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恒河猴骨髓基质细胞源性神经干细胞体外增殖、分化规律及其电生理特性的实验研究

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恒河猴骨髓基质细胞源性神经干细胞体外增殖、分化规律及其电生理...

作者：郭再玉第一军医大学

学位级别：硕士

一.概述神经干细胞(neural stem ceils,NSCs)是一类具有自我更新和多向分化潜能的特殊细胞。通过研究NSCs,不仅可以探讨神经系统发育的分子机制,而且可利用其作为一种替代手段用于中枢神经损伤、退行性疾病和脑肿瘤等疾病的治疗。... 详细信息

一.概述神经干细胞(neural stem ceils,NSCs)是一类具有自我更新和多向分化潜能的特殊细胞。通过研究NSCs,不仅可以探讨神经系统发育的分子机制,而且可利用其作为一种替代手段用于中枢神经损伤、退行性疾病和脑肿瘤等疾病的治疗。建立稳定、可靠的NSCs体外培养体系,探索其增殖规律及分化机理是神经干细胞研究领域的重要内容之一。由于胚胎来源的NSCs受到组织来源、免疫排斥、伦理道德等方面的束缚而使其应用前景受到限制,所以,骨髓基质细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)的分离、培养成功,多分化潜能的发现和向NSCs方向分化的初步研究,为NSCs的来源提供了新的途径,使得“自体源性NSCs”的广泛应用成为可能。骨髓基质细胞源性神经干细胞(BMSCs-derived NSCs,BMSCs-D-NSCs)的诱导成功,将解决胎脑源性NSCs数量不足的问题,避免伦理学方面的争议,同时也可避免异体组织细胞移植可能存在的免疫排斥反应,是移植治疗神经功能障碍性疾病的理想细胞来源。故骨髓源神经干细胞有着广阔的应用前景,成为目前神经科学研究领域的关注焦点。本实验以灵长类动物恒河猴骨髓为研究对象,对BMSCs进行各种实验条件下的体外分离培养和诱导分化,观察各种生长因子对BMSCs-D-NSCs的体外增殖作用,比较不同生长因子体外诱导分化的效能,并应用免疫细胞化学方法

关键词：恒河猴骨髓基质细胞神经干细胞细胞分化膜片钳电生理特性

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外伤性头皮动静脉瘘一例

中华创伤杂志 2014年第3期30卷 287-288页

作者：陈谦张合亮郭再玉天津市泰达医院神经外科 300457

1病历资料患者男，33岁，左颞外伤后出现搏动性包块人院。患者2年前左颞部锐器伤行清创缝合术，后渐觉左耳前可闻杂音。体检：左耳前斜行裂伤愈合瘢痕，长约4．0cm，

关键词：动静脉瘘外伤性头皮搏动性包块清创缝合术病历资料左颞部外伤后

膜片钳技术在神经干细胞领域的研究现状及应用展望

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神经解剖学杂志 2004年第5期20卷 517-520页

作者：郭再玉姜晓丹徐如祥第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所广州510282

膜片钳技术(patch-clamp technique)是1976年由Nehetr和Sakmann在电压钳的基础上发展而来的一种记录细胞膜离子通道电生理活动的技术.其突出优点是能够在维持细胞兴奋过程中膜电位恒定的同时,直接记录离子通道电流,反映单一的(或多个的... 详细信息

膜片钳技术(patch-clamp technique)是1976年由Nehetr和Sakmann在电压钳的基础上发展而来的一种记录细胞膜离子通道电生理活动的技术.其突出优点是能够在维持细胞兴奋过程中膜电位恒定的同时,直接记录离子通道电流,反映单一的(或多个的)离子通道分子活动.此技术的出现将细胞水平和分子水平的生理学研究联系在一起,同时又将神经科学的不同领域融汇成一体,是对生理科学和神经科学研究的重大变革.

关键词：膜片钳技术离子通道神经干细胞电生理活动电压钳膜电位研究现状细胞膜记录神经科学

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灯盏花素对内皮细胞的保护作用及机制

中国药科大学学报 2015年第5期46卷 610-616页

作者：陈建萍任新生孙中华郭再玉天津泰达医院天津300457 天津泰达国际心血管病医院天津300457

探讨灯盏花素对内皮细胞的保护作用及机制。采用用不同浓度的灯盏花素(10,20,40μmol/L)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC细胞)预处理4 h,再采用氧化型低密度脂蛋白诱导细胞氧化损伤20 h,然后检测细胞的改变,包括采用MTT方法检测细胞增殖活力... 详细信息

探讨灯盏花素对内皮细胞的保护作用及机制。采用用不同浓度的灯盏花素(10,20,40μmol/L)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC细胞)预处理4 h,再采用氧化型低密度脂蛋白诱导细胞氧化损伤20 h,然后检测细胞的改变,包括采用MTT方法检测细胞增殖活力、流式细胞仪检测细胞凋亡及活性氧含量,以及蛋白免疫印迹及定量PCR方法检测细胞信号通路关键分子的改变。实验结果发现,灯盏花素可以逆转氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞的损伤并呈剂量依赖效应,并减少内皮细胞的凋亡。为探索灯盏花素的作用机制,首先检测了细胞与多种浓度及时间(2,4,6 h)的灯盏花素预孵育后的活性氧含量改变,结果发现灯盏花素可剂量及时间依赖地减少活性氧的产生。进一步发现,细胞信号通路分析发现灯盏花素可促进BCL-2的表达,抑制BAX的表达及细胞色素C的释放及caspase-3的剪切。灯盏花素可减少Keap1及激活Nrf2的核内转运,促进下游抗氧化酶NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)和谷胱甘肽-S-转移酶Mu1型(GSTM1)的基因转录及蛋白表达,增强NQO1酶活。此外,灯盏花素还可减少IKK及IKB及抑制NF-κB核内转运,而促进e NOS的表达。本研究表明灯盏花素对氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞损伤有保护作用,其作用可能与其抗氧化作用及抑制NF-κB活化有关。

关键词：灯盏花素活性氧内皮细胞细胞凋亡

体外诱导恒河猴骨髓基质细胞分化为神经细胞的分化条件

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基础医学与临床 2005年第5期25卷 402-408页

作者：郭再玉姜晓丹徐如祥徐强邹雨汐肖炳祥第一军医大学珠江医院神经外科广东广州510282

目的比较血清维甲酸(retinoicacid,RA)、胶质细胞源神经营养因子(glialcellline-derivedneurotrophicfactor,GDNF)及脑源性神经营养因子(brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)等在不同浓度诱导条件下使恒河猴骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells)诱导分化为神经干细胞(NSCs)及成熟神经细胞的分化条件。方法用Nestin、CD133抗体免疫细胞化学染色,鉴定NSCs;用NSE、-βtublin鉴定神经元;用GFAP鉴定神经胶质细胞,膜片钳检测分化成熟细胞的电生理特性。结果培养第8天多数细胞表现出Nestin及CD133抗原阳性,即为NSCs细胞;诱导后3天即有神经元样细胞出现,此后神经元样细胞逐渐增多,膜片钳检测发现这些细胞具有类似神经细胞的电生理特性。同时,与其他培养条件相比较,低浓度血清(2.5%)+RA+GDNF组诱导分化效能最高。结论应用RA+GDNF及配合使用低浓度血清能够高效诱导骨髓源NSCs向成熟神经细胞分化。

关键词：恒河猴体外诱导胶质细胞源神经营养因子脑源性神经营养因子免疫细胞化学染色 factor Nestin 神经元样细胞电生理特性骨髓基质细胞 cells) NSCs 神经胶质细胞神经细胞分化诱导分化神经干细胞 CD133 acid 不同浓度

亚低温对重症蛛网膜下腔出血后脑血流速和脑氧摄取率的影响和意义

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中华医学杂志 2018年第19期98卷 1489-1492页

作者：水涛郭再玉张国哲陈谦李博天津市泰达医院神经外科 300457

目的研究亚低温疗法对重症蛛网膜下腔出血（SAH）后脑血流速和脑氧摄取率的影响，探讨亚低温对早期脑损伤（EBI）及脑血管痉挛（CVS）的作用和机制。方法选取2014年1月至2016年12月天津市泰达医院神经外科收治的无亚低温疗法禁忌证的重... 详细信息

目的研究亚低温疗法对重症蛛网膜下腔出血（SAH）后脑血流速和脑氧摄取率的影响，探讨亚低温对早期脑损伤（EBI）及脑血管痉挛（CVS）的作用和机制。方法选取2014年1月至2016年12月天津市泰达医院神经外科收治的无亚低温疗法禁忌证的重症SAH成年患者62例，随机分为亚低温组30例和常规治疗组32例，入院一般资料差异无统计学意义。常规治疗组行血性脑脊液引流，解痉、3H治疗等措施；亚低温组除常规治疗组的治疗外，于入院当天2—8h内开始亚低温疗法，降低直肠温度并维持在（35±1）℃，维持5～7d。两组治疗期间以经颅多普勒检测大脑中动脉血流平均流速（VmMCA）及Lindergaard指数间接评估CVS程度及演变，同时行血气分析获得两组患者同期5个时点动脉和颈静脉的血氧含量（CaO2／CjvO2），计算脑氧摄取率（CERO2）=（CaO2-CjvO2）／CaO2。结果入院后d1、d2、d3、d7和d14这5个时点VmMCA结果比较，两组间d1差异无统计学意义（P〉0．05），d2、d3、d7和d14组间差异有统计学意义（P〈0．01），这4个检测时点测得的VmMCA均值亚低温组均低于常规治疗组。比较两组患者在观察期间CERO2的变化：组间d1与d14差异无统计学意义（P〉0．05）；d2、d3和d7比较差异有统计学意义，低温组均低于常规组。CERO2与VmMCA相关分析发现，亚低温组CERO2与VmMCA相关性很弱（P〉0．05），常规治疗组CERO2与VrnMCA呈显著正相关（P〈0．01）。结论亚低温疗法对降低CVS的发生率、程度和持续时间，打破了CVS与脑缺氧程度的显著相关关系，通过降低代谢而减轻脑组织缺氧损害，改善EBI造成的不良后果。治疗中设定适宜的目标温度、疗程和平缓的复温过程，可减少亚低温的不良并发症发生。

关键词：亚低温蛛网膜下腔出血早期脑损伤脑血管痉挛

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精湛技术医者初心

求贤 2021年第1期 42-43页

作者：郭再玉泰达医院神经医学中心国家脑防委出血性卒中内科专业委员会天津市医师协会神经外科医师分会天津市神经内科质量控制中心天津市滨海新区医学会神经医学专业委员会

从学医的第一天起,我的心愿就是要做一个救人于危难之中的白衣天使。工作后,临床的艰辛,远非我当初想象的那样美好。我从一名充满理想的医学生,历经硕士、博士、博士后阶段的磨砺,始终不忘初心,坚持在临床第一线。从医20余载,我也从最... 详细信息

从学医的第一天起,我的心愿就是要做一个救人于危难之中的白衣天使。工作后,临床的艰辛,远非我当初想象的那样美好。我从一名充满理想的医学生,历经硕士、博士、博士后阶段的磨砺,始终不忘初心,坚持在临床第一线。从医20余载,我也从最初的住院医师晋升到如今的主任医师,成长为一名技术过硬的神经外科医师。临床,首先要重视专业理论的学习以提高业务技能,作为一名神经外科医生.

关键词：临床第一线神经外科医师住院医师神经外科医生白衣天使不忘初心博士后业务技能

重组质粒pcDNA3.1his-hTH与pEGFP-C2共转染骨髓基质细胞源神经干细胞的实验研究

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中华神经外科杂志 2005年第2期21卷 118-122页

作者：徐强徐如祥姜晓丹潘力张世忠郭再玉南方医科大学珠江医院神经外科广州上海华山医院510282 复旦大学华山医院神经外科

目的　构建携带人酪氨酸羟化酶 (tyrosinehydroxylase, TH)目的基因片段的真核表达重组质粒—pcDNA3. 1his hTH,与pEGFP- C2共转染恒河猴骨髓源神经干细胞,观察hTH基因在骨髓源神经干细胞中的表达情况。方法　应用基因重组技术,将pWAV2... 详细信息

目的　构建携带人酪氨酸羟化酶 (tyrosinehydroxylase, TH)目的基因片段的真核表达重组质粒—pcDNA3. 1his hTH,与pEGFP- C2共转染恒河猴骨髓源神经干细胞,观察hTH基因在骨髓源神经干细胞中的表达情况。方法　应用基因重组技术,将pWAV2-TH中TH基因亚克隆到pcDNA3 .1his真核表达载体,以酶切和测序方法鉴定重组质粒pcDNA3 .1his- hTH的正确性;将pcDNA3. 1his hTH和pEGFP- C2经电击穿孔法共转染恒河猴骨髓源神经干细胞, 24h后观察EGFP瞬时表达情况, 10d后进行hTH基因RT PCR,以及hTH和 6His单克隆抗体的免疫组化检测。结果⑴酶切和测序结果均证实pcDNA3 .1his hTH的正确性;⑵细胞转染 24h后,荧光显微镜下可观察到EGFP的表达, 80%以上细胞发出绿色荧光; 10d后RT PCR检测到细胞内有hTH基因的表达,免疫组化结果显示细胞有hTH和 6His抗原表达。结论　成功构建的pcDNA3 .1his -hTH和pEGFP- C2能够共转染恒河猴骨髓源神经干细胞,hTH、EGFP和 6His基因在细胞内有效表达。该系统可以作为体外检测转染率、细胞移植治疗帕金森病活体跟踪移植细胞的技术平台。

关键词： pcDNA3 共转染 EGFP 神经干细胞 TH基因骨髓表达构建结论情况

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自配溃疡散治疗复发性口疮118例

河南中医药学刊 2001年第6期16卷 61-62页

作者：郭再玉丁在亮中国人民解放军95982部队卫生队

１９９６年以来，我们通过自配“溃疡散”治疗复发性口疮１１８例，取得显著疗效，现报道如下。１　资料与方法１．１　临床资料本组复发性口疮共１１８例，年龄１７岁～３８岁，平均２１．２岁；男性９８例，女性２０例；多数为部队中... 详细信息

１９９６年以来，我们通过自配“溃疡散”治疗复发性口疮１１８例，取得显著疗效，现报道如下。１　资料与方法１．１　临床资料本组复发性口疮共１１８例，年龄１７岁～３８岁，平均２１．２岁；男性９８例，女性２０例；多数为部队中战士；溃疡面直径约１．５ｍｍ～２０ｍｍ，平均３．６ｍｍ；溃疡单发２６例，多发９２例。其中有１２例为溃疡面直径２０ｍｍ、深达肌层的顽固性巨大溃疡。１．２　治疗方法１．２．１　药物组成　枯矾、蜂蜜、冰片。将明矾用照明煅法煅至松脆即得枯矾，将冰片研磨成粉，将新鲜蜂蜜、枯矾、冰片粉按１０∶４∶２比例混合后搅拌均匀，即成“溃疡散”。１．２．２　使用方法　用清水漱口，用无菌棉签清洁溃疡创面后将该药直接涂于溃疡处，　每日４次～６次。２　结果２．１　疗效标准治愈：５天内溃疡完全愈合，疼痛消失，无其他不适症状；显效：５天内溃疡明显减小，疼痛减轻；有效：溃疡面于１０天内减小，疼痛有所缓解；无效：溃疡面治疗前后无明显变化或继续增大，疼痛不减。２．２　治疗结果治愈９６例，占８１．４％；显效１５例，占１２．７％；有效７例，占５．９％。３　讨论本组大多数为部队中男性患者。复发性口疮以青少年居多，发病人数　较广，易复发，女性略...

关键词：复发性口疮中医药疗法溃疡散