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犬细小病毒样颗粒的制备及免疫原性分析

中国兽医科学 2024年第1期54卷 19-25页

作者：王傲陈欢苗雨润赵普李家俊郑龙三戴建君印春生钱莺娟南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏省外国专家工作室江苏南京210095 中国兽医药品监察所北京100081

犬细小病毒病是由犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)引起犬的一种急性、高度传染性和致死性的病毒性疾病。该病主要通过接种疫苗预防,没有特效治疗方法。为了制备犬细小病毒样颗粒(virus like particles,VLPs),本研究通过杆状病毒表达... 详细信息

犬细小病毒病是由犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)引起犬的一种急性、高度传染性和致死性的病毒性疾病。该病主要通过接种疫苗预防,没有特效治疗方法。为了制备犬细小病毒样颗粒(virus like particles,VLPs),本研究通过杆状病毒表达系统表达CPV VP2蛋白。将表达后的蛋白经过蔗糖密度梯度离心法纯化后,负染色处理置于透射电子显微镜下观察。结果显示VP2蛋白组装成直径25 nm左右的六边形或圆形样VLPs。血凝试验表明,该VLPs可以凝集猪红细胞,血凝价为27。进一步将该VLPs经弗氏佐剂乳化后免疫小鼠,血凝抑制试验结果显示VLPs可诱导小鼠产生211的血凝抑制抗体。因此,通过杆状病毒表达系统表达VP2蛋白,VP2蛋白可在细胞内组装成与病毒粒子类似的VLPs,该VLPs可以诱导小鼠产生血凝抑制抗体,为CPV VLPs疫苗的制备奠定了基础。

关键词：犬细小病毒 VP2蛋白杆状病毒病毒样颗粒

非洲猪瘟病毒p30和pK205R双抗原间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2024年

作者：何佳依邹艳丽王燕刘珊苗雨润任炜杰王振忠白昀陈欢贾红郑龙三吴晓东冯志新钱莺娟中国农业科学院北京畜牧兽医研究所南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部动物细菌学重点实验室中国动物卫生与流行病学中心国家非洲猪瘟参考实验室江苏省农业科学院兽医研究所

为建立一种可靠、快速的血清学检测方法，以非洲猪瘟病毒（ASFV）结构蛋白p30和非结构蛋白pK205R作为包被抗原，建立了一种双抗原间接ELISA方法，用于检测ASFV抗体。结果表明，该方法与伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪肺炎支原... 详细信息

为建立一种可靠、快速的血清学检测方法，以非洲猪瘟病毒（ASFV）结构蛋白p30和非结构蛋白pK205R作为包被抗原，建立了一种双抗原间接ELISA方法，用于检测ASFV抗体。结果表明，该方法与伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪肺炎支原体、猪圆环病毒和猪瘟病毒等常见猪源病原阳性血清无交叉反应；对ASFV阳性血清的敏感性能达到1︰12800；批内变异系数为7.95%，批间变异系数为9.18%，均小于10%。利用该方法与***商品化ELISA试剂盒分别检测130份临床猪血清，其阳性符合率为92.19%，阴性符合率为86.36%，总符合率为89.23%。综上所述，本研究成功建立了ASFV p30和pK205R双抗原间接ELISA检测方法，为检测猪血清中ASFV特异性抗体提供了新的技术支持。

关键词：非洲猪瘟病毒 p30蛋白 pK205R蛋白间接ELISA

BTV和PPRV双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2022年第3期52卷 285-291页

作者：勾倩倩杜吉革李启红李倩琳赵洋钱莺娟印春生郑龙三南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 中国兽医药品监察所北京100081

为建立一种能够同时检测蓝舌病病毒(BTV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)的快速检测方法,本研究选取蓝舌病病毒的NS3基因和小反刍兽疫病毒的N基因作为靶基因,参照GenBank上公布的两种基因序列,通过序列比对后选取一段保守性较高的区域,利用Beaco... 详细信息

为建立一种能够同时检测蓝舌病病毒(BTV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)的快速检测方法,本研究选取蓝舌病病毒的NS3基因和小反刍兽疫病毒的N基因作为靶基因,参照GenBank上公布的两种基因序列,通过序列比对后选取一段保守性较高的区域,利用Beacon designer 8设计引物和探针并优化反应体系及反应条件,建立了双重荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法检测BTV和PPRV阳性质粒标准品的最低检出量分别为1.7 copies/μL和1.2 copeis/μL;与山羊痘病毒、羊口疮病毒、口蹄疫病毒、羊腐败性梭菌、布氏杆菌及弓形虫无交叉反应,具有良好的特异性;其组间重复性和组内重复性的变异系数均小于2%,表明该方法具有较好的重复性。结果表明,建立的双重荧光定量RT-PCR检测方法适用于BTV和PPRV的快速检测。

关键词：蓝舌病病毒小反刍兽疫病毒双重荧光定量RT-PCR

非洲猪瘟病毒pp62蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

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中国兽医科学 2022年第5期52卷 579-585页

作者：储珺赵普张婕妮王振忠苗雨润鲍晨沂郑龙三吴晓东钱莺娟戴建君南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室和农业部细菌学重点实验室江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266000

pp62蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)CP530R基因编码的多聚蛋白前体,可被蛋白水解酶切割形成成熟蛋白p35、p15和p8,与pp220多聚蛋白前体的加工产物组装成病毒核壳。本研究参考ASFV China/2018/AnhuiXCGQ毒株基因序列,分析后选取CP530R基因N端(... 详细信息

pp62蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)CP530R基因编码的多聚蛋白前体,可被蛋白水解酶切割形成成熟蛋白p35、p15和p8,与pp220多聚蛋白前体的加工产物组装成病毒核壳。本研究参考ASFV China/2018/AnhuiXCGQ毒株基因序列,分析后选取CP530R基因N端(1—612 bp)及C端(784—1593 bp),分别构建原核表达质粒pET-28a-pp62-N和pET-28a-pp62-C;转化Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达pp62蛋白;再用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合和阳性克隆筛选后,获得4株可稳定分泌pp62单克隆抗体的杂交瘤细胞。Western-blot检测ASFV感染PAM细胞中pp62剪切体的结果显示,1株仅识别pp62蛋白,1株仅识别p35蛋白,1株仅识别p15蛋白,1株可识别pp62和p8蛋白。IFA鉴定结果显示,4株均能与ASFV感染PAM细胞产生特异性绿色荧光。本研究为建立ASFV诊断方法和研究pp62的生物学功能奠定了生物材料基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 pp62蛋白单克隆抗体

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黄腐酚对猪流行性腹泻病毒的体外抑制作用

病毒学报 2020年第5期36卷 907-912页

作者：赵诗莹陈新陈欢钱莺娟郑龙三戴建君南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业部细菌学重点实验室南京210095

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种以仔猪水样腹泻、呕吐、脱水和高死亡率为主要特征的高度接触性传染病。该病首先在欧洲出现地区性暴发,2000年后在... 详细信息

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种以仔猪水样腹泻、呕吐、脱水和高死亡率为主要特征的高度接触性传染病。该病首先在欧洲出现地区性暴发,2000年后在亚洲流行严重,给全球养猪业造成了巨大的损失。由于PEDV毒株变异迅速,研究对PEDV具有抑制作用的天然活性化合物对于了解病毒感染致病机制以及防控PED具有重要意义。本研究通过RT-PCR、空斑形成试验、Western Blot和MTT试验等方法探究黄腐酚是否对PEDV感染具有抑制作用,并验证其作用效果。结果显示,黄腐酚能够明显抑制PEDV感染Vero-E6细胞中病毒M基因mRNA水平,显著降低细胞内和上清中病毒粒子的产生;黄腐酚对Vero-E6细胞几乎无毒性,抑制PEDV呈剂量依赖性且半数有效浓度为3.865μM;黄腐酚处理能明显降低PEDV不同毒株(如CV777和SQ2014毒株)感染细胞中N蛋白表达水平。本研究为进一步探究黄腐酚抗PEDV感染机制,研制抗PEDV或广谱抗冠状病毒药物奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪流行性腹泻(PED) 黄腐酚抗病毒

两性霉素B对猪流行性腹泻病毒入胞的抑制作用研究

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畜牧与兽医 2023年第2期55卷 73-79页

作者：赵普陈欢张财盛明鑫钱莺娟戴建君郑龙三南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部细菌学重点实验室/江苏省外国专家工作室江苏南京210095

通过测定两性霉素B(amphotericin B,AmpB)的细胞毒性、半数抑制浓度以及利用Western blot、间接免疫荧光、空斑形成、内吞等试验方法探究AmpB对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的抑制作用及其分子机制。结果显示:20μmol/L浓度范围内,AmpB对... 详细信息

通过测定两性霉素B(amphotericin B,AmpB)的细胞毒性、半数抑制浓度以及利用Western blot、间接免疫荧光、空斑形成、内吞等试验方法探究AmpB对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的抑制作用及其分子机制。结果显示:20μmol/L浓度范围内,AmpB对Vero-E6和Marc145细胞毒性极低;在Vero-E6细胞,AmpB对PEDV HLJBY和CV777毒株的半数抑制浓度(IC_(50))分别为0.5和0.3μmol/L,在Marc145细胞,AmpB对HLJBY和CV777的IC_(50)均为0.3μmol/L;AmpB处理几乎能阻断病毒感染细胞;AmpB主要抑制PEDV入胞和细胞巨胞饮作用。本研究为研制抑制PEDV或广谱抑制冠状病毒药物提供了新线索。

关键词： PEDV 两性霉素B 病毒入胞巨胞饮

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郑龙才:实施种业振兴塑造百合之乡

中国品牌 2024年第1期 50-51页

作者：郑龙才南平市延平区人民政府

延平山清水秀、气候宜人,辖区森林覆盖率达74.47%,主要河流、小流域及饮用水源水质达标率常年保持在100%,空气质量连续8年位居福建省各设区市第一,是百合花自然分布中心和最适宜栽培区,是我国宝贵的种质资源。

关键词：适宜栽培区饮用水源水质百合花森林覆盖率空气质量种质资源设区市种业

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基于表面等离激元的光学氢气传感技术

激光杂志 2024年第7期45卷 49-57页

作者：郑龙超刘勇上海电力大学电子与信息工程学院上海200090

综述了基于表面等离激元(surface plasmon,SP)的光学氢气传感技术的研究进展,重点介绍了两种基于SP的测量方法,即局域表面等离激元共振法(localized surface plasmon resonance,LSPR)和表面等离激元共振法(surface plasmon resonance,SPR),继而阐述了基于这两种原理的传感器的测量方法、传感结构和传感特性。此外,回顾了现有的各种不同的光学氢气传感器,并介绍了它们各自存在的优/劣势。最后,强调了未来基于SP的光学氢气传感器的发展方向和重要挑战,如具备特异性和稳定性的特殊材料、不断发展与应用的新型纳米结构以及可以适应未来需求的多点式传感。

关键词：表面等离激元氢气传感局域表面等离激元共振法表面等离激元共振法

出口直径对脉冲爆震清灰装置外场压力作用特性的影响研究

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西北工业大学学报 2024年第3期42卷 477-486页

作者：王渤文郑龙席程悦王超李勍卢杰西北工业大学动力与能源学院陕西西安710072

脉冲爆震清灰技术是一种利用爆震波解耦产生的冲击波清除积灰的高效清洁技术,在炉内清洁领域具有巨大优势。为探究爆震清灰装置外场压力作用特性及装置出口直径对其压力作用特性的影响,以丙烷-空气为燃料,针对某型脉冲爆震清灰装置开展... 详细信息

脉冲爆震清灰技术是一种利用爆震波解耦产生的冲击波清除积灰的高效清洁技术,在炉内清洁领域具有巨大优势。为探究爆震清灰装置外场压力作用特性及装置出口直径对其压力作用特性的影响,以丙烷-空气为燃料,针对某型脉冲爆震清灰装置开展数值仿真与试验研究。结果表明:随着传播距离的增加,边缘处的弧状冲击波存在转变为平面波的趋势,冲击波的作用压力峰值趋于相近,且作用压力峰值的到达时间也趋于相近。当外场冲击波作用于非对流管束积灰面时,除爆震室轴线正对处发生正反射而产生一道压力峰值外,其余位置主要因发生斜反射而产生2道压力峰值。尾段出口直径与爆震室直径比值(直径比)为1时外场冲击波作用压力峰值最大,出口直径的增加或减小均会不同程度地削弱外场冲击波的压力峰值,直径比小于1的结构对外场冲击波的削弱效果最为显著,直径比大于1的结构削弱效果较次之;在直径比小于1时冲击波作用压力峰值随直径比增大而增大,当直径比大于1时冲击波作用压力峰值随直径比增大而减小。

关键词：锅炉积灰爆震清灰冲击波作用特征填充比直径比