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烟草青枯病与黑胫病拮抗菌筛选及防治效果研究

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烟草青枯病与黑胫病拮抗菌筛选及防治效果研究

作者：郭桥燕河南农业大学

学位级别：硕士

土传病害是危害烟草生产的毁灭性病害,在我国烟草生产中最为严重的是烟草青枯病和黑胫病。国内外对此类病害的防治进行了大量的研究,包括化学防治、生物防治、培育抗病品种以及栽培管理措施等,但由于各自的局限性而无法从根本上进行根... 详细信息

土传病害是危害烟草生产的毁灭性病害,在我国烟草生产中最为严重的是烟草青枯病和黑胫病。国内外对此类病害的防治进行了大量的研究,包括化学防治、生物防治、培育抗病品种以及栽培管理措施等,但由于各自的局限性而无法从根本上进行根治。本文从生态学的原理出发,从病害的原位土壤中分离筛选出对病原菌具有拮抗效果的微生物制成生态有机肥来防治土传病害,在防病的同时,还可以起到改善和修复土壤生态环境,减少化学肥料和农药使用,改善烟叶品质和实现烟叶生产的可持续发展。本文针对烟草青枯病和黑胫病进行拮抗菌的筛选,共得到6株防治青枯病和8株防治黑胫病的拮抗菌,并研究了黑胫病拮抗菌的发酵条件及它们的田间效果验证,研究结果如下:1从福建邵武的青枯病烟株中分离并鉴定出青枯病原菌,并从原位土壤中分离出土壤细菌40株,经平板对峙试验筛选出青枯病的拮抗菌6株,分别编号为T1～T6,拮抗带在4.7～21.4mm之间,其中T5的拮抗效果最好,拮抗带达到10.4～21.4mm。2烟草青枯病拮抗细菌发酵条件的研究表明,抑制效果较好的拮抗菌T5在20～40℃范围内均能生长,最适宜的生长温度为35℃;4～24h为对数生长期:pH值为5.0～9.0。进行该菌的液体培养与扩增时,在相同的接种量下,250ml三角瓶的最佳装瓶量为120ml。通过正交试验法获较佳的液体培养基为蔗糖15 g/L、牛粪堆肥200 g/L、蛋白胨4 g/L、牛肉膏1.5g/L。3从河南农大科教园区的的黑胫病烟株中分离出致病的黑胫病原菌,并从原位土壤中分离出土壤真菌13株,,其中对黑胫病菌具有拮抗作用的有8株,分别编号为Ty1～Ty8,又从中选出拮抗效果较好且相互间无拮抗作用的Ty3、Ty4和Ty7,混合后拮抗效果加强。4通过对黑胫病的拮抗菌y3、Ty4和Ty7的发酵条件的研究表明,三种菌在液体培养条件下4～6d进入稳定生长期;在10～45℃的温度范围内都能生长,最适生长温度是20～35℃;三种菌的适宜生长的pH范围较广,在4.0～9.0的范围内都能生长良好;它们均为好氧菌,装瓶量越大,单位体积中的菌丝量越少;通过正交试验法获得三种混合菌的最佳液体培养基为蔗糖10g/L、牛粪堆肥200 g/L、蛋白胨0.5 g/L、酵母粉15 g/L。5通过拮抗菌生物制剂的田间效果验证结果表明,烟株的田间长势长相以及生长发育与对照是一致的,即拮抗菌及其生物制剂的施用不会对烟株生长造成不良影响;广西的灌根试验显示菌剂对烟草青枯病和黑胫病的发病率和病情指数具有一定的抑制作用,青枯病的防治效果:灌根一次和灌根两次的处理发病率比对照分别降低了8.9和39.6个百分点,病情指数分别降低了4和38;黑胫病的发病率降低了0.4和2.8个百分点,病情指数降低了2.70和4.32,可能具有一定的防治作用;福建邵武青枯病拮抗菌制成的生态菌肥连续两年的田间试验结果为,05年的防治效果不太明显,防治率在1.07%～3.22%之间,病情指数降低了0.54～2.15;06年在05年的基础上对青枯病的防治效果大大加强,发病率降低了30.69%～39.58%,病情指数降低了21.85～25.74,其中有机菌肥做基肥的处理效果最明显。6有机菌肥的施用特别是作为基肥施用使烤后烟的产量、产值以及上中等烟比例都比对照有了较大的提高,分别比对照增加了252.90 kg/hm、2619.90元/hm和0.36%,差异达到极显著水平。7通过对各处理烤后烟叶的品质分析表明,有机菌肥的施用降低了烟叶中的总氮、烟碱和蛋白质的含量,提高了总糖、还原糖和淀粉的含量,同时使烟叶中主要化学成分的比值趋于协调,有利于烟叶品质的提高。

关键词：烟草青枯病黑胫病拮抗菌筛选防治效果

施用有机酸和氨基酸对烤烟生长及氮素吸收的影响

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华北农学报 2004年第4期19卷 51-54页

作者：刘国顺朱凯武雪萍郭桥燕彭飒河南农业大学国家烟草栽培生理生化研究基地河南郑州450002 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所北京100081

试验结果表明,在营养液中添加适量的有机酸和氨基酸促进了烟株的生长发育和氮代谢。表现在:提高烟株的根系活力和叶绿体色素含量,促进烟株干物质和氮素的积累,不同氨基酸和有机酸作用大小不尽相同。有机酸处理烤烟叶绿体色素前期增加快... 详细信息

试验结果表明,在营养液中添加适量的有机酸和氨基酸促进了烟株的生长发育和氮代谢。表现在:提高烟株的根系活力和叶绿体色素含量,促进烟株干物质和氮素的积累,不同氨基酸和有机酸作用大小不尽相同。有机酸处理烤烟叶绿体色素前期增加快后期下降也快,而氨基酸处理后期叶绿体色素变化则相对比较缓和;在促进烟株干物质积累和氮素积累方面,有机酸作用高于氨基酸,而对硝酸还原酶活性和氮含量的影响却低于氨基酸。从整体上看,有机酸对促进烟株生长和氮素积累的效果好于氨基酸。

关键词：烟株有机酸氨基酸氮素积累氮素吸收烤烟生长施用叶绿体色素烤烟叶氮代谢

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外源氨基酸对烟叶氨基酸含量的影响

中国农业科学 2004年第3期37卷 357-361页

作者：武雪萍刘国顺朱凯彭飒郭桥燕中国农业科学院土壤肥料研究所河南农业大学国家烟草栽培生理生化研究基地河南农业大学国家烟草栽培生理生化研究基地北京100081 郑州450002

通过水培试验在营养液中添加氨基酸对烤烟生长的影响。研究表明,3种氨基酸处理均比对照明显促进了烤烟生长,提高了叶片叶绿素a、叶绿素b与类胡萝卜素的含量,增强了硝酸还原酶活性和蔗糖转化酶活性,提高了根系活力。外源谷氨酸、天门冬... 详细信息

通过水培试验在营养液中添加氨基酸对烤烟生长的影响。研究表明,3种氨基酸处理均比对照明显促进了烤烟生长,提高了叶片叶绿素a、叶绿素b与类胡萝卜素的含量,增强了硝酸还原酶活性和蔗糖转化酶活性,提高了根系活力。外源谷氨酸、天门冬氨酸、苯丙氨酸都可以增加烟叶氨基酸含量,以谷氨酸处理效果最明显,其次是天门冬氨酸处理,再次是苯丙氨酸处理。同时3种氨基酸处理都显著提高了单株烤烟烟叶氨基酸累积量,其增加量为天门冬氨酸处理>谷氨酸处理>苯丙氨酸处理。

关键词：氨基酸烟叶谷氨酸天门冬氨酸苯丙氨酸

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光强对烤烟生长发育及光合特性的影响

华北农学报 2007年第3期22卷 76-79页

作者：乔新荣郭桥燕刘国顺王芳河南农业大学国家烟草栽培生理生化研究基地河南郑州450002

采用盆栽的方法,研究了移栽后40 d时不同光强对烤烟植株生长、叶绿素含量、光合及叶绿素荧光参数的影响。结果表明,弱光处理增加了植株高度、叶的长宽比、叶绿素含量,但茎围变小,叶数变少,节间变长,叶绿素a/b变小。净光合速率(Pn)、气... 详细信息

采用盆栽的方法,研究了移栽后40 d时不同光强对烤烟植株生长、叶绿素含量、光合及叶绿素荧光参数的影响。结果表明,弱光处理增加了植株高度、叶的长宽比、叶绿素含量,但茎围变小,叶数变少,节间变长,叶绿素a/b变小。净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、随光强的减弱而降低。叶绿素荧光参数Fv/Fm,￠PSⅡ,光化学淬灭系数(qP),随光强的减弱而升高,而非光化学淬灭系数(qN)降低。

关键词：烤烟光强光合特性叶绿素荧光

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光照强度对烤烟化学成分及物理特性的影响

河南农业科学 2007年第5期36卷 40-43页

作者：乔新荣刘国顺郭桥燕王芳河南农业大学国家烟草栽培生理生化研究基地河南郑州450002

对不同光照强度下烤后烟的矿质元素、主要化学成分、物理特性进行了分析。结果表明:氮、钾、钙、氯、铜、淀粉、还原糖含量,钾/氯,单叶重,叶质重,叶片厚度受光照强度影响较大;铁、锌、总糖含量,含梗率受光照强度影响次之;而磷、镁、平... 详细信息

对不同光照强度下烤后烟的矿质元素、主要化学成分、物理特性进行了分析。结果表明:氮、钾、钙、氯、铜、淀粉、还原糖含量,钾/氯,单叶重,叶质重,叶片厚度受光照强度影响较大;铁、锌、总糖含量,含梗率受光照强度影响次之;而磷、镁、平衡含水率受光照强度影响不显著;≥80%全光照适合优质烟叶的生产。

关键词：光强烤烟化学成分物理特性

反相高效液相色谱法测定烤烟叶片发育过程中的类胡萝卜素类物质

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色谱 2006年第2期24卷 161-163页

作者：刘国顺韦凤杰王芳李亚娟郭桥燕黄晓书河南农业大学国家烟草栽培生理生化研究基地河南郑州450002 河南农业大学河南省高等学校农业生物技术与工程技术重点学科开放实验室河南郑州450002

建立了采用反相高效液相色谱测定烤烟叶片中类胡萝卜素的方法。烤烟叶片先用含0．1％丁基羟基甲苯（BHT）的90％丙酮水溶液萃取，然后加入0．1g醋酸铅，于4℃下以10000r／min离心5min以去除蛋白质。色谱柱为C18反相柱（3．9mmi．d．×15... 详细信息

建立了采用反相高效液相色谱测定烤烟叶片中类胡萝卜素的方法。烤烟叶片先用含0．1％丁基羟基甲苯（BHT）的90％丙酮水溶液萃取，然后加入0．1g醋酸铅，于4℃下以10000r／min离心5min以去除蛋白质。色谱柱为C18反相柱（3．9mmi．d．×150mm，5μm）。流动相：A，甲醇-异丙醇（体积比为1：1）；B，超纯水。洗脱程序：0～10min，70％A＋30％B；10～17min，100％A；17～30min（90％A＋10％B）。流速：0．5mL／min。进样量：10μL。检测波长：450nm。该方法简化了样品的前处理过程，4种类胡萝卜素物质的加标回收率为91．77％～97．42％，相对标准偏差为3．46％～0．98％。用该方法研究了烤烟发育过程中类胡萝卜素含量的变化规律，获得了与文献较为一致的结果。

关键词：反相高效液相色谱法类胡萝卜素烤烟叶片

光照强度对烤烟光合特性及其生长和品质的影响

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西北植物学报 2007年第9期27卷 1833-1837页

作者：刘国顺乔新荣王芳杨超郭桥燕云菲河南农业大学国家烟草栽培生理生化研究基地郑州450002

以‘NC89’烟草品种为材料，用白纱布遮荫研究了100％、80％、50％和20％全光照处理对烤烟生长发育、光合特性及化学成分的影响。结果表明：（1）随光照强度的减弱，植株茎杆变细，叶片的长宽比增加，叶片数减少，出叶速度变慢，干物质... 详细信息

以‘NC89’烟草品种为材料，用白纱布遮荫研究了100％、80％、50％和20％全光照处理对烤烟生长发育、光合特性及化学成分的影响。结果表明：（1）随光照强度的减弱，植株茎杆变细，叶片的长宽比增加，叶片数减少，出叶速度变慢，干物质重逐渐减少，并以80％的全光照条件下的株高、叶面积最大。（2）净光合速率（Pn）、气孔导度（Gs）、蒸腾速率（Tr）、叶绿素a／b值均随光照减弱而逐渐下降，胞间CO2浓度（Ci）、叶绿素含量逐渐升高；叶绿素荧光参数Fm、ФPSⅡ、Fv／Fm、QP值逐渐增加。（3）烟碱、淀粉、还原糖、水溶性总糖、总酚含量随光照减弱而降低，而总氮和钾含量升高。综合分析各项测定指标发现，在大于或等于80％全光照（光照强度为770～1125／Lmol‘m^-2·s^-1）条件下，烤烟的生长指标变化不大，品质指标符合不同卷烟工业需要，适合优质烟叶的生产。

关键词：光照强度烤烟光合特性荧光参数化学成分

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调节土壤微生态防治烟草青枯病

河南农业科学 2006年第2期35卷 57-60页

作者：李红丽李清飞郭夏丽王岩刘国顺郭桥燕郑州大学化工学院河南郑州450002 国家烟草栽培生理生化研究基地河南郑州450002

烟草青枯病是我国南方烟区多发性的主要土传病害之一。目前,生产上主要采取综合防治措施,包括栽培抗病品种、应用化学防治和生物防治等,但由于都存在着各自的局限性而无法从根本上进行防治。生态防治将生态学原理应用于病害的防治,是一... 详细信息

烟草青枯病是我国南方烟区多发性的主要土传病害之一。目前,生产上主要采取综合防治措施,包括栽培抗病品种、应用化学防治和生物防治等,但由于都存在着各自的局限性而无法从根本上进行防治。生态防治将生态学原理应用于病害的防治,是一种病害防治的新思维、新途径。合理施用有机肥或将有机肥与生物防治或抗性菌应用相结合,将可以起到改善和修复土壤生态环境,提高土壤和烟株自身抗御病害的能力,减少肥料和化学农药使用,改善烟叶品质和实现烟叶生产的可持续发展。

关键词：烟草青枯病生态防治有机肥

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烟草青枯病病原菌的分离及其拮抗菌的筛选

河南农业科学 2006年第1期35卷 51-53,79页

作者：李清飞李红丽王岩刘国顺郭桥燕郑州大学化工学院河南郑州450002 国家烟草栽培生理生化研究基地河南郑州450002

从福建烟田的病株中分离出烟草青枯病病原菌，从其原位土壤中经过分离纯化得到40种土壤菌株，经过平板拮抗法筛选后，得到对青枯病菌有明显抑制作用的5株土壤细菌，分别命名为T1、T2、T3、T4和T5，其中，菌株T5的拮抗带最大，菌落拮抗带... 详细信息

从福建烟田的病株中分离出烟草青枯病病原菌，从其原位土壤中经过分离纯化得到40种土壤菌株，经过平板拮抗法筛选后，得到对青枯病菌有明显抑制作用的5株土壤细菌，分别命名为T1、T2、T3、T4和T5，其中，菌株T5的拮抗带最大，菌落拮抗带达10．2～21．4mm.

关键词：烟草青枯病土壤细菌拮抗菌