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作者：郑鹢冰复旦大学

学位级别：硕士

研究背景原发性膀胱输尿管反流(VUR)是一种常见的先天性尿路畸形,严重者可进展为终末期肾病(ESRD)。原发性VUR有一定的遗传基础,在同胞中的发病率显著高于健康儿童。国内外学者通过动物模型研究发现了一系列参与泌尿系统发育的基因与VU... 详细信息

研究背景原发性膀胱输尿管反流(VUR)是一种常见的先天性尿路畸形,严重者可进展为终末期肾病(ESRD)。原发性VUR有一定的遗传基础,在同胞中的发病率显著高于健康儿童。国内外学者通过动物模型研究发现了一系列参与泌尿系统发育的基因与VUR发病相关,但对原发性VUR患者进行基因检测或全基因组扫描却未发现一致的基因异常,原发性VUR确切的发病机制迄今仍不明确。 Pax2基因所编码的蛋白质为核转录因子。在肾、输尿管发育过程中,Pax2表达于发育中的前肾、中肾、输尿管芽及间充质细胞,主要发挥三大作用,包括协调输尿管芽的出芽和定位,抑制输尿管芽的凋亡而促使输尿管芽不断发出分支,以及促使间充质细胞向上皮细胞转化。当上皮前体细胞形成后,Pax2表达逐渐下降,在成熟的肾单位无表达或呈痕量表达。我科前期通过免疫组织化学研究发现原发性VUR患儿输尿管上皮细胞Pax2蛋白阳性表达,而对照组呈痕量表达,且有研究报道在小鼠胚胎肾发育过程中Pax2表达逐渐下降的同时伴有其启动子某些特定区域DNA甲基化水平的增高。我们推测,Pax2在VUR患儿输尿管上皮细胞的表达可能与其启动子DNA甲基化的调控相关。在上述认识的基础上,本研究通过对Pax2启动子DNA甲基化水平的分析,探讨DNA甲基化对Pax2基因表达的影响及其表达的意义,为VUR发病机制的研究提供新的思路。目的(1)检测Pax2基因在人输尿管组织的表达情况。(2)检测Pax2基因启动子DNA甲基化水平。(3)通过检测DNA甲基转移酶(Dnmt)的表达分析引起DNA甲基化差异的可能原因。材料和方法(1)材料：病例组标本21例,来自我院泌尿外科行输尿管再植术的Ⅲ级以上原发性VUR患儿术中切下的异常输尿管下段组织,对照组3例,分别为外伤行肾、输尿管切除术,左输尿管结石伴末端狭窄行输尿管再植术,及肾移植术中取得的输尿管下段组织。(2)方法：通过免疫组织化学、Western blot及Real-time PCR检测VUR及对照组输尿管组织蛋白质及mRNA的表达,然后通过重亚硫酸盐测序(BSP)方法检测VUR及对照组输尿管组织Pax2基因启动子DNA甲基化水平,最后通过Real-time PCR检测VUR及对照组输尿管组织三种DNA甲基转移酶的mRNA表达。结果(1)Pax2表达于VUR输尿管上皮细胞胞核,且VUR组Pax2蛋白质(P=0.011)及mRNA(P<0.0001)表达水平显著高于对照组。(2)Pax2的蛋白质表达量在不同年龄(P=0.309)、性别(P=0.316)及反流等级(P=0.339)的VUR中无显著差异。(3)VUR组Pax2基因所测启动子序列的DNA甲基化水平显著低于对照组(P=0.045),但与mRNA的表达无显著相关性(P=0.091)。(4)Pax2基因所测启动子序列的DNA甲基化水平在不同年龄(P=0.574)、性别(P=0.347)、反流等级(P=0.881)的VUR中无显著差异。(5)VUR组Dnmt3a显著低于对照组(P=0.027),但Dnmtl、Dnmt3b的差异无统计学意义。结论(1)VUR组Pax2基因蛋白质及mRNA的表达显著高于对照组,其表达的意义有待进一步研究。(2)VUR组Pax2基因所测启动子序列的DNA甲基化水平显著低于对照组,在一定程度上可以解释Pax2在输尿管上皮细胞的高表达。(3)Pax2基因所测启动子的DNA低甲基化可能是由低水平的Dnmt3a所引起。

关键词：膀胱输尿管反流 Pax2 表观遗传学 DNA甲基化 DNA甲基转移酶

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肾活检指证的重新思考——30年肾活检病理结果回顾

肾活检指证的重新思考——30年肾活检病理结果回顾

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中华医学会第十五次全国儿科学术大会

作者：郑鹢冰徐虹复旦大学附属儿科医院肾脏风湿科

目的(1)回顾分析我院肾脏科近30年来肾活检病理类型的变化。(2)分析如何改善我们的肾活检指征。方法回顾性分析我院肾脏科1979年1月至2010年1月肾活检病理结果,并以10年为一个间期分三个阶段进行分析比较:阶段一(1979.1-1990.1),阶段二(...

目的(1)回顾分析我院肾脏科近30年来肾活检病理类型的变化。(2)分析如何改善我们的肾活检指征。方法回顾性分析我院肾脏科1979年1月至2010年1月肾活检病理结果,并以10年为一个间期分三个阶段进行分析比较:阶段一(1979.1-1990.1),阶段二(1991.1-2000.1),阶段三(2001.1-2010.1)。结果30年间我科共进行肾活检1934例,1926例肾活检成功,成功率为99.6%,平均年龄7.9+3.7

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原发性膀胱输尿管反流Pax2基因启动子DNA甲基化状态研究

原发性膀胱输尿管反流Pax2基因启动子DNA甲基化状态研究

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2012年江浙沪儿科学术年会暨浙江省医学会儿科学分会学术年会、儿内科疾病诊治新进展国家级学习班

作者：郑鹢冰徐虹郭维复旦大学附属儿科医院

目的(1)检测Pax2基因在人输尿管组织的表达情况。(2)检测Pax2基因启动子DNA甲基化水平。(3)通过检测DNA甲基转移酶(Dnmt)的表达分析引起DNA甲基化差异的可能原因。方法(1)材料:病例组标本21例,来自我院泌尿外科行输尿管再植术的Ⅲ级以... 详细信息

目的(1)检测Pax2基因在人输尿管组织的表达情况。(2)检测Pax2基因启动子DNA甲基化水平。(3)通过检测DNA甲基转移酶(Dnmt)的表达分析引起DNA甲基化差异的可能原因。方法(1)材料:病例组标本21例,来自我院泌尿外科行输尿管再植术的Ⅲ级以上原发性VUR患儿术中切下的异常输尿管下段组织,对照组3例,分别为外伤行肾、输尿管切除术,左输尿管结石伴末端狭窄行输尿管再

关键词：甲基化水平启动子序列原发性基因启动子 DNA

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原发性膀胱输尿管反流Pax2基因启动子DNA甲基化状态研究

原发性膀胱输尿管反流Pax2基因启动子DNA甲基化状态研究

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中华医学会第十七次全国儿科学术大会

作者：郑鹢冰徐虹郭维复旦大学附属儿科医院肾脏风湿科

目的(1)检测Pax2基因在人输尿管组织的表达情况。(2)检测Pax2基因启动子DNA甲基化水平。(3)通过检测DNA甲基转移酶(Dnmt)的表达分析引起DNA甲基化差异的可能原因。方法(1)材料:病例组标本21例,来自我院泌尿外科行输尿管再植术的Ⅲ级以...

目的(1)检测Pax2基因在人输尿管组织的表达情况。(2)检测Pax2基因启动子DNA甲基化水平。(3)通过检测DNA甲基转移酶(Dnmt)的表达分析引起DNA甲基化差异的可能原因。方法(1)材料:病例组标本21例,来自我院泌尿外科行输尿管再植术的Ⅲ级以上原发性VUR患

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地塞米松影响足细胞活动力的相关分子研究

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中华肾脏病杂志 2012年第9期28卷 705-709页

作者：刘海梅徐虹高霞郑鹢冰刘俊朝查锡良复旦大学附属儿科医院肾脏风湿科上海201102 复旦大学医学院分子生物学与生物化学系

目的通过分析地塞米松对足细胞活动力的影响特点,探讨其对足细胞固有分子α-actinin-4、nephrin的调控能力.方法体外足细胞根据不同处理分为3组：地塞米松组（地塞米松1μmol/L＋嘌呤霉素50 mg/L）、嘌呤霉素组（嘌呤霉素50 mg/L）和... 详细信息

目的通过分析地塞米松对足细胞活动力的影响特点,探讨其对足细胞固有分子α-actinin-4、nephrin的调控能力.方法体外足细胞根据不同处理分为3组：地塞米松组（地塞米松1μmol/L＋嘌呤霉素50 mg/L）、嘌呤霉素组（嘌呤霉素50 mg/L）和正常对照组.采用划痕和Transwell实验检测各组足细胞活动力的变化.应用两室弥散系统检测各组足细胞单层膜对FITC-BSA的滤过率.使用实时定量PCR和Western印迹法分析各组足细胞α-actinin-4和nephrin的表达变化.结果足细胞在嘌呤霉素干预后,细胞划痕修复能力及细胞迁移数均显著提高（P＜0.01）.与嘌呤霉素组比较,地塞米松预处理后足细胞再次给予同样剂量、时间的嘌呤霉素刺激后,细胞划痕修复及迁移数均未发生显著升高（P＜0.01）.实时定量PCR和Western印迹结果均提示,地塞米松预处理后足细胞α-actinin-4和nephrin的表达量显著低于嘌呤霉素组（P＜0.05）.结论地塞米松能够减轻嘌呤霉素诱导的足细胞活动力升高,其作用机制可能与调控α-actinin-4和nephrin的表达有关.

关键词：地塞米松足细胞辅肌动蛋白细胞运动 nephrin

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先天性肾脏和泌尿道畸形超声筛查模式的探讨及应用

先天性肾脏和泌尿道畸形超声筛查模式的探讨及应用

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中华医学会第十七次全国儿科学术大会

作者：龚一女张莺李云姚亦郑鹢冰徐虹复旦大学附属儿科医院肾脏风湿科上海市闵行区妇幼保健所儿童保健科

目的:本研究拟通过高危儿生后泌尿系统超声筛查了解高危儿CAKUT发病情况,探索上海开展CAKUT筛查的适宜模式和筛查对象。方法:以上海市闵行区妇幼保健院为筛查中心,对2010年6月1日至2011年12月31日登记于闵行区个人健康电子档案的高危儿...

目的:本研究拟通过高危儿生后泌尿系统超声筛查了解高危儿CAKUT发病情况,探索上海开展CAKUT筛查的适宜模式和筛查对象。方法:以上海市闵行区妇幼保健院为筛查中心,对2010年6月1日至2011年12月31日登记于闵行区个人健康电子档案的高危儿进行泌尿系统超声筛查,轻-中度先天性肾积水者定期随访,严重肾

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高危儿泌尿系统超声筛查三级管理模式的探索及应用

高危儿泌尿系统超声筛查三级管理模式的探索及应用

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2012年江浙沪儿科学术年会暨浙江省医学会儿科学分会学术年会、儿内科疾病诊治新进展国家级学习班

作者：龚一女郑鹢冰徐虹张莺李云姚亦复旦大学附属儿科医院肾脏风湿科上海市闵行区妇幼保健院

目的通过上海实施高危儿生后泌尿系统超声筛查,及早发现和诊断严重先天性肾脏和泌尿系统畸形患儿;逐步探索上海市"社区登记-区级妇幼保健院筛查-三级儿童专科医院诊治严重患儿"的三级管理模式,以有效管理筛查异常患儿。方法以上海市闵... 详细信息

目的通过上海实施高危儿生后泌尿系统超声筛查,及早发现和诊断严重先天性肾脏和泌尿系统畸形患儿;逐步探索上海市"社区登记-区级妇幼保健院筛查-三级儿童专科医院诊治严重患儿"的三级管理模式,以有效管理筛查异常患儿。方法以上海市闵行区妇幼保健院为筛查中心,对2010年6月1日至2012年5月31日登记于闵行区各社区卫生服务中心的高危儿进行泌尿系统超声筛查。轻-中度的先天

关键词：泌尿系统妇幼保健院高危儿三级管理模式

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无症状血尿和/或蛋白尿患儿肾活检指征的探讨

无症状血尿和/或蛋白尿患儿肾活检指征的探讨

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中华医学会第十七次全国儿科学术大会

作者：翟亦晖沈茜朱光华卫敏江曹琦郑鷁冰徐虹复旦大学附属儿科医院交通大学附属儿童医院交通大学附属新华医院

目的通过多中心研究,分析无症状血尿和/或蛋白尿患儿肾活检病理资料的特点,探讨无症状尿检异常儿童肾活检的指征。方法分析上海市三个临床儿科肾病中心2003年至2010年7～14岁无症状血尿和/或蛋白尿儿童的肾活检病理资料。入组病例包括...

目的通过多中心研究,分析无症状血尿和/或蛋白尿患儿肾活检病理资料的特点,探讨无症状尿检异常儿童肾活检的指征。方法分析上海市三个临床儿科肾病中心2003年至2010年7～14岁无症状血尿和/或蛋白尿儿童的肾活检病理资料。入组病例包括健康儿童学校尿液筛查或自发体检时发现的无症状血尿和/或蛋白尿者,以及因非泌尿系统疾病症状就诊而无意发现的镜下血尿和/或蛋白尿者。结果三个临床中心共有112例入组病例。分析发现,大多数(71%)患儿因单纯镜下血尿而接受肾活检,8%因无症状蛋白尿,21%因镜下血尿合并无症状蛋白尿而接受肾活检。肾活检病理结果提示,大多数(61%)患儿被证实为肾小球轻微病变或薄基底膜肾病,仅约30%被证实为IgA肾病、局灶节段性肾小球硬化或Alport综合征等。具体分析尿检异常与肾活检病理特点发现,绝大多数单纯镜下血尿患儿经肾活检证实为轻微病变(56%)或薄基底膜肾病(19%);轻微病变(85%)与薄基底膜肾病(90%)的主要尿检表现亦为无症状镜下血尿。而无症状蛋白尿患儿有33%被证实为IgA肾病。同时伴有镜下血尿和蛋白尿者则有高达79%被证实为IgA肾病。分析年龄与尿检结果发现,大年龄儿童(12岁)首次发现尿检异常多表现为镜下血尿合并蛋白尿,而稍小年龄儿童(9岁)首次发现尿检异常多表现为镜下血尿,中小学生之间有统计学差异(P<0.05)。因单纯镜下血尿而行肾活检的间隔时间最长(中位数:12月),无症状蛋白尿次之(8月),两者兼有者最短(7月)。比较三个中心的资料发现,中心A诊断轻微病变最少,而诊断IgA肾病最多,可能与中心A因单纯镜下血尿行肾活检者仅占47%,明显低于中心B(89%)和C(76%),而因镜下血尿合并蛋白尿行肾活检者占38%,明显高于中心B(9%)和C(16%)有关。各中心之间的差异可能与肾活检指征略有不同有关。结论尿液检查结合随访有助于早期诊断儿童隐匿起病的肾小球肾炎。无症状尿检异常儿童合适的肾活检指征值得探讨,单纯镜下血尿不建议作为早期肾活检的指征,而应结合尿微量蛋白、家族史等其他临床信息再决定;而镜下血尿合并蛋白尿者可考虑适时行肾活检以早期明确诊断。

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无症状血尿和/或蛋白尿患儿肾活检指征的探讨

无症状血尿和/或蛋白尿患儿肾活检指征的探讨

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2012年江浙沪儿科学术年会暨浙江省医学会儿科学分会学术年会、儿内科疾病诊治新进展国家级学习班

作者：翟亦晖沈茜曹琦郑鹢冰徐虹朱光华卫敏江复旦大学附属儿科医院交通大学附属儿童医院交通大学附属新华医院

目的通过多中心研究,分析无症状血尿和/或蛋白尿患儿肾活检病理资料的特点,探讨无症状尿检异常儿童肾活检的指征。方法分析上海市三个临床儿科肾病中心2003年至2010年7～14岁无症状血尿和/或蛋白尿儿童的肾活检病理资料。入组病例包括... 详细信息

关键词：无症状血尿肾活检病理肾活检镜下血尿

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高危儿泌尿系统超声筛查三级管理模式的探索及应用

高危儿泌尿系统超声筛查三级管理模式的探索及应用

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中华医学会第十七次全国儿科学术大会

作者：龚一女张莺李云姚亦郑鹢冰徐虹复旦大学附属儿科医院肾脏风湿科上海市闵行区妇幼保健所儿童保健科

目的:通过在上海实施高危儿生后泌尿系统超声筛查,及早发现和诊断严重先天性肾脏和泌尿道畸形患儿;逐步探索上海市"社区登记-区级妇幼保健院筛查-三级儿童专科医院诊治严重患儿"的三级管理模式,以有效管理筛查异常患儿。方法:以上海市...

目的:通过在上海实施高危儿生后泌尿系统超声筛查,及早发现和诊断严重先天性肾脏和泌尿道畸形患儿;逐步探索上海市"社区登记-区级妇幼保健院筛查-三级儿童专科医院诊治严重患儿"的三级管理模式,以有效管理筛查异常患儿。方法:以上海市闵行区妇幼保健院为筛查中心,对2010年6月1日至2012年5月31日登记于闵行区各社区卫生服务中心的高危儿进行泌尿系统超声筛查。轻.中度的先天性肾积水患儿在闵行区妇幼保健院进行定期随访,严重肾积水、其他肾脏畸形以及泌尿系统外异常患儿转诊至复旦大学附属儿科医院进一步检查、治疗及随访。2011年8月起,复旦大学附属儿科医院与闵行区妇幼保健院采取定期信息汇总、严重患儿转诊确认等措施。结果:(一)筛查情况:闵行区妇幼保健院筛查高危儿4148例,男婴2338例,女婴1810例,筛查率为74.86%。2011年8月后,每月新就诊高危儿泌尿系统超声筛查率明显升高。筛查异常者382例,阳性率9.21%。(二)筛查阳性结果:以先天性肾积水最常见,362例(8.73%)轻、中、重度构成比分别为75.07%、21.61%,3.32%。泌尿系统其他异常12例(0.29%),最常见的为孤立肾3例,皮髓质回声异常3例,双侧肾发育不良、囊性肾发育不良、单纯性肾囊肿、异位肾(盆腔)、双肾盂结构、单侧肾脏增大等各1例。泌尿系统外异常分别为,11例(0.27%)。(三)转诊及随访情况:符合转诊标准高危儿实际转诊率为29.4.1%,其中主要转诊者为重度肾积水及泌尿系统外异常者:近一半继续在闵妇幼随访,部分(7.84%)转诊至其他三级医院就诊及随访,失访率15.69%。转诊患儿中2例重度肾积水接受外科手术治疗,1例盆腔囊性占位者诊断为卵巢囊肿,接受手术摘除;4例盆腔囊性占位患儿及1例肾上腺占位在转诊医院超声随访中。未达到转诊标准的轻-中度先天性肾积水高危儿在闵妇幼进行超声随访,失访率为8.41%。结论:高危儿泌尿系统超声筛查三级管理模式实施对早期发现和诊断严重先天性肾脏和泌尿道畸形十分重要。对严重肾积水及泌尿系统其他异常患儿及早转诊,由三级儿科专科医院采取有效预防性或治疗性干预措施,以防止疾病进展。区级妇幼保健院在筛查及轻.中度先天性肾积水患儿随访中发挥了重要作用,三级儿童专科医院规范化指导及质控必不可少,多级医疗机构合作是提高患儿随访管理的有效形式。

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