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黏膜上皮细胞:病毒侵染与机体免疫的初始交汇处

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生命科学 2016年第2期28卷 248-257页

作者：鄢慧民中国科学院武汉病毒研究所病毒学国家重点实验室黏膜免疫学科组武汉430071

黏膜上皮细胞构成了包括呼吸道、消化道、泌尿生殖道在内的一个广阔的黏膜界面。黏膜上皮细胞、免疫细胞、免疫分子共同组成黏膜相关淋巴组织,构成了一个完整的黏膜免疫防御系统。黏膜上皮细胞通常是病毒感染的初始靶细胞。大多数DNA和... 详细信息

黏膜上皮细胞构成了包括呼吸道、消化道、泌尿生殖道在内的一个广阔的黏膜界面。黏膜上皮细胞、免疫细胞、免疫分子共同组成黏膜相关淋巴组织,构成了一个完整的黏膜免疫防御系统。黏膜上皮细胞通常是病毒感染的初始靶细胞。大多数DNA和RNA病毒都能直接感染黏膜上皮细胞。黏膜上皮细胞在病毒复制过程中可通过各种模式识别受体感应病毒的病原相关分子模式,从而识别病毒,并启动抗病毒固有免疫应答。近10年来,巨噬细胞炎症小体和caspase-1信号通路激活及其相应的抗感染效应成为固有免疫研究一个热点。病原相关分子模式被巨噬细胞识别,启动形成不同类型的炎症小体,激活caspase-1信号通路,诱导炎性细胞因子IL-1β和IL-18产生,造成细胞焦亡。对巨噬细胞炎症小体的研究,加深了人们对固有免疫的理解,促进了免疫识别、免疫信号转导、免疫应答、免疫调节、免疫病理等各个方面的研究。与固有免疫细胞一样,黏膜上皮细胞具有自身特征性的模式识别受体表达和分布。黏膜上皮细胞通过模式识别受体识别病毒病原相关分子模式,并激活NF-κB信号通路,产生炎性细胞因子、I型和III型干扰素,实现快速的炎性应答和发挥抗病毒作用。黏膜上皮细胞的这种快速应答释放出的各类细胞因子共同招募、激活和协调固有免疫细胞发挥固有免疫应答,并进一步调节、诱导特异性免疫细胞产生特异性抗体和T细胞应答。可见,黏膜上皮细胞是病毒侵染与机体免疫的一个最初的重要交汇处。在这个初始交汇处,黏膜上皮细胞不仅对局部黏膜免疫应答起作用,而且对系统免疫应答起着决定性调节作用。然而,黏膜上皮细胞对病原相关分子模式的识别以及相关炎症通路的激活尚处于启蒙时期。黏膜上皮细胞与炎症小体的关系值得进一步研究。新发现的III型干扰素及其在黏膜上皮细胞的独特表达分布,以及其在固有免疫应答中的抗病毒功能近年逐渐得到关注,详细机制需深入研究。此外,黏膜上皮细胞还是黏膜免疫应答特异效应因子Ig A抗体分泌和发挥功能的平台。Ig A特异性抗病毒功能,尤其是Ig A独特的上皮细胞内中和病毒复制的功能机制值得进一步探讨。现将概述病毒入侵黏膜上皮细胞并起始病毒复制过程,以及黏膜上皮细胞识别病毒感染启动固有免疫应答,调节特异免疫应答的研究进展,并探讨部分研究的交叉前沿。

关键词：黏膜上皮细胞病毒感染模式识别受体病原相关分子模式固有免疫应答干扰素黏膜免疫应答 Ig A抗体抗病毒机制

Bph3在栽培稻和药用野生稻中的BAC-FISH比较物理定位(英)

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Acta Botanica Sinica 2002年第5期44卷 583-587页

作者：鄢慧民覃瑞金危危何光存宋运淳武汉大学植物发育生物学教育部重点实验室武汉430072

用栽培稻 (OryzasativaL .)遗传图第四连锁群中与抗褐稻虱基因Bph3紧密连锁的RFLP标记RZ6 9及筛选出来的BAC克隆 38J9作探针 ,对药用野生稻 (O .officinalisWellexWatt)和栽培稻荧光原位杂交 ,供试标记RZ6 9及38J9均被定位于药用野生稻... 详细信息

用栽培稻 (OryzasativaL .)遗传图第四连锁群中与抗褐稻虱基因Bph3紧密连锁的RFLP标记RZ6 9及筛选出来的BAC克隆 38J9作探针 ,对药用野生稻 (O .officinalisWellexWatt)和栽培稻荧光原位杂交 ,供试标记RZ6 9及38J9均被定位于药用野生稻和栽培稻第 4染色体的短臂上 ,药用野生稻杂交信号的百分距分别为 2 2 .12± 3.4 4和2 0 .0 0± 5 .4 0 ,而栽培稻均为 0。在栽培稻中 ,信号检出率相应地为 6 .2 9%和 5 6 .10 % ,在药用野生稻中则为 6 .14 %和 5 0 .0 0 %。BAC克隆和RFLP标记探针杂交信号的百分距十分接近 ,说明在栽培稻和野生稻中RFLP标记RZ6 9都在同一BAC克隆的大插入片段中。由此推知 ,药用野生稻与抗性基因Bph3的同源顺序就在第 4染色体信号出现的相应位置。在未封阻的情况下 ,药用野生稻的BAC杂交在多条染色体上具有信号 ,这表明它和栽培稻的Cot_1DNA重复顺序也在一定程度上具有同源性。药用野生稻第 4染色体是根据栽培稻与药用野生稻的比较遗传图选用与Gm_6连锁的RG2 14通过FISH确定的。讨论了栽培稻BAC克隆对药用野生稻比较原位杂交物理作图的可行性问题。

关键词： Bph3 栽培稻药用野生稻 BAC-FISH 比较物理定位

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遗传学实验教程

遗传学实验教程

染色体定位两个与玉米大斑病抗性基因Ht1连锁的RFLP标记

2004年

作者：王建波方呈祥鄢慧民章志宏编

遗传学是一门实验性学科，实验操作在教学中起着重要作用。根据遗传教学内容和要求，本书选择编写了49个实验项目，涵盖经典遗传学，如关于模式动物果蝇的多项实验等；细胞遗传学，如数分裂中染色体行为的观察、动植物有丝分裂染色体标... 详细信息

遗传学是一门实验性学科，实验操作在教学中起着重要作用。根据遗传教学内容和要求，本书选择编写了49个实验项目，涵盖经典遗传学，如关于模式动物果蝇的多项实验等；细胞遗传学，如数分裂中染色体行为的观察、动植物有丝分裂染色体标本制备等；微生物遗传学，如细菌的诱发突变、转化、转导等；分子遗传学，如细胞核及细胞器DNA的提取、利用分子标记分析植物的遗传多样性等领域。本书可作为综合性大学、师范院校、农林院校、医学院校等生命等学领域本科生遗传学实验教材。

关键词：遗传学实验高等学校教材

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Acta Botanica Sinica 1998年第12期40卷 1093-1097页

作者：李立家宋运淳鄢慧民刘立华武汉大学生命科学学院

以玉米（ＺｅａｍａｙｓＬ．）黄早四自交系为材料，采用生物素标记的染色体原位杂交技术，对与大斑病抗性基因Ｈｔ１紧密连锁的两侧两个ＲＦＬＰ标记ｕｍｃ２２和ｕｍｃ１２２进行了定位。结果表明，ｕｍｃ２２和ｕｍｃ１２２探针都同... 详细信息

以玉米（ＺｅａｍａｙｓＬ．）黄早四自交系为材料，采用生物素标记的染色体原位杂交技术，对与大斑病抗性基因Ｈｔ１紧密连锁的两侧两个ＲＦＬＰ标记ｕｍｃ２２和ｕｍｃ１２２进行了定位。结果表明，ｕｍｃ２２和ｕｍｃ１２２探针都同时与第２号和第７号染色体杂交，而且，ｕｍｃ２２也和第４号染色体杂交。这些结果反映了这两个ＲＦＬＰ标记的二重或三重分布。两探针平均信号检出率分别为２０４２％和１４４９％。ｕｍｃ２２和ｕｍｃ１２２在第２号染色体长臂上杂交信号与着丝粒的百分距离分别为５８３６±３．１９和６１０２±４３２；在第７号染色体长臂上杂交信号与着丝粒的百分距离分别为４４７０±２．１１和４５１９±２２７。这些结果表明，ｕｍｃ２２和ｕｍｃ１２２在第２号染色体上的物理图的相对位置与遗传图的相对位置相符，彼此间都相距很近，两个标记在第２号和第７号染色体的重复是连在一起发生的。由此推断，Ｈｔ１除位于第２号染色体ｕｍｃ２２和ｕｍｃ１２２之间的位置外。

关键词：原位杂交 RFLP标记玉米抗大斑病基因

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遗传学实验

遗传学实验

水稻Xa21基因在水稻和玉米中的比较物理定位

1994年

作者：鄢慧民袁文静

本书共收实验52个,分为两部分,第一部分:减数分裂、三点试验、基因突变;第二部分:各种DNA的提取纯化及分析、电泳技术、层析技术等。

关键词：遗传学实验教材

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Acta Botanica Sinica 1999年第3期41卷 249-253页

作者：鄢慧民宋运淳李立家李霞付彬英武汉大学发育生物学研究中心

比较基因组分析证明，禾本科不同种基因组间存在广泛的同线性和共线性。对水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）这一模式植物与其它禾本科植物基因的原位杂交比较定位可以揭示禾本科植物基因组结构的共同特点和进化规律。利用含Ｘａ２１... 详细信息

比较基因组分析证明，禾本科不同种基因组间存在广泛的同线性和共线性。对水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）这一模式植物与其它禾本科植物基因的原位杂交比较定位可以揭示禾本科植物基因组结构的共同特点和进化规律。利用含Ｘａ２１基因的ｐＢ８２２作探针筛选水稻的细菌人工染色体（ＢＡＣ）文库，建立了一个包含３个ＢＡＣ克隆的重叠群。用生物素标记其中一个ＢＡＣ克隆，对水稻“广陆矮４号”和玉米自交系黄早四进行了染色体荧光原位杂交。同时，用ｐＢ８２２也作了原位杂交检测。在水稻第１１染色体长臂中间检出了杂交信号，信号与着丝粒的百分距离约为２４。在玉米的第１、３和第８染色体长臂观察到杂交信号，表明玉米基因组中具有三个Ｘａ２１的同源序列座位。ＢＡＣＦＩＳＨ的信号检出率达在４０％以上，大大高于质粒探针ｐＢ８２２的检出率（１５％），而且可在同源染色体和姊妹染色单体上同时检出杂交信号的比例较高，证明了利用ＢＡＣ克隆荧光原位杂交进行比较物理定位的可行性和优越性。在ＢＡＣＦＩＳＨ中必须用相应基因组的ＣｏｔⅠＤＮＡ封阻，以排除重复序列的干扰。

关键词：水稻 FISH Xa21 比较物理定位

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加强遗传学实验教学，注重学生能力培养

实验技术与管理 1999年第2期16卷 76-80页

作者：鄢慧民宋文贞武汉大学生命科学学院

重视实验教学，从实验教学环境，实验教学内容、教学方法、教材体系、教学日历安排等各个环节，都做到精心组织，认真准备，使学生的能力得到全面的培养和提高。

关键词：生命科学遗传变异能力培养实验教学

SARS-CoV S蛋白的原核表达及其粘膜免疫效应

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武汉大学学报（理学版） 2006年第6期52卷 733-738页

作者：罗君毅盖伟伟雷磊涂浩波鄢慧民武汉大学生命科学学院/病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

SARS冠状病毒（SARS-CoV）的S（Spike）蛋白是病毒表面最主要的膜蛋白，在病毒的感染过程中起重要作用，是冠状病毒的主要抗原．以SARS冠状病毒的cDNA为模板，通过PCR得到S△1（151～1200bp）、S△2（1201～2250bp）和S△3（2251～3150b... 详细信息

SARS冠状病毒（SARS-CoV）的S（Spike）蛋白是病毒表面最主要的膜蛋白，在病毒的感染过程中起重要作用，是冠状病毒的主要抗原．以SARS冠状病毒的cDNA为模板，通过PCR得到S△1（151～1200bp）、S△2（1201～2250bp）和S△3（2251～3150bp）3段基因序列，克隆到表达载体pET-32a，在大肠杆菌BL21中诱导表达得到包涵体蛋白，经Western blot检测正确后，将此作为抗原以滴鼻和腹腔注射两种小同的途径免疫BALB／c雌性小鼠，3次免疫之后采集小鼠的血清和肺洗液，经酶联免疫吸附实验（enzyme—linked immunosorbent assay，ELISA）检测其中的抗体IgG和IgA．结果表明S蛋白通过滴鼻途径既能刺激产生一定的血清IgG，更能诱导肺粘膜产生特异IgA抗体．进一步比较分析发现，诱导粘膜免疫的效应区域主要位于S△2（401～750aa）蛋白区段．

关键词： SARS-CoV S蛋白粘膜免疫效应滴鼻免疫

SARS-CoV感染Vero E6细胞诱导细胞凋亡

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中国病毒学 2003年第6期18卷 541-543页

作者：鄢然沈超雷磊郑从义肖庚富郭德银朱应鄢慧民武汉大学生命科学学院湖北武汉430072

为了确定SARS冠状病毒(SARS-CoV)感染Vero E6是否引起细胞凋亡,我们利用细胞DNA琼脂糖电泳,感染细胞的间接荧光染色和Hoechst 33258细胞核染色,以及流式细胞仪分析等方法证明了SARS-CoV感染的Vero E6具有典型的凋亡细胞学和生物化学特... 详细信息

为了确定SARS冠状病毒(SARS-CoV)感染Vero E6是否引起细胞凋亡,我们利用细胞DNA琼脂糖电泳,感染细胞的间接荧光染色和Hoechst 33258细胞核染色,以及流式细胞仪分析等方法证明了SARS-CoV感染的Vero E6具有典型的凋亡细胞学和生物化学特征。实验证明具有细胞凋亡特征的所有细胞均为处于感染晚期的细胞。表现明显细胞病变(CPE)的细胞大多已经出现核质凝缩或形成凋亡小体进入细胞凋亡的过程。可以断定SARS-CoV感染Vero E6细胞诱发了细胞凋亡。

关键词： SARS冠状病毒细胞凋亡 VeroE6细胞生物化学特征