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不同处理对采后黄冠梨果实有机酸代谢酶及其基因表达的影响

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不同处理对采后黄冠梨果实有机酸代谢酶及其基因表达的影响

作者：郭润姿天津大学

学位级别：硕士

本课题以采后黄冠梨为试验材料，采用2%CaCl2和0.2%壳聚糖涂膜处理，对贮藏期间黄冠梨果皮和果肉中苹果酸与柠檬酸含量、相关调控酶的活性变化进行了研究，并通过实时荧光定量PCR对果实中与有机酸代谢相关的8个基因的转录水平变化进行... 详细信息

本课题以采后黄冠梨为试验材料，采用2%CaCl2和0.2%壳聚糖涂膜处理，对贮藏期间黄冠梨果皮和果肉中苹果酸与柠檬酸含量、相关调控酶的活性变化进行了研究，并通过实时荧光定量PCR对果实中与有机酸代谢相关的8个基因的转录水平变化进行分析，从分子水平揭示采后梨果实中苹果酸和柠檬酸代谢调控的机理。主要得到以下结论：（1）HPLC和生理生化分析表明，氯化钙和壳聚糖涂膜处理均能显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）地延缓贮藏期间可滴定酸、柠檬酸和苹果酸含量的下降以及有机酸相关酶活性的变化。（2）研究表明，PEPC、NAD-MDH以及NADP-ME为采后梨果实中苹果酸代谢调控的关键酶。不同组织部位中苹果酸含量与NAD-MDH以及PEPC活性之间的相关性均达到显著水平，对果实中苹果酸含量起到积累作用。NADP-ME活性与苹果酸含量呈现负相关关系，在果实中达到显著水平。CS、PEPC以及cyt-ACO为采后黄冠梨果实柠檬酸代谢中的关键酶。CS在果皮和果肉中都显著影响采后梨果实柠檬酸含量的变化。PEPC与cyt-ACO显著影响果肉中柠檬酸的含量，Mit-ACO与柠檬酸含量呈负相关，NADP-IDH与柠檬酸含量呈现正相关性。（3）荧光定量分析发现：苹果酸代谢酶Mdh和Me基因对NAD-MDH和NADP-ME酶有正调控作用。基因转录水平与苹果酸呈显著或者及显著相关性。NADP-IDH基因与果皮中异柠檬酸脱氢酶活性呈显著相关性。cyACO基因与果皮和果肉中的细胞质ACO活性达到了显著相关性，对果肉中柠檬酸有重要作用。（4）质子泵基因vVAtp1对苹果酸含量有显著负调控作用, vVpp基因对果皮中苹果酸的积累有显著的负相关性。vVAtp1， vVAtp2以及vVpp三种基因对柠檬酸均没有显著影响，氯化钙和壳聚糖处理在不同程度上改变了果皮中三种质子泵基因对柠檬酸的调控。综合分析显示，氯化钙和壳聚糖涂膜处理可以从基因转录和表达水平影响有机酸代谢，从而维持梨果实贮藏期间的优良品质，具有较好的应用前景。

关键词：黄冠梨苹果酸柠檬酸基因表达质子泵荧光定量

减压贮藏对番茄果实抗氧化物质和抗氧化酶的影响

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食品工业科技 2013年第8期34卷 338-341,368页

作者：郭润姿白阳郭文岚寇晓虹天津大学化工学院天津300072

为了研究不同减压处理对番茄果实后熟过程中抗氧化性的影响,以粉冠番茄为材料,研究了在43.6、73.0kPa和常压三个压力条件下,番茄中维生素C、番茄红素和谷胱甘肽含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)的活性... 详细信息

为了研究不同减压处理对番茄果实后熟过程中抗氧化性的影响,以粉冠番茄为材料,研究了在43.6、73.0kPa和常压三个压力条件下,番茄中维生素C、番茄红素和谷胱甘肽含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)的活性变化规律。结果表明,减压贮藏显著推迟了番茄中维生素C含量的高峰,在一定程度上延迟了番茄红素和谷胱甘肽含量的高峰,并且压力越低效果越显著(p<0.05);在果实后熟过程中SOD、CAT活性逐渐下降,而减压处理可显著抑制SOD活性下降(p<0.05)。POD活性在贮藏期间呈现先降后升的趋势,减压处理可以有效地保持较高的抗氧化酶活性。结论:减压处理贮藏可以显著保护番茄果实中的抗氧化物质和抗氧化酶活性,而且一定范围内压力越低效果越好。

关键词：番茄减压贮藏抗氧化性抗氧化酶

采后氯化钙和壳聚糖涂膜处理对梨果实柠檬酸代谢酶及其基因表达特性的影响

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食品科学 2013年第8期34卷 263-268页

作者：郭润姿寇晓虹张莹王爽天津大学化工学院天津300072

目的:以采后黄冠梨为试材,系统研究梨果实在贮藏期间柠檬酸代谢调控机制,以及不同处理对柠檬酸代谢酶和基因表达特性的影响。方法:采用氯化钙和壳聚糖涂膜处理梨果实,利用高效液相色谱法(HPLC)测定果皮和果肉中柠檬酸含量的变化,同时测... 详细信息

目的:以采后黄冠梨为试材,系统研究梨果实在贮藏期间柠檬酸代谢调控机制,以及不同处理对柠檬酸代谢酶和基因表达特性的影响。方法:采用氯化钙和壳聚糖涂膜处理梨果实,利用高效液相色谱法(HPLC)测定果皮和果肉中柠檬酸含量的变化,同时测定在贮藏期内柠檬酸合酶(citrate synthase,CS),细胞质乌头酸酶(cytoplasmicaconitase,cyt-ACO)以及异柠檬酸脱氢酶(NAD-isocitrate dehydrogenase,NADP-IDH)活性变化,通过实时荧光定量PCR技术分析柠檬酸代谢酶基因的相对表达水平,并对三者进行显著性和相关性分析。结果:氯化钙和壳聚糖涂膜处理黄冠梨果实可以有效地延缓柠檬酸的降解(P<0.05)以及改善代谢酶的活性(P<0.05),两种处理在一定程度上影响了柠檬酸代谢酶基因的表达。柠檬酸合酶(CS)对柠檬酸的积累有显著的正相关性(P<0.05),cyt-ACO与果肉中的柠檬酸代谢呈显著正相关性,对果皮中柠檬酸呈现负相关,而NADP-IDH对柠檬酸代谢影响很小。基因表达特性与相应酶活变化呈一致性,从而调控柠檬酸代谢。因此,采后黄冠梨果实柠檬酸的代谢受到酶活以及基因水平的共同调控,氯化钙和壳聚糖涂膜处理在一定程度上影响酶的活性以及基因的表达水平。

关键词：柠檬酸代谢酶基因表达涂膜处理

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不同涂膜处理对采后梨果实抗氧化能力的影响

食品科学 2012年第14期33卷 261-267页

作者：郭文岚郭润姿李兴元刘春龙寇晓虹天津大学化工学院天津300072

目的:以采后黄冠梨为试材,系统研究梨果实在贮藏期间抗氧化能力的变化和涂膜处理对抗氧化活性的影响。方法:采用CaCl2和普鲁兰多糖涂膜处理梨果实,主要对梨果实不同组织部位的VC含量、总酚含量、总黄酮含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧... 详细信息

目的:以采后黄冠梨为试材,系统研究梨果实在贮藏期间抗氧化能力的变化和涂膜处理对抗氧化活性的影响。方法:采用CaCl2和普鲁兰多糖涂膜处理梨果实,主要对梨果实不同组织部位的VC含量、总酚含量、总黄酮含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性以及抗氧化能力进行测定,进行显著性和相关性分析。结果:CaCl2和普鲁兰多糖涂膜处理均能有效延缓贮藏期间VC、总酚、总黄酮含量的下降,显著抑制SOD、CAT、抗氧化活性的下降速度及POD的活性(P<0.05)。梨果皮的各抗氧化指标均显著高于果肉。结论:涂膜处理能够显著抑制梨果实抗氧化成分的流失和抗氧化酶活性的下降,提高其抗氧化能力,保护抗氧化成分和流通品质。

关键词：梨果实贮藏抗氧化能力涂膜处理

NMM肿瘤DNA疫苗乙二胺四乙酸二钠残留量高效液相色谱检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2023年第7期36卷 855-861页

作者：孙澳郭润姿田园伊君梅柯尊阳宋卫卫邱创钧李忠明王宇于继云固安鼎泰海规生物科技有限公司河北廊坊065000

目的建立NMM肿瘤DNA疫苗原液中乙二胺四乙酸二钠(ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt,EDTA-2Na)残留量高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)检测方法,并进行验证,用于DNA疫苗质量控制。方法将NMM肿瘤DNA疫苗原液与硫酸铜络合后,建立EDTA-2Na残留量HPLC检测方法:色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为水-10%四丁基氢氧化铵-乙腈溶液(74.5∶0.5∶25);检测波长为254 nm;流速为0.8 mL/min;柱温为20℃;进样量为20μL。对方法的专属性、线性范围、检测限及定量限、溶液稳定性、耐用性、准确度、精密度进行验证。用建立的方法对多批次DNA疫苗原液中EDTA-2Na残留量进行检测。结果EDTA-2Na对照品及加入EDTA-2Na的DNA疫苗原液与硫酸铜反应后,在5.3 min附近出现吸收峰,而DNA疫苗原液与硫酸铜反应后未见吸收峰;对照品在4~400μg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系,R^(2)=0.999 9;该方法检测限为10 ng/mL,定量限为40 ng/mL;对照品及供试品溶液放置12 h,溶液稳定性良好;方法检测条件发生微小变动时(不同流动相比例、不同流速、不同柱温),对检测结果的影响在可接受范围内;低、中、高浓度加标样品EDTA-2Na回收率均值为101.38%,RSD为0.39%;0.1 mg/mL对照品溶液连续进样6次,峰面积RSD为0.04%,6份供试品溶液均未检出EDTA-2Na,含EDTA-2Na的供试品溶液峰面积RSD为0.02%,中间精密度良好。多批次DNA疫苗原液均未检测出EDTA-2Na残留。结论建立的方法操作简便,准确可靠,专属性强,可用于DNA疫苗原液中EDTA-2Na残留量检测。

关键词： DNA疫苗肿瘤高效液相色谱法 EDTA-2Na残留量质量控制

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番茄果实总RNA提取方法的定量比较分析

西北农业学报 2012年第12期21卷 112-115页

作者：王爽吴梦诗郭润姿孟楠寇晓虹天津大学化工学院天津300072

番茄果实富含多糖和酚类等次级代谢物质,RNA提取难度较大。为了获取高质量的RNA进行分子生物学研究,分别采用改进CTAB法和4种植物RNA抽提试剂盒提取总RNA进行比较分析。结果表明,柱式试剂盒提取的RNA质量和产量较高,且操作简便,但需进... 详细信息

番茄果实富含多糖和酚类等次级代谢物质,RNA提取难度较大。为了获取高质量的RNA进行分子生物学研究,分别采用改进CTAB法和4种植物RNA抽提试剂盒提取总RNA进行比较分析。结果表明,柱式试剂盒提取的RNA质量和产量较高,且操作简便,但需进一步纯化。利用RT-PCR技术,采用试验提取的RNA,成功克隆出NAC15基因片段并进行定量分析,进一步表明RNA品质可以满足定性定量分子生物学研究。

关键词：番茄果实 RNA提取改良CTAB法 RNA试剂盒

黄冠梨果实发育过程中有机酸含量及相关代谢酶活性的变化

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江苏农业学报 2013年第1期29卷 157-161页

作者：郭润姿郭文岚李兴元寇晓虹天津大学化工学院食品科学系天津300072

以黄冠梨为试验材料,研究梨果实不同发育时期果皮和果肉中苹果酸、柠檬酸含量及苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)、苹果酸酶(NADP-ME)、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)、柠檬酸合酶(CS)、异柠檬酸脱氢酶(NADP-IDH)、线粒体乌头酸酶(Mit-ACO)、细胞... 详细信息

以黄冠梨为试验材料,研究梨果实不同发育时期果皮和果肉中苹果酸、柠檬酸含量及苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)、苹果酸酶(NADP-ME)、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)、柠檬酸合酶(CS)、异柠檬酸脱氢酶(NADP-IDH)、线粒体乌头酸酶(Mit-ACO)、细胞质乌头酸酶(cyt-ACO)活性的变化,并分析梨果皮和果肉中苹果酸、柠檬酸积累量与其相关代谢酶活性的相关关系。结果表明在梨果实发育过程中,果皮和果肉中苹果酸均呈先上升后下降的趋势,均在盛花后80 d时达到最高值;果皮和果肉中柠檬酸在梨果实生长发育过程(盛花后20～120 d)中均不断积累。NAD-MDH、NADP-ME和PEPC活性与黄冠梨果皮和果肉中苹果酸积累量呈显著或极显著正相关关系(P<0.05或P<0.01),CS、NADP-IDH与黄冠梨果皮和果肉中柠檬酸积累量呈极显著正相关关系(P<0.01),而Mit-ACO与黄冠梨果皮和果肉中柠檬酸积累量存在极显著负相关关系(P<0.01),PEPC酶与果皮中柠檬酸积累量达到显著正相关关系(P<0.05)。

关键词：黄冠梨苹果酸柠檬酸代谢关键酶

NMM抗肿瘤治疗性DNA疫苗中卡那霉素残留量检测方法的建立与验证

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药物生物技术 2023年第6期30卷 561-566页

作者：郭润姿伊君梅田园宋卫卫车亦伟于继云王宇固安鼎泰海规生物科技有限公司河北廊坊065500

建立并验证检测NMM抗肿瘤DNA疫苗中卡那霉素残留量的方法。采用间接竞争ELISA方法检测卡那霉素残留量,采用四参数Logstic曲线进行回归分析,并对本方法的专属性、检测限、定量限、线性与范围、精密度、准确度、耐用性等进行验证,验证方... 详细信息

建立并验证检测NMM抗肿瘤DNA疫苗中卡那霉素残留量的方法。采用间接竞争ELISA方法检测卡那霉素残留量,采用四参数Logstic曲线进行回归分析,并对本方法的专属性、检测限、定量限、线性与范围、精密度、准确度、耐用性等进行验证,验证方法有效后对多批次样品进行检测。使用该方法检测卡那霉素残留量时,样品无需稀释,辅料、质粒DNA对卡那霉素的检测无干扰;本方法检测限为0.15 ng/mL;定量限为0.5 ng/mL;在0.5~40.5 ng/mL范围内线性关系良好,且符合四参数方程式:y=D+(A-D)/[1+(x/C)^(B)],R^(2)≥0.999;在检测线性范围内加入不同浓度的卡那霉素对照溶液,回收率均值在95%~115%之间(n=12,RSD=6.20%);本方法重复性试验中卡那霉素含量RSD值为4.22%(n=6),中间精密度试验中DNA疫苗中卡那霉素含量RSD值为10.95%。本方法检测实验条件发生微小变动时(不同人员、不同批次试剂盒、不同酶标仪),对测定结果的影响在可接受范围内。应用该方法对7批样品中卡那霉素残留量进行检测,结果表明,每个人用剂量(0.3 mg DNA)卡那霉素的残留量均小于0.5 ng。本方法操作简便、准确可靠、专属性强,可用于NMM抗肿瘤DNA疫苗卡那霉素残留量的检定。

关键词：重组生物制品抗肿瘤DNA疫苗酶联免疫吸附法卡那霉素残留质量控制药物分析验证

NMM抗肿瘤DNA疫苗原液大肠杆菌菌体蛋白质残留量检测方法的建立与验证

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中国医药科学 2023年第9期13卷 85-89页

作者：郭润姿伊君梅孙澳田园车亦伟邱创钧王宇固安鼎泰海规生物科技有限公司河北廊坊065500

目的建立并验证检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白质残留量的双抗体夹心ELISA试验方法。方法使用双抗体夹心ELISA试验方法检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白残留量,采用四参数logstic曲线进行回归分析,并对该方法... 详细信息

目的建立并验证检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白质残留量的双抗体夹心ELISA试验方法。方法使用双抗体夹心ELISA试验方法检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白残留量,采用四参数logstic曲线进行回归分析,并对该方法的专属性、检测限、定量限、线性与范围、精密度、准确度、耐用性等进行验证,验证通过对5批样品进行检测。结果采用双抗体夹心ELISA试验方法进行大肠杆菌蛋白质残留量检测时,DNA疫苗原液无需进行稀释。NMM抗肿瘤DNA疫苗原液对大肠杆菌菌体蛋白质的检测无干扰及抑制作用,方法的专属性良好;本法检测限为0.41 ng/ml;定量限为0.98 ng/ml;该方法测定宿主菌蛋白质残留量在0~100 ng/ml范围内线性良好,R^(2)≥0.9999;本方法重复性试验中宿主菌蛋白质含量RSD值均低于15%,中间精密度实验中样品吸光值RSD值低于10%,精密度结果良好。在检测线性范围内加入高、中、低3种浓度的大肠杆菌菌体蛋白,回收率均值为100.35%(n=9,RSD=3.58%);本方法检测实验条件发生微小变动时(不同人员、不同批次试剂盒),对测定结果的影响在可接受范围内。应用该方法对5批NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌蛋白质残留量进行检测,大肠杆菌菌体蛋白残留量均在1 ng/mg左右,远低于相关指导原则中规定的不高于1μg/mg的质量标准。结论该方法可用于NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中宿主菌蛋白质含量的检测。

关键词：抗肿瘤DNA疫苗重组生物制品双抗原夹心ELISA法大肠杆菌菌体蛋白残留质量控制