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血液循环中存在内皮细胞的前体细胞(英文)

中国实验血液学杂志 2001年第2期9卷 101-104页

作者：郭子宽唐佩弦刘晓丹袁红丰毛宁军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学研究室北京100850

为证明出生后血液循环中存在内皮细胞的前体细胞 ,从G CSF动员的成人外周血及脐带血中分离CD34+ 细胞 ,将之接种于纤连蛋白与明胶铺板的培养皿上 ,培养体系中加入重组人内皮细胞生长因子(rhVEGF)和重组人碱性成纤维细胞生长因子 (rhbFGF... 详细信息

为证明出生后血液循环中存在内皮细胞的前体细胞 ,从G CSF动员的成人外周血及脐带血中分离CD34+ 细胞 ,将之接种于纤连蛋白与明胶铺板的培养皿上 ,培养体系中加入重组人内皮细胞生长因子(rhVEGF)和重组人碱性成纤维细胞生长因子 (rhbFGF)。用vonWillibrand因子 (vWF)表达及I型凝集素(UEA I)结合能力鉴定内皮细胞。结果表明 ,上述体系经 5 - 6周培养后 ,接种CD34+ 细胞的皿出现一层致密的贴壁细胞 ,而接种CD34-细胞的皿则未形成贴壁层。免疫细胞化学和流式细胞术的结果显示 ,几乎所有贴壁细胞为vWF阳性 ,且约 90 %的细胞具有UEA I结合能力。实验结果证明人出生后阶段血循环中存在有成血管细胞 (angioblast) ,因此在成人中也可发生血管系形成过程。

关键词：内皮细胞前体细胞 CD34^+细胞血液循环成血管细胞

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人骨髓间充质干细胞体外分化为神经元样细胞

中国实验血液学杂志 2001年第1期9卷 91-92页

作者：郭子宽刘晓丹候春梅李秀森毛宁北京基础医学研究所细胞生物学研究室北京100850

Recent reports have clearly demonstrated that bone marrow cells can be differentiated into neurons, suggesting the existence of cells with the differentiation capacity in the bone marrow cell population. It is well known that hematopoietic stem cells as well as mesenchymal stem cells (MSCs) can be transplanted and therefore, alternative of them might contribute to the process. In the present study it was addressed whether marrow MSCs could be coaxed into neuron-specific antigen bearing cells and if so, whether the differentiated cells possess the cytochemical features seen in neurons. The report here showed that high concentration of 2-mercaptoethanol (2-ME) could induce some of the MSCs into neuron-like cells expressing neurofilament (NF) and neuron specific enolase (NSE). The neuron-like cells were alkaline phosphotase positive while the others MSCs were kept negative. Cells treated with 2-ME were positive for α-naphthylacetate esterase and glycogen and negative for acetylchonlinesterase, which were similar with the results seen in untreated cells. Furthermore, Nissel body was not observed in treated cells shown by toluidine blue staining. Therefore, it is likely that the cells described here seem not belong to the neuronal lineage. These findings, however, reveal that human MSCs could alter their committed fates under some circumstances.

关键词：骨髓间充质干细胞细胞分化神经元样细胞

内皮细胞支持体外造血和造血干/祖细胞体外扩增

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内皮细胞支持体外造血和造血干/祖细胞体外扩增

凝血酶活化的富血小板血浆促进人骨髓间充质干细胞增殖

中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会

作者：袁红丰郭子宽刘晓丹张双喜毛宁军事医学科学院野战输血研究所

造血细胞与内皮细胞之间的关系十分密切。一方面,内皮细胞和造血细胞在发育上具有同源性,它们来源于共同的前体细胞;另一方面,内皮细胞通过分泌细胞因子和表达粘附分子,对造血干/祖细胞增殖与分化产生重要的调控作用。为了研究内皮细胞...

造血细胞与内皮细胞之间的关系十分密切。一方面,内皮细胞和造血细胞在发育上具有同源性,它们来源于共同的前体细胞;另一方面,内皮细胞通过分泌细胞因子和表达粘附分子,对造血干/祖细胞增殖与分化产生重要的调控作用。为了研究内皮细胞在造血调控中的作用,本实验采用体外诱导脐血CD34+细胞向内皮细胞分化、胰蛋白酶消化及SV40大T抗原转染原代人脐静脉内皮细胞的方法,分别获取了三种不同来源的内皮细胞,并将脐血CD34+细胞分别与这三种内皮细胞直接接触共培养,研究了三种内皮细胞特别是系统地观察

关键词：

来源： cnki会议评论

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组织工程与重建外科杂志 2010年第1期6卷 14-16,20页

作者：具星爱郭子宽靳继德李占全中国医科大学附属盛京医院辽宁省沈阳市110016 军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究室北京市100850

目的探索凝血酶活化的富血小板血浆(Thrombin-activated platelet-rich plasma,tPRP)替代牛血清,进行人骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stme cells,MSC)分离及培养扩增的可行性。方法分别用MTT法和羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记细... 详细信息

目的探索凝血酶活化的富血小板血浆(Thrombin-activated platelet-rich plasma,tPRP)替代牛血清,进行人骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stme cells,MSC)分离及培养扩增的可行性。方法分别用MTT法和羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记细胞技术,观察人骨髓MSC在含有tPRP和胎牛血清培养体系中的增殖状态:利用流式细胞学技术检测细胞表面表型;细胞化学染色法分析不同培养体系所获细胞的成骨及成脂细胞分化能力。结果tPRP培养的人骨髓MSC呈典型的成纤维细胞样形态,且tPRP促MSC增殖能力优于筛选后的胎牛血清。tPRP培养的MSC均表达CD29、CD73、CD166和HLA-ABC,而不表达CD31、CD34、CD45和HLA-DR。体外分化实验显示,利用tPRP培养的MSC具有体外成骨和成脂能力。结论tPRP可以替代胎牛血清,用于人骨髓MSC的培养。

关键词：凝血酶富血小板血浆骨髓间充质干细胞

携EGFP基因的人骨髓间充质干细胞具有成骨及成脂肪功能

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携EGFP基因的人骨髓间充质干细胞具有成骨及成脂肪功能

锌离子促进人骨髓间充质干细胞增殖并增强其纤黏连蛋白表达的实验研究

第10届全国实验血液学会议

作者：刘晓丹郭子宽侯春梅李秀森毛宁军事医学科学院基础医学研究所细胞生物室军事医学科学院基础医学研究所细胞生物室军事医学科学院基础医学研究所细胞生物室军事医学科学院基础医学研究所细胞生物室军事医学科学院基础医学研究所细胞生物室

＜正＞背景间充质干细胞（MSC）是存在于骨髓、骨膜、胸腺和皮肤等组织中的一小群细胞,具有向成骨、软骨、脂肪、内皮、神经细胞以及骨髓基质细胞分化的能力。与造血干细胞不同,MSC在体外增殖旺盛,并在增殖过程中维持其多向分化性。在... 详细信息

＜正＞背景间充质干细胞（MSC）是存在于骨髓、骨膜、胸腺和皮肤等组织中的一小群细胞,具有向成骨、软骨、脂肪、内皮、神经细胞以及骨髓基质细胞分化的能力。与造血干细胞不同,MSC在体外增殖旺盛,并在增殖过程中维持其多向分化性。在适当的条件下,体外培养过程中的MSC可以有丝分裂150-300次。MSC的增殖特性使之可作为一种受体细胞,用于反转录病毒载体介导的外源基因转移,而MSC的可移植性则是其可应用于基因治疗的基础。但是,反转录病毒介导的外源基因转染效率如何,以及基因修饰的干细胞是否仍具有多向分化能力,均需要研究证实。在本实验中,我们应用增强型绿色荧光蛋白（EGFP）作为标志基因,对上述问题进行了初步探讨。方法人骨髓 MSC的分离与培养按文献方法分离培养人骨髓MSC,流式细胞学分析细胞表面标志显示,培养的细胞为一群表型均一的细胞。EGFP载体转染MSCs将EGFP反转录载体pLXSN-EGFP转染包

关键词：间充质干细胞绿色灸光蛋白基因治疗

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组织工程与重建外科杂志 2013年第2期9卷 81-84页

作者：毕晓云黄舒郭杰陈晶砺陈小坚丁丽陈津郭子宽广州市经济技术开发区医院广东省广州市510730 军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究室北京市100850

目的探索适宜的锌离子浓度,以促进人间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)在无血清培养基中的黏附和增殖。方法将人骨髓MSC培养于含胰岛素、转铁蛋白和亚硒酸钠的α-MEM中,体系中加入不同浓度硫酸锌。培养72 h后,MTT实验测定490 n... 详细信息

目的探索适宜的锌离子浓度,以促进人间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)在无血清培养基中的黏附和增殖。方法将人骨髓MSC培养于含胰岛素、转铁蛋白和亚硒酸钠的α-MEM中,体系中加入不同浓度硫酸锌。培养72 h后,MTT实验测定490 nm光密度值,观察细胞增殖状态。蛋白印迹杂交比较含锌离子(1×10-5M)培养体系与未加锌离子培养体系两组细胞纤黏连蛋白含量的差异。结果MTT结果显示,在一定浓度范围内,锌离子促进人骨髓MSC增殖,作用呈浓度依赖性,适宜浓度为1×10-5M;蛋白印迹实验表明,在该浓度刺激下细胞培养72 h后,纤黏连蛋白表达量显著升高。结论锌离子可作为人无血清培养基中的一个成分,可提高人骨髓MSC的贴壁生长能力。

关键词：间充质干细胞无血清培养体系锌离子纤黏连蛋白

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肿瘤细胞分泌物抑制树突状细胞的生成和功能

中国肿瘤生物治疗杂志 2002年第2期9卷 105-109页

作者：李春昭侯春梅吴英张双喜郭子宽毛宁北京军区总医院消化内科北京100700 军事医学科学院基础医学研究所

目的：探讨肿瘤细胞对人单个核细胞源树突状细胞（dendritic cells,DC）的生成和功能的影响。方法：培养外周血单个核细胞源DC，体系中加入人肝癌细胞系H7402，结肠癌细胞系HCT－8及正常人骨髓基质细胞系HFCL的培养上清液，以正常培养... 详细信息

目的：探讨肿瘤细胞对人单个核细胞源树突状细胞（dendritic cells,DC）的生成和功能的影响。方法：培养外周血单个核细胞源DC，体系中加入人肝癌细胞系H7402，结肠癌细胞系HCT－8及正常人骨髓基质细胞系HFCL的培养上清液，以正常培养体系为对照。应用流式技术检测DC的细胞表面标志及吞噬功能；通过[^3H]－TdR掺入法检测DC激活同种异体T淋巴细胞活化的能力。结果：H7402和HCT－8细胞培养上清液作为条件培养的DC，低表达CD1a抗原、共刺激分子（CD86）及MHC-Ⅱ类分子，与对照及基质细胞组比较有明显差异。DC成熟也受到抑制。此外，DC对葡聚糖（Dextran）的吞噬功能下降，对同种异常T淋巴细胞激活的能力较低。结论：肿瘤细胞分泌的某些物质可抑制DC的生成及其相关功能，这可能是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的机制之一。

关键词：单个核细胞源树突状细胞肿瘤细胞免疫逃逸 DC

人骨髓间充质干细胞生物学特性及腺病毒介导的GFP标记

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西安交通大学学报（医学版） 2012年第5期33卷 587-592页

作者：谭云鹤种铁杨平郭子宽甘为民陈长虹翟宇强石硕文彭秀君西安交通大学医学院第二附属医院泌尿外科陕西西安710004 西安市中心医院泌尿外科陕西西安710003 军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究室北京100850

目的建立人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分离、培养以及鉴定的方法,同时应用腺病毒介导的绿色荧光蛋白(Ad-GFP)检测细胞转染的效率。方法应用人淋巴细胞分离液(Ficoll)对hMSCs进行分离,经贴壁纯化后用MTT法检测增殖能力;并对其成骨、成脂、... 详细信息

目的建立人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分离、培养以及鉴定的方法,同时应用腺病毒介导的绿色荧光蛋白(Ad-GFP)检测细胞转染的效率。方法应用人淋巴细胞分离液(Ficoll)对hMSCs进行分离,经贴壁纯化后用MTT法检测增殖能力;并对其成骨、成脂、成平滑肌诱导分别进行碱性磷酸酶(ALP)、油红O染色及α-SMA免疫细胞化学检测;采用流式细胞仪(FCM)检测细胞表面标志的表达。用Ad-GFP转染,并应用荧光显微镜与FCM检测转染效率。结果 hMSCs镜下为成纤维样形态,约在第4天进入对数增长期;分化诱导后ALP染色、Von kossa银染、油红O染色以及α-SMA均为阳性;FCM检测CD14、CD31、CD45表达阴性,CD44、CD73、CD106及PDGFRβ表达阳性;当感染复数MOI=200,细胞培养48h时感染效率较高,FCM检测显示为99.81%。结论经过对增殖、分化能力以及表面标志的分析,证明用Ficoll可以分离得到较纯的hMSCs,Ad-GFP可以很好地感染细胞,为组织工程种子细胞的体内示踪提供了途径。

关键词：间充质干细胞分化细胞表面标志 Ad-GFP 细胞转染人淋巴细胞分离液(Ficoll)

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体外培养中间充质干细胞的异质性

中国实验血液学杂志 2011年第2期19卷 542-545页

作者：李玉芝鲍扬漪郭子宽徐州医学院研究生院肿瘤系江苏徐州221004 合肥市第一人民医院血液肿瘤科安徽合肥230061 军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究室北京100850

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)具有易于取材、体外扩增能力强、低免疫原性和免疫调节作用等特点,已成为细胞/基因治疗和组织工程的重要种子细胞。作为一种细胞药物,MSC已经完成Ⅲ期临床试验,用于难治性移植物抗宿主病的处... 详细信息

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)具有易于取材、体外扩增能力强、低免疫原性和免疫调节作用等特点,已成为细胞/基因治疗和组织工程的重要种子细胞。作为一种细胞药物,MSC已经完成Ⅲ期临床试验,用于难治性移植物抗宿主病的处理。然而,截至目前,人们对体外扩增MSC的本质并不清楚。体外培养的MSC都是真正意义上的干细胞么?如否,为什么扩增的MSC仍具有多向分化性呢?MSC群体的不均一性的意义是什么?本文将围绕体外扩增MSC的异质性,对上述问题进行简要的阐述。

关键词：间充质干细胞体外扩增间充质干细胞异质性