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PCR-RFLP技术在布氏菌鉴定与分型中的应用

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解放军医学杂志 2010年第3期35卷 241-243页

作者：李波郭桐生崔恩博曲芬毛远丽解放军302医院临床检验中心北京100039

目的利用PCR-RFLP技术扩增7株布氏菌临床分离株16S RNA基因片段,为该菌的分子诊断学、遗传学和流行病学研究提供实验依据。方法参考GenBank公布的布氏菌ATCC 25840标准株序列,设计针对该菌16S RNA保守区的特异性引物,从临床分离培养7株... 详细信息

目的利用PCR-RFLP技术扩增7株布氏菌临床分离株16S RNA基因片段,为该菌的分子诊断学、遗传学和流行病学研究提供实验依据。方法参考GenBank公布的布氏菌ATCC 25840标准株序列,设计针对该菌16S RNA保守区的特异性引物,从临床分离培养7株布氏菌,提取DNA并行16S RNA片段的PCR扩增。将PCR产物克隆至PGEM-T载体进行测序并选用合适的限制性内切酶进行RFLP分析,将分析结果用于临床株的同源性及变异位点的研究,并对感染患者的临床资料进行回顾性分析,研究不同布氏菌基因型与感染患者临床特征的相关性。结果利用PCR扩增出的目的片段与预期一致,大小约为1500bp。测序及同源性分析表明,7株临床分离株之间存在98.88%的同源性和11个变异位点。RFLP结果将7株菌分为4个基因型,临床资料回顾性分析患者不同基因型与临床表现之间无明显联系。结论利用PCR技术扩增布氏菌16SRNA基因片段可以实现对该菌的早期诊断,为布氏菌的分子遗传学和流行病学提供依据。

关键词：布氏菌属 RNA,核糖体,16S 聚合酶链反应多态性,限制性片段长度

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丙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群变化特点

细胞与分子免疫学杂志 2014年第10期30卷 1058-1061页

作者：王晗李妍杨宁苑雯文谢娜王大刚郭桐生毛远丽解放军302医院临床检验医学中心全军感染病临床实验诊断中心北京100039 解放军302医院感染性疾病研究与诊疗中心北京100039

目的观察丙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群变化特点。方法对219例丙型肝炎患者和66例健康对照者分别采用流式细胞术(FCM)检测外周血CD45+淋巴细胞,T淋巴细胞(CD45+CD3+、CD45+CD3+CD4+、CD45+CD3+CD8+),B淋巴细胞(CD45+CD3-CD19+),NK细胞... 详细信息

目的观察丙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群变化特点。方法对219例丙型肝炎患者和66例健康对照者分别采用流式细胞术(FCM)检测外周血CD45+淋巴细胞,T淋巴细胞(CD45+CD3+、CD45+CD3+CD4+、CD45+CD3+CD8+),B淋巴细胞(CD45+CD3-CD19+),NK细胞(CD45+CD3-CD16+56+)百分比和细胞绝对计数。结果在丙型肝炎病毒(HCV)慢性感染到肝硬化失代偿过程中,淋巴细胞亚群绝对计数出现逐渐下降趋势。慢性丙型肝炎组较健康对照组CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞绝对计数明显降低(P<0.05)。丙型肝炎肝硬化在早期组和失代偿期组淋巴细胞各亚群计数均较慢性丙型肝炎组明显降低(P<0.01),而失代偿期组明显低于早期组(P<0.01)。B淋巴细胞百分比以及CD4/CD8比值在慢性感染到肝硬化失代偿过程中出现升高趋势,并在丙型肝炎肝硬化早期和失代偿期时变化明显(P<0.01,P<0.05),NK淋巴细胞百分比出现明显降低趋势(P<0.01)。结论 HCV感染慢性化至肝硬化早期和失代偿期的过程中,外周血CD8+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞减少;B细胞百分比、CD4/CD8比值升高。

关键词：丙型肝炎病毒淋巴细胞流式细胞术

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403例泌尿生殖道支原体感染及药敏分析

中国抗生素杂志 2004年第11期29卷 691-693页

作者：鲍春梅曲芬郭桐生崔恩博徐军李潇潇毛远丽解放军302医院临检中心北京100039

目的了解本地区生殖道支原体感染及耐药情况,指导临床合理用药。方法对918例泌尿生殖道感染的患者用法国Bio-merieux公司生产的支原体IST试剂盒,进行支原体的培养和药敏分析。结果检出支原体感染阳性的患者403例,阳性率43.90%,UU、MH、U... 详细信息

目的了解本地区生殖道支原体感染及耐药情况,指导临床合理用药。方法对918例泌尿生殖道感染的患者用法国Bio-merieux公司生产的支原体IST试剂盒,进行支原体的培养和药敏分析。结果检出支原体感染阳性的患者403例,阳性率43.90%,UU、MH、UU+MH感染的阳性率分别为34.42%(316例),4.79%(44例),4.68%(43例)。MH和UU+MH的混合感染中EM、PRI、AZM及CLDM的耐药率明显高于UU(P生素治疗。

关键词：解脲脲原体人型支原体药物敏感试验

多指标联合检测在肝硬化合并感染诊断中的价值

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第二军医大学学报 2015年第10期36卷 1148-1151页

作者：王大刚朱剑功华菲王晗申艳郭桐生崔恩博李永利解放军第三〇二医院临床检验医学中心北京100039

目的分析降钙素原（PCT）、白介素6（IL-6）、C-反应蛋白（CRP）、中性粒细胞CD64、白细胞计数（WBC）、中性粒细胞比例等多种指标联合检测诊断肝硬化患者合并感染的临床价值。方法将肝硬化住院患者按照细菌培养结果和临床症状分为感... 详细信息

目的分析降钙素原（PCT）、白介素6（IL-6）、C-反应蛋白（CRP）、中性粒细胞CD64、白细胞计数（WBC）、中性粒细胞比例等多种指标联合检测诊断肝硬化患者合并感染的临床价值。方法将肝硬化住院患者按照细菌培养结果和临床症状分为感染组和非感染组,血清PCT、IL-6采用化学发光分析仪进行检测,血清CRP采用生化分析仪进行检测,中性粒细胞CD64采用流式细胞分析仪进行检测,WBC和中性粒细胞比例采用全血细胞分析仪进行检测。数据采用logistic回归和受试者工作特征（ROC）曲线进行分析。结果感染组各项指标均高于非感染组（P〈0.01）。Logistic回归分析结果表明PCT、IL-6和中性粒细胞CD64具有预测肝硬化合并感染的能力,其OR值分别为7.199（95%CI：2.180~23.771）、1.010（95%CI：1.002~1.017）和2.312（95%CI：1.485~3.600）;而CRP、WBC和中性粒细胞比例不具有预测价值。ROC曲线分析结果显示,PCT、IL-6和中性粒细胞CD64的曲线下面积（AUC）分别为0.791（95%CI：0.727~0.856）、0.762（95%CI：0.693~0.832）和0.884（95%CI：0.835~0.933）;三者联合检测的AUC为0.932（95%CI：0.897~0.967）,诊断准确率为86.9%。结论PCT、IL-6和中性粒细胞CD64可以作为诊断肝硬化合并感染的指标,三者联合检测能够提高临床诊断效率。

关键词：降钙素原白介素6 中性粒细胞CD64 肝硬化感染

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位W/O/W型复乳剂的研制

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免疫学杂志 2003年第5期19卷 387-390,393页

作者：高志刚邹全明郭刚郭桐生曾韦锟第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室重庆400038

目的制备重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(rUreB)复乳剂,研究其物理性质及免疫效率。方法设计处方采用二步法制备复乳,显微镜观察乳滴结构及粒径分布,以电导法测定包封率,以经典法、离心法及电导法观察复乳的稳定性,免疫印迹观察抗原制... 详细信息

目的制备重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(rUreB)复乳剂,研究其物理性质及免疫效率。方法设计处方采用二步法制备复乳,显微镜观察乳滴结构及粒径分布,以电导法测定包封率,以经典法、离心法及电导法观察复乳的稳定性,免疫印迹观察抗原制备成复乳剂后免疫反应性的变化,以动物实验观察rUreB复乳的免疫效率。结果制备的rUreB复乳性质稳定、包封率98.3％、粒径大小主要在2～10μm,免疫印迹及小鼠口服免疫后特异性抗体测定结果表明,该复乳具有良好的免疫原性,剂量小、免疫效率高。结论将幽门螺杆菌尿素酶B亚单位制备成复乳剂可得到高效、廉价、使用方便的疫苗,复乳是一个很有潜力的黏膜疫苗传送系统。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位复乳免疫效率

重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位疫苗鼻腔免疫的实验研究

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第1期19卷 68-70页

作者：高志刚邹全明郭刚郭桐生曾韦锟解庆华第三军医大学临床微生物及免疫学教研室重庆400038

目的:探讨基因工程疫苗Hp重组尿素酶B亚单位(rUreB)鼻腔接种的免疫效果。方法:以rUreB不同剂量或加不同佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠。末次免疫7 d后,收集血清及胃黏膜、小肠黏膜、鼻黏膜及气管黏膜冲洗液,用ELISA法检测抗rUreB特异性抗体。... 详细信息

目的:探讨基因工程疫苗Hp重组尿素酶B亚单位(rUreB)鼻腔接种的免疫效果。方法:以rUreB不同剂量或加不同佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠。末次免疫7 d后,收集血清及胃黏膜、小肠黏膜、鼻黏膜及气管黏膜冲洗液,用ELISA法检测抗rUreB特异性抗体。结果:rUreB鼻腔免疫后各实验组血清特异性IgG及各黏膜冲洗液中特异性IgA的水平均明显增高,与对照组相比较差异显著(P<0.01)。20μg剂量组与10μg剂量组相比较,仅血清特异性IgG水平增高,其它黏膜特异性IgA的水平未见增高。大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的佐剂效果较霍乱毒素B亚单位(CTB)强,卡泊波可增强鼻腔接种疫苗在胃黏膜洗液中的抗体应答水平。结论:CTB、LTB、卡泊波均可作为rUreB鼻腔黏膜接种的佐剂。HprUreB鼻黏膜接种,不仅可诱导血清特异性抗体反应,而且能引起多个黏膜部位的免疫应答,是一种方便、有效、廉价的免疫途径。

关键词：重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位疫苗鼻腔免疫实验研究

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泌尿生殖道支原体检测及药敏结果分析

解放军医学杂志 2006年第1期31卷 7-8页

作者：张鞠玲曲芬崔恩博郭桐生鲍春梅毛远丽解放军第302医院检验中心北京100039

目的了解解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)的感染情况及其对抗生素的敏感性以指导临床合理用药。方法应用法国梅里埃公司IST支原体试剂盒进行支原体鉴定及药敏检测,并对结果进行统计学分析。结果1008例样本中,阳性数为781例,其中Uu阳性57... 详细信息

目的了解解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)的感染情况及其对抗生素的敏感性以指导临床合理用药。方法应用法国梅里埃公司IST支原体试剂盒进行支原体鉴定及药敏检测,并对结果进行统计学分析。结果1008例样本中,阳性数为781例,其中Uu阳性572例,占56.0%,Mh阳性40例,占4.0%,Uu+Mh阳性169例,占16.7%。对9种抗生素强力霉素、交沙霉素、氧氟沙星、红霉素、四环素、环丙沙星、阿齐霉素、克拉霉素和原始霉素的药物敏感率,Uu分别为89.3%、95.1%、17.5%、64.3%、84.1%、14.8%、77.8%、90.8%和96.5%,Mh分别为86.0%、78.9%、23.2%、0.0%、73.2%、57.1%、0.0%、7.7%和83.9%。与2000～2003年药敏结果比较,2004年阿齐霉素和克拉霉素耐药率显著升高(P<0.01)。结论支原体感染以Uu为主,强力霉素、交沙霉素、克拉霉素、原始霉素对Uu的敏感性较好,而克拉霉素、红霉素和阿齐霉素对Mh高度耐药。临床用药应根据支原体的种类和药物敏感性进行选择。

关键词：解脲脲原体支原体人型微生物敏感性试验

CpG基序对幽门螺杆菌疫苗的免疫佐剂效应实验研究

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第三军医大学学报 2004年第3期26卷 238-241页

作者：郭桐生冯强郭刚解庆华邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物和免疫学教研室重庆400038

目的　探讨CpG在幽门螺杆菌疫苗研究中的佐剂效应。方法　将 60只BALB c小鼠分为 4组 ,分别以H .pylori尿素酶B亚单位 (rUreB) +CPG、rUreB +CT、单独UreB以及PBS进行口服免疫 ,ELISA检测胃、肠、气管冲洗液sIgA以及血清IgG亚类 (IgG1,I... 详细信息

目的　探讨CpG在幽门螺杆菌疫苗研究中的佐剂效应。方法　将 60只BALB c小鼠分为 4组 ,分别以H .pylori尿素酶B亚单位 (rUreB) +CPG、rUreB +CT、单独UreB以及PBS进行口服免疫 ,ELISA检测胃、肠、气管冲洗液sIgA以及血清IgG亚类 (IgG1,IgG2a) ,RT PCR差异显示T淋巴细胞IFN γ、IL 4mRNA。结果　①CpG +rUreB组在胃、肠、气管和血清产特异性抗体水平显著高于PBS组和单独rUreB组 (P 0 0 5 ) ;②抗原刺激后CpG +rUreB组T淋巴细胞表达的IFN γ、IL 4mRNA显著高于PBS组和rUreB组。结论　①CpG可能是H .pylori疫苗研究中有效的粘膜佐剂 ;②CpG +rUreB组诱导的可能是Th1 Th2型免疫应答。

关键词：幽门螺杆菌 CpG基序佐剂尿素酶B亚单位

三种LT突变体的幽门螺杆菌疫苗黏膜免疫佐剂效应比较

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免疫学杂志 2007年第6期23卷 640-644页

作者：冯强邹全明郭桐生重庆教育学院生命科学与化学系重庆400067 第三军医大学临床微生物学教研室重庆400038

目的探讨3种大肠杆菌不耐热肠毒素突变体在辅佐幽门螺杆菌候选疫苗尿素酶B亚单位(rUreB)中的佐剂效应。方法各组Balb/c小鼠分别用PBS、rUreB、rUreB+LTK63、rUreB+LTR72、rUreB+LTKR及rUreB+CT进行4次口服免疫。ELISA检测胃、肠、气管... 详细信息

目的探讨3种大肠杆菌不耐热肠毒素突变体在辅佐幽门螺杆菌候选疫苗尿素酶B亚单位(rUreB)中的佐剂效应。方法各组Balb/c小鼠分别用PBS、rUreB、rUreB+LTK63、rUreB+LTR72、rUreB+LTKR及rUreB+CT进行4次口服免疫。ELISA检测胃、肠、气管冲洗液sIgA以及血清IgG亚类(IgG1,IgG2a);RT-PCR差异显示T淋巴细胞IFN-γ、IL-4 mRNA;ELISPOT检测肠派伊尔氏结IgA、IgG抗体分泌细胞。结果①各rUREB加突变体佐剂组在胃、肠、气管的sIgA和血清IgG1、IgG2a水平显著高于PBS组和单独rUreB组(P生特异的抗rUreB的抗体,且3种突变体诱导的免疫应答可能都是Th1/Th2型。LTR72的佐剂效应强于LTK63及LTKR。LTKR无毒,其稳定性高于LTR72,佐剂活性高于LTK63,是一个有希望的新型黏膜免疫佐剂。

关键词：幽门螺杆菌大肠杆菌耐热肠毒素突变体佐剂尿素酶B亚单位