检索结果-南通市图书馆

两性霉素B对猪流行性腹泻病毒入胞的抑制作用研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧与兽医 2023年第2期55卷 73-79页

作者：赵普陈欢张财盛明鑫钱莺娟戴建君郑龙三南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部细菌学重点实验室/江苏省外国专家工作室江苏南京210095

通过测定两性霉素B(amphotericin B,AmpB)的细胞毒性、半数抑制浓度以及利用Western blot、间接免疫荧光、空斑形成、内吞等试验方法探究AmpB对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的抑制作用及其分子机制。结果显示:20μmol/L浓度范围内,AmpB对... 详细信息

通过测定两性霉素B(amphotericin B,AmpB)的细胞毒性、半数抑制浓度以及利用Western blot、间接免疫荧光、空斑形成、内吞等试验方法探究AmpB对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的抑制作用及其分子机制。结果显示:20μmol/L浓度范围内,AmpB对Vero-E6和Marc145细胞毒性极低;在Vero-E6细胞,AmpB对PEDV HLJBY和CV777毒株的半数抑制浓度(IC_(50))分别为0.5和0.3μmol/L,在Marc145细胞,AmpB对HLJBY和CV777的IC_(50)均为0.3μmol/L;AmpB处理几乎能阻断病毒感染细胞;AmpB主要抑制PEDV入胞和细胞巨胞饮作用。本研究为研制抑制PEDV或广谱抑制冠状病毒药物提供了新线索。

关键词： PEDV 两性霉素B 病毒入胞巨胞饮

维普期刊数据库博看期刊

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

小反刍兽疫免疫抗体监测的Meta分析

畜牧与兽医 2024年第11期56卷 100-108页

作者：王艺沈鹏钱莺娟蔡畅常星韩秀琚徐蛟郑龙三王志亮南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/江苏省外国专家工作室江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心/世界动物卫生组织小反刍兽疫参考实验室/联合国粮农组织小反刍兽疫参考中心山东青岛266000 浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江杭州311300 默多克大学信息技术学院理学部澳大利亚珀斯6150

小反刍兽疫(PPR)是我国计划要消灭的重大外来动物疫病,对于实施疫苗免疫预防的省份或地区,必须确保免疫覆盖率和免疫抗体合格率,才能有效阻断病毒的传播。我国在春防、秋防期间,会组织开展免疫抗体监测活动,对抗体水平不高的场户及时开... 详细信息

小反刍兽疫(PPR)是我国计划要消灭的重大外来动物疫病,对于实施疫苗免疫预防的省份或地区,必须确保免疫覆盖率和免疫抗体合格率,才能有效阻断病毒的传播。我国在春防、秋防期间,会组织开展免疫抗体监测活动,对抗体水平不高的场户及时开展补免工作。为综合评价PPR的群体免疫情况,利用荟萃(Meta)分析方法对已发表的文献进行了梳理分析。通过关键词匹配和全文阅读,共有59篇文献符合要求纳入分析,包含样品252048份,抗体平均阳性率为85%(95%CI:83%~87%)。通过进行亚组分析和Wilcoxon显著性检验,发现山东省和江苏省的抗体阳性率明显高于其余省份;不同场户类型之间,规模场的抗体阳性率明显高于散养户;不同检测方法之间抗体阳性率无显著性差异。本研究的分析结果为PPR根除计划的实施提供了科学依据。

关键词：小反刍兽疫免疫抗体 Meta分析

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

依福地平对猪流行性腹泻病毒的抑制作用研究

畜牧与兽医 2024年第3期56卷 62-68页

作者：张财盛陈欢司安琪赵普齐传翔钱莺娟郑龙三戴建君南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部细菌学重点实验室江苏南京210095

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)是猪流行性腹泻(PED)的病原。本研究通过CCK-8、细胞ELISA、Western blot、时间过程分析、药物抑制病毒吸附和入胞试验,探究了依福地平对PEDV的抑制作用。结果表明,依福地平在2... 详细信息

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)是猪流行性腹泻(PED)的病原。本研究通过CCK-8、细胞ELISA、Western blot、时间过程分析、药物抑制病毒吸附和入胞试验,探究了依福地平对PEDV的抑制作用。结果表明,依福地平在20μmol/L浓度范围内,对Vero-E6和Marc-145细胞毒性较低;Western blot结果表明,依福地平能够显著降低宿主细胞中PEDV-N蛋白水平,主要抑制PEDV感染的入胞阶段。研究还发现,依福地平能抑制Ⅰ型单纯疱疹病毒和猪伪狂犬病毒感染宿主细胞,是一类潜在的广谱抗病毒药物。

关键词：猪流行性腹泻病毒依福地平病毒入胞广谱抗病毒效应

BTV和PPRV双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2022年第3期52卷 285-291页

作者：勾倩倩杜吉革李启红李倩琳赵洋钱莺娟印春生郑龙三南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 中国兽医药品监察所北京100081

为建立一种能够同时检测蓝舌病病毒(BTV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)的快速检测方法,本研究选取蓝舌病病毒的NS3基因和小反刍兽疫病毒的N基因作为靶基因,参照GenBank上公布的两种基因序列,通过序列比对后选取一段保守性较高的区域,利用Beaco... 详细信息

为建立一种能够同时检测蓝舌病病毒(BTV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)的快速检测方法,本研究选取蓝舌病病毒的NS3基因和小反刍兽疫病毒的N基因作为靶基因,参照GenBank上公布的两种基因序列,通过序列比对后选取一段保守性较高的区域,利用Beacon designer 8设计引物和探针并优化反应体系及反应条件,建立了双重荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法检测BTV和PPRV阳性质粒标准品的最低检出量分别为1.7 copies/μL和1.2 copeis/μL;与山羊痘病毒、羊口疮病毒、口蹄疫病毒、羊腐败性梭菌、布氏杆菌及弓形虫无交叉反应,具有良好的特异性;其组间重复性和组内重复性的变异系数均小于2%,表明该方法具有较好的重复性。结果表明,建立的双重荧光定量RT-PCR检测方法适用于BTV和PPRV的快速检测。

关键词：蓝舌病病毒小反刍兽疫病毒双重荧光定量RT-PCR

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

犬细小病毒样颗粒的制备及免疫原性分析

中国兽医科学 2024年第1期54卷 19-25页

作者：王傲陈欢苗雨润赵普李家俊郑龙三戴建君印春生钱莺娟南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏省外国专家工作室江苏南京210095 中国兽医药品监察所北京100081

犬细小病毒病是由犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)引起犬的一种急性、高度传染性和致死性的病毒性疾病。该病主要通过接种疫苗预防,没有特效治疗方法。为了制备犬细小病毒样颗粒(virus like particles,VLPs),本研究通过杆状病毒表达... 详细信息

犬细小病毒病是由犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)引起犬的一种急性、高度传染性和致死性的病毒性疾病。该病主要通过接种疫苗预防,没有特效治疗方法。为了制备犬细小病毒样颗粒(virus like particles,VLPs),本研究通过杆状病毒表达系统表达CPV VP2蛋白。将表达后的蛋白经过蔗糖密度梯度离心法纯化后,负染色处理置于透射电子显微镜下观察。结果显示VP2蛋白组装成直径25 nm左右的六边形或圆形样VLPs。血凝试验表明,该VLPs可以凝集猪红细胞,血凝价为27。进一步将该VLPs经弗氏佐剂乳化后免疫小鼠,血凝抑制试验结果显示VLPs可诱导小鼠产生211的血凝抑制抗体。因此,通过杆状病毒表达系统表达VP2蛋白,VP2蛋白可在细胞内组装成与病毒粒子类似的VLPs,该VLPs可以诱导小鼠产生血凝抑制抗体,为CPV VLPs疫苗的制备奠定了基础。

关键词：犬细小病毒 VP2蛋白杆状病毒病毒样颗粒

同方期刊数据库

非洲猪瘟病毒p54蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国动物传染病学报 2023年第4期31卷 164-169页

作者：敖清莹钟秋萍史馨瑾魏常青刘英楠廖欣欣谢振华钱莺娟郑龙三陈鸿军南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业农村部细菌学重点实验室南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白由晚期基因E183L编码,是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白,本研究将E183L基因克隆至pFastBac1载体中,取1μg重组质粒转座DH10Bac感受态细菌,经三轮蓝白斑筛选后,获得重组Bacmid-p54。将提取的... 详细信息

非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白由晚期基因E183L编码,是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白,本研究将E183L基因克隆至pFastBac1载体中,取1μg重组质粒转座DH10Bac感受态细菌,经三轮蓝白斑筛选后,获得重组Bacmid-p54。将提取的Bacmid-p54质粒DNA转染Sf9细胞,出现明显病变后,收获细胞培养上清,在正常Sf9细胞中传三代,获得的杆状病毒命名为rBac-P54。利用SDS-PAGE检测rBac-P54感染后昆虫细胞的蛋白表达情况,并通过间接免疫荧光(IFA)和Western-blot鉴定p54蛋白的免疫原性。结果显示,在感染的Sf9细胞中,p54蛋白能获得高效表达,并可被ASFV阳性血清特异性识别。这表明杆状病毒系统表达的p54蛋白具有良好的免疫原性,为后续开展非洲猪瘟血清学诊断和p54功能研究奠定基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 p54蛋白昆虫细胞表达系统免疫原性

同方期刊数据库

非洲猪瘟病毒pp62蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2022年第5期52卷 579-585页

作者：储珺赵普张婕妮王振忠苗雨润鲍晨沂郑龙三吴晓东钱莺娟戴建君南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室和农业部细菌学重点实验室江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266000

pp62蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)CP530R基因编码的多聚蛋白前体,可被蛋白水解酶切割形成成熟蛋白p35、p15和p8,与pp220多聚蛋白前体的加工产物组装成病毒核壳。本研究参考ASFV China/2018/AnhuiXCGQ毒株基因序列,分析后选取CP530R基因N端(... 详细信息

pp62蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)CP530R基因编码的多聚蛋白前体,可被蛋白水解酶切割形成成熟蛋白p35、p15和p8,与pp220多聚蛋白前体的加工产物组装成病毒核壳。本研究参考ASFV China/2018/AnhuiXCGQ毒株基因序列,分析后选取CP530R基因N端(1—612 bp)及C端(784—1593 bp),分别构建原核表达质粒pET-28a-pp62-N和pET-28a-pp62-C;转化Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达pp62蛋白;再用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合和阳性克隆筛选后,获得4株可稳定分泌pp62单克隆抗体的杂交瘤细胞。Western-blot检测ASFV感染PAM细胞中pp62剪切体的结果显示,1株仅识别pp62蛋白,1株仅识别p35蛋白,1株仅识别p15蛋白,1株可识别pp62和p8蛋白。IFA鉴定结果显示,4株均能与ASFV感染PAM细胞产生特异性绿色荧光。本研究为建立ASFV诊断方法和研究pp62的生物学功能奠定了生物材料基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 pp62蛋白单克隆抗体

非洲猪瘟病毒外膜蛋白CD2v的原核表达及其免疫特性的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2020年第6期50卷 689-695页

作者：钟秋萍于婉琪薄宗义吕璐谢振华王振忠郑龙三张志芳扈荣良钱莺娟陈鸿军南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

本研究参考非洲猪瘟病毒(ASFV)国内分离株SY18株的EP402R基因(编码CD2v蛋白),优化其序列,设计特异性引物扩增。将去除跨膜保留胞外区或胞内区的两种截短体克隆到原核表达载体p ET-28a中,再转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。经IPTG诱... 详细信息

本研究参考非洲猪瘟病毒(ASFV)国内分离株SY18株的EP402R基因(编码CD2v蛋白),优化其序列,设计特异性引物扩增。将去除跨膜保留胞外区或胞内区的两种截短体克隆到原核表达载体p ET-28a中,再转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。经IPTG诱导,铁蛋白融合CD2v胞外区(CD2vN-Fe)和铁蛋白融合CD2v胞外-胞内区(CD2v-NC-Fe)均获得高效表达。以该融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)和间接免疫荧光(IFA)方法检测其灵敏度和特异性。结果表明:CD2vN-Fe多抗特异性较强。本研究为建立ASFV的血清学鉴别检测方法奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 CD2v 原核表达抗体

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

非洲猪瘟病毒p30单克隆抗体的制备和鉴定

中国兽医科学 2020年第8期50卷 976-981页

作者：杨莎莎苗雨润薄宗义王振忠谭凯鲍晨沂吴晓东陈鸿军郑龙三钱莺娟戴建君南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部细菌学重点实验室江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266000 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

p30蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)的膜蛋白,在病毒感染早期分泌表达,含量丰富且抗原性较高,是重要的病毒早期诊断靶标。本研究以ASFV基因Ⅱ型格鲁吉亚2007株p30基因的质粒为模板扩增p30基因片段,连接至原核表达载体pET-28a,转化到大肠杆菌Ro... 详细信息

p30蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)的膜蛋白,在病毒感染早期分泌表达,含量丰富且抗原性较高,是重要的病毒早期诊断靶标。本研究以ASFV基因Ⅱ型格鲁吉亚2007株p30基因的质粒为模板扩增p30基因片段,连接至原核表达载体pET-28a,转化到大肠杆菌Rosetta后,经IPTG诱导表达和镍柱纯化;将纯化后的重组p30蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合和间接ELISA方法,筛选出了2株能够稳定分泌抗p30蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,并通过制备腹水的方法获得单克隆抗体;最后经Western-blot和IFA试验鉴定,其均能与ASFV感染细胞发生特异性反应。本研究为ASFV感染的诊断和致病机制研究提供了重要材料。

关键词：非洲猪瘟病毒 p30蛋白单克隆抗体