检索结果-南通市图书馆

作者：郑芳园南京农业大学

学位级别：硕士

猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的以腹泻、呕吐、脱水和哺乳仔猪高致死率为主要特征的一种高度接触性肠道传染病。该病已给各国的养猪业造成了严重的经济损失,因此关于其疫苗的研制迫在眉睫。本研究制备了PEDVM和S蛋... 详细信息

猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的以腹泻、呕吐、脱水和哺乳仔猪高致死率为主要特征的一种高度接触性肠道传染病。该病已给各国的养猪业造成了严重的经济损失,因此关于其疫苗的研制迫在眉睫。本研究制备了PEDVM和S蛋白的多克隆抗体,利用原核表达的S蛋白建立了间接ELISA方法,还利用昆虫细胞杆状病毒表达系统表达了M、E和S蛋白,成功构建了PEDV病毒样颗粒(VLPs),并对其免疫特性进行了研究,PEDV VLPs的构建和免疫特性研究为PEDVVLPs疫苗的研制奠定了基础。具体研究内容如下：1.猪流行性腹泻病毒M和S蛋白多克隆抗体的制备及鉴定本研究采用PCR方法对猪流行性腹泻病毒(PEDV) M蛋白和S蛋白的亲水区基因进行扩增,扩增片段(命名为Ma和Sa)分别克隆到原核表达载体pET-32a(+)和pGEX-6p-1中,获得的重组质粒pET-32a-Ma 和 pGEX-6p-1-Sa转化大肠杆菌BL-21菌株,经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳及Western-blot鉴定。表达产物经SDS-PAGE电泳后切胶免疫小鼠制备多克隆抗体,间接ELISA方法检测小鼠免疫后血清效价,Western-blot和间接免疫荧光检测抗体的特异性。结果表明目标蛋白获得了正确表达,且制备的多克隆抗体具有较高的敏感性和特异性。PEDV Ma和Sa蛋白的表达及多克隆抗体的制备将为进一步构建PEDV的病毒样颗粒(VLPS)抗原和建立血清学检测方法奠定了基础。*** Sc蛋白间接ELISA方法的建立及其与中和试验相关性的研究本研究应用原核表达载体pET-28a (+)表达了PEDV S蛋白的截短片段(命名为Sc),并利用纯化的Sc蛋白建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法。通过筛选确定,抗原最佳包被浓度为1 gg/mL,包被条件为37℃ 2 h,最佳封闭液为5%脱脂乳,封闭时间为2 h,血清最佳稀释度为1：100,作用时间为1 h,二抗最佳稀释度为1：20000,作用时间为45 min,最佳显色时间为15 min。通过对80份PEDV阴性血清间接ELISA结果进行统计学分析,确定本方法的判定标准为：当OD450nm≥0.259时判为阳性,当OD450nm≤0.223时判为阴性,介于两者之间判为可疑。本方法的批内重复性和批间重复性变异系数均小于100%，敏感性实验证明5份阳性血清1：3200稀释后检测仍为阳性,说明本方法具有良好的重复性和敏感性。使用本研究建立的间接ELISA方法检测PRV、PCV2、FMDV、PRRSV和CSFV的标准阳性血清,结果均为阴性,说明本方法具有良好的特异性。运用本方法筛选的OD4sonm值递减的7份血清样品做中和试验,结果中和抗体效价基本保持递减趋势,说明本研究建立的间接ELISA方法可信度高,可用于检测PEDV中和抗体。3. PEDV病毒样颗粒的构建和免疫原性的研究本研究通过PCR方法扩增了PEDV的M、E和S基因,先后将M和E基因克隆到昆虫杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBac Dual的PH和p10启动子后,构建重组质粒pFast-ME,将S基因克隆到pFastBac Dual的PH启动子后,构建重组质粒pFast-S。分别将重组质粒pFast-ME和pFast-S转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经2轮蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得正确的重组杆粒Bacmid-ME和Bacmid-S.在脂质体的介导下,分别用Bacmid-ME和Bacmid-S转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBME和rBS。用重组杆状病毒rBME和rBS共同感染Sf9细胞,收获细胞后经Western-blot鉴定,M、E和S蛋白均得到正确表达。将共感染收获的细胞经蔗糖密度梯度离心纯化后电镜观察,结果证明M、E和S 3种蛋白可以组装形成PEDV病毒样颗粒。将VLPs样品制成疫苗,免疫小鼠,通过ELISA实验和中和试验检测发现VLPs能诱导机体产生ELISA抗体和中和抗体。以上结果说明杆状病毒表达的M、E和S蛋白在昆虫细胞中组装形成了VLPs,为研制VLPs疫苗奠定了基础,具有良好的应用前景。综上所述,本研究制备了PEDV M和S蛋白的多克隆抗体,利用截短表达的S蛋白建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法,并成功利用杆状病毒表达的M、E和S蛋白在昆虫细胞中组装形成了VLPs,为PEDV血清学诊断技术和VLPs疫苗的研制奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV) S蛋白间接ELISA 病毒样颗粒(VLPs)

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间型假丝酵母C410产生挥发性抗真菌物质的条件优化及其对草莓储藏期病害的防治研究

间型假丝酵母C410产生挥发性抗真菌物质的条件优化及其对草莓储藏...

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作者：郑芳园华中农业大学

学位级别：硕士

论文研究了间型假丝酵母C410产生挥发性气体(Volatile organic compounds, VOCs)的培养条件优化;评估了VOCs对草莓储藏期病害防病潜力;探讨了C410在保护地防治番茄灰霉病的效果;最后对C410熏蒸剂进行了研究。取得的研究结果如下：1.通... 详细信息

论文研究了间型假丝酵母C410产生挥发性气体(Volatile organic compounds, VOCs)的培养条件优化;评估了VOCs对草莓储藏期病害防病潜力;探讨了C410在保护地防治番茄灰霉病的效果;最后对C410熏蒸剂进行了研究。取得的研究结果如下：1.通过生物测定法测定了培养基、碳源、氮源、pH值和温度等因子对间型假丝酵母C410产生VOCs的影响。结果表明：用MCDA培养基培养酵母菌,生物量达到最高,产生的VOCs对灰霉菌菌落生长抑制效果显著。最适宜菌株C410产生VOCs的碳源为麦芽糖和葡萄糖;最适宜无机氮源为硫酸铵;最适宜有机氮源为精氨酸;最适宜pH值范围为5-7;最适宜生长温度为25℃。2.通过分离、筛选得到177株草莓储藏期病害病原菌,经传统的形态特征和分子生物学的ITS测序比对结果,将菌株分别鉴定为10个种;通过平板对峙试验和离体果实接种试验,证实了间型假丝酵母C410产生的VOCs对草莓储藏期病害进行防治均具有显著地防治效果。3.通过2011年和2012年两年的田间防治试验,证实间型假丝酵母C410细胞悬浮液对温室番茄灰霉病的发生具有显著地防治效果。4.对酵母菌进行制剂研发,筛选出面粉和稻壳为最佳发酵基质;并初探了干酵母的制备流程,筛选最适宜离心条件为5000r/min、20min及洗涤液浓度为1%。确定干燥温度、时间为25℃,30min。对乳化剂的选择和添加量进行优化,得出吐温80：司盘60(1：1)为最佳保护干酵母细胞在干燥和复水过程活性损失;并证实,筛选出的发酵基质与酵母菌孢子液混合制剂,在草莓储藏过程中,其产生的挥发性物质对草莓果实自然发病情况有显著地抑制作用。

关键词：间型假丝酵母条件优化草莓储藏期病害田间试验制剂研发

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财务柔性对企业研发投入的影响研究

财务柔性对企业研发投入的影响研究

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作者：郑芳园湘潭大学

学位级别：硕士

随着创新策略的深入,我国企业的发展模式开始发生转变,创新战略成为企业竞争的一大重要方向,而企业要想提高创新水平,资金资源是不可或缺的部分。对于企业而言,要想增加企业价值就得保证企业投资活动的良好运行,作为投资活动的重要代表... 详细信息

随着创新策略的深入,我国企业的发展模式开始发生转变,创新战略成为企业竞争的一大重要方向,而企业要想提高创新水平,资金资源是不可或缺的部分。对于企业而言,要想增加企业价值就得保证企业投资活动的良好运行,作为投资活动的重要代表,研发活动关系到大多数企业的经营发展。因此,不管是为了当前的经营还是未来持续发展,企业必然需要加强对研发活动的投入力度。财务柔性是市场主体在财务管理方面具有弹性的具体表现,并且在企业经营中发挥着日益重要的作用,具备柔性的财务战略显得更为重要。财务柔性是企业在日益复杂多变的市场环境下,能够根据外界变化以及自身需求来进行战略上的调整,从而能够更好地应对外部冲击;其主要来源为企业存有大量的自有现金以及较低的负债水平,能够把握机遇,降低企业财务风险,提高企业的生存能力,以实现长久稳定的发展目标。根据国内外已有对财务柔性的研究,有关其对创新的实证研究虽有一定数量,但存在着结论不一的情况,并且对于二者关系的机制研究更是少见。因而本文在已有研究的基础之上,选取融资约束、风险承担水平变量作为中介变量,并根据主效应以及机制研究提出相关假设并构建研究模型,通过对2008-2020年的A股上市公司数据进行实证分析,探究财务柔性能够在企业研发过程中产生何种影响以及通过何种路径产生作用。通过研究结果得出研发投入水平随着财务柔性正向变动,其中融资约束充当着中介变量,风险承担水平也在二者关系之间起部分中介作用;异质性分析发现,相较于国有企业,财务柔性的作用在非国有企业组更为明显;财务柔性不仅能对企业的研发投入产生影响,还能促进企业价值的提高;不仅如此,财务柔性具有持续性作用,能够对滞后两期的研发投入产生积极影响,且随着滞后期的增加作用逐渐减小。最后根据研究结果提出如下的对策建议:(1)重视财务柔性的作用,积极储备财务柔性;(2)改善资本结构,提升风险承担水平;(3)合理选择柔性政策,坚定发展意识。通过本文分析,一方面希望能够拓展财务柔性相关的理论研究,另一方面希望推动企业能够树立合理的储备意识,增强其对研发投入的影响,以实现企业长期稳定的发展。

关键词：财务柔性研发投入融资约束风险承担水平

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猪繁殖与呼吸综合征病毒截短GP5蛋白间接ELISA方法的建立

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畜牧与兽医 2014年第4期46卷 36-40页

作者：陈攀郑芳园李玉峰南京农业大学农业部细菌学重点开放实验室江苏南京210095

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染主要引起母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状,目前尚无有效的血清学检测方法评价猪群疫苗免疫或感染后抗体水平与免疫保护力之间的关系。为建立PRRSV GP5蛋白的ELISA方法,本研究选择GP5蛋白亲水区进行... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染主要引起母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状,目前尚无有效的血清学检测方法评价猪群疫苗免疫或感染后抗体水平与免疫保护力之间的关系。为建立PRRSV GP5蛋白的ELISA方法,本研究选择GP5蛋白亲水区进行原核表达,以表达的重组蛋白tGP5为包被抗原建立了检测针对GP5蛋白抗体的ELISA方法,优化后反应条件为:抗原包被浓度2μg/mL,37℃包被2 h,5%脱脂乳37℃封闭2 h,待检血清稀释度1∶100,37℃作用1 h,二抗1∶20 000稀释,37℃作用45 min,37℃显色3 min,抗体临界值OD450nm≥0.22判为阳性,OD450nm<0.183判为阴性,介于两者之间为可疑。特异性和重复性试验证明,与猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪口蹄疫病毒血清抗体无交叉反应,批内、批间重复性较好。

关键词： PRRSV 重组蛋白tGP5 原核表达间接ELISA

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猪流行性腹泻病毒M和S蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

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畜牧与兽医 2014年第5期46卷 35-40页

作者：郑芳园陈攀范宝超李玉峰南京农业大学农业部细菌学重点开放实验室江苏南京210095

采用PCR方法对猪流行性腹泻病毒(PEDV)M蛋白和S蛋白基因的亲水区进行扩增,扩增片段(命名为Ma和Sa)分别克隆至原核表达载体pET-32a(+)和pGEX-6p-1中,获得的重组质粒pET-32a-Ma和pGEX-6p-1-Sa转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达后进行SDS-P... 详细信息

采用PCR方法对猪流行性腹泻病毒(PEDV)M蛋白和S蛋白基因的亲水区进行扩增,扩增片段(命名为Ma和Sa)分别克隆至原核表达载体pET-32a(+)和pGEX-6p-1中,获得的重组质粒pET-32a-Ma和pGEX-6p-1-Sa转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE及Westernblot鉴定。表达产物经SDS-PAGE后切胶免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,间接ELISA方法检测小鼠免疫后血清效价,Westernblot和间接免疫荧光方法检测抗体的特异性。结果表明目标蛋白获得了正确表达,且制备的多克隆抗体具有较高的敏感性和特异性。PEDV Ma和Sa蛋白的表达及多克隆抗体的制备将为进一步构建PEDV的病毒样颗粒(VLP)抗原和建立血清学检测方法奠定基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒 M蛋白 S蛋白原核表达多克隆抗体

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财务柔性、融资约束与企业研发投入

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长春理工大学学报（社会科学版） 2022年第2期35卷 115-122页

作者：周密郑芳园湘潭大学商学院湖南湘潭411100

以我国2012—2019年A股上市公司为样本,检验财务柔性、融资约束与企业研发投入三者之间的关系。结果表明:企业保持一定的财务柔性能够提高企业研发投入水平;财务柔性对融资约束存在抑制作用,即企业储备财务柔性能够一定程度上改善企业... 详细信息

以我国2012—2019年A股上市公司为样本,检验财务柔性、融资约束与企业研发投入三者之间的关系。结果表明:企业保持一定的财务柔性能够提高企业研发投入水平;财务柔性对融资约束存在抑制作用,即企业储备财务柔性能够一定程度上改善企业的融资约束困境;财务柔性能够通过缓解企业的融资约束情况而促进研发投入水平的提高,融资约束发挥中介作用。进一步分样本研究表明,国有企业中财务柔性对企业研发投入作用并不显著,但非国有企业组中其作用依然显著;对于高新技术企业与非高新技术企业,财务柔性对企业研发投入的作用也存在差异。根据研究结论提出企业应当提高财务柔性储备意识,合理储备财务柔性以及拓宽财务柔性融资渠道的建议。

关键词：财务柔性融资约束企业研发投入

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不同术式宫颈癌患者手术前后抑郁、焦虑和生存质量比较

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中国公共卫生 2018年第3期34卷 445-447页

作者：刘运泳郑芳园王丹波中国医科大学肿瘤医院辽宁省肿瘤医院辽宁省肿瘤防治办公室辽宁沈阳110042

目的比较腹腔镜手术和开腹手术宫颈癌患者手术前后的抑郁、焦虑和生存质量,为有针对性地对宫颈癌患者进行心理干预提供参考依据。方法于2015年1月—2016年7月在中国医科大学附属肿瘤医院和附属盛京医院随机抽取49例行腹腔镜根治术(腹腔... 详细信息

目的比较腹腔镜手术和开腹手术宫颈癌患者手术前后的抑郁、焦虑和生存质量,为有针对性地对宫颈癌患者进行心理干预提供参考依据。方法于2015年1月—2016年7月在中国医科大学附属肿瘤医院和附属盛京医院随机抽取49例行腹腔镜根治术(腹腔镜组)和51例行开腹根治术(开腹组)的宫颈癌患者进行问卷调查。结果术前开腹组与腹腔镜组宫颈癌患者比较,2组患者抑郁、焦虑和生存质量得分差异均无统计学意义(均P>0.05);术后2个月和术后6个月开腹组与腹腔镜组宫颈癌患者比较,开腹组患者生存质量得分分别为(67.92±14.40)和(72.46±14.62)分,均低于腹腔镜组患者的(78.22±11.88)和(93.90±8.08)分(均P0.05)。结论腹腔镜组宫颈癌患者术后2个月和术后6个月生存质量高于开腹组患者,且腹腔镜组宫颈癌患者术后6个月抑郁和焦虑水平降低,生存质量提高。

关键词：宫颈癌腹腔镜根治术开腹根治术抑郁焦虑生存质量

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紧抓机遇聚焦主业服务自贸港建设 031

紧抓机遇聚焦主业服务自贸港建设

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中国交通报

作者：陈言锦郑芳园

2021年，是中国共产党成立一百周年，是“十四五”开局之年，也是全面建设社会主义现代化国家新征程开启之年。在历史坐标系中，这一年注定留下极其特殊而重要的印记。对于海南省交通投资控股有限公司（简称海南交控）来说，亦在砥砺奋... 详细信息

2021年，是中国共产党成立一百周年，是“十四五”开局之年，也是全面建设社会主义现代化国家新征程开启之年。在历史坐标系中，这一年注定留下极其特殊而重要的印记。对于海南省交通投资控股有限公司（简称海南交控）来说，亦在砥砺奋进中迎来成立10周年。海南交控成立于2

关键词：养护公司流动党员高速公路服务区产业基金智慧交通党史学习新能源汽车充电桩旅游公路党小组交通运输领域

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猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的原核表达和纯化

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畜牧与兽医 2014年第4期46卷 14-17页

作者：张亚宁赵红英陈攀郑芳园李玉峰南京农业大学动物医学院江苏南京210095 察布查尔县畜牧兽医站新疆察布查尔835300

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)是一种具有多种生物学活性的细胞因子。本试验根据GenBank发表的猪的GM-CSF基因序列设计特异性引物,对GM-CSF基因片段进行扩增,扩增后的PCR产物... 详细信息

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)是一种具有多种生物学活性的细胞因子。本试验根据GenBank发表的猪的GM-CSF基因序列设计特异性引物,对GM-CSF基因片段进行扩增,扩增后的PCR产物经酶切后克隆入pET-28a载体。重组质粒转化入大肠杆菌杆菌BL21中经IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果证明,重组蛋白获得了成功表达,并且主要以包涵体的形式存在。Western blot结果证明重组蛋白具有良好免疫反应性。以上结果为进一步应用重组GM-CSF作为血液干细胞动员剂提供了基础。

关键词：猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF) 重组蛋白原核表达

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间型假丝酵母菌株C410产生挥发性抗真菌物质的条件优化

间型假丝酵母菌株C410产生挥发性抗真菌物质的条件优化

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中国植物病理学会2011年学术年会

作者：郑芳园黄蓉张静杨龙姜道宏李国庆华中农业大学植物科技学院

＜正＞草莓采后极易腐烂,难以贮藏。灰霉菌属、根霉菌属、毛霉菌属等真菌侵染是造成腐烂的主要原因。近年来,利用微生物产生的挥发性物质防治草莓采后病害日益引起关注。间型假丝酵母菌（Candida intermedia）菌株C410是我们实验室筛选... 详细信息

＜正＞草莓采后极易腐烂,难以贮藏。灰霉菌属、根霉菌属、毛霉菌属等真菌侵染是造成腐烂的主要原因。近年来,利用微生物产生的挥发性物质防治草莓采后病害日益引起关注。间型假丝酵母菌（Candida intermedia）菌株C410是我们实验室筛选的一株生防菌。这种酵母菌能通过竞争机制和产生挥发性物质（volatile organic compounds,简称VOCs）,对灰葡萄孢（Botrytis cinerea）侵染草莓果实具有明显的防治效果。为了更

关键词：草莓果实真菌侵染假丝酵母菌挥发性物质病害防治

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