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白花丹参谷氧还蛋白SmGRX2基因的克隆及其对丹参的转化

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时珍国医国药 2022年第3期33卷 725-729页

作者：赵法兴李艳玲郝岗平江西中医药高等专科学校江西抚州344000 山东第一医科大学生命科学学院山东泰安271016

目的获取白花丹参GRX基因的全长cDNA序列(命名为SmGRX2),并分析其序列特征和不同外源胁迫下的表达特征,构建其表达载体并转化到白花丹参。方法利用已有白花丹参cDNA全长文库,随机测序获得SmGRX2全长序列。BLAST进行序列比对,Motif Scan... 详细信息

目的获取白花丹参GRX基因的全长cDNA序列(命名为SmGRX2),并分析其序列特征和不同外源胁迫下的表达特征,构建其表达载体并转化到白花丹参。方法利用已有白花丹参cDNA全长文库,随机测序获得SmGRX2全长序列。BLAST进行序列比对,Motif Scan软件分析氨基酸序列的功能区段,real-time RT-PCR技术分析基因表达特征;将SmGRX2连接到含有双增强子的高效植物双元表达载体pGreen0029-GFP上,获得含融合DHA基因的植物双元表达载体pGreen0029-SmGRX2-DHA,采用电击法将含SmGRX2的植物表达载体转入根癌农杆菌LBA4404中,用叶片浸染法转化白花丹参。结果获得ORF为372bp的SmGRX2全长cDNA序列,编码氨基酸123个,氨基酸序列分析发现其具有典型的GRX prosite patters CCMC,NCBI登录号为KJ009322。Real-timePCR分析其在根部中表达量最高。SA和MeJA处理均能较强的诱导该基因的表达。对再生植株用PCR检测证实了SmGRX2基因的导入,pGreen0029-SmGRX2-DHA的转化率为24.4%。结论首次获得白花丹参SmGRX2全长基因序列,分析其可能参与对抗病等生物胁迫的响应;成功获得过表达SmGRX2转基因植株,为SmGRX2基因的进一步功能分析奠定了基础。

关键词：白花丹参 SmGRX2基因克隆表达分析表达载体构建遗传转化

干旱胁迫下外源一氧化氮促进银杏可溶性糖、脯氨酸和次生代谢产物合成

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植物生理与分子生物学学报 2007年第6期33卷 499-506页

作者：郝岗平杜希华史仁玖泰山医学院生物化学教研室泰安271000 山东师范大学生命科学学院济南250014

以硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)为一氧化氮(NO)供体,研究其在干旱胁迫下对银杏叶片物质代谢的影响。结果表明,在土壤相对含水量为35%的干旱胁迫下,250μmol/L SNP显著提高可溶性糖含量、脯氨酸含量、苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ... 详细信息

以硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)为一氧化氮(NO)供体,研究其在干旱胁迫下对银杏叶片物质代谢的影响。结果表明,在土壤相对含水量为35%的干旱胁迫下,250μmol/L SNP显著提高可溶性糖含量、脯氨酸含量、苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia lyase,PAL)活性、黄酮类化合物和银杏内酯含量。NO清除剂血红蛋白(hemoglobin)抑制了SNP对银杏叶片可溶性糖、脯氨酸、PAL酶活性、黄酮和银杏内酯合成的促进作用,说明SNP是通过其分解产物NO影响这些物质的合成。推测在干旱胁迫下次生代谢产物黄酮类物质和银杏内酯的作用类似脯氨酸和可溶性糖,NO通过促进这些物质的合成,来缓解干旱胁迫的不良影响。

关键词：一氧化氮银杏干旱胁迫苯丙氨酸解氨酶 (PAL)活性黄酮类物质银杏内酯

泰山赤灵芝复合降解酶提取白花丹参须根有效成分的研究

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中国中药杂志 2013年第5期38卷 678-682页

作者：李艳玲辛晓明苗增民史仁玖郝岗平泰山医学院生物科学学院山东泰安271016

目的:研究泰山赤灵芝复合降解酶在白花丹参须根有效成分提取中的应用。方法:采用木质纤维素复合降解酶来提取丹参须根中的有效成分,通过正交试验法优化酶解参数。结果:利用优化酶解工艺所得到的丹参须根提取液中总丹参酮和总丹酚酸的提... 详细信息

目的:研究泰山赤灵芝复合降解酶在白花丹参须根有效成分提取中的应用。方法:采用木质纤维素复合降解酶来提取丹参须根中的有效成分,通过正交试验法优化酶解参数。结果:利用优化酶解工艺所得到的丹参须根提取液中总丹参酮和总丹酚酸的提取率可达11.923%,12.465%,比常规非酶法提取提高了62.794%,56.086%。结论:采用木质纤维素复合降解酶酶解法可以充分提取出丹参须根中的有效成分,为中药废弃物的再次利用提供了一条新途径。

关键词：赤灵芝漆酶纤维素酶白花丹参有效成分

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植物线粒体与细胞质雄性不育研究进展

植物学通报 2003年第5期20卷 549-557页

作者：郝岗平陈敏杨清南京农业大学生命科学学院南京210095

本文从能量代谢与植物细胞质雄性不育 (CMS)、线粒体的结构和数量与CMS、线粒体DNA多态性与CMS、线粒体基因转录与CMS、线粒体多肽差异与CMS几个方面介绍了植物线粒体与CMS的关系。

关键词：植物线粒体细胞质雄性不育分子机制

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蛋白质内含肽的研究进展

生命科学研究 2002年第S2期6卷 136-139,162页

作者：郝岗平杨清南京农业大学生命科学学院中国江苏南京210095

蛋白质内含肽是能够自我剪接的一段多肽链.它的发现不仅在理论上丰富了遗传信息翻译后加工的内容,而且在蛋白质纯化的实践方面有着广泛的应用前景.主要对蛋白质内含肽的剪接机制、结构特征、核酸内切酶活性以及应用方面的研究进展作一概述.

关键词：蛋白质内含肽自我剪接归巢核酸内切酶

白花丹参顺式还原酮加双氧酶基因的克隆、分子特征和表达调控分析

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中国中药杂志 2011年第3期36卷 346-350页

作者：郝岗平王健美史仁玖张显忠泰山医学院生物科学系泰安山东271000

目的:获得白花丹参参与乙烯和多胺合成的顺式还原酮加双氧酶(acireductone dioxygenase,ARD)基因(命名为SmARD)序列,并进行生物信息学分析和初步的表达特性研究。方法:利用全长cDNA文库技术,从两年生白花丹参根中获得目的基因SmARD序列... 详细信息

目的:获得白花丹参参与乙烯和多胺合成的顺式还原酮加双氧酶(acireductone dioxygenase,ARD)基因(命名为SmARD)序列,并进行生物信息学分析和初步的表达特性研究。方法:利用全长cDNA文库技术,从两年生白花丹参根中获得目的基因SmARD序列。利用BLAST进行序列比对,ORF Finder寻找该基因的开放读码框,prosite分析蛋白质的基本结构域。用半定量RT-PCR检测其在白花丹参幼苗根、茎、叶和成花中的表达情况。结果:得到688 bp的SmARD基因全长序列。具有一个591 bp的开放读码框,编码196个氨基酸,预测蛋白质相对分子质量23.27 kDa。使用预测的SmARD蛋白序列在NCBI中进行蛋白保守域分析,发现SmARD与ARD/ARD′家族具有很高的同源性。半定量RT-PCR表明,SmARD在白花丹参幼苗根、茎、叶和成花等组织中均有转录水平的表达,但是在根部表达最强。水分亏缺处理3 d,150 mmol.L-1NaCl处理1 d,4℃低温处理1 d和100μmol.L-1ABA处理1 d均抑制SmARD的表达,100μmol.L-1茉莉酸甲脂(MJ)和10μmol.L-1乙烯利(ETH)处理1 d诱导SmARD的表达。结论:首次得到白花丹参的顺式还原酮加双氧酶(ARD)基因序列,为其参与白花丹参响应逆境和次生代谢产物合成的信号调节功能研究奠定了基础。

关键词：白花丹参顺式还原酮加双氧酶(ARD)基因序列分析表达分析

NO对银杏悬浮细胞生长及黄酮类物质合成的影响

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西北植物学报 2007年第2期27卷 272-277页

作者：郝岗平杜希华史仁玖泰山医学院生物技术教研室山东泰安271000 山东师范大学生命科学学院济南250014

以硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)为一氧化氮(NO)的供体,向银杏悬浮细胞培养液中加入不同浓度的SNP,研究外源NO对银杏悬浮细胞生长状况、过氧化氢酶(CAT)活性、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性和黄酮类物质生物合成的影响.结果表明,低浓度SN... 详细信息

以硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)为一氧化氮(NO)的供体,向银杏悬浮细胞培养液中加入不同浓度的SNP,研究外源NO对银杏悬浮细胞生长状况、过氧化氢酶(CAT)活性、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性和黄酮类物质生物合成的影响.结果表明,低浓度SNP有利于银杏悬浮细胞生长,而高浓度SNP可以促进黄酮类物质的合成.银杏悬浮细胞在添加0.5和10 mmol/L SNP的培养基中培养16 d时,细胞干重分别为对照组的134%和73%;在添加10 mmol/L SNP的培养基中培养20 d时,细胞中黄酮类物质的含量为对照组的136%.同时,10 mmol/L SNP促进银杏悬浮细胞PAL和CAT活性显著升高.NO专一性淬灭剂c-PITO(carboxyl phenyltetramethylimidazoleoxide)抑制SNP对银杏悬浮细胞生长、CAT活性、PAL活性和黄酮类物质含量的促进作用,说明SNP是通过其分解产物NO影响细胞生长和黄酮类物质的合成.根据这些结果推测,NO可能通过触发银杏悬浮细胞的防卫反应,激活了细胞中黄酮类物质的生物合成途径.

关键词：一氧化氮银杏悬浮细胞CAT活性 PAL活性黄酮类物质

丹参注射液处理动脉粥样硬化大鼠前后胸主动脉细胞相关基因表达的变化

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中国临床康复 2005年第30期9卷 98-100页

作者：郝岗平史仁玖张媛英泰山医学院生物化学与分子生物学教研室山东省泰安市271000

目的:观察经丹参注射液处理的动脉粥样硬化大鼠前后胸主动脉细胞与病理组未经处理的同类细胞基因表达的差异。方法:实验于2004-03/2005-02在泰山医学院生物化学与分子生物学研究室完成。18只Wistar大鼠随机分为2组:病理模型组和丹参注... 详细信息

目的:观察经丹参注射液处理的动脉粥样硬化大鼠前后胸主动脉细胞与病理组未经处理的同类细胞基因表达的差异。方法:实验于2004-03/2005-02在泰山医学院生物化学与分子生物学研究室完成。18只Wistar大鼠随机分为2组:病理模型组和丹参注射液处理组,每组9只。两组均以50万U维生素D/kg体质量的总剂量分3d灌胃,每天喂高脂饲料15g/只,连续30d。同时丹参注射液处理组按1.5mL/(kg.d)体质量,腹腔注射丹参注射液15d。30d后应用DDRT-PCR技术分析丹参注射液处理动脉粥样硬化大鼠胸主动脉细胞基因表达的差异,并用反向Northern证实,计数统计处理后细胞表达上调和下调的基因数量。结果:纳入18只大鼠均进入结果分析。①大鼠胸主动脉mRNA的差异显示分析:大鼠胸主动脉细胞总RNA经DDRT-PCR分析,60对引物进行PCR反应,有32对引物组合中发现有差异片段,个别的引物组合扩增出2～3条差异带,共发现重复性较好的差异条带37条,其中4条在丹参注射液处理细胞中表达较强,其余在病理组细胞中特异表达或表达较强。②mRNA差别显示技术分离差异片段的克隆、序列分析及同源性比较:在29个阳性克隆中有21个克隆与已知基因序列高度同源,13个目前认为与动脉粥样硬化发病有关;;另外8个克隆为未知基因的序列。③病理组和丹参注射液处理组大鼠胸主动脉细胞mRNA的反向Northern分析:丹参注射液处理动脉粥样硬化大鼠前后胸主动脉细胞出现一些表达上调和下调的基因片段。上调基因有Apobec-1结合蛋白基因、ERP72、nitricoxidesynthase2和Gpx1;;下调的基因有胸腺素β4、FGFRI原癌基因伴随蛋白、ICAM-1、endothelin2、c-myc和TNF-α。结论:对29个阳性克隆中有21个克隆与已知基因序列高度同源,其中13个目前认为与动脉粥样硬化发病有关,将其各取约300ng的DNA产物,结果显示1、4、8和13号基因在丹参注射液处理组大鼠胸主动脉细胞后表达上调,2、3、6、7、9和12号表达下调,其余的诱导前后没有差异,可以认为是假阳性,总阳性率达76%。用DDRT-PCR方法证实经丹参注射液处理动脉粥样硬化大鼠前后胸主动脉细胞可发生一些基因表达水平的变化,引起血管内皮细胞发生病理变化减弱,阻碍动脉粥样硬化斑块的形成。

关键词：丹参注射液动脉粥样硬化主动脉,胸基因表达

植物的单核苷酸多态性及其在作物遗传育种中的应用

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植物学通报 2004年第5期21卷 618-624页

作者：郝岗平杨清吴忠义曹鸣庆黄丛林北京农业生物技术研究中心北京100089 南京农业大学生命科学学院南京210095

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)是基因组中最常见的遗传多态性,在遗传学研究的许多方面具有重要的作用。综述了单核苷酸多态性的发现、特点及其应用等方面对植物SNP的研究进展,并展望其在作物遗传育种中的应用前景。

关键词：植物单核苷酸多态性作物遗传育种基因组遗传标记 SNP