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绵羊乳腺组织RNA-Seq及STAT5a基因遗传特征分析

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绵羊乳腺组织RNA-Seq及STAT5a基因遗传特征分析

作者：郝志云甘肃农业大学

学位级别：硕士

乳腺是具有泌乳功能的特殊腺体。在哺乳动物繁殖过程中,泌乳性能影响了后代的成活率和生长速度。哺乳动物的泌乳规律性变化(如泌乳量的高低、乳成分的变化等)取决于乳腺组织中相关基因的差异性表达。调控绵羊乳腺性能的功能基因及其分... 详细信息

乳腺是具有泌乳功能的特殊腺体。在哺乳动物繁殖过程中,泌乳性能影响了后代的成活率和生长速度。哺乳动物的泌乳规律性变化(如泌乳量的高低、乳成分的变化等)取决于乳腺组织中相关基因的差异性表达。调控绵羊乳腺性能的功能基因及其分子机制仍需要进一步探讨。本研究选择年龄、胎次、饲养管理条件相同的3只多羔绵羊品种(小尾寒羊)与3只单羔绵羊品种(甘肃高山细毛羊)作为研究对象,屠宰后采集泌乳高峰期乳腺组织(产后3周),采用高通量二代测序技术对2个品种的乳腺组织进行转录组测序(RNA-Seq),筛选出品种间的差异表达基因,分析这些基因的GO和KEGG功能富集,鉴定品种间的新mRNA转录本、SNP和Indels。同时,以筛选出的STAT5a作为候选基因,应用qRT-PCR和PCR-SSCP技术,分析STAT5a基因的组织表达和核苷酸序列变异特征。主要研究结果如下:1.小尾寒羊和甘肃高山细毛羊泌乳高峰期乳腺的转录组特征。在6个乳腺组织RNA测序文库中分别得到约139 M(million)的原始读段(Raw Reads),碱基识别准确率均在99%以上,通过质控后,约76.62%的Clean Reads和15041个基因被注释到绵羊参考基因组上。在2个绵羊品种间,共筛选出226个差异表达基因,其中上调基因75个,下调基因151个。随机选择13个差异表达基因(包括7个上调基因和6个下调基因),qRT-PCR发现这些基因在2个绵羊品种间的差异表达趋势与RNA-Seq研究结果相一致,表明本研究中的RNA-seq具有很高的准确性。GO和KEGG功能富集分析发现,这些差异表达基因主要参与钠离子转运、血管平滑肌收缩、PI3K-Akt信号通路和Notch信号通路等。转录本结构分析表明,小尾寒羊乳腺组织中存在170436个转录本,其中155040个为新转录本,364516个SNPs和42506个Indels。甘肃高山细毛羊中存在174336个转录本,其中158847个为新转录本,397044个SNPs和49012个Indels。***5a基因表达特征和核苷酸序列变异特征。STAT5a基因在绵羊7个组织中均有表达,并表现出明显的品种差异性和组织差异性,在藏绵羊和小尾寒羊中,STAT5a基因在乳腺组织中的表达量显著高于其它6个组织(PG)、1个(c.1308 A>G,为同义突变)和2个SNPs(c.2150-154 C>T和c.2150-50 T>C)。在第10内含子和第12外显子上,3个绵羊品种的多态信息含量均处于中度多态,藏绵羊处于Hardy-Weinberg平衡状态,湖羊和多浪羊偏离了Hardy-Weinberg平衡状态;在第15内含子上,藏绵羊属于中度多态,湖羊和多浪羊属于低度多态。3个绵羊群体均处于Hardy-Weinberg平衡状态。本研究筛选出了多羔和单羔绵羊品种间的差异表达基因,明确了调控不同产羔数品种间泌乳性能的生物学途径,获得了泌乳性状相关基因STAT5a基因的组织表达和核苷酸序列变异特征。结果可作为阐释绵羊泌乳性状分子改良的理论基础,也丰富了绵羊基因组学的研究结果。

关键词：绵羊乳腺 RNA-Seq 差异表达基因功能富集 STAT5a基因

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二甲基亚砜固相萃取分离钯的研究

稀有金属 2013年第5期37卷 814-819页

作者：杨新周郝志云杨子仙林惠坤胡秋芬德宏师范高等专科学校理工系云南德宏678400 云南民族大学化学与生物技术学院云南昆明650500

研究了用MCI—GEL树脂分离富集钯的行为及与一些金属离子分离的条件。结果表明，钯与二甲基亚砜形成的配合物，能被MCI—GEL树脂吸附。当溶液中二甲基亚砜体积分数为2．5％，盐酸的浓度在0．5—2．0mol·L^-1之间，整个体系反应5min，... 详细信息

研究了用MCI—GEL树脂分离富集钯的行为及与一些金属离子分离的条件。结果表明，钯与二甲基亚砜形成的配合物，能被MCI—GEL树脂吸附。当溶液中二甲基亚砜体积分数为2．5％，盐酸的浓度在0．5—2．0mol·L^-1之间，整个体系反应5min，过柱流速为2ml·min^-1时，Pd（Ⅱ）可与Pt（Ⅳ），Fe（III），Ni（II），Cu（II），Zn（Ⅱ）离子定量分离，且钯的萃取率可达99％以上。通过实验发现MCI-GEL树脂材料对钯的萃取容量为2mg·g^-1，1ml二甲基亚砜能够完全洗脱富集物。文中初步探讨了二甲基亚砜固相萃取钯的机制，并对合成试样进行了分离和测定，表明该方法是一种高效、快捷，节约试剂，分离富集钯的良好方法。

关键词： MCI—GEL树脂固相萃取钯富集二甲基亚砜

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超声与双水相体系耦合提取竹叶总黄酮研究

安徽农业科学 2010年第23期38卷 12448-12449页

作者：左光德郝志云高云涛云南德宏师范高等专科学校云南潞西678400 云南民族大学化学与生物技术学院云南昆明650031

[目的]探讨超声提取法和双水相分离技术相结合提取竹叶黄酮的新方法。[方法]利用超声与丙醇-硫酸铵双水相体系耦合对竹叶总黄酮进行提取和分离,并研究硫酸铵和丙醇含量、超声时间和液固比对黄酮提取率的影响。[结果]利用超声与丙醇-硫... 详细信息

[目的]探讨超声提取法和双水相分离技术相结合提取竹叶黄酮的新方法。[方法]利用超声与丙醇-硫酸铵双水相体系耦合对竹叶总黄酮进行提取和分离,并研究硫酸铵和丙醇含量、超声时间和液固比对黄酮提取率的影响。[结果]利用超声与丙醇-硫酸铵双水相体系耦合对竹叶总黄酮进行提取分离的最佳提取条件为:丙醇体积分数60%;(NH4)2SO4用量为0.35g/ml,超声提取25min、液固比为30∶1,在此条件下,竹叶总黄酮提取率为2.03%,提取物中总黄酮纯度为31.3%,明显高于常规超声法。[结论]超声与丙醇-硫酸铵双水相体系耦合对竹叶总黄酮提取的方法简便,值得推广应用。

关键词：超声提取双水相分离竹叶总黄酮

一种基于3,4-二取代-1,8-萘酰亚胺和双通道响应的Cu2+荧光分子探针（英文）

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Chinese Journal of Chemical Physics 2015年第2期 235-239+246页

作者：李辉郝志云孟欣朱以常德宏师范高等专科学校双鸭山市质量技术监督局

设计合成了一种新型3,4-二取代-1,8-萘酰亚胺衍生物H1,在多种金属离子的水溶液中,作为铜离子的一个选择性荧光探针.该探针在甲醇和水体积比为1:1的溶液中与Cu2+结合,其荧光强度增强且探针的H1的吸收光谱发生红移,同时探针溶液的颜色由... 详细信息

设计合成了一种新型3,4-二取代-1,8-萘酰亚胺衍生物H1,在多种金属离子的水溶液中,作为铜离子的一个选择性荧光探针.该探针在甲醇和水体积比为1:1的溶液中与Cu2+结合,其荧光强度增强且探针的H1的吸收光谱发生红移,同时探针溶液的颜色由黄色变成粉红色.此外,探针H1与Cu2+结合比为1:1.

关键词： 1,8-萘酰亚胺铜离子荧光

HPLC法研究肾叶山蚂蝗清除DPPH自由基能力

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分析试验室 2013年第3期32卷 30-32页

作者：杨新周郝志云杨子仙胡秋芬德宏师范高等专科学校理工系德宏678400 云南民族大学化学与生物技术学院昆明650031

建立了以HPLC法对傣药-肾叶山蚂蝗甲醇提取物清除二苯基苦基肼自由基(DPPH.)能力的方法,通过实验得出最佳的色谱条件:色谱柱为AgilentEclipse XDB-C18(4.6×150 mm,5μm),流速为1.0 mL/min,检测波长517 nm,柱温箱温度为20℃,进样体积20.... 详细信息

建立了以HPLC法对傣药-肾叶山蚂蝗甲醇提取物清除二苯基苦基肼自由基(DPPH.)能力的方法,通过实验得出最佳的色谱条件:色谱柱为AgilentEclipse XDB-C18(4.6×150 mm,5μm),流速为1.0 mL/min,检测波长517 nm,柱温箱温度为20℃,进样体积20.0μL,流动相为不同比例的甲醇和水的混合液。在此条件下测定了DPPH.的清除率为50%时抗氧化剂的质量浓度(IC50)值,肾叶山蚂蝗甲醇提取物的IC50为1.51 mg/mL。

关键词：抗氧化活性 HPLC 肾叶山蚂蝗 DPPH·

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南方根结线虫对不同寄主植物侵染能力的比较

安徽农业科学 2011年第24期39卷 14658-14659,14695页

作者：马艳粉郝志云肖春胡先奇袁盛勇德宏师范高等专科学校职教系云南芒市678400 云南农业大学植物保护学院云南昆明650201 云南红河学院生命科学与技术学院云南蒙自661100

[目的]筛选南方根结线虫的易感寄主。[方法]通过接种试验比较了南方根结线虫对5种寄主植物(黄瓜、番茄、茄子、菠菜及辣椒)的侵染能力。[结果]南方根结线虫对不同寄主植物的侵染能力存在显著差异。黄瓜和番茄的根结百分率显著高于菠菜... 详细信息

[目的]筛选南方根结线虫的易感寄主。[方法]通过接种试验比较了南方根结线虫对5种寄主植物(黄瓜、番茄、茄子、菠菜及辣椒)的侵染能力。[结果]南方根结线虫对不同寄主植物的侵染能力存在显著差异。黄瓜和番茄的根结百分率显著高于菠菜、茄子和辣椒,黄瓜和番茄根际土壤中2龄幼虫数、雌成虫数及卵块数都显著高于菠菜、茄子和辣椒。[结论]南方根结线虫对黄瓜和番茄的侵染能力显著强于菠菜、茄子和辣椒,为南方根结线虫的易感寄主植物。

关键词：南方根结线虫寄主植物侵染能力

A Novel Naked-Eye and Dual-Channel Responsive Fluorescent Probe for Cu2＋ Based on 3,4-Disubstituted-1,8-naphthalimide

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Chinese Journal of Chemical Physics 2015年第2期28卷 235-239,I0002页

作者：李辉郝志云盂欣朱以常德宏师范高等专科学校芒市678400 双鸭山市质量技术监营局双鸭山155100

A new 3,4-disubstituted-l,8-naphthalimide derivative H1 was designed and synthesized as a selective fluorescent probe for Cu2＋ over miscellaneous metM ions in aqueous media. Upon mixing with Cup-＋ in CH3OH：H2O （1：1, volume ratio）, the increase of fluorescence intensity and a bathochromic shift of absorbance of H1 could be observed with a notable color response （changing from yellow to pink）, htrthermore, Cu2＋ coordinates to the probe H1 and a 1：1 metal-ligand complex was formed.

关键词： 1,8-Naphthalimide Copper(II) Fluorescence

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澳洲坚果壳吸附3种阳离子染料的研究

热带作物学报 2019年第7期40卷 1387-1392页

作者：杨新周郝志云田先娇马艳粉德宏师范高等专科学校理工学院云南德宏678400 德宏师范高等专科学校民族医药研究所云南德宏678400 德宏师范高等专科学校农学与生物科学学院云南德宏678400

以坚果壳为原料,经粉碎制成不同粒径的粉末吸附剂。探究了坚果壳吸附亚甲基蓝、罗丹明B、碱性品红的性能。研究发现坚果壳吸附亚甲基蓝、罗丹明B、碱性品红最佳粒径为0.3 mm、最佳投加量分别为1.6、2.4、1.2 g,pH均为5、温度为30℃、震... 详细信息

以坚果壳为原料,经粉碎制成不同粒径的粉末吸附剂。探究了坚果壳吸附亚甲基蓝、罗丹明B、碱性品红的性能。研究发现坚果壳吸附亚甲基蓝、罗丹明B、碱性品红最佳粒径为0.3 mm、最佳投加量分别为1.6、2.4、1.2 g,pH均为5、温度为30℃、震荡时间为30、60、60 min。利用准一级、准二级动力学方程模拟坚果壳吸附亚甲基蓝、罗丹明B和碱性品红的动力学过程,结果表明坚果壳吸附亚甲基蓝、罗丹明B和碱性品红的过程适合于准二级动力,学模型。文中计算了焓变(ΔH^0)、自由能(ΔG^0)、熵变(ΔS^0)等热力学参数,坚果壳吸附3种阳离子染料过程中ΔG^0均小于0,ΔS^0、ΔH^0均大于0,说明坚果壳吸附3种阳离子染料的过程是一个自发的趋于无序的吸热过程。

关键词：澳洲坚果壳亚甲基蓝碱性品红罗丹明B 吸附

狸尾豆中重金属元素的ICP-MS-内标法测定

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时珍国医国药 2014年第1期25卷 85-86页

作者：杨新周郝志云杨子仙马金晶德宏师范高等专科学校云南德宏678400 云南民族大学化学与生物技术学院云南昆明650031

摘要：目的建立一种快速测定狸尾豆中重金属元素含量的方法。方法对样品直接消解，称重定容，ICP—Ms内标法在线快速测定狸尾豆中重金属元素的含量。结果狸尾豆中含有Hg、cd、As、Pb、M、Cr六种重金属元素，加标回收率在98．54％～118... 详细信息

摘要：目的建立一种快速测定狸尾豆中重金属元素含量的方法。方法对样品直接消解，称重定容，ICP—Ms内标法在线快速测定狸尾豆中重金属元素的含量。结果狸尾豆中含有Hg、cd、As、Pb、M、Cr六种重金属元素，加标回收率在98．54％～118．54％之间，方法检出限在0．0100～0．0870ixg／L之间，相对标准偏差均小于等于4．85％。结论该方法具有良好的精密度和准确度，能满足狸尾豆中重金属元素同时检测的需要。

关键词：关键词狸尾豆 ICP-Ms 微波消解重金属