检索结果-南通市图书馆

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

鞘氨醇胶WL合成过程中限速酶的研究

鞘氨醇胶WL合成过程中限速酶的研究

作者：郭中瑞中国石油大学(华东)

学位级别：硕士

鞘氨醇胶WL结构类似于威兰胶,威兰胶是一种新型的微生物多糖,在黏度及对极端环境耐受力等方面优于黄原胶等微生物多糖,可广泛应用于石油、食品等多个领域。本文以鞘氨醇胶WL产生菌株Sphingomonas ***为研究对象,分别对鞘氨醇胶WL合成过... 详细信息

鞘氨醇胶WL结构类似于威兰胶,威兰胶是一种新型的微生物多糖,在黏度及对极端环境耐受力等方面优于黄原胶等微生物多糖,可广泛应用于石油、食品等多个领域。本文以鞘氨醇胶WL产生菌株Sphingomonas ***为研究对象,分别对鞘氨醇胶WL合成过程中的各基因进行扩增,并构建其过表达菌株,通过对过表达菌株的发酵实验初步确定编码限速酶的基因,并对其发酵产物的结构进行初步表征,明确基因过表达对鞘氨醇胶WL结构的影响,以尝试揭示鞘氨醇胶WL合成过程的限速步骤,以及结构与黏度之间可能的关系,为后续通过基因工程的手段构建高性能鞘氨醇胶WL生产菌株奠定基础。本论文的具体研究内容如下:首先,构建各基因过表达菌株,根据预测的基因功能,把鞘氨醇胶WL合成过程中的基因分为7组:核苷酸糖前体UDP-葡萄糖和UDP-葡萄糖醛酸合成相关基因ugd G、ugp G、pgm G;d TDP-鼠李糖合成相关基因rmlA、rmlB、rmlC、rmlD;四糖重复单元组装相关基因welB、welK、welL、welQ;多糖聚合和输出相关基因welC、welE、welS、welR;多糖分泌相关基因welI、welJ、welM、welN;ABC转运相关基因atrB、atrD。通过PCR方法分别获得这些基因片段后,将其克隆至广宿主载体p BBR1MCS-3,再通过三亲杂交的方式构建过表达鞘氨醇单胞菌重组菌株及仅含有p BBR1MCS-3质粒的对照菌株。其次,将构建的过表达菌株进行发酵培养。选取36 h、60 h、84 h为时间点进行取样检测,分析其生物量、黏度、p H和产量变化,结果表明:(1)对鞘氨醇胶WL黏度影响较大的基因有pgm G、welJ,发酵36 h、60 h、84 h时,pgm G基因过表达菌株的发酵液黏度较对照菌株提高了46.0%、31.8%、20.8%;相反的,welJ基因过表达菌株则分别降低了96.7%、99.3%、99.3%;(2)对鞘氨醇胶WL产量影响较大的基因有welB、atrB、atrD。在发酵36 h和84 h时,welB过表达菌株鞘氨醇胶WL产量较对照菌株分别提升了19.0%和21.0%。在36 h、60 h时,atrB过表达菌株的产量较对照组菌株分别提高了34.5%、21.8%,atrD过表达菌株则分别提高了34.5%、20.3%。最后,对鞘氨醇胶WL进行分离纯化,并对获得的精制品的化学组成进行初步解析。welK、welN过表达会使鞘氨醇胶WL的糖醛酸含量上升,welJ、welS以及参与鼠李糖合成的相关基因的过表达使得鞘氨醇胶WL总糖含量上升。总结乙酰基含量的数据发现,大部分基因遵循以下规律:过表达菌株产物黏度大于对照组,乙酰基含量低于对照组;若过表达菌株产物黏度小于对照组,乙酰基含量则高于对照组,即乙酰基含量升高可能会降低鞘氨醇胶WL黏度。气相色谱分析数据显示,这些基因的过表达会使得单糖含量发生波动。针对pgm G、welJ基因影响鞘氨醇胶WL黏度的现象,我们对其产物进行了分子量测定,结果显示pgm G过表达菌株产物分子量大于对照组,而welJ过表达菌株产物分子量小于对照组,说明分子量对其黏度也有较大影响。综上,本论文推测鞘氨醇胶WL合成过程的限速酶是welB、atrB、atrD,即鞘氨醇胶WL的合成过程可能存在三个限速步骤,这三个基因可作为基因工程的靶标应用于后续鞘氨醇胶WL高产菌株的构建。

关键词：鞘氨醇单胞菌鞘氨醇胶WL 生物合成限速酶

闭合回路电子流强化硝酸盐异化还原为铵性能及功能菌群分析

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

环境科学学报 2023年第4期43卷 217-227页

作者：张涵瑞朱超郭中瑞刘春雷祝贵兵陕西科技大学环境科学与工程学院西安710021 中国科学院生态环境研究中心环境水质学国家重点实验室北京100085

硝酸盐异化还原为铵(DNRA)是氮循环中的一个重要过程,DNRA能够将硝酸盐还原为铵,是将活性氮保留在自然生态系统中的重要路径.然而,DNRA的效率仍然较低,其内在反应机理仍然不清楚.本研究采用自主搭建的电强化-DNRA(E-DNRA)连续流式反应器... 详细信息

硝酸盐异化还原为铵(DNRA)是氮循环中的一个重要过程,DNRA能够将硝酸盐还原为铵,是将活性氮保留在自然生态系统中的重要路径.然而,DNRA的效率仍然较低,其内在反应机理仍然不清楚.本研究采用自主搭建的电强化-DNRA(E-DNRA)连续流式反应器,利用闭合回路电子流构建单个细菌周围强还原环境,以提高细菌周围局部微环境的电子供体比例,进而提高DNRA效率.据此,进一步深入探究了电子流强化DNRA过程的内在反应机理及DNRA功能菌的群落特征.结果表明,电阻为50Ω,水力停留时间为20 h,电极面积为847 cm^(2)时可以有效提高硝酸盐异化还原为铵(DNRA)的活性,反应器中c(NH_(4)^(+))/c(NO_(3)^(-))最高可达79.1%.胞外聚合物(EPS)、电子传递系统活性(ESTA)及NADH分析表明,电子流促进了电极生物膜上各菌属的生物的活性.宏基因分析结果表明,反应器内Thauera、Azonexus、Cupriavidus、Pseudomonas为主要功能菌属.以nrf A基因编码的细胞色素c型亚硝酸盐还原酶在电子流的作用下由0.18%升高至32.84%,促进了细胞周质内DNRA过程的发生;以nir B基因编码的NADH依赖型亚硝酸盐还原酶在电子流的作用下由6.05%升高至12.71%,强化了细胞质内DNRA过程的发生.研究结果将为开发强化的DNRA技术提供新策略.

关键词：硝酸盐异化还原为铵(DNRA) 电活性菌电子流生物代谢通路宏基因组

重水标记-单细胞拉曼光谱表征反硝化菌代谢活性与电子传递

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

环境科学学报 2023年第4期43卷 228-235页

作者：郭中瑞朱超张涵瑞刘春雷祝贵兵陕西科技大学环境科学与工程学院西安710021 中国科学院生态环境研究中心环境水质学国家重点实验室北京100085

细菌内部电子传递快慢及其代谢水平是其外在活性的决定因素之一.然而,目前对于细菌活性、电子传递及代谢水平三者之间的关系鲜有报道.本研究针对氮循环的经典过程—反硝化过程,以施氏假单胞菌为模式反硝化菌,系统探究了不同电子供体条件... 详细信息

细菌内部电子传递快慢及其代谢水平是其外在活性的决定因素之一.然而,目前对于细菌活性、电子传递及代谢水平三者之间的关系鲜有报道.本研究针对氮循环的经典过程—反硝化过程,以施氏假单胞菌为模式反硝化菌,系统探究了不同电子供体条件(不同C/N比)下电子传递对反硝化脱氮效率的影响,并通过重水标记(DIP)-拉曼光谱在单细胞水平上分析了代谢活性与电子传递、脱氮相关因素的潜在联系.结果表明,在反硝化前期(0~9 h),NADH脱氢酶活力均处于较高水平,导致电子传递系统活性(ETSA)迅速升高,加速了反硝化脱氮效率,NADH脱氢酶平均活力相对于C/N为5时分别增加50.97%(C/N=10)和83.40%(C/N=20),同时NADH/NAD+比率分别增加43.98%(C/N=10)和65.27%(C/N=20).在反硝化后期(9~24 h),碳源的消耗降低了ETSA,导致脱氮活性降低.同时,在反硝化过程中,C—D键的拉曼特征峰变化表明微生物代谢活性与NO_(3)^(-)-N还原量呈负向的线性关系,揭示了反硝化菌代谢和脱氮活动的不同步性.

关键词：拉曼光谱施氏假单胞菌电子传递代谢活性重水标记

LB克隆系统的构建及在鞘氨醇单胞菌基因融合表达中的应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2022年第4期38卷 1576-1588页

作者：薛含李慧陈萌琦张再美郭中瑞朱虎王继乾孙亚伟中国石油大学(华东)化学化工学院生物与能源化工系重质油国家重点实验室山东青岛266580 福建师范大学化学与材料学院工业生物催化福建省高校工程研究中心福建福州350007

为摆脱限制性酶切位点不足的限制,构建可灵活改变多基因融合方向的表达载体,基于IIS型和IIT型限制性内切酶LguⅠ和BbvCⅠ设计开发了LB克隆系统。该克隆系统是以广宿主质粒pBBR1MCS-3为初始载体,利用PCR的方法,在其多克隆位点区插入LB片... 详细信息

为摆脱限制性酶切位点不足的限制,构建可灵活改变多基因融合方向的表达载体,基于IIS型和IIT型限制性内切酶LguⅠ和BbvCⅠ设计开发了LB克隆系统。该克隆系统是以广宿主质粒pBBR1MCS-3为初始载体,利用PCR的方法,在其多克隆位点区插入LB片段(GCTCTTCCTCAGC)构建得到的。LB片段含LguⅠ和BbvCⅠ部分重叠识别位点,经这两种限制性内切酶酶切后可以产生相同非回文序列,利用这一性质可快速、灵活地将多个基因逐步、定向插入表达载体。为验证该克隆系统的有效性,将鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sp.)WG中两个糖基转移酶基因welB、welK逐步定向融合至LB克隆载体,并将重组质粒转入鞘氨醇单胞菌中表达。结果表明,基因融合表达对鞘氨醇胶产量影响较小,但是,对鞘氨醇胶粘度有重要影响。在发酵84 h时,重组菌株Sphingomonas ***/pBBR1MCS-3-LB-welKB的发酵液粘度较野生株提高约24.7%,粘度提升将有助于该鞘氨醇胶在石油开采、食品等多个领域的应用。综上所述,以鞘氨醇单胞菌为研究对象,验证了LB克隆系统在多基因融合中的应用,为构建融合酶提供了一种高效的方法。

关键词：鞘氨醇单胞菌鞘氨醇胶 LB克隆系统基因融合糖基转移酶

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

延长县兰街村苹果园土壤质量分析与评价

南方农业 2022年第17期16卷 163-166页

作者：薛卫鹏李杨张涵瑞郭中瑞陕西省林业科技推广与国际项目管理中心(陕西省林业工作站) 陕西西安710082 陕西科技大学环境科学与工程学院陕西西安710021

为促进陕北苹果产业健康发展,解决苹果种植单产偏低的问题,对陕西省延长县罗子山镇兰街村的苹果园进行了土壤肥力测定,并根据全国第二次土壤普查养分分级标准进行评价。结果表明,兰街村苹果园土壤呈微碱性,不适宜果树生长;除速效钾含量... 详细信息

为促进陕北苹果产业健康发展,解决苹果种植单产偏低的问题,对陕西省延长县罗子山镇兰街村的苹果园进行了土壤肥力测定,并根据全国第二次土壤普查养分分级标准进行评价。结果表明,兰街村苹果园土壤呈微碱性,不适宜果树生长;除速效钾含量较高外,有机质、有效磷、全氮平均含量较低;除有效磷之外的其他营养元素变异系数均在20%左右,空间分布相对均衡。针对果园土壤养分现状,提出可适当增加氮肥、磷肥的施用量,增施有机肥等有针对性的施肥策略。

关键词：苹果园土壤养分评价陕西省延长县兰街村

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

一种新型生物驱油剂——威兰胶及其性能评价

一种新型生物驱油剂——威兰胶及其性能评价

中国化学会第十七届全国胶体与界面化学学术会议

作者：姬思雪李慧朱虎王继乾徐海李菁黎可卉郭中瑞薛含中国石油大学(华东)化学工程学院福建师范大学化学与材料学院

生物聚合物有望取代聚丙烯酰胺成为一种绿色驱油剂。利用鞘氨醇单胞菌Sphingomonas ***发酵得到了一种新型微生物多糖命名为WLJ,并对WLJ水溶液的流变学性质以及耐盐性、耐温性进行了研究,通过填砂管驱替实验对比了WLJ与聚合物HPAM的驱... 详细信息

生物聚合物有望取代聚丙烯酰胺成为一种绿色驱油剂。利用鞘氨醇单胞菌Sphingomonas ***发酵得到了一种新型微生物多糖命名为WLJ,并对WLJ水溶液的流变学性质以及耐盐性、耐温性进行了研究,通过填砂管驱替实验对比了WLJ与聚合物HPAM的驱油效率。结果表明:WLJ水溶液是一种典型的非牛顿流体,频率动态扫描显示以弹性模量为主;WLJ水溶液具有较好的耐盐性,随着Na+、K+等离子强度的增加表观粘度没有显著降低;WLJ水溶液同时具有一定的耐温性,当温度在25～80℃之间,WLJ水溶液受温度的影响粘度下降,当温度达到80℃以后粘度趋于稳定并能保持在较高水平。采用相同粘度的WLJ和HPAM溶液进行填砂管驱替实验,WLJ驱替体系提高采收率高于HPAM体系。以上研究表明微生物多糖WLJ驱油体系具有较大的应用潜力。

关键词：威兰胶流变性能耐温抗盐性能聚合物驱油

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

饲用益生菌的筛选及效果评价研究

天津农业科学 2024年第3期30卷 73-79页

作者：张心青张萧萧傅英旬郭南南郭中瑞马春峰黄河三角洲京博化工研究院有限公司山东滨州256500

为获得制备益生菌制剂的优良菌株,满足不同阶段饲用益生菌的需求,采用简便有效的饲用益生菌益生特性的指标评价体系,对20株不同来源的益生菌菌种的产酸能力、抑菌效果、溶血性、抗生素敏感性、胆盐耐受性、耐高温能力,以及模拟胃液中的... 详细信息

为获得制备益生菌制剂的优良菌株,满足不同阶段饲用益生菌的需求,采用简便有效的饲用益生菌益生特性的指标评价体系,对20株不同来源的益生菌菌种的产酸能力、抑菌效果、溶血性、抗生素敏感性、胆盐耐受性、耐高温能力,以及模拟胃液中的存活能力进行比较筛选。结果表明:7种益生菌的体外益生特性与饲用益生菌的益生作用相一致,其中,枯草芽孢杆菌CICC10089产酸和抑菌效果均较好,ZWRB和干酪-P具有强抑菌能力,SL和ZW具有较弱产酸能力,ZP和NG2具有较强产酸能力。综上,本试验研究了饲用益生菌的评价方法,建立了饲用益生菌评价指标,可为后续饲用益生菌的工业化生产提供参考依据。

关键词：益生菌制剂枯草芽孢杆菌抑菌能力评价方法

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

响应面法优化酿酒酵母培养基

中国酿造 2024年第6期43卷 206-212页

作者：潘冬梅杨传伦张心青李佳明冯清敏田杰伟杨丹丹苏士岗和富明郭中瑞成鲁南张思婕黄河三角洲京博化工研究院有限公司山东滨州256500 山东京博环保材料有限公司山东滨州256500 山东京博物流股份有限公司山东滨州256500

为提高酿酒酵母菌体产量,该研究以酿酒酵母菌体干质量为响应值,在单因素试验的基础上,采用Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应面法对酿酒酵母培养基配方进行优化。结果表明,通过PB试验筛选出葡萄糖、酵母抽提物、硫酸铵为影响酵... 详细信息

为提高酿酒酵母菌体产量,该研究以酿酒酵母菌体干质量为响应值,在单因素试验的基础上,采用Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应面法对酿酒酵母培养基配方进行优化。结果表明,通过PB试验筛选出葡萄糖、酵母抽提物、硫酸铵为影响酵母菌体干质量的主要因素,最后运用响应面法确定酿酒酵母最优发酵培养基为:葡萄糖48 g/L、酵母抽提物38 g/L、硫酸铵2 g/L、磷酸氢二钾3 g/L、氯化钙0.1 g/L、硫酸锌0.05 g/L、硫酸锰0.05 g/L、VB10.1 g/L、VB70.1 g/L,在最优培养基组合下,酿酒酵母菌体干质量达到22.31 g/L,是优化前的3.31倍。

关键词：酿酒酵母培养基配方优化响应面法

ChatGPT引入互联网慈善的风险识别和应对策略

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

河南大学学报(社会科学版) 2025年第1期 29-35+153页

作者：孙蔚黄晓瑞武汉大学社会保障研究中心华侨大学国际关系学院

ChatGPT正在改变人们的生产生活方式，为我国互联网慈善的创新发展带来了机遇与动力。探讨ChatGPT在互联网慈善中的潜在风险及应对策略，对推动数字化助力公益慈善升级有重大现实意义。现阶段，以ChatGPT模型为代表的数字技术影响着互... 详细信息

ChatGPT正在改变人们的生产生活方式，为我国互联网慈善的创新发展带来了机遇与动力。探讨ChatGPT在互联网慈善中的潜在风险及应对策略，对推动数字化助力公益慈善升级有重大现实意义。现阶段，以ChatGPT模型为代表的数字技术影响着互联网慈善中的政府、互联网平台、中介组织、捐助者、受助者等主体，并最终重塑它们之间的关系，赋能于包含慈善活动、社会环境和政府政策等互联网慈善生态全链条。基于ChatGPT应用可能带来的诸如数字鸿沟加剧、内容可靠性存疑和技术治理失灵等社会问题，重点从求助失效、动员低效、知识鸿沟、制度缺位等视角进行风险识别，并进一步提出加强数字慈善教育和建立慈善大数据中心、完善监管体系、推进数字技术建设、健全法律规制和行业标准的应对策略。

关键词：互联网慈善 ChatGPT 风险识别应对策略