检索结果-南通市图书馆

生命的化学 2004年第4期24卷 334-336页

作者：郭泓珅马端复旦大学分子医学教育部重点实验室上海200032

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。DNA甲基化作为哺乳动物细胞基因组修饰和表达调控的表观遗传学方式 ,在肿瘤的发生发展过程中总体水平降低 ,但同时又伴随某些基因的高甲基化。在乳腺癌中。

关键词：乳腺癌 DNA甲基化 CpG岛启动子

hTFPI-2的基因克隆表达及生物学性质研究

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中华血液学杂志 2006年第9期27卷 606-610页

作者：孔德升郭泓珅蔡旭梁旺彭卓醇宋后燕马端复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室上海200032

目的克隆人组织因子途径抑制物-2(human tissue fact0r pathway inhibitor-2,hTFPI-2)的编码基因,并在大肠杆菌中表达,获得有活性的目的蛋白。方法应用 RT-PCR 法从人胎盘总 RNA 中获得人组织因子途径抑制物-2的编码基因,将该基因片段... 详细信息

目的克隆人组织因子途径抑制物-2(human tissue fact0r pathway inhibitor-2,hTFPI-2)的编码基因,并在大肠杆菌中表达,获得有活性的目的蛋白。方法应用 RT-PCR 法从人胎盘总 RNA 中获得人组织因子途径抑制物-2的编码基因,将该基因片段克隆至原核表达载体 pET19b 中,转化表达宿主 BL21,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白的表达。获得的包涵体经离子交换法进行纯化,并使其在体外进行复性。采用发色底物法测定 hTFPI-2对纤溶酶、胰蛋白酶的抑制作用;明胶酶谱法测定对基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)的抑制作用;采用人工基底膜法观察hTFP1-2对纤维肉瘤细胞侵袭能力的影响。结果成功获得了序列完全正确 hTFPI-2的编码基因,hTFP1-2在大肠杆菌中以包涵体的形式获得高效表达,占细菌总蛋白的20%～30%。经纯化、复性后可得到纯度大于90%的目的蛋白。复性后的 hTFPI-2具有抑制胰蛋白酶、纤溶酶、MMP-2和 MMP-9的活性,同时亦具有抑制纤维肉瘤细胞 HT-1080侵袭转移的能力结论采用原核表达系统高效地获得了具有活性的 hTFPI-2。

关键词：组织因子途径抑制物-2 蛋白质复性基因工程

脾内微量注射免疫法制备抗重组可溶性组织因子单克隆抗体

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复旦学报（医学版） 2006年第1期33卷 92-96页

作者：蔡旭彭卓醇孔德升郭泓珅白浩宋后燕马端复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-分子医学教育部重点实验室上海200032

目的制备抗重组可溶性组织因子(r-sTF)单克隆抗体并建立检测组织因子(TF)含量的夹心ELISA法,以期为TF的深入研究及临床应用提供参考依据。方法取微量TF对Balb/c小鼠直接进行脾内注射免疫,分离小鼠脾细胞和鼠骨髓瘤细胞,融合后对杂交瘤... 详细信息

目的制备抗重组可溶性组织因子(r-sTF)单克隆抗体并建立检测组织因子(TF)含量的夹心ELISA法,以期为TF的深入研究及临床应用提供参考依据。方法取微量TF对Balb/c小鼠直接进行脾内注射免疫,分离小鼠脾细胞和鼠骨髓瘤细胞,融合后对杂交瘤细胞进行筛选克隆化培养;建立了3株稳定分泌TF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1-C3、2-G9、3-H9;进而在小鼠体内诱生腹水,并用rprotein A亲合层析法纯化;经鉴定后用过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记于其中一株单抗上,建立夹心ELISA法测定正常人血浆中的TF含量。结果纯化的单抗用SDS-PAGE测定纯度,在Mr为150 000左右呈现一条带;Western blot测定显示1-C3、2-G9、3-H9分泌的单抗可特异地识别Mr为47 000的TF,经免疫球蛋白(Ig)类和亚类鉴定实验证实3株单抗均为IgG1;用夹心ELISA法检测正常人血浆中的TF含量为(130±80)pg/mL。结论用脾内微量注射法成功制备抗TF单克隆抗体及ELISA测定TF含量方法的建立,为TF的制备纯化和检测奠定了基础,也使TF的临床深入化研究成为可能。

关键词：重组可溶性组织因子免疫单克隆抗体

组织因子途径抑制剂-1诱导大鼠肾系膜细胞凋亡作用的研究

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组织因子途径抑制剂-1诱导大鼠肾系膜细胞凋亡作用的研究

抗重组人组织因子途径抑制物1单抗抑制rhTFPI-1的抗凝作用

中华医学会病理学分会2006年学术年会

作者：林伊凤马端蒋涛郭泓珅张农复旦大学上海医学院病理学系复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室复旦大学上海医学院病理学系

目的观察重组人组织因子途径抑制剂-1（human recombinant tissue factor pathway inhibitor-1,hrTFPI-1）对大鼠肾系膜细胞（mesangial cell,MsC）凋亡的影响。方法培养正常的大鼠MsC,采用激光共聚焦法检测大鼠 MsC中TFPI-1及TF表达;... 详细信息

目的观察重组人组织因子途径抑制剂-1（human recombinant tissue factor pathway inhibitor-1,hrTFPI-1）对大鼠肾系膜细胞（mesangial cell,MsC）凋亡的影响。方法培养正常的大鼠MsC,采用激光共聚焦法检测大鼠 MsC中TFPI-1及TF表达;将hrTFPI-1加入其培养液中,采用Hoechst 33258染色观察MsC细胞核的改变;用流式细胞仪检测MsC细胞凋亡率;用DNA片段凝胶电泳（DNA Ladder）分析MsC 凋亡情况;用Western印迹法检测凋亡相关激酶半胱氨酸蛋白酶3（Csapase-3）蛋白的表达。结果正常大鼠MsC中有TFPI-1及TF表达;加入 hrTFPI-1后,凋亡的MsC数量明显增加,分别为对照组的2．1、3．0及4．9倍（P＜0．05）,活性形式的Caspase-3蛋白表达也明显高于对照组,并呈剂量依赖性表达。结论 hrTFPI-1能诱导正常大鼠 MsC发生凋亡。

关键词：组织因子途径抑制剂-1 系膜细胞大鼠凋亡

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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基础医学与临床 2006年第11期26卷 1186-1190页

作者：蔡旭白浩孔德升郭泓珅梁旺宋后燕马端复旦大学上海医学院分子医学教育部重点实验室上海200032

目的研制抗重组人组织因子途径抑制物1单克隆抗体(rhTFPI-1 M cAb),了解其对rhTFPI-1抗凝活性的抑制作用。方法将分泌rhTFPI-1 M cAb的杂交瘤细胞注入经降植烷预处理的Balb/C小鼠腹腔中,诱生腹水。腹水先经硫酸铵沉淀处理,再用rprote i... 详细信息

目的研制抗重组人组织因子途径抑制物1单克隆抗体(rhTFPI-1 M cAb),了解其对rhTFPI-1抗凝活性的抑制作用。方法将分泌rhTFPI-1 M cAb的杂交瘤细胞注入经降植烷预处理的Balb/C小鼠腹腔中,诱生腹水。腹水先经硫酸铵沉淀处理,再用rprote in A亲和层析柱进一步纯化。对纯化后的单克隆抗体进行SDS-PAGE检测和W estern b lot分析。并用发色底物法测定rhTFPI-1 M cAb对rhTFPI-1的活性抑制。结果纯化后的抗rhTFPI-1 M cAb经SDS-PAGE检测,其纯度为98%;W estern b lot分析显示其能特异识别rhTFPI-1抗原。发色底物法检测结果表明,其能有效阻断rhTFPI-1的抗FVIIa/TF活性,M cAb浓度为8 mg/L时FVIIa/TF剩余活性达到86%;但对rhTFPI-1的抗FXa活性作用不明显,M cAb浓度为80 mg/L时FXa的剩余活性为48.4%。结论rhTFPI-1 M cAb可明显抑制rhT-FPI-1活性,阻碍rhTFPI-1对TF/FVIIa的抑制活性。纯化后的rhTFPI-1 M cAb的各项鉴定指标均较为理想,rprote inA亲和层析柱纯化方法简便易行值得推广。

关键词：单克隆抗体组织因子途径抑制物 rprotein A亲和层析法

重组TFPI缺失突变体TFPI_(1-161)在毕赤酵母中的高效表达及功能鉴定

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生物工程学报 2004年第6期20卷 937-942页

作者：白浩马端宋后燕莫炜顾银良孔德升郭泓珅复旦大学分子医学教育部重点实验室上海200032

人组织因子途径抑制物 (TFPI)是一种体内天然存在的外源性凝血途径特异性抑制物。缺失突变体TFPI1 - 1 6 1 仅包括TFPI的N末端、K1和K2结构域 ,是一种研究TFPI结构与功能及其相互关系的理想对照分子。以克隆质粒pGEM 3Zf( ) TFPI为模... 详细信息

人组织因子途径抑制物 (TFPI)是一种体内天然存在的外源性凝血途径特异性抑制物。缺失突变体TFPI1 - 1 6 1 仅包括TFPI的N末端、K1和K2结构域 ,是一种研究TFPI结构与功能及其相互关系的理想对照分子。以克隆质粒pGEM 3Zf( ) TFPI为模板 ,用PCR方法获得TFPI1 - 1 6 1 基因 ,构建表达质粒pPIC9K TFPI1 - 1 6 1 并转化毕赤酵母GS115。通过筛选多拷贝转化子及优化发酵培养条件 ,首次在毕赤酵母中高效表达了TFPI1 - 1 6 1 ,经纯化后最终产量高于酿酒酵母 2 0倍以上。由于糖基化程度不同 ,TFPI1 - 1 6 1 表达为TFPI1 - 1 6 1 (2 4kD)和TFPI1 - 1 6 1 (2 7kD)两种分子形式 ,其等电点分别为 4 8和 4 9。根据等电点差异 ,二者可通过阴离子交换层析得到分离 ,其活性无显著性差异。经分子筛和阴离子交换层析分离纯化后 ,从 4L发酵培养液中可分别获得 1 4gTFPI1 - 1 6 1 (2 4kD)和 1 8gTFPI1 - 1 6 1 (2 7kD) ,其比活性分别达 12 880u mg和 12 4 0 0u mg ,回收率达 5 5 %。经稀释的凝血酶原时间及发色底物法检测 ,重组TFPI1 - 1 6 1 具有良好的抗凝及抑制FXa活性的作用。为获得大量TFPI1 - 1 6 1 提供了一种廉价高效的蛋白表达纯化方式。

关键词：组织因子途径抑制物 TFPI1-161 表达纯化 Pichia pastoris

具有共谐振支路的定频倍压型宽增益LLC谐振变换器

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电网技术 2024年第4期48卷 1681-1689页

作者：郭泓展潘健熊嘉鑫湖北工业大学电气与电子工程学院湖北省武汉市430068 东南大学电气工程学院江苏省南京市210096

宽增益和高性能是LLC谐振变换器应用于电动汽车、可再生能源系统等领域的关键,而传统变频控制下存在开关频率范围宽、电压调节性能差的问题。为此,基于倍压整流结构提出一种共谐振支路的改进型拓扑,设计了定频变占空比的调制策略。首先... 详细信息

宽增益和高性能是LLC谐振变换器应用于电动汽车、可再生能源系统等领域的关键,而传统变频控制下存在开关频率范围宽、电压调节性能差的问题。为此,基于倍压整流结构提出一种共谐振支路的改进型拓扑,设计了定频变占空比的调制策略。首先给出了变换器的拓扑介绍及工作原理;其次根据增益特性分析了电感比和品质因数对增益的影响,根据零电压导通(zero voltage conduction,ZVS)条件对参数进行了约束;最后比较了变换器性能。仿真及实验表明,该变换器可实现宽输出电压调节,具有良好的软开关性能。相比于传统变频控制,始终工作在最佳谐振频率点,电路中循环电流小。

关键词：谐振变换器宽电压共谐振定频软开关

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我国有限责任公司受压迫股东退出机制研究

我国有限责任公司受压迫股东退出机制研究

作者：郭泓成青海师范大学

学位级别：硕士

有限责任公司由于其高度人合性的特点,加之作为公司主要决策机制的“资本多数决原则”的异化。公司的控股股东可以凭借其在股东会中的优势地位,以股东会决议的形式压迫和排挤其他少数派股东,以此攫取超额的不正当利益。这便是有限责任... 详细信息

有限责任公司由于其高度人合性的特点,加之作为公司主要决策机制的“资本多数决原则”的异化。公司的控股股东可以凭借其在股东会中的优势地位,以股东会决议的形式压迫和排挤其他少数派股东,以此攫取超额的不正当利益。这便是有限责任公司内部治理的一大顽疾,即“股东压迫”。而对于受到压迫的股东而言,最好的救济途径无疑是出售股权进而退出公司,自我国2005年《公司法》之后,历次《公司法》修订都规定了一系列制度用于保障受压迫股东能够顺利退出公司。但是由于我国《公司法》尚未引入“股东压迫”概念,现有制度对于受压迫股东退出权的保护存在局限。笔者基于股东压迫这一现象,重点探究剖析有限责任公司产生股东压迫的原因,并结合我国司法实践中所形成的判例,分析股权回购制度以及司法强制解散公司制度在适用中存在的困境,通过对典型英美法系国家及大陆法系国家的立法情况对比研究,为我国进一步完善异议股东股权回购请求权制度和司法解散制度提供思路。论文主要包括以下几个部分:第一部分为绪论,主要介绍本文的选题背景及意义,国内外研究状态,以及本文的研究方法和论文创新点。第二部分是对股东压迫现象和受压迫股东退出机制的概述。股东压迫是从司法实践的案例中总结而来,因而难以准确定义其概念。本文首先分析了股东压迫的成因,然后列举了部分典型的股东压迫行为。其次,对受压迫股东可以选择的两种退出路径作了简要概述。第三部分为实证分析,首先检索出42篇涉及受压迫股东的请求公司收购股份纠纷的案件,同级法院的判决结果、原告股东的起诉理由和法院驳回原告请求的理由以及法院的部分观点,探讨我国异议股东股份回购请求权制度适用上存在的主体模糊、条件苛刻和程序不完善等问题。然后继续检索出27篇涉及受压迫股东的强制解散公司纠纷案件,同级法院的判决情况以及驳回股东申请的理由,分析该制度在适用中存在的适用范围狭窄等问题。第四部分为比较法分析,研究典型英美法系国家——英国和美国,其在立法层面对受压迫股东的保护,包括美国法上的信义义务原则与合理期待原则以及英国法中的不公平损害救济制度,为我国相关制度之设计和司法实践提供借鉴。最后一部分针对该制度存在的问题,并结合域外发达国家立法和司法实践经验提出对策。

关键词：股东压迫有限责任公司股权回购司法解散

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基于深度学习的高原夏菜分级模型优化

基于深度学习的高原夏菜分级模型优化

作者：郭泓兰州财经大学

学位级别：硕士

随着生活水平的提高,年轻一代对多样化需求的偏好显著增长,尤其在水果和蔬菜的质量及品种上。尽管甘肃省的高原夏菜产业被认为是省级特色产业,但是受到人工分拣成本限制,分级标准并没有在销售环节推广。本文利用深度学习技术的进步,提... 详细信息

随着生活水平的提高,年轻一代对多样化需求的偏好显著增长,尤其在水果和蔬菜的质量及品种上。尽管甘肃省的高原夏菜产业被认为是省级特色产业,但是受到人工分拣成本限制,分级标准并没有在销售环节推广。本文利用深度学习技术的进步,提出了一种基于图像识别的高原夏菜质量分级方法,考虑生产环境硬件资源的限制,提出的模型尽量降低时间和空间复杂度,为方法落地实施奠定基础。具体研究内容包括:(1)构建高原夏菜数据集。为应对高原夏菜图像数据集不足的挑战,设计并实施了一套高原夏菜图像收集装置。利用此装置,成功采集到了包括结球甘蓝、娃娃菜、菜花、以及西兰花在内的四种蔬菜图像,共计构建了含2400张图片的初始数据集。(2)扩充原始数据集。为提高模型训练的准确性和效率,本研究在扩展原始高原夏菜数据集方面进行了细致工作。首先,通过粗略分割技术去除了图像中的背景干扰,确保数据的质量。随后,借助拍摄扩展和数据增强手段扩充了初始数据集,从而为卷积神经网络模型的训练提供了更为丰富和多样化的图像资源,进一步优化了训练过程的效果。(3)提出了针对高原夏菜质量分级的多尺度融合ECA-DS-ResNet50模型。这种融合模型结合了多种技术,在ResNet50和Mobile Net V2的基础上进行了改进和融合。首先,ResNet50作为主干网络,通过引入ECA(Efficient Channel Attention)注意力机制和多尺度特征提取的ASPP模块,进一步增强了对图像特征的抽取能力。其次,针对ResNet50中7x7卷积核和池化层的计算成本较高的特点,将其3x3标准卷积替换成深度可分离卷积,整合Mobile Net V2的DW(Depthwise Convolution)和PW(Pointwise Convolution)卷积机制取代ResNet50的常规卷积,有效降低了计算量。同时,在每层卷积后引入池化层,进一步减少参数量,优化网络结构,大幅减少了时间和空间复杂度,有效提升模型的运算速度。本研究通过对预处理后的高原夏菜数据集在改进后的ResNet模型以及其他经典深度神经网络模型上进行训练,并通过消融对比实验进行评估。实验结果显示,本文提出的方法在准确率和模型识别速度方面均显著优于其他网络以及原始未改进的网络,这充分证明了我们所改进的网络模型在有效性和可行性方面的显著优势。

关键词：高原夏菜质量分级 ResNet网络 ECA注意力模块

数字基础设施对城市绿色创新效率的影响及机制研究

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生态经济 2024年

作者：石林吕鹏郭泓玉新疆大学经济与管理学院

数字基础设施是助推城市绿色创新效率提升，实现城市高质量发展的重要保障。论文对数字基础设施与城市绿色创新效率的关系、机制等问题进行分析，研究发现：（1）数字基础设施能够提升城市绿色创新效率，其影响路径为倒“U”型；（2）... 详细信息

数字基础设施是助推城市绿色创新效率提升，实现城市高质量发展的重要保障。论文对数字基础设施与城市绿色创新效率的关系、机制等问题进行分析，研究发现：（1）数字基础设施能够提升城市绿色创新效率，其影响路径为倒“U”型；（2）机制分析表明，数字基础设施能够通过促进产业结构优化来提升城市绿色创新效率，而就业活跃度的机制作用具有区域异质性；（3）异质性分析发现，在一线、二线、三线城市以及建设有高铁的城市，数字基础设施对城市绿色创新效率的影响更显著，而是否建设国家级高新区并不能产生异质性影响。根据研究结论提出，应探索数字基础设施的长效带动机制，推进城市绿色高质量发展，注重区域发展差异化的政策建议。

关键词：数字基础设施绿色创新效率产业结构升级就业活跃度