法进行配位聚合物的自组装的研究,得到了如下10个结构新颖的配合物。[Cd(2-pytz)Cl](1)(一维zig-zag),Fe(2-pytz)(SCN)·4HO(2) (二核), [Cd(2-pytz)(SO)](3) (一维梯形), [Zn(3-pytz)(OH)Cl](5) (一维梯形),[Zn(3-Hpytz)(SO)·7.5HO](6) (一维zig-zag),[Cd(3-Hpytz)(SO)](7) (三维孔洞结构),[Ag(4-pytz)](10) (二维T形),[Zn(4-pytz)Cl](11) (三维孔洞结构),[Cd(4-Hpytz)(SCN)·3HO](12)(三维格状结构),[Zn(4-pytz)(SO)(OH)](13)(三维孔洞结构),在配位过程中尝试使用第二配体,同时也改变体系的反应温度、反应时间、反应物的配比、pH值和降温速度来辅助配合物晶体的生长。采用三唑配体以溶液扩散法得到了以下3个晶体,[Cd(2-pytz)(SO)(HO)](4()一维zig-zag),[Cd(3-Hpytz)(SO)·5HO](8) (一维zig-zag),[Ag(3-pytz) (BF4)](9) (二维层状结构),体系中加入了第二配体,虽然没有参与配位,但仍然影响了配合物的分子结构。另外以另一含吡啶基团的4,4’-双吡啶硫醚(dps)为桥连配体,选用过渡金属(Fe、Cd)为中心离子进行配位聚合物的自组装,得到了2个结构新颖的一维线形链的配位聚合物[Fe (dps)(SCN)(HO)](14),[Cd (dps)(SCN)(HO)](15),并对其进行了结构的表征。

关键词：水热合成配位聚合物晶体结构荧光性能

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猪冠状病毒四重荧光定量PCR检测方法建立

中国动物传染病学报 2023年

作者：俞赵荣孙彤金雪明孙竹筠苏苌刘静宜刘英楠陈鸿军中国农业科学院上海兽医研究所农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(北方) 中国农业科学院生物安全研究中心

为鉴别诊断猪重要冠状病毒感染，本研究设计特异性引物和TaqMan探针，建立猪急性腹泻综合征冠状病毒（SADS-CoV）、猪血凝性脑脊髓炎病毒（PHEV）、猪δ-冠状病毒（PDCoV）和猪流行性腹泻病毒（PEDV）四重荧光定量RT-PCR（qRT-PCR）检... 详细信息

为鉴别诊断猪重要冠状病毒感染，本研究设计特异性引物和TaqMan探针，建立猪急性腹泻综合征冠状病毒（SADS-CoV）、猪血凝性脑脊髓炎病毒（PHEV）、猪δ-冠状病毒（PDCoV）和猪流行性腹泻病毒（PEDV）四重荧光定量RT-PCR（qRT-PCR）检测方法，对特异性、敏感性、稳定性进行评价。结果显示：该方法具有良好的扩增特异性，可鉴别上述几种猪冠状病毒，对SADS-CoV、PDCoV、PHEV最低检测限均为10个拷贝数/μL，对PEDV病毒最低检测限为100个拷贝数/μL，敏感性比常规PCR高100倍。该方法为对鉴别诊断猪冠状病毒感染提供了良好的分子检测工具，具有重要的临床应用价值。

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒猪血凝性脑脊髓炎病毒猪δ-冠状病毒猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR

改良易筋经对脑卒中后患者认知功能及跌倒自我效能的影响

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改良易筋经对脑卒中后患者认知功能及跌倒自我效能的影响

作者：金雪明上海中医药大学

学位级别：硕士

目的:卒中后易表现认知功能损伤并长期伴有跌倒风险,阻碍了患者的康复进程。目前,卒中后认知功能损伤尚无有效治疗方法。近年来的研究显示,跌倒风险与认知水平相关。中国传统功法作为卒中患者非药物干预手段的主要方法之一,在认知、运... 详细信息

目的:卒中后易表现认知功能损伤并长期伴有跌倒风险,阻碍了患者的康复进程。目前,卒中后认知功能损伤尚无有效治疗方法。近年来的研究显示,跌倒风险与认知水平相关。中国传统功法作为卒中患者非药物干预手段的主要方法之一,在认知、运动功能领域的疗效倍受关注。但对于传统功法改善认知并降低跌倒风险的共同研究极少。因此,本研究设计改良易筋经锻炼方式,探索其对卒中后患者的认知功能、跌倒风险及跌倒自我效能的影响。有利于为改良易筋经在临床的应用及推广提供理论证据。方法:2019年12月至2020年12月,于上海市第二康复医院神经康复科及老年疾病科招募住院的脑卒中患者共58例,用SPSS24.0软件生成随机数字表将试验对象分为对照组、试验组。对照组接受院内常规康复治疗,试验组在常规康复治疗的基础上结合改良易筋经锻炼。改良易筋经锻炼一般在下午3:00-5:00,如有特殊情况可适当做调整;锻炼频率:1次/天,40分钟/次,5次/周,共4周。最终参与次数达到85%及以上即视为有效。干预前后分别用MOCA、TMT-A、BBS、MFES、步行-认知单/双任务能力、PSQI、MBI评估试验对象的认知功能、跌倒风险、跌倒效能、睡眠质量、日常生活活动能力等。通过Microsoft Excel 2019建立数据库后进行数据录入,采用SPSS24.0进行统计分析。结果:本研究最终对51例试验对象的数据资料进行统计分析,对照组24例,试验组27例。统计分析时均进行基线比较。研究结果显示:①认知功能:试验后对照组和试验组的MOCA得分相比于试验前显著提高(对照组P0.05)。对照组的注意力、定向力得分组内比较显著提高(P0.05)。④步行-认知单/双任务能力:试验后仅试验组TUGT得分组内比较有显著性差异(P0.05);双任务在认知任务中的干扰效应值组内比较对照组无显著性差异(P>0.05),试验组显著降低(P0.05);对照组PSQI总分显著降低(P0.05);将两组试验前后的睡眠效率、PSQI总分的差值进行组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。试验后对照组和试验组MBI得分均显著性提高(P0.05)。⑥认知与跌倒风险间的关系:注意、抽象、定向、MOCA总分、TMT-A测试时间与BBS得分呈弱相关(rs=0.213,P=0.031;rs=0.217,P=0.028;rs=0.330,P=0.001;rs=0.308,P=0.002;rs=-0.299,P=0.002);MOCA 总分与 MFES 得分呈弱相关(rs=0.222,P=0.025);BBS 得分与MFES得分呈强相关关系(rs=0.626,P<0.001)。结论:增加改良易筋经锻炼可以显著改善卒中后患者的视空间与执行功能、语言、抽象、定向能力,对其整体认知功能也具有积极效果;参与改良易筋经锻炼可以改善卒中后患者的平衡能力,提高其跌倒自我效能;提高卒中患者的双任务能力,有效预防患者跌倒。对于慢性患病者而言,传统的易筋经可能很难学习,较低的健康水平使他们无法练习一整套易筋经。一个简单易学,强度相对较低,较安全的改良易筋经版本更适合卒中患者练习。

关键词：改良易筋经脑卒中认知功能跌倒风险双任务能力

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简明中医外感病证治 1

易筋经动作的训练对脑卒中患者静态平衡足底压力的影响

2004年

作者：金雪明胡之璟

本书简述了外感病的含义、分类与致病特点，在此基础上，提出了风、热、湿、燥、寒、疠——六淫的新概念，并介绍了31种常见外感疾病的辨证施治。

ISBN: (纸本)780194223X

关键词：辨证论治外感病

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易筋经动作的训练对脑卒中患者静态平衡足底压力的影响

掀开人生新一页——记昆山市自主择业军转干部吕建坤

第十二届全国体育科学大会

作者：罗开亮金雪明刘欣昊马书杰胡军上海中医药大学上海市第二康复医院

研究目的:观察易筋经动作的训练对脑卒中患者平衡功能及足底压力变化的影响,探究其对患者平衡功能的改善情况,并探讨易筋经动作对患者自我训练的适用性,为脑卒中患者临床康复提供科学的理论依据。研究方法:2021年2月至5月于上海市第二... 详细信息

研究目的:观察易筋经动作的训练对脑卒中患者平衡功能及足底压力变化的影响,探究其对患者平衡功能的改善情况,并探讨易筋经动作对患者自我训练的适用性,为脑卒中患者临床康复提供科学的理论依据。研究方法:2021年2月至5月于上海市第二康复医院招募脑卒中受试者20例,按1:1比例随机分为试验组10例和对照组10例,两组受试者一般资料经统计学分析比较差异无统计学意义（P＞0.05）,具有可比较性。对照组行常规康复治疗:治疗项目具体包括:（1）运动疗法;（2）作业疗法;（3）物理因子治疗;（4）针灸治疗,1次/天,5天/周;试验组在常规康复治疗基础上进行易筋经动作训练,具体的训练动作根据脑卒中患者肢体功能的特点及综合前期研究选取十二势易筋经中的六势:韦陀献杵第一势、韦陀献杵第二势、韦陀献杵第三势、倒拽九牛尾势、九鬼拔马刀势、三盘落地势进行训练。所有受试者均接受同一位治疗师的全程指导训练,训练强度控制在60%-80%的最大心率之间,30min/次,1次/天,5次/周,持续4周。若受试者完成动作有困难可在治疗师的辅助下进行动作训练。在治疗前后使用足底压力分析系统（上海脉沃,中国）分别在睁眼状态和闭眼状态下进行静态平衡的功能检测:检测开始前告知受试者保持独立站立状态并放松,调整"+"标记物至与受试者双眼平行,检测过程均先测试睁眼状态,再测试闭眼状态,且全程由一名治疗师在受试者的正后方进行防护,以保证检测的安全性;（1）睁眼状态:嘱受试者目视前方的"+"标记物,并保持身体不动,待其准备好后开始记录,记录时间为10s;（2）闭眼状态:嘱受试者站立保持身体不动后闭眼,待其准备好后开始记录,记录时间为10s。并使用系统自带的分析系统进行数据的分析处理,生成足底压力参数,包括左右两侧足底的压强值和每侧足底的压强所占比值及包络椭圆参数（长轴长度、短轴长度与面积）。采用SPSS 23.0版进行数据的统计学分析,计量资料采用均数±标准差表示,若数据满足正态性及方差齐性检验,组内比较采用配对t检验,组间比较采用两独立样本t检验;若数据不满足则采用Wilcoxon秩和检验进行分析。显著性水平α=0.05,P＜0.05为差异具有统计学意义。研究结果:（1）双侧足底压力百分比值的组内及组间比较:根据系统分析各受试者的左右两侧足底压力占总压力的百分比值进行统计比较,发现20例受试者的健侧肢体所承受的足底压力值均大于患侧,取患侧足底压力百分比值进行统计分析,其数值越接近50%,则躯体两侧所承受重力越对称。在睁眼与闭眼状态下,试验组与对照组在治疗前后均能显著的增加受试者患侧足底压力的百分比值（P＜0.01）;与对照组相比,试验组受试者患侧足底压力百分比值均显著增加（P＜0.05）。（2）包络椭圆参数的组内比较:试验组在长轴长度、短轴长度与面积的改善中均有显著的差异性（P＜0.01）;对照组在长轴长度及睁眼状态下的短轴长度的比较中无显著性差异（P＞0.05）,在面积及闭眼状态下的短轴长度的比较中有显著性差异（P＜0.05）。（3）包络椭圆参数的组间比较:在睁眼状态下,两组之间比较无显著性差异（P＞0.05）;在闭眼状态下由于两组的干预前的基线不一致,将两组干预前后的效应差值做比较:试验组在长轴长度、短轴长度及面积的改善程度中均优于对照组,其差异有统计学意义（P＜0.05）。研究结论:易筋经动作训练有助于提高脑卒中患者患侧肢体的负重能力及重心控制的稳定性,促进躯体两侧承重力趋于对称,有效打破干预前的健侧肢体代偿模式,强化其平衡调节能力。易筋经作为我国传统健身气功亦是中医康复适宜技术之一,其动作简单易学,受试者接受程度较高,适合在脑卒中患者自我训练中推广应用。

关键词：脑卒中易筋经平衡功能足底压力运动训练

来源： cnki会议评论

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中国人才 2006年第2期 42-43页

作者：金雪明

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易筋经训练对脑卒中患者平衡功能及足底压力的影响

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康复学报 2022年第2期32卷 117-123页

作者：罗开亮金雪明马书杰薛炘刘欣昊马欣然胡军上海中医药大学康复医学院上海201203 上海市第二康复医院上海200441

目的:观察易筋经训练对脑卒中患者睁眼、闭眼状态下静态平衡功能及足底压力变化的影响。方法:选取2021年1月—8月在上海市第二康复医院治疗的脑卒中患者48例,采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组24例。对照组接受常规康复治疗,包... 详细信息

目的:观察易筋经训练对脑卒中患者睁眼、闭眼状态下静态平衡功能及足底压力变化的影响。方法:选取2021年1月—8月在上海市第二康复医院治疗的脑卒中患者48例,采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组24例。对照组接受常规康复治疗,包括运动疗法、作业疗法、电疗及针刺治疗等,1次/d,5 d/周,连续治疗4周;观察组在对照组基础上接受易筋经训练,30 min/次,1次/d,5 d/周,连续治疗4周。分别在治疗前后采用Berg平衡功能量表(BBS)进行平衡功能评估;采用足底压力分析系统进行睁眼与闭眼状态下足底压力参数的评估,通过分析系统处理得出患侧足底压力百分比值及包络椭圆参数(长轴长度、短轴长度与面积);记录治疗过程中2组跌倒、肌肉疼痛、血压与心率异常等不良反应发生的情况。结果:2组治疗前BBS评分、患侧足底压力百分比值、包络椭圆参数比较均无明显区别,差异无统计学意义(P>0.05)。与治疗前比较,2组治疗后BBS评分均明显提高;观察组治疗后睁眼与闭眼状态下患侧足底压力百分比值均明显增加,包络椭圆参数值均明显减小,差异均有统计学意义(P明显提高,睁眼状态下包络椭圆参数值明显减小,差异具有统计学意义(P<0.05)。2组均未出现不良事件。结论:易筋经训练有助于提高脑卒中患者患侧肢体的负重能力及重心控制的稳定性,改善其平衡功能,值得临床推广应用。

关键词：脑卒中易筋经平衡功能足底压力运动训练

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改良易筋经对社区老年人动静态平衡功能的影响

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改良易筋经对社区老年人动静态平衡功能的影响