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HEK293细胞的传代、建库与高效表达重组HPV16-E6E7腺病毒的研究

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中国现代应用药学 2015年第4期32卷 399-403页

作者：吴洁李剑波高孟金素凤潘海桦陈刚姜云水庄昉成浙江省医学科学院病毒病研究所杭州310013 浙江普康生物技术股份有限公司杭州310053

目的对HEK293细胞进行三级细胞库的建立,并高效表达重组的HPV16-E6E7腺病毒。方法进行HEK293细胞传代培养,并建立三级细胞库,按中国药典2010年版III部要求进行常规检验;培养重组HPV16-E6E7腺病毒,测定滴度,插入目的基因以及基因组酶切... 详细信息

目的对HEK293细胞进行三级细胞库的建立,并高效表达重组的HPV16-E6E7腺病毒。方法进行HEK293细胞传代培养,并建立三级细胞库,按中国药典2010年版III部要求进行常规检验;培养重组HPV16-E6E7腺病毒,测定滴度,插入目的基因以及基因组酶切图谱鉴定。结果 HEK293细胞传代符合其生长形态,建立的三级细胞库和不同细胞库之间的传代数,细胞浓度和装量均符合疫苗基质制备的要求;能高效表达重组HPV16-E6E7腺病毒,种子滴度>3.0×109 IU·m L?1;表达的目的基因和目的蛋白稳定。结论建立的HEK293三级细胞库符合疫苗用细胞基质的要求。

关键词： HEK293 细胞库 HPV16 重组腺病毒高效表达

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使命与梦想责任与担当 005

经阴道彩色多普勒超声在卵巢早衰诊断中的应用

中国应急管理报

作者：李金素封迪刘祖凤

他们怀揣梦想，肩负责任；他们有的曾经是在校大学生，有的曾经是部队战士；他们是丈夫，是父亲……他们有很多身份，但他们拥有同一个名字：森林消防员。面对山火，他们勇敢出战，面对危难，他们挺身而出。使命与梦想让他们聚在一起，... 详细信息

他们怀揣梦想，肩负责任；他们有的曾经是在校大学生，有的曾经是部队战士；他们是丈夫，是父亲……他们有很多身份，但他们拥有同一个名字：森林消防员。面对山火，他们勇敢出战，面对危难，他们挺身而出。使命与梦想让他们聚在一起，责任与担当让他们义无反顾地成为危急时刻?

关键词：消防员机动支队森林消防消防局森林火灾父亲节

来源： cnki报纸评论

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中国妇幼保健 2011年第17期26卷 2684-2685页

作者：金素娟叶平陈峥刘凤浙江省中医药大学附属第一医院浙江杭州310006

目的:观察经阴道彩色多普勒超声在卵巢早衰诊断中的价值。方法:对符合纳入标准35例卵巢早衰患者及35例正常育龄妇女行阴道彩色多普勒超声检查,对两组受检者的卵巢声像图、血流动力学参数进行观察并比较。结果:两组卵巢结构、卵泡数、卵... 详细信息

目的:观察经阴道彩色多普勒超声在卵巢早衰诊断中的价值。方法:对符合纳入标准35例卵巢早衰患者及35例正常育龄妇女行阴道彩色多普勒超声检查,对两组受检者的卵巢声像图、血流动力学参数进行观察并比较。结果:两组卵巢结构、卵泡数、卵泡大小、卵巢前后径回声及纤维条索等情况相比差异有统计学意义(P<0.01),两组卵巢动脉的收缩期峰值流速(PSV)及舒张末期流速(EDV)、阻力指数(R I)及搏动指数(PI)等观察指标相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:经阴道超声彩色多普靳检查有助于明确诊断卵巢早衰。

关键词：卵巢早衰彩色多普勒超声检查诊断价值

表达人乳头瘤病毒16型E6E7重组腺病毒疫苗对小鼠的免疫和抗肿瘤效应

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国际流行病学传染病学杂志 2014年第6期41卷 368-373页

作者：吴洁陈刚金素凤高孟庄昉成李剑波姜云水毛子安浙江省医学科学院病毒病研究所杭州310013 浙江普康生物技术股份有限公司杭州310053

目的评价HPVl6E6E7的复制缺陷型重组5型腺病毒（PK—HPV—ad5）治疗性疫苗对实验小鼠免疫应答和抗肿瘤的生物学效应。方法使用基因重组技术构建PK—HPV—ad，疫苗，并通过小鼠免疫试验，检测小鼠总抗体和特异性IFNl，同时将造模小鼠分... 详细信息

目的评价HPVl6E6E7的复制缺陷型重组5型腺病毒（PK—HPV—ad5）治疗性疫苗对实验小鼠免疫应答和抗肿瘤的生物学效应。方法使用基因重组技术构建PK—HPV—ad，疫苗，并通过小鼠免疫试验，检测小鼠总抗体和特异性IFNl，同时将造模小鼠分成疫苗组和对照组，分别对其进行抑瘤试验、TC-1肿瘤细胞挑战试验和肿瘤切除后防复发试验。结果HPV16E6E7诱导的总抗体第12天的水平相对较高（1：400～1：600）；3批次疫苗特异性IFNl在第14天与对照组比较分别升高8．6、5．9和8．9倍，差异有统计学意义（t=15．721、6．967和14．342，P均〈0．01）。抑瘤试验表明疫苗剂量为10^7IU／只时小鼠肿瘤生长率为0，与对照组比较差异有统计学意义（确切概率法，P〈0．01），3批次疫苗验证有效剂量为10^7IU／只时肿瘤抑制率可达80％（8／10）以上。TC-1肿瘤细胞挑战试验结果显示：小鼠先接种疫苗能引起特异性的免疫应答，并能保护90％（9／10）的小鼠免受TC-1肿瘤细胞的攻击；肿瘤切除后防止复发试验提示在注射相同剂量疫苗时，对10^4个，只和10^5个／只肿瘤细胞造模小鼠，第0、5天免疫组肿瘤复发数少于第5，8天免疫组（1／10，4／10VS8／10，7／10）。结论PK—HPV—ads疫苗能诱导小鼠产生特异性的免疫应答，对抗肿瘤复发有治疗潜力。

关键词：乳头状瘤病毒疫苗腺病毒疫苗免疫应答抗肿瘤作用

人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗酶联免疫检测法的建立及其应用

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中国现代应用药学 2015年第1期32卷 10-14页

作者：李剑波潘海桦姜云水吴洁陈刚高孟金素凤吴小红包佳源陈科达庄昉成浙江省医学科学院病毒病研究所杭州310013 浙江普康生物技术有限公司杭州310013

目的建立人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗（HPV16 L2E6E7）酶联免疫的检测方法,用于疫苗发酵过程中的重组蛋白表达的监控。方法用常规方法制备兔抗HPV16 L2E6E7多克隆抗体作为包被抗体,商品化小鼠抗HPV16 E7单克隆抗体为检测抗体,夹心ELISA方... 详细信息

目的建立人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗（HPV16 L2E6E7）酶联免疫的检测方法,用于疫苗发酵过程中的重组蛋白表达的监控。方法用常规方法制备兔抗HPV16 L2E6E7多克隆抗体作为包被抗体,商品化小鼠抗HPV16 E7单克隆抗体为检测抗体,夹心ELISA方法检测HPV16 L2E6E7抗原参考品,建立抗原标准曲线,确定线性范围及检测限,同时验证该方法的特异性。结果建立了检测HPV16 L2E6E7抗原含量的夹心ELISA方法,抗原参考品系列浓度在19.53~1 250 ng·m L-1内有很好的线性（R2〉0.99）和回收率（90%~110%）;特异性好,不受发酵液中宿主菌蛋白的干扰。结论建立了人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗重组抗原含量的测定方法,为该疫苗的发酵工艺的质控提供了有效技术手段。

关键词：人乳头瘤病毒16型酶联免疫吸附检测重组蛋白抗体

人本主义视角下的儿童心理行为问题与家庭教育

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潍坊学院学报 2018年第3期18卷 100-102页

作者：王金素孙丽丽潍坊学院山东潍坊261061 寿光市凤华小学山东寿光262700

心理行为问题不但影响儿童的生活质量,而且影响儿童的身心健康发育,诸多研究发现,儿童的心理行为问题与家庭教育关系非常密切。儿童心理行为问题产生的原因是儿童多种合理的需求没有获得满足,自我成长的潜能受到了压抑。在家庭教育中家... 详细信息

心理行为问题不但影响儿童的生活质量,而且影响儿童的身心健康发育,诸多研究发现,儿童的心理行为问题与家庭教育关系非常密切。儿童心理行为问题产生的原因是儿童多种合理的需求没有获得满足,自我成长的潜能受到了压抑。在家庭教育中家长要解决儿童心理行为问题,其关键是建立良好的亲子关系,并在此基础上协助孩子成长。

关键词：人本主义儿童心理行为问题家庭教育

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乳腺癌大小和转移超声征象与预后相关性分析

河北医科大学学报 2011年第2期32卷 220-222页

作者：金素娟陈峥谢小红陈雅梅刘凤孙泉浙江省中医院B超室浙江杭州310006

目的探讨乳腺癌大小和转移超声征象与预后相关性。方法对32例乳腺癌患者的高频彩色超声、手术病理和预后资料进行整理分析。结果局部转移的患者术前肿块≥2cm者13例,而未发生局部转移的患者中肿块>2cm者6例。局部转移患者的乳腺癌大小... 详细信息

目的探讨乳腺癌大小和转移超声征象与预后相关性。方法对32例乳腺癌患者的高频彩色超声、手术病理和预后资料进行整理分析。结果局部转移的患者术前肿块≥2cm者13例,而未发生局部转移的患者中肿块>2cm者6例。局部转移患者的乳腺癌大小明显大于没有局部转移的患者(P<0.05)。乳腺癌大小和转移超声征象与预后存在很大相关性,乳腺癌越大,淋巴结发生转移所导致的患者病死率越高(P<0.05)。结论乳腺癌大小和淋巴结转移与预后有很强的相关性,应加强超声的检查与诊断。

关键词：乳腺肿瘤超声检查预后

治疗宫颈癌的人乳头瘤病毒16型疫苗动物免疫效果的初步研究

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治疗宫颈癌的人乳头瘤病毒16型疫苗动物免疫效果的初步研究

氢氧化铝对人乳头瘤病毒16型L2E6E7融合蛋白免疫增强作用的初步研究

浙江省医学会医学微生物与免疫学及医学病毒学学术年会

作者：庄昉成陈刚姜云水吴洁高孟李剑波陈科达陈悦青毛江森金素凤毛子安浙江省医学科学院浙江省医学生物工程疫苗研发重点实验室浙江普康生物技术股份有限公司

高危型HPV感染与宫颈癌的发生密切相关,发展能有效治疗重度HPV感染和宫颈癌术后免疫治疗的新型疫苗己成为使用生物技术预防和治疗宫颈癌的重要发展方向。本课题组承担的国家863项目其目标是研制用于HPV16病毒持续感染和宫颈癌术后免疫...

高危型HPV感染与宫颈癌的发生密切相关,发展能有效治疗重度HPV感染和宫颈癌术后免疫治疗的新型疫苗己成为使用生物技术预防和治疗宫颈癌的重要发展方向。本课题组承担的国家863项目其目标是研制用于HPV16病毒持续感染和宫颈癌术后免疫治疗的联合疫苗。发展我国预防与治疗宫颈癌的人乳头瘤病毒疫苗,是真正可产业化的治疗肿瘤的疫苗,具有巨大的应用市场。

关键词：

来源： cnki会议评论

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国际流行病学传染病学杂志 2013年第3期40卷 -页

作者：吴小红吴洁陈刚金素凤高孟陈科达姜云水李剑波罗永能浙江省医学科学院病毒病研究所杭州310053

目的初步评价Al(OH)3对重组HPV16的L2E6E7融合蛋白(简称HPV16L2E6E7)的免疫佐剂作用.方法将108只雌性C57BL/6小鼠随机分成Al(OH)3组(85.7 μg/只,肌肉注射)、HPV16L2E6E7组(120.0μg/只,肌肉注射)、A1 (OH)3+HPV16L2E6E7组[每只 Al(OH)3 85.7μg+HPV16L2E6E7120.0μg,肌肉注射],每组36只,免疫程序为0、3、7d.ELISPOT法检测IFN-γ,间接ELISA法检测IgG抗体水平.另将40只皮下接种TC-1肿瘤细胞(1×104/只)的雌性C57BL/6小鼠随机分为PBS组(100.0 μL)、Al (OH)3组(85.7μg/只,肌肉注射)、HPV16L2E6E7组(120.0μg,/只,肌肉注射)、Al(OH)3+ HPV16L2E6E7组[每只Al(OH)385.7μg+HPV16L2E6E7 120.0μg,肌肉注射],每组10只.免疫程序为0、3、7d.观察肿瘤形成时间、体积变化及成瘤率,观察期为53 d.结果免疫后第10、14、21、28、35和42d,HPV16L2E6E7组与Al(OH)3+HPV16L2E6E7组IgG抗体滴度都高于Al(OH)3对照组,差异具有统计学意义(P均＜0.01),免疫后21、28、35、42 d Al(OH)3+ HPV16L2E6E7组特异性IgG抗体显著高于HPV16L2E6E7组(P均＜0.01);免疫后14、21、28d Al(OH)3+ HPV16L2E6E7组E7特异性IFN-γ水平显著高于HPV16L2E6E7组(P均＜0.01);小鼠抑瘤实验中,HPV16L2E6E7组抑瘤率为60％,Al(OH)3+ HPV16L2E6E7抑瘤率为40％,两组无明显差异(P＞0.05),但与对照组比较都有显著性差异(P＜ 0.01,P＜0.05).结论初步评价Al(OH)3能与HPV16L2E6E7较好吸附,可诱导C57BL/6雌性小鼠产生更强的特异性体液和细胞免疫应答,具有免疫增强作用.

关键词：人乳头瘤病毒16 融合蛋白氢氧化铝免疫佐剂