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EHD2通过EGFR调控细胞生物学功能研究

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EHD2通过EGFR调控细胞生物学功能研究

作者：郭立莎天津医科大学

学位级别：硕士

目的:表皮生长因子受体EGFR具有酪氨酸激酶活性,是一种重要的跨膜受体,是细胞生长、分化和存活的重要调节因子。EHD2蛋白是一类新型膜转运调控蛋白。前期研究工作显示,EHD2降表达使乳腺癌细胞EGFR总量下降,并抑制了乳腺癌细胞的生长和... 详细信息

目的:表皮生长因子受体EGFR具有酪氨酸激酶活性,是一种重要的跨膜受体,是细胞生长、分化和存活的重要调节因子。EHD2蛋白是一类新型膜转运调控蛋白。前期研究工作显示,EHD2降表达使乳腺癌细胞EGFR总量下降,并抑制了乳腺癌细胞的生长和迁移能力,但EHD2是否调控EGFR的转运和信号传导还不清楚。本课题将在应用宫颈癌Hela细胞为模型研究EHD2对EGFR的转运调控的基础上,进一步验证由此对细胞增殖、迁移、转化及成瘤性的影响,并初步检测EHD2在实体乳腺瘤中的表达和定位情况,以探讨EHD2以及它对EGFR的调控作用在肿瘤发生发展中的作用机制。方法:1.通过Western Blotting和免疫荧光技术分别验证内源性EHD2在Hela细胞中的表达和定位情况。2.建立稳定感染空载体,稳定感染EHD2降表达的Hela细胞。用Westem Blotting技术验证EHD2降表达效果及对EGFR表达情况的影响,并用有限稀释法获得EHD2蛋白表达下降明显的克隆。3.通过Western Blotting检测EHD2降表达后EGF刺激下Hela细胞EGFR的降解速率及EGFR,AKT的磷酸化水平。4.采用细胞计数法检测EHD2降表达对Hela细胞增殖能力的影响。5.趋化运动实验,探讨EHD2降表达对Hela细胞的运动能力影响。*** Agar实验,探讨EHD2降表达对Hela细胞克隆生长能力的影响。7.体内实验检测EHD2降表达对Hela细胞在SCID鼠体内成瘤能力的影响。8.用Western Blotting和免疫组化的方法检测EHD2在乳腺癌组织中的表达情况。结果:1 Hela细胞中EHD2有适度的表达,并且在核,浆,膜中均有定位。2应用siRNA经慢病毒体系感染Hela细胞后,Western检测EHD2蛋白表达明显下降,同时EGFR蛋白含量总体上下降。3 EHD2降表达后EGF刺激下Hela细胞EGFR的降解速率加快,EGFR在Tyrl068和AKT在Thr-308位点的磷酸化水平减弱。4 EHD2降表达后Hela细胞的增殖能力减弱(P<0.01)。5与对照组相比,EHD2降表达的Hela细胞的趋化运动能力明显减弱(P<0.01)。6与对照组相比,EHD2降表达的Hela细胞克隆生长能力减弱。7与对照组相比,EHD2降表达促进了 Hela细胞在SCID鼠中的生长。8 Western Blotting和免疫组化检测发现EHD2在正常乳腺组织中表达高于乳腺癌组织。结论:1.内源性EHD2负调控Hela细胞EGFR内吞并抑制随后的降解,而EHD2干扰表达可加快EGFR的内吞并使EGFR总量下降。2.细胞实验发现EHD2干扰对细胞功能(生长,定向迁移等)的影响与干扰后EGFR受体的表型一致,表明EGFR依赖的细胞主要功能可以通过EHD2来调节。***2降表达促进了 Hela细胞在SCID鼠中的生长,并且EHD2在乳腺癌组织中低表达。4.肿瘤的发生发展是受多因素影响的,EHD2的作用机制尚需进一步的研究。

关键词： EHD2 EGFR Hela 生物学功能

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双频激光测量系统测角误差分析

计量技术 2002年第9期 27-28页

作者：高媛郭立莎大连理工大学机械学院大连116024

定量分析双频激光测量系统测角误差。

关键词：双频激光测量系统误差分析角度测量精度分析原理

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EHD2调节乳腺上皮细胞极性的实验研究

中国肿瘤临床 2011年第11期38卷 608-611页

作者：郭立莎王洪玉吴敏徐玥董秋萍应国光天津医科大学附属肿瘤医院肿瘤研究所中心实验室乳腺癌防治教育部重点实验室天津市肿瘤防治重点实验室天津市300060

目的:研究EHD2基因对上皮细胞极性的调控作用及其机制,探讨EHD2基因在乳腺癌组织中表达失调的肿瘤分子生物学和细胞生物学意义。方法:以乳腺永生化正常上皮细胞的二维和三维培养为模型,建立EHD2突变体的Doxycycline外源诱导表达体系,应... 详细信息

目的:研究EHD2基因对上皮细胞极性的调控作用及其机制,探讨EHD2基因在乳腺癌组织中表达失调的肿瘤分子生物学和细胞生物学意义。方法:以乳腺永生化正常上皮细胞的二维和三维培养为模型,建立EHD2突变体的Doxycycline外源诱导表达体系,应用荧光显微镜和激光共聚焦显微成像技术,观察诱导表达前后细胞在二维培养条件下细胞内β肌动蛋白的微丝组装及聚合情况,以及三维基质胶培养条件下对上皮细胞腺泡形成的影响,综合判断EHD2蛋白在调控上皮细胞极性中的生物学作用。结果:EHD2突变的诱导表达显著影响乳腺上皮细胞的骨架重排,在细胞表面发生密集发散状微刺,细胞内定向排列的β肌动蛋白微丝结构消失。三维培养中,EHD2突变体的引入破坏了原本规则的腺泡型生长,细胞向外侵入基质。结论:EHD2突变可导致乳腺上皮细胞的骨架重排和极性改变,可能是乳腺肿瘤发生的重要机制之一。

关键词： EHD2 乳腺上皮细胞极性

EHD2干扰影响永生化乳腺上皮细胞的增殖和迁移

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中国肿瘤临床 2011年第11期38卷 601-604页

作者：王洪玉郭立莎吴敏徐玥董秋萍应国光天津医科大学附属肿瘤医院肿瘤研究所中心实验室乳腺癌防治教育部重点实验室天津市肿瘤防治重点实验室天津市300060

目的:研究EHD2膜转运调控蛋白对非癌乳腺上皮细胞HBL100生长、粘附和迁移等生物学行为的影响,揭示乳腺癌发生发展的新分子机制。方法:数据挖掘分析已公开的各组乳腺癌基因表达芯片结果中EHD2基因表达与乳腺肿瘤发生发展的关系。小RNA干... 详细信息

目的:研究EHD2膜转运调控蛋白对非癌乳腺上皮细胞HBL100生长、粘附和迁移等生物学行为的影响,揭示乳腺癌发生发展的新分子机制。方法:数据挖掘分析已公开的各组乳腺癌基因表达芯片结果中EHD2基因表达与乳腺肿瘤发生发展的关系。小RNA干扰永生化非癌乳腺上皮细胞HBL100的EHD2蛋白表达水平,免疫印迹法检测验证EHD2蛋白的降表达情况,并以此为模型研究EHD2干扰表达对细胞的增殖速度、粘附能力以及迁移能力等生物学行为的影响。结果:数据挖掘结果显示,EHD2基因在乳腺癌中的表达明显减弱,而且其表达水平随肿瘤病理分级的升高呈逐级下降趋势。HBL100细胞系小RNA干扰EHD2表达后,二维培养条件下的生长及EGF诱导下的迁移速度均升高,差异有统计学意义(P<0.005),但其粘附能力下降(P<0.05)。结论:EHD2参与调节永生化乳腺上皮细胞HBL100的生长、粘附和迁移。在乳腺肿瘤中EHD2的基因表达失调下降,提示EHD2可能是一个新的乳腺抑癌基因,并可能成为乳腺癌分子诊断和靶向治疗的新指标、新靶点。

关键词： EHD2 增殖粘附迁移乳腺癌

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对急诊患者进行心理护理干预的效果观察

当代医药论丛 2014年第17期12卷 96-97页

作者：林飞雪黄姗姗钟瑞郭立莎山东省滨州市滨州医学院附属医院急诊科山东滨州256600 山东省新泰市第二人民医院心血管科山东新泰271219 山东省济南市山东省精神卫生中心一病区山东济南250014

目的 :探讨对急诊科患者实行心理护理干预的效果。方法 :对2012年12月至2013年12月我院急诊科收治的200例患者的临床资料进行回顾性分析,将其随机分为治疗组和对照组,为对照组患者施行常规护理,在为治疗组患者施行常规护理的基础上进行... 详细信息

目的 :探讨对急诊科患者实行心理护理干预的效果。方法 :对2012年12月至2013年12月我院急诊科收治的200例患者的临床资料进行回顾性分析,将其随机分为治疗组和对照组,为对照组患者施行常规护理,在为治疗组患者施行常规护理的基础上进行心理护理,并对比分析其对护理服务的满意度及症状自评量表评分。结果 :治疗组患者对护理服务的满意度明显优于对照组患者,差异显著(p<0.01),有统计学意义。两组患者出现焦虑、抑郁、恐怖等不良情绪的评分、人际关系评分及对治疗的配合度相比较,差异显著(P<0.05),有统计学意义。结论 :为急诊科患者施行心理护理可显著改善其心理状态,消除其不良情绪,提高其对治护工作的配合度,此法值得在临床上推广应用。

关键词：急诊科心理护理临床研究

百草枯中毒患者核转录因子kB的变化及乌司他丁的干预作用

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滨州医学院学报 2016年第1期39卷 33-35页

作者：张金英郭立莎纪洪新滨州医学院附属医院急诊科滨州256603 滨州医学院附属医院体检中心

目的观察百草枯中毒患者血浆核转录因子κB(NF-κB)的变化,探讨乌司他丁对炎症介质的干预作用。方法以我院2010年10月至2015年6月急诊重症监护室(EICU)收治的存活>48h的136例急性百草枯中毒患者为研究对象,随机分为常规治疗组(69例)和... 详细信息

目的观察百草枯中毒患者血浆核转录因子κB(NF-κB)的变化,探讨乌司他丁对炎症介质的干预作用。方法以我院2010年10月至2015年6月急诊重症监护室(EICU)收治的存活>48h的136例急性百草枯中毒患者为研究对象,随机分为常规治疗组(69例)和乌司他丁组(67例)。常规治疗组为洗胃、导泻、早期血液灌流、抗氧化、免疫抑制剂冲击及对症支持治疗;乌司他丁组在常规治疗基础上早期加用乌司他丁。以体检中心30例查体的健康者为健康对照组。于48h抽取外周血测定NF-κB的活性,白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平,观察多脏器功能衰竭(MODS)的发生率,将两组结果进行比较。结果两组患者外周血测定NF-κB的活性,IL-6、TNF-α的水平均高于健康对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),乌司他丁组外周血测定NF-κB的活性,IL-6、TNF-α的水平低于常规治疗组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。常规治疗组MODS的发生率为56.65%,乌司他丁组MODS的发生率为34.33%,两组比较差异有统计学意义(χ2=5.891,P=0.031)。结论乌司他丁能够有效地抑制急性百草枯中毒中毒后炎症反应,保护重要脏器功能,降低死亡率。

关键词：百草枯中毒乌司他丁核转录因子κB 多脏器功能衰竭

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小RNA干扰PDK1抑制乳腺肿瘤细胞侵袭

中国肿瘤临床 2009年第12期36卷 697-700页

作者：吴敏吴静徐玥董秋萍王洪玉郭立莎张宁牛瑞芳应国光乳腺癌防治教育部重点实验室天津市肿瘤防治重点实验室天津医科大学附属肿瘤医院肿瘤研究所天津市300060

目的:在肿瘤侵袭转移的细胞和生物学机制中,包含有多种基因和信号传导通路的改变。PDK1是PI3K分子通路上的一个重要分子,为了研究PDK1对乳腺肿瘤细胞侵袭能力的影响,我们以乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究模型,用小RNA干扰法特异下调PDK1的... 详细信息

目的:在肿瘤侵袭转移的细胞和生物学机制中,包含有多种基因和信号传导通路的改变。PDK1是PI3K分子通路上的一个重要分子,为了研究PDK1对乳腺肿瘤细胞侵袭能力的影响,我们以乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究模型,用小RNA干扰法特异下调PDK1的表达,研究其侵袭能力的变化,为乳腺癌临床治疗探索新的分子靶点。方法:通过构建PDK1特异的小RNA干扰质粒,利用脂质体介导的方法转染乳腺癌细胞MDA-MB-231,无限稀释法筛选单克隆细胞系,并通过Western Blot的方法检测各组细胞中PDK1蛋白的表达水平,细胞计数的方法观察各组细胞之间的增殖情况,并利用Matrigel Transwell的实验方法研究细胞在体外的侵袭能力差别。结果:MDA-MB-231细胞经小RNA干扰后PDK1蛋白表达水平明显下降,与对照组相比,细胞的生长增殖能力没有显著差异(P>0.05),细胞的侵袭能力显著下降,并且差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MDA-MB-231是一种侵袭能力高的乳腺癌细胞系,本研究利用小RNA干扰技术,特异性下调了乳腺癌MDA-MB-231细胞中的PDK1蛋白表达,结果表明,乳腺癌细胞的生长能力与对照组的细胞相比没有明显差别,但是,PDK1蛋白表达水平下降后乳腺癌细胞的侵袭能力明显下降,提示我们PDK1可能与乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭能力肾密相关。鉴于PDK1处于PDK1-Akt-PKC信号通路的上游,以PDK1为靶标的分子干预可能对乳腺癌细胞的侵袭转移起到有效的作用。

关键词： PDK1 乳腺癌侵袭

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三伏贴防治慢性阻塞性肺疾病的Meta分析

广西中医药 2016年第4期39卷 76-80页

作者：林飞雪郑景辉钟美容郭立莎孙正钦易剑波广西中医药大学附属瑞康医院南宁市华东路10号530011 滨州医学院附属医院 256600 蒙阴县人民医院 276200

目的:系统评价三伏贴防治慢性阻塞性肺疾病(COPD)的临床疗效及安全性。方法:利用计算机检索中文科技期刊全文数据库(维普)、中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库、Pubmed、Embase医学文献检索全文数据库(各数据库检索时间均从建库起到... 详细信息

目的:系统评价三伏贴防治慢性阻塞性肺疾病(COPD)的临床疗效及安全性。方法:利用计算机检索中文科技期刊全文数据库(维普)、中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库、Pubmed、Embase医学文献检索全文数据库(各数据库检索时间均从建库起到2016年2月),同时检索相关文献的参考文献,并辅以手工检索相关会议论文和杂志等。收集有关三伏贴防治慢性阻塞性肺疾病的随机对照研究,并根据Cochrane Handbook推荐的文献质量评价办法对符合纳入标准的文献进行质量评价,应用Rev Man 5.3软件进行统计学处理。结果:最终纳入11个随机对照试验(randomized controlled trial,RCT),总计1 005例患者,包括三伏贴治疗组504例,对照组501例。Meta分析结果显示,在常规治疗基础上加用三伏贴治疗可提高COPD患者的治疗有效率[RR=6.24,95%CI(3.61~10.76)],提高FEV1/FVC指标[MD=3.22,95%CI(1.78~4.66)],圣乔治呼吸困难问卷(SGRQ)评分明显改善[MD=-5.52,95%CI(-9.32^-1.72)],BODE指数评分明显改善[MD=-0.69,95%CI(-1.14^-0.23)],与对照组比较差异均有统计学意义。所纳入研究共出现局部疱疹3例,色素沉着4例,均无肝肾功能损害。结论:目前有效的证据表明,应用三伏贴防治COPD可以提高临床疗效,但由于所纳入研究的文献质量不高,尚需要更多设计良好、规模较大的RCT研究进一步加以验证。

关键词：慢性阻塞性肺疾病三伏贴冬病夏治 Meta分析循证医学

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同轴旋转可压缩气流中黏性液体射流形态研究

内燃机学报 2024年第1期42卷 53-60页

作者：吕明郭立梅宁智北京交通大学机械与电子控制工程学院北京100044

采用射流线性稳定性分析方法,考虑液体黏性、周围气流的同轴旋转运动以及可压缩性的条件下,建立了描述同轴旋转可压缩气流中黏性液体射流的数学模型,并进行了验证,研究了气流量纲为1旋转强度以及流体物性对液体射流不稳定形态的影响.研... 详细信息

采用射流线性稳定性分析方法,考虑液体黏性、周围气流的同轴旋转运动以及可压缩性的条件下,建立了描述同轴旋转可压缩气流中黏性液体射流的数学模型,并进行了验证,研究了气流量纲为1旋转强度以及流体物性对液体射流不稳定形态的影响.研究表明:周围气流的旋转速度较小时,对射流起促稳作用,继续增大气流量纲为1旋转强度,开始对射流起促分裂作用;且随着气流旋转强度的增大,射流扰动沿周向方向发展,射流柱变的高度不对称.在研究参数范围内,气体可压缩性和气/液密度比均能促进射流的失稳,并会影响射流空间形态,尤其是在周向方向上能够改变射流的占优模式,增强射流的不对称性;液体黏性以及表面张力对射流均具有增强稳定性的作用.

关键词：液体射流气流旋转数学模型射流形态