检索结果-南通市图书馆

作者：都田赵中国医科大学

学位级别：硕士

目的:宫颈癌(Cervical cancer,CC)是世界范围内最常见的妇科肿瘤之一,高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,HR-HPV)持续感染已被证实是其组织发生和进展的重要致病因素。近年来,随着HPV预防疫苗的广泛应用,CC的一级预防... 详细信息

目的:宫颈癌(Cervical cancer,CC)是世界范围内最常见的妇科肿瘤之一,高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,HR-HPV)持续感染已被证实是其组织发生和进展的重要致病因素。近年来,随着HPV预防疫苗的广泛应用,CC的一级预防取得了一定的成效,其发病率和死亡率在许多发达国家得到了有效控制。然而,较高的HPV感染率和较低的CC发病率,这不仅使CC筛查和初级预防成为卫生经济学的沉重经济负担,也提示个体遗传和免疫状态差异等重要因素是CC进展的重要因素。因此,探索CC发生的分子机制,寻找潜在的治疗靶点是十分必要的。研究证实,人类基因组只有不到2%的核苷酸序列编码蛋白质,而其余的大多数基因被转录成非编码RNA。近年来,随着RNA测序技术和生物信息学的发展,环状RNA(Circular RNA,circRNA)成为继微小RNA(microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)之后的又一疾病研究的热点。与传统的线性结构的miRNA和lncRNA不同,circRNA是一个共价键闭合的连续环。circRNA由于缺少3’、5’端和多聚A尾,可以避免外切酶和RNase R的降解作用。与线性RNA相比,circRNA保守稳定,具有细胞特异性、组织特异性和阶段特异性。目前,对circRNA生物学功能的研究还处于探索阶段。研究者已经证实circRNA作为竞争性内源性RNA(competitive endogenous RNAs,ceRNAs),即miRNA海绵,调控靶基因的表达。它们也可以作为转录调节剂或蛋白结合RNA,甚至可以在特定情况下直接翻译成蛋白质。许多潜在的circRNA分子标记物及其通路作为miRNA海绵已经在许多肿瘤中被发现,包括食管鳞癌、胃癌、胰腺导管腺癌、肝癌、结肠直肠癌、早期肺腺癌、胶质瘤和卵巢癌。然而,circRNA的表达谱及circRNA在宫颈癌发生中的作用仍不清楚。课题组前期工作明确了circRNA在宫颈癌中的表达谱,并证实了circRNA circTPCN在宫颈癌组织中高表达。本项目在前期工作的基础上,研究circTPCN对宫颈癌细胞系Hela细胞生物学行为的影响及其作用机制。研究方法:利用生物信息学检索方法预测circTPCN的干扰序列,化学合成siircTPCN(1)、siircTPCN(2)、无关序列sic以及带有FAM荧光的无关序列sicAM。利用转染试剂将上述序列瞬时转染人宫颈癌细胞系Hela细胞。转染后,荧光性显微镜下观察转染sicAM干扰序列的转染效率。转染48小时后,TRIzol法提取总RNA,检测RNA浓度及纯度后,逆转录为cDNA。逆转录PCR条件为:退火:25℃,5min;延伸:42℃,60min;70℃,15min;4℃保存。用circTPCN的特异引物及SYBR Green I荧光染料进行定量PCR检测,所用内参为18S。用miR-634、miR-195-5p、miR-455-3p的特异引物及SYBR Green I荧光染料进行定量PCR检测,所用内参为U6。荧光定量PCR反应条件为:95℃5 min;95℃15s;60℃60 s,共45个循环。CircRNA相对定量采用2法。2=2-(ΔCt siNA-ΔCt sic)),ΔCt siNA=siNA组Ct值的均值-对应内参18S或U6的Ct值的均值,ΔCt sic=sic组Ct值的均值-对应内参18S或U6的Ct值的均值,并将sic组的相对表达量定为1,计算环状RNA的表达差异;转染后24小时,收取细胞,用细胞计数板计数转染干扰序列后的细胞数,进行增殖能力检测实验Hela细胞的增殖情况;转染后24小时,向转染体系中加入MTS试剂,孵育后利用酶标仪检测Hela细胞的增殖能力变化;转染后48小时,收集细胞,用Annexin V/FITC和PI试剂对各组细胞进行染色,孵育后,用流式细胞仪检测各组Hela细胞的凋亡情况。转染24小时后,进行细胞划痕实验。对孔板内转染后Hela细胞进行多条划痕并去除上清,用PBS清洗三遍,加入无血清培养基培养,在不同时间点对划痕变化进行观察;转染24小时后,收集细胞接种至Transwell小室内,上室为无血清培养体系,下室为高血清培养体系,培养24小时后,镜下计数各组穿膜细胞数,检测细胞的侵袭能力变化。结果:瞬时转染转染效率为27.5pmol组:87.5%;55pmol组:91.3%;110pmol组:93.5%。干扰序列物质的量确定为12孔板中55pmol/孔。MTS检测结果与细胞计数结果显示siircTPCN(1)组Hela细胞的生长能力低于sic对照组,差异有统计学意义。干扰序列siircTPCN(1)转染H

关键词： circTPCN 宫颈癌 Hela 生物学行为 miR-634 mTOR

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CircRALB对宫颈癌细胞株Hela细胞生物学行为影响的研究

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微生物学杂志 2019年第4期39卷 52-57页

作者：都田赵王雪莲中国医科大学病原生物学教研室

探讨circRALB对宫颈癌细胞株Hela细胞生物学行为的影响。化学合成circRALB干扰序列si_RALB以及无关序列si_nc,瞬时转染Hela细胞。荧光定量PCR法检测干扰序列si_RALB对Hela细胞中circRALB表达的影响;细胞计数、MTS法、流式细胞术、细胞... 详细信息

探讨circRALB对宫颈癌细胞株Hela细胞生物学行为的影响。化学合成circRALB干扰序列si_RALB以及无关序列si_nc,瞬时转染Hela细胞。荧光定量PCR法检测干扰序列si_RALB对Hela细胞中circRALB表达的影响;细胞计数、MTS法、流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验检测circRALB对Hela细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。结果显示,瞬时转染效率为(89.67±3.1)%。干扰序列si_RALB转染Hela细胞,circRALB表达量为si_nc组的(47.3±1.5)%,差异有统计学意义;si_RALB转染组细胞增殖活性明显低于si_nc对照组,差异有统计学意义;si_RALB转染组细胞凋亡率为(9.17±1.17)%,si_nc对照组细胞凋亡率为(7.2±0.32)%,空白对照组细胞凋亡率(5.63±0.31)%,尽管si_RALB细胞凋亡率大于si_nc对照组细胞凋亡率,但差异无统计学意义;si_RALB转染组与si_nc转染组相比,划痕间距缩小不明显;si_RALB转染组Hela细胞穿膜数为(21.33±2.19)个,显著低于si_nc组(45.33±1.76)个和空白对照组(52±1.53)个。化学合成的circRALB干扰序列转染Hela细胞后,能显著降低细胞中circRALB的表达量。CircRALB表达下调可显著抑制宫颈癌细胞系Hela细胞的增殖、迁移和侵袭能力,但对其凋亡无明显影响。结果提示CircRALB的表达与宫颈癌细胞的生物学行为有关,可能成为有效的宫颈癌治疗靶标。

关键词： circRALB 宫颈癌 Hela 生物学行为

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NK细胞表面Fcγ受体3A的基因多态性对NK细胞功能的影响

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中国医科大学学报 2017年第5期46卷 439-443页

作者：孙舒岚李晓曦苏楠都田赵张桂荣中国医科大学肿瘤医院、辽宁省肿瘤医院中心实验室沈阳110042

目的研究自然杀伤细胞(NK)表面Fcγ受体3A(FCGR3A)的基因多态性对NK细胞功能的影响。方法取患者外周血,利用实时PCR方法确定FCGR3A基因型,在曲妥珠单抗刺激下进行体外培养。检测各基因型的NK细胞扩增倍数。同时检测NK细胞表面活化受体... 详细信息

目的研究自然杀伤细胞(NK)表面Fcγ受体3A(FCGR3A)的基因多态性对NK细胞功能的影响。方法取患者外周血,利用实时PCR方法确定FCGR3A基因型,在曲妥珠单抗刺激下进行体外培养。检测各基因型的NK细胞扩增倍数。同时检测NK细胞表面活化受体表达及其ADCC活性。结果体外在曲妥珠单抗刺激下,FCGR3A野生型患者的NK细胞扩增倍数是变异型的8倍左右。NK细胞活化受体表达及体外ADCC活性均高于变异型患者。结论体外实验结果表明FCGR3A的基因多态性影响NK细胞功能及对单克隆抗体的应答水平。

关键词：自然杀伤细胞 FCGR3A 基因多态性曲妥珠单抗

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两种培养袋对细胞因子诱导的杀伤细胞分化增殖作用的比较

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中国生物制品学杂志 2018年第1期31卷 24-27页

作者：都田赵苏楠孟一鸣陈诗张桂荣中国医科大学肿瘤医院辽宁省肿瘤医院辽宁沈阳110042

目的比较两种不同品牌培养袋对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)分化增殖效果的影响,为CIK细胞扩增培养方法提供依据。方法采集10例肿瘤患者静脉血,分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),采用CI... 详细信息

目的比较两种不同品牌培养袋对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)分化增殖效果的影响,为CIK细胞扩增培养方法提供依据。方法采集10例肿瘤患者静脉血,分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),采用CIK培养方案进行诱导培养,分别使用A、B两种培养袋扩增同一来源细胞。培养14 d后检测细胞终浓度、细胞活率,流式细胞术分析细胞表型。结果同一患者细胞使用A、B两种培养袋扩增14 d,B组总细胞数和活细胞数均显著高于A组(P均0.05);B组CD3+CD8+CD56+表型细胞比率显著大于A组(P<0.05)。结论 B培养袋培养细胞的增殖倍数大于A培养袋,B培养袋较A培养袋有更好的CIK细胞扩增效果。

关键词：细胞因子诱导的杀伤细胞细胞培养培养袋细胞增殖细胞分化

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WAVE生物反应器应用于CIK细胞培养

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中国肿瘤生物治疗杂志 2017年第6期24卷 670-674页

作者：孟一鸣苏楠孙舒岚于志福李晓曦都田赵张桂荣中国医科大学肿瘤医院辽宁省肿瘤医院暨肿瘤研究所中心实验室辽宁沈阳110042 中国医科大学肿瘤医院辽宁省肿瘤医院暨肿瘤研究所流行病学研究室辽宁沈阳110042

目的:探讨利用波浪(WAVE)生物反应器培养扩增肿瘤患者CIK细胞的效能及其对肿瘤细胞的杀伤活性。方法:分离8例肿瘤患者外周血单个核细胞,分别采用CIK细胞传统扩增技术(CIK组)和WAVE反应器培养方案(WAVE组),应用锥虫蓝染色并进行细胞计数... 详细信息

目的:探讨利用波浪(WAVE)生物反应器培养扩增肿瘤患者CIK细胞的效能及其对肿瘤细胞的杀伤活性。方法:分离8例肿瘤患者外周血单个核细胞,分别采用CIK细胞传统扩增技术(CIK组)和WAVE反应器培养方案(WAVE组),应用锥虫蓝染色并进行细胞计数,利用流式细胞术比较两组CIK细胞的扩增效率、活化情况及其亚群的组成变化,并以K562细胞为靶细胞检测扩增后CIK细胞的杀伤活性。结果:WAVE组细胞增殖数较CIK组明显提高(P<0.05或P<0.01);在第14天,WAVE组CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+细胞亚群比例明显高于CIK组[(78.56±2.99)%vs(74.54±3.02)%,(48.33±7.01)%vs(40.69±6.43)%,均P<0.05],而Treg细胞比例显著降低(P<0.05);当效靶比为10∶1、20∶1时WAVE组扩增的CIK细胞对K562的杀伤率明显高于CIK组(P<0.05或P<0.01),CIK细胞中CD3^+CD8^+CD107a^+的比例明显升高[(29.43±4.97)%vs(25.19±4.91)%,P<0.05]。结论:WAVE生物反应器扩增培养体系获得的CIK细胞数量多、纯度高,其中CD3^+CD8^+和CD3^+CD56^+NKT细胞比例较高,其对K562肿瘤细胞的杀伤效果明显高于传统培养技术获得的CIK细胞。

关键词： WAVE生物反应器细胞因子诱导的杀伤细胞细胞培养体外扩增

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短壁块段式采煤覆岩隔水层失稳判别依据研究

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采矿与安全工程学报 2024年

作者：赵长政曹胜根张云都书禹车驰远中国矿业大学煤炭精细勘探与智能开发全国重点实验室西安科技大学能源学院

短壁块段式采煤技术作为新型绿色开采技术，在确保煤炭资源高效开采的同时，兼顾了水资源保护和生态环境修复，成为了保水采煤技术的重要组成部分。本文基于短壁块段式采煤工艺特点，建立了短壁块段式采煤覆岩力学模型，揭示了覆岩隔水... 详细信息

短壁块段式采煤技术作为新型绿色开采技术，在确保煤炭资源高效开采的同时，兼顾了水资源保护和生态环境修复，成为了保水采煤技术的重要组成部分。本文基于短壁块段式采煤工艺特点，建立了短壁块段式采煤覆岩力学模型，揭示了覆岩隔水层失效判别依据。根据覆岩运移特征以及隔水层破坏形式，确定了覆岩隔水层失效的主控因素，并研究了各主控因素下覆岩隔水层变形破坏规律。研究表明：随着保护煤柱宽度增加，可以显著降低保护煤柱区域的破坏程度；随着隔水层厚度增加，块段区域的破坏程度逐渐升高，而保护煤柱区域的破坏程度则相反。随着隔水层高度升高破坏程度随之降低；随着弹性模量的增加，块段区域的破坏程度逐渐升高，保护煤柱区域的破坏程度显著降低。以西北地区伊宁矿区某矿为分析实例，基于本文建立的隔水层阻水性能评价模型，确定了短壁块段式开采的最佳方案。

关键词：短壁块段式采煤力学模型主控因素评价模型

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润湿性梯度对仿生织构表面摩擦学行为的影响

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摩擦学学报（中英文） 2024年第3期44卷 300-311页

作者：王胡军谢正灿赵修远田炉林郑靖西南交通大学机械工程学院摩擦学研究所四川成都610031

润湿性调控和仿生织构设计是实现表面减摩耐磨的重要方法.利用飞秒激光在AISI 440C不锈钢表面制备了仿生微凹坑,在微凹坑中沉积润湿性可调的超疏水涂层,通过紫外线辐照构筑了4种梯度润湿性仿生织构表面.采用往复滑动摩擦磨损试验,以水... 详细信息

润湿性调控和仿生织构设计是实现表面减摩耐磨的重要方法.利用飞秒激光在AISI 440C不锈钢表面制备了仿生微凹坑,在微凹坑中沉积润湿性可调的超疏水涂层,通过紫外线辐照构筑了4种梯度润湿性仿生织构表面.采用往复滑动摩擦磨损试验,以水为润滑剂,对比研究了不同载荷和速度下润湿性梯度对仿生织构表面摩擦学行为的影响.结果表明,在低载高速条件下,当表面形成低黏附性超疏水-弱疏水的润湿性梯度时,耐磨性最佳,相较于AISI 440C不锈钢抛光表面,磨损率降低47.9%,说明润湿性梯度耦合仿生织构能够有效减小磨损.

关键词：润湿性梯度仿生织构水润滑耐磨飞秒激光

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原核表达载体GST-RUNX3的构建及其在大肠杆菌表达

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解剖科学进展 2011年第4期17卷 375-377页

作者：王桂玲王孝会都田赵陈薇姜佩家中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的构建GST/RUNX3融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法利用Kpn1和Xho1位点酶切pcDNA3.1-RUNX3质粒,将获得的1300bpRUNX3编码序列插入到pGEX-4T-2中,构建pGEX-4T-2-RUNX3质粒,并转化*** DH5α,筛选阳性重组子,酶切鉴... 详细信息

目的构建GST/RUNX3融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法利用Kpn1和Xho1位点酶切pcDNA3.1-RUNX3质粒,将获得的1300bpRUNX3编码序列插入到pGEX-4T-2中,构建pGEX-4T-2-RUNX3质粒,并转化*** DH5α,筛选阳性重组子,酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入BL21中,经IPTG诱导表达后SDS-PAGE电泳鉴定。结果酶切pGEX-4T-2-RUNX3质粒获得1300bpRUNX3片段,经测序后获得的DNA序列与GenBank进行同源性比对,证实pGEX-4T-2-RUNX3构建成功。在*** BL21用IPTG进行诱导表达后,SDS-PAGE电泳方法证实了GST-RUNX3融合蛋白表达。结论成功构建了RUNX3原核表达载体,其融合蛋白在大肠埃希菌表达,为进一步纯化RUNX3蛋白和研究RUNX3的生物学功能奠定了基础。

关键词： pGEX-4T-2-RUNX3质粒原核表达融合蛋白大肠埃希菌

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原核表达载体GST-RUNX3的构建及其在大肠杆菌中的表达

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解剖科学进展 2011年第3期17卷 284-286页

作者：王桂玲王孝会都田赵陈薇姜佩家中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室辽宁沈阳110001

目的构建GST/RUNX3融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-RUNX3为模板,通过Kpn1和Xho1酶切位点将RUNX3定向插入pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-RUNX3,并转化***5α,筛选阳性重组子,限制性内切... 详细信息

目的构建GST/RUNX3融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(***)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-RUNX3为模板,通过Kpn1和Xho1酶切位点将RUNX3定向插入pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-RUNX3,并转化***5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入***21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,鉴定。结果双酶切获得1300bp片段,证明RUNX3片段被成功导入pGEX-4T-2,并在测序后与GenBank进行同源性比对,比对进一步证实原核表达质粒pGEX-4T-2-RUNX3构建成功,并用IPTG诱导,SDS-PAGE方法证实了GST/RUNX3融合蛋白在大肠杆菌中的表达。结论成功构建了RUNX3原核表达载体,并证实了融合蛋白在大肠埃希菌中的表达,为进一步纯化RUNX3蛋白和研究RUNX3的生物学功能奠定了基础。

关键词：质粒原核表达融合蛋白

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基于维纳滤波的船载地波雷达海流反演方法

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现代雷达 2024年

作者：李晨田应伟赵久瑞王蕾自然资源部海洋环境探测技术与应用重点实验室国家海洋局南海信息中心武汉大学电子信息学院

在利用船载便携式高频地波雷达进行海洋探测过程中，由于海风、海浪的影响，平台难以保持稳定的航向。为了更准确地提取海流参数，有必要在海流反演过程中对平台偏航运动进行补偿处理。本研究基于阵列信号模型，推导了平台偏航运动条件... 详细信息

在利用船载便携式高频地波雷达进行海洋探测过程中，由于海风、海浪的影响，平台难以保持稳定的航向。为了更准确地提取海流参数，有必要在海流反演过程中对平台偏航运动进行补偿处理。本研究基于阵列信号模型，推导了平台偏航运动条件下回波信号的时频域表达式，提出一种基于维纳滤波反卷积的补偿方法。此外利用船载仿真和试验实测数据验证了该方法，结果表明：经过偏航运动补偿后雷达径向流估计误差降低了4.18cm/s，表明了这种海流反演方法的有效性。

关键词：船载雷达径向流反演偏航补偿维纳滤波

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