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绵羊HGTP家族基因克隆和上游调控区多态性及生物信息学分析

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绵羊HGTP家族基因克隆和上游调控区多态性及生物信息学分析

作者：金雨婷中国计量大学

学位级别：硕士

羊毛是绵羊养殖业的主要副产品之一,也是牧民收入的重要经济来源之一。我国是畜牧业大国也是绵羊资源大国,羊毛产业是我国牧区经济重要的组成部分,有着至关重要的地位。作为纺织纤维中的天然材料,羊毛因其有多种优良特性在纺织业中具有... 详细信息

羊毛是绵羊养殖业的主要副产品之一,也是牧民收入的重要经济来源之一。我国是畜牧业大国也是绵羊资源大国,羊毛产业是我国牧区经济重要的组成部分,有着至关重要的地位。作为纺织纤维中的天然材料,羊毛因其有多种优良特性在纺织业中具有不可代替的地位,优良的细毛(直径13～24μm)更是许多高端纺织品不可或缺的材料,但我国纺织所需羊毛2/3依靠进口,其中细毛的进口依赖性更大。我国绵羊养殖分布在东北、西北和内蒙古等多个省份,但是多以肉羊为主,细毛羊数量少,高档细毛产量低。中国美利奴羊是我国早期自主培育的细毛羊品种,但是品种资源单一,数量不足。因此,挖掘我国细毛绵羊品种的优良基因并提高我国羊毛质量和产量是提高牧民收入和提升养羊业科技含量的重大问题,具有重要的科学和经济意义。已有研究证明粗毛和细毛成分的差异之一在于高甘氨酸-酪氨酸蛋白(high-glycine-tyrosine KAPs,HGTPs)的含量和分布不同,研究还证明其基因多态性影响了羊毛弯曲度和细度性状调控基因的表达。绵羊HGTPs是一个多基因编码的角蛋白家族,其成员主要包括KAP6、KAP7和KAP8三种不同的角蛋白联合蛋白(Keratin associated protein,KAP)。鉴于此,本论文在前期对三个基因编码区多态性研究基础上,以三种绵羊(中国美利奴细毛羊、萨福克羊、湖羊)为主,采用PCR(Polymerase Chain Reaction,PCR)克隆、RACE(Rapid Amplification of c DNA Ends,RACE)克隆、测序和生物信息学分析等手段,主要比较分析了绵羊HGTP家族KAP6、KAP8基因启动子调控元件、上游调控区序列差异,从而了解KAP6、KAP8基因启动子区域在不同绵羊品种中的差异,为细毛羊育种提供一定的理论参考。结果总结如下:(1)对步移法TAIL-PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)获得的KAP6、KAP7和KAP8基因上游序列进行验证及启动子预测用中国美利奴羊、湖羊和山羊DNA样品对TAIL-PCR获得的KAP6、KAP7和KAP8上游克隆序列进行了拼接区域的片段扩增验证,证实了其获得序列的正确性并提交绵羊的三个序列并获得Gen Bank序列号MT084114、MT084115和MT090064。三种羊三个基因在近CDS(Coding sequence,CDS)区上游克隆序列结果均一致,说明KAP6、KAP7和KAP8角蛋白基因在近CDS区上游的400～500 bp区间的序列片段在羊中可能有高度保守性,且与羊的品种无关。同时也对验证后的序列进行了初步的启动子预测分析,均在各序列中预测到启动子,综合评分预测KAP6、KAP7和KAP8基因启动子大约分别位于各自转录起始点上游-40～-1000 bp、-800～-1500 bp和-100～-900 bp区间。同时也预测到了TATA盒以及AP1、TFIID、SRF、NF-KB、CREB、SP1等相关转录因子结合位点。(2)KAP6和KAP8基因全长c DNA克隆及转录起始点确认对KAP6和KAP8基因进行5′端RACE和3′端RACE克隆,测序拼接后得到了长度分别为606 bp、559 bp的三个基因全长c DNA序列,其CDS区序列长度分别为252 bp和189 bp,与NCBI公布的绵羊对应序列高度一致。在CDS区上游分别得到了5′UTR(Untranslated Region,UTR)区域,长度分别为43 bp和50 bp,并确定了两个基因的转录起始点及其在各自上游克隆序列中的具体位置和碱基。(3)KAP6和KAP8上游区克隆及多态性分析在对KAP6和KAP8基因上游启动子序列进行初步扩增(选取中国美利奴羊、湖羊、山羊作为实验材料)中,中国美利奴羊和湖羊的KAP6基因上游约1600 bp长度的序列经过种间对比几乎一致,绵羊品种内差异很小。在KAP8基因扩增序列种间对比中,中国美利奴羊和湖羊相对于山羊有一段约7个碱基长度的片段插入多态性,同时中国美利奴羊和湖羊以及山羊都有一段不同长度的(CA)3重复碱基序列。在对KAP6和KAP8基因启动子序列进行群体检测(选取中国美利奴羊、萨福克羊作为实验材料)中,KAP6基因总计得到37个完整序列(其中中国美利奴羊22个,萨福克羊15个,长度均在1000 bp左右)。共发现7个SNP(single nucleotide polymorphism,SNP)多态性位点,所得结果中有7种单倍型,分别有两种单倍型只在单个羊品种内出现,属于品种特异性单倍型。KAP8基因总计得到32个完整序列(其中中国美利奴羊21个,萨福克羊11个,长度均在2500 bp左右)。共发现74个SNP位点和片段插

关键词：绵羊羊毛角蛋白高甘氨酸-酪氨酸蛋白(HGTP) 上游调控区启动子

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YC石化公司安全管理存在问题研究

YC石化公司安全管理存在问题研究

作者：金雨婷辽宁石油化工大学

学位级别：硕士

近些年来,安全生产状况在我国总体保持一种平稳、逐渐好转的发展态势。但是,国内化工企业安全生产的形势依然不容乐观,特别是炼化企业,安全事故依然时有发生。炼化企业具有其独特的生产特征,比如高温高压、易燃易爆等,这些特有的生产特... 详细信息

近些年来,安全生产状况在我国总体保持一种平稳、逐渐好转的发展态势。但是,国内化工企业安全生产的形势依然不容乐观,特别是炼化企业,安全事故依然时有发生。炼化企业具有其独特的生产特征,比如高温高压、易燃易爆等,这些特有的生产特征决定了相关企业在生产作业过程中存在着各种危险。实践证明:炼化企业要想保持健康稳定且可持续的发展态势,必须时时处处以安全为前提,将安全作为企业发展的重中之重。本文研究YC石化公司为对象,研究该公司的安全管理问题。首先结合安全管理的有关理论对YC石化公司的安全管理现状进行描述和分析,包括重大危险源识别和安全评价分析;接着采用问卷调查的方法对YC公司的整体员工进行调查,以期发现公司当前安全管理存在的问题;通过对问卷调查结果进行分析,发现YC石化公司的管理层面、组织层面、技术与体系层面、作业层面和风险控制层面存在管理制度不完善、安全培训流于形式等问题;基于分析出的YC石化公司安全管理存在的问题,有针对性地提出改善措施,以期达到提升公司安全管理水平,降低安全隐患的目的。

关键词：炼化企业安全管理 HSE体系重大危险源辨识

野生型果蝇w1118的酵母双杂交cDNA文库及诱饵载体的构建

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野生型果蝇w1118的酵母双杂交cDNA文库及诱饵载体的构建

作者：金雨婷湖北大学

学位级别：硕士

果蝇有体积小,生命周期很短,子代数量多等特点,且果蝇的全基因组序列已测序完成,其基因序列与其他生物(特别是哺乳动物)有很高的同源性,同时,对果蝇的一些复杂生物学现象也有了深入的研究和认识。因此,果蝇成为目前最重要的模式生物之一... 详细信息

果蝇有体积小,生命周期很短,子代数量多等特点,且果蝇的全基因组序列已测序完成,其基因序列与其他生物(特别是哺乳动物)有很高的同源性,同时,对果蝇的一些复杂生物学现象也有了深入的研究和认识。因此,果蝇成为目前最重要的模式生物之一,在遗传学、神经科学、人类疾病等研究领域起到非常重要的作用,其中黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)的应用最为广泛,而野生型果蝇w就是黑腹果蝇的一种。构建野生型果蝇w的酵母双杂交cDNA文库,可以更为方便地研究果蝇中蛋白质与RNA、小分子物质以及蛋白质之间的相互作用。本实验采用 SMART(Switching Mechanism At 5’ end of RNATranscript)技术,在酵母菌Y187中构建野生型果蝇w的cDNA文库。提取野生型果蝇w的总RNA,对其进行凝胶电泳后清晰可见28S和18S两条带,说明总RNA的提取质量较高,以其为模板反转录获得第一链cDNA。以第一链cDNA为模板通过长距PCR(LD-PCR)扩增得到双链cDNA(dscDNA),将dscDNA进行凝胶电泳,其片段大小在500-2000bp之间,说明dscDNA质量较高,可用于转化酵母菌感受态Y187。dscDNA经纯化后,与线性化载体pGADT7-Rec共转化酵母菌感受态Y187,利用酵母细胞内同源重组形成文库质粒。在SD/-Leu营养缺陷平板上筛选并收集克隆,通过稀释法计算转化效率为5.5×105/3ug pGADT7-Rec,测定文库效价为1.42×107cfu/ml。通过菌落PCR计算重组率达到100%,插入cDNA片段的大小在300-2000bp之间,说明转入了大小不等的cDNA片段。以上实验结果说明本实验构建的cDNA文库质量较高,为后续酵母双杂交筛选受体蛋白提供了重要的材料和基础。同时,根据Flybase中基因CG2056的CDS序列设计引物,野生型果蝇w的总RNA经反转录合成cDNA,以此为模板通过PCR扩增基因CG2056,并利用该基因构建诱饵载体pGBKT7-CG2056。将诱饵载体pGBKT7-CG2056转化酵母菌感受态AH109,并进行自激活检测。结果显示诱饵载体pGBKT7-CG2056转化酵母菌感受态AH109后,无自激活反应,可以用于后续实验。

关键词：野生型果蝇w1118 酵母双杂交 cDNA文库构建诱饵载体

梦想余杭，未来科技——余杭区域软实力标志性项目传播方案设计

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梦想余杭，未来科技——余杭区域软实力标志性项目传播方案设计

作者：金雨婷浙江大学

学位级别：硕士

余杭在打造具备全球影响力的科技创新策源地和创业创新中心的过程中,软实力发展和硬实力不匹配,存在区域资源提炼不足、顶层概念缺失、传播特色不够鲜明、传播要素分散单一等问题。本设计旨在基于余杭区软实力建设定位和战略规划路径,... 详细信息

余杭在打造具备全球影响力的科技创新策源地和创业创新中心的过程中,软实力发展和硬实力不匹配,存在区域资源提炼不足、顶层概念缺失、传播特色不够鲜明、传播要素分散单一等问题。本设计旨在基于余杭区软实力建设定位和战略规划路径,通过对余杭区资源的重新梳理与再研判,以及国内外区域软实力建设案例和品牌形象传播典型的分析,提炼出符合余杭发展现状和发展诉求的传播思路与对策。本文创新性地通过品牌口号设计、标志形象设计和传播方案设计,规划具有影响力和传播性的标志性项目,在讲好余杭故事、提升余杭软实力的同时,助推杭州城市新一轮品牌建设和国际化发展,同时为其他转型中区域建设和形象传播提供范例。

关键词：区域软实力城市品牌城市形象标志性项目

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关于旅顺日俄战争的历史记忆研究

关于旅顺日俄战争的历史记忆研究

作者：金雨婷大连外国语大学

学位级别：硕士

旅顺,位于辽东半岛的最南端,是濒临黄海与大连相接的军港。在1904年的日俄战争中曾作为战场,到1955年回归中国本土前被日本占领了四十年以上。日俄战争是日本与沙俄在中国的领土上交战,其本质是一场侵略战争。日俄战争结束后,作为战胜... 详细信息

旅顺,位于辽东半岛的最南端,是濒临黄海与大连相接的军港。在1904年的日俄战争中曾作为战场,到1955年回归中国本土前被日本占领了四十年以上。日俄战争是日本与沙俄在中国的领土上交战,其本质是一场侵略战争。日俄战争结束后,作为战胜国的日本进一步推进侵略大陆政策,给中华民族带来了巨大的灾难。本研究利用历史记忆的理论,对旅顺日俄战争的历史记忆进行了考察。结论整理如下:日俄战争结束后,日本大力宣传伪满洲资源丰富,对战迹进行建设,趁着日本国民对战胜的喜悦中推进了伪满洲的观光。通过在发行的观光指南和明信片对战迹的描述,对日俄战争进行历史的建构。强调旅顺是由日本士兵的牺牲换来的,想要掩盖侵略的罪行。经历了二战的战败,虽然对战争进行了反省,但面对日俄战争的胜利有着极强的荣誉感。随着将日俄战争作为主题的小说《坂上之云》的发行,司马史观在日本民间引起了热潮。日本政府无视了作为殖民地受害者中国人民的感受,丝毫没有对侵略罪行进行反省。战迹作为记忆之场对地方社会仍持续产生影响。通过对田野调查和访谈调查的数据进行分析,能够掌握现今市民对于日俄战争的历史记忆情况。通过调查,作者发现大部分市民对于日俄战争不了解。为了改善这个现象,需要对现在的战迹景区进行整改。通过让市民了解日俄战争的历史,认识其对旅顺的影响,能够加强对地方身份的认同并培养爱国精神。只有正确地认识历史,才能够好好地将历史传承下去,并珍惜当下来之不易的和平。

关键词：日俄战争历史记忆记忆之场战争遗迹

产业集聚对出口技术复杂度的影响研究 ——基于长江经济带高技术产业分析

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产业集聚对出口技术复杂度的影响研究 ...

作者：金雨婷四川外国语大学

学位级别：硕士

党的十九大报告指出,我国经济已步入高质量发展阶段,高技术产业日益成为各国在国际竞争中取得优势地位的关键,是一国经济发展的主要推动力量。产业集聚作为一种重要的经济现象,在各地区多种产业的发展中扮演着愈加重要的角色,为企业搭... 详细信息

党的十九大报告指出,我国经济已步入高质量发展阶段,高技术产业日益成为各国在国际竞争中取得优势地位的关键,是一国经济发展的主要推动力量。产业集聚作为一种重要的经济现象,在各地区多种产业的发展中扮演着愈加重要的角色,为企业搭建创新发展的平台。虽然改革开放以来我国出口数量猛增,但出口结构在技术含量、产品复杂度和核心竞争力等方面低于一些发达国家,完善出口结构是当下我国从世界工厂向世界发动机转变的有力助推器。长江经济带是我国的重大国家战略发展区域,从地理位置上来看,长江经济带横跨11个省市,将中国东中西部连接起来,研究长江经济带高技术产业集聚和产品出口结构就具有重大的现实意义,能够对其他集聚区的发展提供建议。本文首先从理论上分析影响机理,发现高技术产业集聚主要通过产生人才集聚效应、知识溢出效应和外部规模经济效应来提高企业技术创新能力,从而促进高技术产品出口技术复杂度的提高。其次收集整理数据分析长江经济带高技术产业发展、集聚和出口结构现状。最后再利用线性回归模型进一步实证发现,长江经济带高技术产业集聚与出口技术复杂度呈正相关关系,同时,人力资本和专利技术等因素对高技术产品出口技术复杂度也能起到一定的促进作用。结合本文的研究和实际情况分别对政府和企业两个层面提出建议。从政府的角度来看:一是要加强对高技术行业集聚区的建设,充分发挥其优势;二是要合理规划高技术产业的产业布局,重点聚焦中西部产业区发展;三是要横向搭建定期学习培训交流平台,纵向促进国内外企业进行合作。从企业的角度来看:一是要重视自主研发和创新能力,增强自身吸收能力;二是要结合自身特点,选择合适的集聚区;三是要建立集聚区企业家俱乐部,共同分享集聚区的新商机。

关键词：高技术产业产业集聚出口技术复杂度长江经济带

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工匠精神对员工双元创新行为的影响机制研究

工匠精神对员工双元创新行为的影响机制研究

作者：金雨婷兰州理工大学

学位级别：硕士

多中心治理视域下哈尔滨市青少年冰雪运动发展研究

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多中心治理视域下哈尔滨市青少年冰雪运动发展研究

作者：金雨婷哈尔滨体育学院

学位级别：硕士

随着北京2022年冬奥会的成功申办,青少年参与冰雪运动不仅是实现国家战略要求,更是符合哈尔滨市的现实需求,所以对青少年参与冰雪运动的研究尤为关键。哈尔滨市青少年冰雪运动的开展将极大程度上提升哈尔滨市青少年身心素质,缓解青少年... 详细信息

随着北京2022年冬奥会的成功申办,青少年参与冰雪运动不仅是实现国家战略要求,更是符合哈尔滨市的现实需求,所以对青少年参与冰雪运动的研究尤为关键。哈尔滨市青少年冰雪运动的开展将极大程度上提升哈尔滨市青少年身心素质,缓解青少年体质下降的现实弊端,具有现实意义。本文通过大量的搜集、阅读国内外相关文献了解到,学者对青少年参与冰雪的研究较多,但其中少有学者从多中心治理视域下对青少年冰雪运动展开研究。本文从多中心治理的角度切入,对多中心主体的功能进行分析,以期形成哈尔滨市青少年冰雪运动的发展对策。本文以哈尔滨市市区青少年冰雪运动参与情况为研究对象,通过文献资料法、专家访谈法、实地调查法、逻辑分析法、问卷调查法、数理分析法作为研究的具体方法。第一,本文总结多中心治理视域下青少年冰雪运动发展的功能定位,即:政府中心功能、社会中心功能、学校中心功能、家庭中心功能,四个中心主体之间在发挥各自功能的基础上形成联动格局,保障青少年冰雪运动的发展。第二,本文分析哈尔滨市青少年冰雪运动发展主体现状,从治理主体和参与主体角度进行研究,其中治理主体包含政府、学校、社会以及家庭带动情况,参与主体则是聚焦于青少年群体的情况。第三,阐释哈尔滨市青少年冰雪运动发展困境及其成因。困境包括:条件保障、价值认同以及运动自觉困境;困境的成因为:政府后续监督乏力、社会利益主义趋势、学校应试教育倾向、家庭重视程度不足。第四,从域外国家和国内部分城市借鉴经验,总结出哈尔滨市青少年冰雪运动开展可借鉴的经验,以及治理主体和参与主体之间关系配合的必要性。最后,提出多中心治理视域下哈尔滨市青少年冰雪运动发展策略:（1）政府层面,政策细化:构建多中心的保护屏障;激励驱动:提升内部人员办事效率。（2）社会层面,自寻风口:盘活经济满足现实需要;资源互换:自身优势换取本质需要。（3）学校层面,意识培养:提升领导层的重视程度;运用共享:调配冰雪运动相关资源。（4）家庭层面,导向强化:树立青少年的学习榜样;建立联动:配合多中心的支持行动。本文通过总结多中心治理视域下青少年冰雪运动发展的功能定位,分析哈尔滨市青少年冰雪运动发展主体现状,阐释哈尔滨市青少年冰雪运动发展困境与成因,借鉴国内外相关经验,提出多中心治理视域下哈尔滨市青少年冰雪运动发展策略,以期切实提升哈尔滨市青少年冰雪运动参与。

关键词：哈尔滨市青少年冰雪运动多中心治理

乳腺癌中医证型与分子分型及相关基因表达的关联性研究

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乳腺癌中医证型与分子分型及相关基因表达的关联性研究

作者：金雨婷南京中医药大学

学位级别：硕士

目的：探讨乳腺癌中医证型与分子分型及相关基因表达的关联性,将宏观的中医辨证与临床客观的量化指标相结合,分析其内在联系,为乳腺癌的辨证分型及中西医结合治疗提供客观依据。方法：选取2015年4月-2015年12月期间在江苏省中医院及江... 详细信息

目的：探讨乳腺癌中医证型与分子分型及相关基因表达的关联性,将宏观的中医辨证与临床客观的量化指标相结合,分析其内在联系,为乳腺癌的辨证分型及中西医结合治疗提供客观依据。方法：选取2015年4月-2015年12月期间在江苏省中医院及江苏省肿瘤医院住院并拟行手术治疗的乳腺癌患者100例。对其进行中医辨证,并收集患者的一般临床资料,包括性别、年龄、术后病理指标(ER、PR、HER-2、Ki67、VEGF、EGFR、p53)等指标,用SPSS19.0统计软件包建立数据库,分析中医证型与客观指标之间的关联性,计数资料采用卡方检验,组间计量资料采用方差分析,以P<0.05表示有统计学意义。结果：乳腺癌发病率年龄呈正态分布,41-50岁为高发年龄段(P<0.05)。肝郁气滞证、热毒蕴结证及冲任失调证为乳腺癌最常见证型(P<0.05)。肝郁气滞证与浸润性导管癌高发生率、ER高阳性率、Luminal型乳腺癌高发生率及VEGF高表达有相关性(P<0.05)。热毒蕴结证与浸润性导管癌高发生率、三阴性乳腺癌高发生率、p53高表达、Ki-67高水平及EGFR高表达有相关性(P<0.05)。冲任失调证与浸润性导管癌高发生率、ER高阳性率、p53高表达、Luminal B型乳腺癌高发生率及VEGF高表达有相关性(P<0.05)。气血两虚证与浸润性导管癌高发生率、HER-2高阳性率、p53高表达、Luminal B型乳腺癌高发生率、HER-2过表达型乳腺癌高发生率及EGFR高表达有相关性(P<0.05)。脾胃虚弱证与浸润性导管癌高发生率、Luminal B型乳腺癌高发生率及ER高阳性率有相关性(P<0.05)。肝肾阴虚证与浸润性导管癌高发生率、Luminal B型乳腺癌高发生率及Ki-67高水平有相关性(P<0.05)。结论：乳腺瘤的中医辨证分型与分子分型及相关基因表达具有关联性。肝郁气滞证对化疗敏感,可能配合抑制血管生成药物效果更佳,中医方而主要为配合手术及放化疗,减轻毒副反应。热毒蕴结证恶性程度高,对化疗效果欠佳,对内分泌治疗不敏感,分子靶向药物对其效果较差,中医治疗是主要治疗手段,要加强抗肿瘤治疗的力度。冲任失调证对化疗敏感,可能配合抑制血管生成药物效果更佳。气血两虚证恶性程度高,对蒽环类及紫杉类药物敏感,对内分泌治疗效果欠佳,对曲妥珠单抗(赫赛汀)靶向治疗有效,中医方面要加强抗肿瘤治疗的力度。脾胃虚弱证对化疗敏感,对内分泌治疗敏感,中医在抗肿瘤治疗的同时注重健脾和胃。肝肾阴虚证肿瘤增殖迅速,可能对化疗药物治疗更有效,同时也要加强中医抗肿瘤治疗的力度。

关键词：乳腺癌中医分型分子分型中西医结合