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嗜热真菌Thermomyces lanuginosus热稳定几丁质酶基因的cDNA克隆及表达

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微生物学报 2006年第1期46卷 99-103页

作者：郭润芳李多川山东农业大学植保学院环境生物系

根据Thermomyces lanuginosus热稳定几丁质酶Chit的N-端氨基酸序列和同源保守序列设计简并引物,通过RT-PCR及快速扩增cDNA末端(RACE)的方法,克隆了该几丁质酶的编码基因chit,全长cDNA为1500bp,包含一个由442个氨基酸组成的开放阅读框。... 详细信息

根据Thermomyces lanuginosus热稳定几丁质酶Chit的N-端氨基酸序列和同源保守序列设计简并引物,通过RT-PCR及快速扩增cDNA末端(RACE)的方法,克隆了该几丁质酶的编码基因chit,全长cDNA为1500bp,包含一个由442个氨基酸组成的开放阅读框。该基因已在GenBank中注册,登录号为DQ092332。将成熟肽几丁质酶Chit阅读框与酵母表达载体pPIC9K连接,构建重组质粒pPIC9K/chit,转化毕赤酵母GS115,在甲醇的诱导下,成功地分泌出具生物活性的几丁质酶,诱导6d后酶活性达2.261U/mL,酶蛋白表达量为0.36mg/mL。该酶的最适反应温度和pH值分别为60℃和5.5,该酶在50℃以下稳定;65℃的半衰期为40min。

关键词：几丁质酶 RACE 同源性表达

一株嗜热毛壳菌β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性

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菌物学报 2004年第3期23卷 397-402页

作者：楚春雪李多川郭润芳山东农业大学环境生物系泰安271018

研究了液体发酵嗜热毛壳菌Chaetomium thermophile产生的β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性。粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子层析、Phenyl-Sepharose 疏水层析、Sephacryl S-100分子筛层析等步骤后获得凝胶电泳均一的... 详细信息

研究了液体发酵嗜热毛壳菌Chaetomium thermophile产生的β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性。粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子层析、Phenyl-Sepharose 疏水层析、Sephacryl S-100分子筛层析等步骤后获得凝胶电泳均一的β-葡萄糖苷酶。经12.5%SDS-PAGE和凝胶过滤层析方法分别测得该酶的分子量大小约为78.4kDa和81kDa。该酶反应的最适温度和pH值分别为60℃和4.5-5.0。有较好的酸稳定性和热稳定性。金属离子对β-葡萄糖苷酶的活性影响较大, 其中Ca2+对酶有激活作用, 而Ag+、Cu2+ 、Hg2+对酶有显著的抑制作用。该酶对水杨苷具有很强的底物特异性。

关键词： β-葡萄糖苷酶分离纯化嗜热真菌嗜热毛壳菌水杨苷

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高校专业基础课程“微生物学”思政案例设计

微生物学通报 2021年第5期48卷 1810-1814页

作者：郭润芳裴家伟林杨河北农业大学食品科技学院河北保定071000

为充分挖掘微生物学课程中的思政元素,发挥专业课程在立德树人方面的重要作用,本文对微生物学课程思政的设计理念和具体案例进行介绍,构建以微生物学知识为主体,以发展历史、名人故事、励志典故、日常生活等为素材,将专业知识和思政教... 详细信息

为充分挖掘微生物学课程中的思政元素,发挥专业课程在立德树人方面的重要作用,本文对微生物学课程思政的设计理念和具体案例进行介绍,构建以微生物学知识为主体,以发展历史、名人故事、励志典故、日常生活等为素材,将专业知识和思政教育融合,引导学生树立辩证思维,端正学生求真求实的科学态度,增强学生社会责任感,实现“全员育人、全程育人、全方位育人”的创新教育模式。

关键词：微生物学思政课程案例设计教育模式

疏绵状嗜热丝孢菌热稳定几丁质酶的纯化及其性质研究

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微生物学报 2005年第2期45卷 270-274页

作者：郭润芳李多川王荣山东农业大学环境生物系泰安271018

采用硫酸铵沉淀、DEAE SepharoseFastFlow阴离子层析、Phenyl Sepharose疏水层析等步骤获得了凝胶电泳均一的疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyceslanuginosus)几丁质酶。经SDS PAGE和凝胶过滤层析测得纯酶蛋白的分子量在 4 8～ 4 9 .8kD之间... 详细信息

采用硫酸铵沉淀、DEAE SepharoseFastFlow阴离子层析、Phenyl Sepharose疏水层析等步骤获得了凝胶电泳均一的疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyceslanuginosus)几丁质酶。经SDS PAGE和凝胶过滤层析测得纯酶蛋白的分子量在 4 8～ 4 9 .8kD之间。该酶反应的最适温度和最适pH分别为 5 5℃和 4 5 ,在pH4 5条件下 ,该酶在 5 0℃以下稳定 ;6 5℃的半衰期为 2 5min ;70℃保温 2 0min后 ,仍保留 2 4 %的酶活性。其N 端氨基酸序列为AQGYLSVQYFVNWAI。金属离子对几丁质酶的活性影响较大 ,Ca2 + 、Na+ 、K+ 、Ba2 + 对酶有激活作用 ;Ag+ 、Fe2 + 、Cu2 + 、Hg2 + 对酶有显著的抑制作用 ;以胶体几丁质为底物的Km 和Vmax值分别为 9 .5 6mg mL和 2 2 . 12 μmol min。抗菌活性显示 ,该酶对供试病原菌有不同程度的抑制作用。

关键词：嗜热真菌 Thermomyces lanuginosus 几丁质酶纯化性质

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木霉菌对杨树树皮溃疡病菌拮抗作用的研究

林业科学 2001年第5期37卷 82-86,T002页

作者：高克祥刘晓光郭润芳淮稳霞张敏山东农业大学植保系泰安271018 河北农业大学林学院保定071000

应用哈茨木霉 (Trichodemaharzianum )T88菌株和深绿木霉 (T .atroviride)T95菌株分别与杨树烂皮病菌 (Cytosporachrysosperma)和杨树水泡溃疡病菌 (Dothiorellagregaria)进行了平皿对峙培养和载片对峙培养 ;并研究了两种木霉菌产生的... 详细信息

应用哈茨木霉 (Trichodemaharzianum )T88菌株和深绿木霉 (T .atroviride)T95菌株分别与杨树烂皮病菌 (Cytosporachrysosperma)和杨树水泡溃疡病菌 (Dothiorellagregaria)进行了平皿对峙培养和载片对峙培养 ;并研究了两种木霉菌产生的挥发性代谢物对病原菌菌落的影响和其非挥发性代谢物对菌丝干重的影响 ;分别在光学显微镜和扫描电镜下观察了两种木霉菌的重寄生现象。结果表明 :对峙培养中木霉菌T88和T95对两种病原菌均有明显的抑制作用。两种木霉菌均能产生挥发性代谢物质并不同程度地抑制病菌菌落的生长 ,在密闭条件下T95的抑制率最高达到 80 .30 %。两种木霉菌产生的非挥发性代谢物质可以强烈抑制病原菌的生长、明显降低其菌丝干重 ,并具有热稳定性。在光学显微镜和扫描电镜下 ,可以观察到木霉菌的菌丝在病原菌的菌丝上平行或波浪式生长 ,并在其上产生钩状分枝、吸器或附着胞吸附于病原菌的菌丝上 ,或穿透病原菌的菌丝生长。

关键词：木霉菌杨树烂皮病菌水泡溃疡病菌拮抗作用

小麦叶片β-1,3-葡聚糖酶的诱导、纯化与抗菌活性

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植物生理与分子生物学学报 2004年第4期30卷 399-404页

作者：孙斌李多川慈晓燕郭润芳王颖山东农业大学植保学院植物病理学系泰安271018

三个小麦品种331、抗倒680和鲁麦23经氯化汞、水杨酸或核黄素处理后，叶片中的β-1，3-葡聚糖酶活性均有不同程度的升高。氯化汞处理24h对品种331该酶活性的诱导作用最强。因此取用氯化汞处理24h的331小麦叶片研磨得到粗酶液。将粗酶液... 详细信息

三个小麦品种331、抗倒680和鲁麦23经氯化汞、水杨酸或核黄素处理后，叶片中的β-1，3-葡聚糖酶活性均有不同程度的升高。氯化汞处理24h对品种331该酶活性的诱导作用最强。因此取用氯化汞处理24h的331小麦叶片研磨得到粗酶液。将粗酶液经硫酸铵分级沉淀、Phenyl-Sepharose Fast Flow疏水层析、DEAE-Sepharose Fast FloW阴离子交换层析和SephacrylS-100分子筛层析，得到了SDS-PAGE凝胶电泳谱带单一的β-1，3-葡聚糖酶样品。经SDS-PAGE(12％)和凝胶过滤层析，测得其分子量约为52.0～53.6kD。抗菌试验测定显示，纯化的β-1，3-葡聚糖酶对供试的4种病原真菌的生长、孢子萌发或芽管伸长都有一定程度的抑制作用。

关键词：小麦 β-1,3-葡聚糖酶升汞水杨酸核黄素抗真菌活性

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食源性单核增生性李斯特氏菌毒力基因的分布

中国食品学报 2017年第3期17卷 241-249页

作者：亢春雨于宏伟郭润芳贾英民张楠河北农业大学食品科技学院河北保定071001 河北科技大学生物科学与工程学院石家庄050018

为探明保定、石家庄及周边地区食源性单增李斯特菌的污染状况以及食源性单增李斯特菌中毒力基因的分布情况,从保定、石家庄及周边地区农贸市场、超市采集七大类食品,共1 288个样品进行单增李斯特菌的污染调查,对鉴定分离出的308株食源... 详细信息

为探明保定、石家庄及周边地区食源性单增李斯特菌的污染状况以及食源性单增李斯特菌中毒力基因的分布情况,从保定、石家庄及周边地区农贸市场、超市采集七大类食品,共1 288个样品进行单增李斯特菌的污染调查,对鉴定分离出的308株食源性单增李斯特菌的27个毒力基因进行PCR检测。结果表明:七大类食品中单增李斯特菌的平均检出率为23.91%,动物源食品单增李斯特菌污染远高于植物源食品;27个毒力基因的PCR检测发现,inl、plcA、plcB、hpt、hly及fbp等与侵入、感染有关的毒力基因在动物源食品分离株中分布明显高于植物源食品分离株;而iap、ami、dlt、prfA、virR、hfq与粘附、调控有关的毒力基因在动物源食品分离株和在植物源食品分离株中差别不明显;hfq、dltC和iap 3个基因的检出率最高,分别达到94.68%,93.36%和91.03%,可作为该地区食源性单增李斯特氏菌鉴定的参考基因。

关键词：食源性单核增生性李斯特氏菌毒力基因 PCR

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适合奶醋发酵的酵母菌发酵动力学

食品与发酵工业 2020年第22期46卷 106-112页

作者：姚妞妞常春晖于宏伟郭润芳河北农业大学食品科技学院河北保定071000

该研究通过感官评价筛选出适合奶醋发酵的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)4-2和安琪高活性干酵母,并以蔗糖为底物的发酵动力学,利用Logistic方程和Leudeking-Piret方程分别建立了2株酵母菌的菌体生长、产物生成和底物消耗动力学模型... 详细信息

该研究通过感官评价筛选出适合奶醋发酵的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)4-2和安琪高活性干酵母,并以蔗糖为底物的发酵动力学,利用Logistic方程和Leudeking-Piret方程分别建立了2株酵母菌的菌体生长、产物生成和底物消耗动力学模型,然后对试验数据进行非线性拟合分析和模型验证。结果表明,*** 4-2和安琪干酵母的酵母菌生长符合Logistic模型,酒精含量变化和总糖含量变化都符合Leudeking-Piret模型,拟合度>0.950。2株酵母菌的3个模型验证的理论值与试验值的误差大部分<10%,说明模型拟合较好。3个动力学模型均能够较好地阐明酵母发酵牛乳过程中物质的动态变化规律,为发酵牛乳提供理论依据。

关键词：酿酒酵母4-2 安琪干酵母动力学模型非线性拟合

酵母菌固态发酵对麦麸蛋白的结构与功能特性的影响

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食品工业科技 2024年

作者：史婷婷卢雨洁裴家伟郭润芳河北农业大学食品科技学院

为探究酵母菌固态发酵麦麸生产替代蛋白的可能性，本研究以麦麸为基质，利用单菌发酵和混菌发酵制备了两种发酵蛋白，并通过SDS-PAGE蛋白凝胶电泳、傅里叶红外光谱、热重分析和测定蛋白加工特性、生物可利用性等指标，对两种发酵蛋白与... 详细信息

为探究酵母菌固态发酵麦麸生产替代蛋白的可能性，本研究以麦麸为基质，利用单菌发酵和混菌发酵制备了两种发酵蛋白，并通过SDS-PAGE蛋白凝胶电泳、傅里叶红外光谱、热重分析和测定蛋白加工特性、生物可利用性等指标，对两种发酵蛋白与原麦麸蛋白的结构与功能特性进行了比较。结果表明，单菌发酵（DJ）和混菌发酵（HJ）后总蛋白和可溶性蛋白含量比原麦麸（MF）分别提高了112.5%、109.1%和216.9%、449.6%。与MF相比，DJ和HJ蛋白结构发生较大变化，其中β-折叠占比大大减少，β-转角占比大幅增加，而且发酵后产生了0.4）。综上所述，单菌和混菌发酵蛋白均有良好功能特性和营养价值，对于利用麦麸生产微生物替代蛋白，开发更具功能性和营养价值的发酵蛋白产品有重要意义。

关键词：麦麸固态发酵微生物蛋白蛋白质结构功能特性