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柽柳液泡膜H+-ATPasec"亚基（ThVHAc" 1）基因耐盐功能分析

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柽柳液泡膜H+-ATPasec"亚基（ThVHAc" 1）基因耐盐功能分析

作者：郭宇聪东北林业大学

学位级别：硕士

植物液泡膜H+-ATPase (V-ATPase)是一个多亚基复合蛋白,在植物中最基本的功能是维持细胞质内的酸碱性内平衡状态(pH值内稳态)和建立跨膜电化学梯度、为相关的代谢提供能量。当植物处于逆境条件下,V-ATPase在调控植物响应逆境过程的功能... 详细信息

植物液泡膜H+-ATPase (V-ATPase)是一个多亚基复合蛋白,在植物中最基本的功能是维持细胞质内的酸碱性内平衡状态(pH值内稳态)和建立跨膜电化学梯度、为相关的代谢提供能量。当植物处于逆境条件下,V-ATPase在调控植物响应逆境过程的功能具有复杂性和多样性。对V-ATPase全酶功能的了解可以通过其关键亚基的深入研究来实现,有研究报道了其中的a、c、G等亚基的抗逆功能。但鲜有关于c”亚基的抗逆功能研究的报道。本研究对柽柳V-ATPase c"亚基基因的表达和抗逆功能进行了初步分析,获得的结果如下：对0.4 mol/L NaCl,20% PEG,0.3 mol/L NaHCO3,150 μmol/L CdCl2和100 μmol/L ABA处理后刚毛柽柳根、茎、叶中ThVHAc"1基因的表达进行了分析,结果显示该基因能对这些胁迫做出响应,在胁迫后柽柳各组织中主要表现为上调表达,在NaCl胁迫24 h的叶中表达被诱导了8.88倍。在前期研究中已经证实ThVHAc1基因能明显提高植物的抗逆能力,为了分析ThVHAc"1基因是否也具有抗逆功能,将ThVHAc"1基因转入酵母中,使其在酵母中表达,分析比较了转基因和对照酵母在各种逆境胁迫后的存活率,结果显示,与对照酵母相比,转ThVHAc"1基因酵母能提高抵抗盐、过氧化物、重金属、异常温度和干旱等胁迫的能力。推测ThVHAc"1基因也能参与多种逆境胁迫抗性过程。为了进一步分析ThVHAc"1基因在植物中的抗逆功能,构建了ThVHAc"1基因植物过表达载体35S::ThVHAc"1,利用农杆菌介导的蘸花法将重组载体转入拟南芥,对转基因拟南芥中的ThVHAc"1基因表达进行分析,确认其确实过表达。对T3代转基因苗进行胁迫处理。分析比较胁迫前后转基因和对照拟南芥发芽、生长和相关抗逆生理指标。结果显示转ThVHAc"1基因拟南芥在盐胁迫下的发芽率和生物量积累明显优于对照。组织化学染色(DAB、H2DCF、Evans Blue)结果显示,盐胁迫下,过表达ThVHAc"1基因拟南芥积累的活性氧(ROS)明显少于野生型(WT),所受到的细胞损伤也比WT轻。此外,非胁迫条件下,转基因和非转基因株系的保护酶活性、电导率、MDA含量等无明显差异,但NaCl胁迫后,ThVHAc"1转基因株系的SOD、POD、GST活性显著高于WT,而H2O2含量、MDA含量及相对电导率却显著低于WT。这些结果表明,过表达ThVHAc"1明显提高了转ThVHAc"1基因拟南芥的耐盐能力。为了验证ThVHAc"1基因在拟南芥中异源表达的结果,将ThVHAc"1在柽柳中进行了瞬时过表达和抑制表达,比较瞬时过表达、抑制表达ThVHAc"1基因柽柳和对照柽柳在盐胁迫前后的表现。结果显示,盐胁迫下过表达ThVHAc"1基因的柽柳的保护酶活性明显高于pROKⅡ株系,而抑制表达株系的保护酶活性明显低于pROKⅡ株系;同时,过表达株系的ROS水平和细胞受损伤程度明显少于或弱于pROKⅡ株系,而抑制表达株系却明显高于pROKⅡ株系。此外,为进一步分析Th VHAc"l基因耐盐调控的上游机制,利用染色体步移法克隆获得了ThVHAc"1上游1033 bp启动子序列。利用PLACE在线分析软件对ThVHAc"1上游启动子序列进行分析,发现该启动子含有G-box、TATA-box、CAAT-box、W-box等多个胁迫应答元件。利用酵母单杂交技术筛选获得可特异识别ThVHAc"1基因启动子中的DOF元件的上游调控基因ThDof8。初步证实ThDof8可能参与调控或者共同与ThVHAc"l来完成植株的耐盐调控。总之,本研究初步证实了ThVHAc"l基因具有耐盐功能,该研究结果完善了我们对V-ATPase c'’亚基基因功能的了解,并为阐明柽柳V-ATPase参与的抗逆机制奠定了基础。在后续研究中,将对ThVHAc"l基因的上游调控机制和其表达对V-ATPase全酶的影响等方面进行进一步的研究。

关键词：刚毛柽柳非生物胁迫耐盐 ThVHAc"1 启动子

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一种基于规则的眼睛快速定位方法

计算机工程 2004年第9期30卷 154-156页

作者：毛敏峰张星明郭宇聪华南理工大学计算机学院广州510640

介绍了一种快速眼睛定位方法。它结合使用了肤色概率模型、人脸图像的梯度信息以及运动模型提取出人脸器官的可能特征点，然后使用一系列规则筛选出最可能是眼睛对的特征点对，最后通过确认模块进行确认。实验结果表明此算法具有很好的... 详细信息

介绍了一种快速眼睛定位方法。它结合使用了肤色概率模型、人脸图像的梯度信息以及运动模型提取出人脸器官的可能特征点，然后使用一系列规则筛选出最可能是眼睛对的特征点对，最后通过确认模块进行确认。实验结果表明此算法具有很好的准确性和实时性。

关键词：眼睛定位规则主成分分析肤色模型数学形态学

不同长度ThVHAc1基因启动子片段分离及活性分析

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林业科学 2016年第1期52卷 55-61页

作者：杨桂燕郭宇聪张凤娇赵震高彩球林木遗传育种国家重点实验室东北林业大学哈尔滨150040

[目的]VHAc基因(V-ATPase c亚基)是V-ATPase的重要亚基,能响应盐、重金属等胁迫,过表达刚毛柽柳ThVHAc1基因的酵母能提高抗CdCl_2耐NaCl能力。本研究拟通过分离ThVHAc1基因不同长度启动子片段并对其胁迫后活性进行分析,以进一步探讨ThVH... 详细信息

[目的]VHAc基因(V-ATPase c亚基)是V-ATPase的重要亚基,能响应盐、重金属等胁迫,过表达刚毛柽柳ThVHAc1基因的酵母能提高抗CdCl_2耐NaCl能力。本研究拟通过分离ThVHAc1基因不同长度启动子片段并对其胁迫后活性进行分析,以进一步探讨ThVHAc1基因响应CdCl_2和NaCl胁迫的机制。[方法]根据ThVHAc1基因启动子中含有的Dof顺式作用元件的分布,将ThVHAc1基因上游启动子分为205 bp(-1—-205),504 bp(-1—-504)和781 bp(-1—-781)3个不同长度片段。将这些不同长度启动子片段分别替换p CAMBIA1301载体上的CaMV35S启动子,以驱动GUS基因表达,构建植物表达载体,利用农杆菌介导法转化拟南芥。对4周龄的T4代转基因拟南芥分别进行H_2O(非胁迫处理,对照)、100 mmol·L^(-1)NaCl和150μmol·L^(-1)CdCl_2胁迫处理,比较不同转基因株系的GUS染色和GUS酶活性。[结果]正常生长条件下,CaMV35S株系在根、茎、叶中均有GUS染色;3个启动子片段转基因株系均能在不同组织观察到GUS染色,且在根、茎、叶中有一定差异,但整体上GUS酶活性表现为781>504>205。NaCl胁迫下,CaMV35S株系的GUS染色及酶活性与正常生长条件相比无明显变化,但3个启动子片段转基因株系的GUS染色及酶活性均显著降低,且781株系的GUS酶活性分别为205和504株系的2.73和2.07倍;同时,3个启动子片段转基因株系的组织表达特性发生了一些改变,如,504株系在老叶中表达明显增强,嫩叶中减弱,根中无明显变化。CdCl_2胁迫下各转基因株系的GUS染色和酶活性变化趋势与NaCl胁迫相似。CdCl_2胁迫下,205,504,781株系的GUS酶活性分别为非胁迫时的52.4%,57.9%和80.9%;胁迫后的组织表达活性也发生了一些改变,205株系的GUS染色在老叶较深、嫩叶较浅,504株系则在各部分的表达较均匀,781株系大多叶片的GUS表达减弱;但781株系的GUS酶活性仍然最高,分别为205和504株系的2.67和2.07倍。[结论]ThVHAc1基因启动子片段的驱动活性与长度呈正相关;各不同片段启动子在根、茎、叶中的GUS染色及活性具有一定差异,体现在不同启动子片段的表达活性具有一定的组织特异性。NaCl和CdCl_2胁迫对ThVHAc1基因启动子的驱动能力具有一定影响,胁迫后各启动子片段转基因株系GUS酶活性均显著降低,但长片段受胁迫的影响程度低于短片段。Dof元件的数量在3个启动子片段中依次减少,表明Dof元件可能对NaCl和CdCl_2胁迫有一定的调节作用。同时,NaCl和CdCl_2胁迫对ThVHAc1基因启动子的组织表达特性具有一定的影响。

关键词：刚毛柽柳拟南芥 ThVHAc1基因启动子 GUS酶活性 NaCl胁迫 CdCl_2胁迫

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行政协议相对人违约时行政机关的救济机制

百科知识 2023年第3期 27-28+31页

作者：郭宇聪大连海事大学法学院

我国最新颁布施行的《最高人民法院关于审理行政协议案件若干问题的规定》（简称《行政协议解释》）创建了行政机关在行政协议履行过程中的救济机制。此机制填补了行政机关在行政协议纠纷中救济方式的空白。现行的行政诉讼法仅规定了协... 详细信息

我国最新颁布施行的《最高人民法院关于审理行政协议案件若干问题的规定》（简称《行政协议解释》）创建了行政机关在行政协议履行过程中的救济机制。此机制填补了行政机关在行政协议纠纷中救济方式的空白。现行的行政诉讼法仅规定了协议相对人在行政机关违约后可以通过行政诉讼的方式保护自身权利。但是行政协议的矛盾纠纷并不单指行政机关的违约，协议相对人作为协议主体之一也可以成为违约的一方。为此《行政协议解释》构建出全新的行政机关救济机制，此机制符合法治发展进程的要求。

关键词：相对人救济机制

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柽柳液泡膜微囊蛋白的分离

西南林业大学学报（自然科学） 2016年第1期36卷 28-32页

作者：杨桂燕赵玉琳郭宇聪赵震高彩球林木遗传育种国家重点实验室(东北林业大学) 黑龙江哈尔滨150040 西北农林科技大学林学院核桃研究中心陕西杨凌712100

采用差速离心和不连续蔗糖密度梯度离心法分离和纯化柽柳液泡膜微囊，通过western杂交对获得的微囊蛋白进行检测，获得ThVHAcl蛋白目的条带，表明分离的液泡膜微囊中含有有效的V-ATPase成分，进一步测定液泡膜微囊对NaNO3、Na3VO3、NaN... 详细信息

采用差速离心和不连续蔗糖密度梯度离心法分离和纯化柽柳液泡膜微囊，通过western杂交对获得的微囊蛋白进行检测，获得ThVHAcl蛋白目的条带，表明分离的液泡膜微囊中含有有效的V-ATPase成分，进一步测定液泡膜微囊对NaNO3、Na3VO3、NaN3的敏感性及V-ATPase的水解活性和翻转比例。结果表明：液泡膜微囊主要分布在0-25％蔗糖梯度界面上，且研磨法提取液泡膜微囊具有较高的水解活性和较大的原位比例，表明液氮研磨结合差速离心及不连续蔗糖密度梯度离心法能有效提取柽柳液泡膜微囊。

关键词：刚毛柽柳液泡膜 V-ATPase 翻转比例

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基于多方法融合的人脸图像光照纠正算法

计算机工程与设计 2006年第9期27卷 1547-1549,1559页

作者：郭宇聪张星明詹皇源张咏梅华南理工大学计算机学院广东广州510640

提出了一种人脸识别图像的光照纠正预处理算法。该算法首先将均衡化引入仿射变换算法和光照补偿算法中,改进它们的处理效果;然后采用一种基于直方图灰度重心分布统计的方法,将多种预处理算法有效地融合在一起,得到新的光照纠正预处理算... 详细信息

提出了一种人脸识别图像的光照纠正预处理算法。该算法首先将均衡化引入仿射变换算法和光照补偿算法中,改进它们的处理效果;然后采用一种基于直方图灰度重心分布统计的方法,将多种预处理算法有效地融合在一起,得到新的光照纠正预处理算法。实验表明该算法具有光照无关性,能取得良好的光照纠正效果,并可大幅度提高复杂光照环境下的人脸识别率。

关键词：人脸识别预处理仿射变换算法光照补偿算法光照无关

过表达ThVHAc1对拟南芥V-ATPase各亚基表达的影响

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植物研究 2015年第5期35卷 692-695页

作者：杨桂燕郭宇聪赵玉琳张凤娇高彩球东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室哈尔滨150040 西北农林科技大学林学院核桃研究中心杨凌712100

V-ATPase是多亚基复合蛋白,其c亚基负责V-ATPase的组装及质子通道的形成。本研究拟分析盐胁迫下过表达Th VHAc1基因拟南芥V-ATPase各亚基的表达,探讨过表达外源c亚基对拟南芥V-ATPase全酶响应盐胁迫表达模式的影响。实时荧光定量PCR结... 详细信息

V-ATPase是多亚基复合蛋白,其c亚基负责V-ATPase的组装及质子通道的形成。本研究拟分析盐胁迫下过表达Th VHAc1基因拟南芥V-ATPase各亚基的表达,探讨过表达外源c亚基对拟南芥V-ATPase全酶响应盐胁迫表达模式的影响。实时荧光定量PCR结果显示,盐胁迫下,过表达外源Th VHAc1拟南芥V-ATPase 28个亚基的表达发生了明显改变,且拟南芥5个c亚基的表达均不同程度的被抑制。表明外源Th VHAc1基因能影响拟南芥V-ATPase各亚基的表达以调节V-ATPase全酶的活性,但各亚基的表达模式与V-ATPase活性非简单对应关系,各亚基互相协调决定V-ATPase活性。

关键词：刚毛柽柳表达分析 c亚基 V-ATPase ThVHAc1

盐胁迫下TheIF1A基因启动子表达特性分析

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西南林业大学学报（自然科学） 2015年第6期35卷 1-5页

作者：郭宇聪杨桂燕赵玉琳张凤娇高彩球林木遗传育种国家重点实验室(东北林业大学) 黑龙江哈尔滨150040

为探讨刚毛柽柳真核翻译起始因子1A(The IF1A)基因对植物逆境胁迫响应的调控作用,对The IF1A基因启动子盐胁迫下的应答表达情况进行分析,比较转The IF1A基因启动子拟南芥在不同浓度盐胁迫及不同时间后GUS染色和酶活差异。结果显示:The I... 详细信息

为探讨刚毛柽柳真核翻译起始因子1A(The IF1A)基因对植物逆境胁迫响应的调控作用,对The IF1A基因启动子盐胁迫下的应答表达情况进行分析,比较转The IF1A基因启动子拟南芥在不同浓度盐胁迫及不同时间后GUS染色和酶活差异。结果显示:The IF1A启动子在短时间内即对400 mmol/L Na Cl胁迫做出应答,主要表现为表达受抑制,各组织中老叶的GUS酶活性最高;100mmol/L Na Cl胁迫下,The IF1A启动子活性也被明显抑制,胁迫20 h后,GUS酶活性恢复到较高水平,各组织中,根中的活性最低。研究表明,The IF1A启动子的表达能对盐胁迫作出应答,但在低盐和高盐胁迫下的应答方式存在一定的差异性。

关键词：刚毛柽柳盐胁迫表达模式 TheIF1A启动子

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惩罚对齐法:测量不变性检验的新方法

心理科学进展 2025年第1期33卷 176-190,I0008-I0013页

作者：温聪聪厦门大学国际学院厦门361005

Asparouhov和Muthén在2023年提出了一种全新的惩罚结构方程模型框架。惩罚对齐法是该模型框架在测量不变性检验领域的应用范例。惩罚对齐法继承了多组探索性因子分析在探索性因子分析框架内进行测量不变性检验和可以估计交叉载荷等优点... 详细信息

Asparouhov和Muthén在2023年提出了一种全新的惩罚结构方程模型框架。惩罚对齐法是该模型框架在测量不变性检验领域的应用范例。惩罚对齐法继承了多组探索性因子分析在探索性因子分析框架内进行测量不变性检验和可以估计交叉载荷等优点,继承了对齐法使用成分损失函数、允许模型中存在一定量不等参数等优点,同时继承了贝叶斯结构方程模型对模型参数设置先验分布、通过检验模型参数的近似测量不变性达到潜因子均值比较的目的等优点。此外,惩罚对齐法还克服了传统测量不变性检验方法的一些不足。本文以大学生职业价值观研究为例,比较了多组验证性因子分析、基于验证性因子分析的惩罚对齐法分析、基于探索性结构方程模型的惩罚对齐法分析拟合样本数据的效果,演示了如何使用惩罚对齐法进行测量不变性检验和多组比较。

关键词：测量不变性检验惩罚对齐法贝叶斯结构方程模型探索性结构方程模型对齐先验分布

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