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调肝方药对高浓度皮质酮环境下海马神经细胞发生的调控作用及机理

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调肝方药对高浓度皮质酮环境下海马神经细胞发生的调控作用及机理

作者：冉川莲广州中医药大学

学位级别：硕士

研究目的中枢神经系统的大部分神经元处于未分化状态,受损后无法再生。近年来,研究者在胚胎神经组织和成年脑内均找到了这样一群特殊的神经细胞,它们不但保有自我更新能力,而且具备了多向分化潜能,因而被称为“干细胞”或“前体细胞”... 详细信息

研究目的中枢神经系统的大部分神经元处于未分化状态,受损后无法再生。近年来,研究者在胚胎神经组织和成年脑内均找到了这样一群特殊的神经细胞,它们不但保有自我更新能力,而且具备了多向分化潜能,因而被称为“干细胞”或“前体细胞”。脑内神经干细胞的发现彻底打破了中枢神经系统神经元缺乏再生能力的传统观点。海马可分为海马回和齿状回2个部分,与人类的神经系统结构可塑性、学习、记忆及情感等高级认知功能密切相关。成年哺乳动物海马齿状回终生保持了生成新神经元的能力,即神经发生。海马齿状回的颗粒下层产生新生神经元的前体细胞,迁移到颗粒细胞层,分化为颗粒细胞,产生树突、轴突,形成突触联系,整合到海马功能的神经环路中。虽然这些颗粒细胞的具体功能不清楚,但比成熟的神经细胞更具可塑性。大量研究表明,应激可以影响海马神经发生,导致齿状回颗粒细胞再生减少和萎缩,LTP抑制。海马神经发生障碍,已成为抑郁症发病的重要原因,而抗抑郁药物很可能是通过调节神经发生来产生和维持疗效的。我们以往的研究主要着重于调肝方药调节应激所致的HPA轴功能改变和中枢单胺类神经递质紊乱,抑制应激所致海马神经元的调亡的作用及机理研究等方面,还未涉及到海马神经发生方面。本研究旨在通过离体实验,在体外培养海马神经前体细胞,并在体外模拟应激时内源性糖皮质激素增高的状态,用调肝方药逍遥散(XYS)和加味四逆散(JWSNS)含药血清作用于细胞模型,观察调肝方药对慢性心理应激海马神经前体细胞增殖与凋亡之间失衡的调控作用及作用途径,进一步从海马神经发生的角度阐述调肝方药抗慢性心理应激性海马损伤的细胞和分子药理学靶向作用及其机理,从而为今后运用中医药防治应激所致的神经精神疾患以及研制开发抗应激性损伤的中药新药提供科学的依据。研究方法运用细胞培养技术在体外无血清培养大鼠海马前体细胞,运用中药血清药理学方法,探讨调肝方药对海马神经发生的调控作用及机理。1.取胚胎大鼠海马组织,采用体外无血法培养方法培养海马神经前体细胞。***方法检测高浓度皮质酮环境下,不同浓度XYS、JWSNS含药血清对海马神经前体细胞增殖能力的影响。3.免疫荧光细胞化学技术观察高浓度皮质酮环境下,XYS、JWSNS含药血清对海马神经前体细胞增殖、凋亡及分化的影响。4.蛋白免疫印迹方法检测高浓度皮质酮环境下,XYS、JWSNS含药血清对BDNF、CREB蛋白表达的影响。5.实时荧光定量PCR法检测高浓度皮质酮环境下,XYS、JWSNS含药血清对BDNFmRNA、NMDAR-1mRNA表达的影响。研究结果1.分离培养的海马神经前体细胞,在干细胞生长培养基中经5—7天形成大量悬浮生长的神经球;消化传代后经6—8天可行成新一代神经球;在分化培养基中可分化形成成熟的神经元和胶质细胞。免疫细胞化学方法证实,培养细胞可表达神经前体细胞特异性巢蛋白,可以摄入胸腺嘧啶核苷类似物——BrdU,说明培养细胞是正在分裂的原始神经细胞;免疫荧光双标证明培养细胞能够分化为成熟神经元和胶质细胞,具有多向分化潜能。***结果显示:30μmol/L CORT对海马神经前体细胞增殖率影响不明显(P＞0.05);60μmol/L,120μmol/L CORT能显著降低海马神经前体细胞增殖率(P＜0.05或P＜0.01)。5%和10%XYS含药血清、10%JWSNS含药血清能促进海马神经前体细胞增殖(P＜0.01或P＜0.001)。除1201μmol/L CORT+5%空白血清组外,其余各组都与CORT组有显著差异(P＜0.01或P＜0.001),说明调肝方药含药血清能明显提高神经前体细胞的增殖能力,而且血清浓度越高神经前体细胞的增殖能力越高。与空白血清组比较,10%的含药血清能显著提高体外培养的海马神经前体细胞的增殖能力,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.001)。3.免疫荧光细胞化学结果显示:高浓度皮质酮能明显抑制海马神经前体细胞的增殖(P＜0.01),并增加其凋亡(P＜0.001):XYS、JWSNS含药血清能够促进海马神经前体细胞向神经元方向分化,并降低分化形成的神经细胞的凋亡率。4.蛋白免疫印迹方法结果显示:高浓度皮质酮降低了pro-BDNF和BDNF蛋白的表达,但与正常对照组比较BDNF只表现出降低的趋势,差异无统计学意义;XYS含药血清能显著提高pro-BDNF和BDNF蛋白的表达(P＜0.05或P＜0.01):JWSNS含药血清也能提高pro-BDNF和BDNF蛋白的表达,但与空白血清组相比差异无统计学意义;对于CREB蛋白表达各组无显著差异。5.实时荧光定量PCR法结果显示:高浓度皮质酮降低了BDNFmRNA和N

关键词：逍遥散加味四逆散皮质酮海马神经发生细胞凋亡脑源性神经营养因子(BDNF) CAMP/Ca2+-反应元件结合蛋白(CREB) N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA) 应激

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基于多尺度深度网络的自动睡眠分期

中国生物医学工程学报 2021年第2期40卷 170-176页

作者：柏浩冉张伟陆冠泽同济大学电子与信息工程学院控制科学与工程系上海201804

传统睡眠质量评估与诊断高度依赖医生的经验以及对长时间睡眠监测数据的分析统计,耗时耗力,且传统机器学习技术所实现的自动睡眠分期依赖人工构造的特征,在发掘深层次分期特征上效果有限,对部分分期的辨识效果欠佳。提出一种基于多尺度... 详细信息

传统睡眠质量评估与诊断高度依赖医生的经验以及对长时间睡眠监测数据的分析统计,耗时耗力,且传统机器学习技术所实现的自动睡眠分期依赖人工构造的特征,在发掘深层次分期特征上效果有限,对部分分期的辨识效果欠佳。提出一种基于多尺度深度网络(MSDNet)的自动睡眠分期算法,能够自动分析提取睡眠信号特征,并基于不同睡眠阶段的分期难度进行相应的多尺度分析与判别。该算法可提前输出特征简单明确的W、N2、N3、REM等阶段的分类结果,然后让特征相对不够清晰的过渡阶段N1进入更深尺度的网络,利用更精细的特征数据以及更深的网络进行判别,能提高整体分类效率以及N1阶段的分类精度。在Sleep-EDFx数据集中,提取197组样本数据用于训练和测试,并在仅采用单通道EEG脑电信号的前提下,平均分类精度达到0.83,Kappa值为0.749,N1阶段的F1-score达到0.51,较传统机器学习算法以及多种深度网络,提高了整体分类精度,特别是N1阶段精度,且计算量没有显著增加,适于自动化实时分析。

关键词：自动睡眠分期多尺度分析机器学习深度学习多尺度深度网络(MSDNet)

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“人工天河”谁人开：红旗渠建设者

LGR5、β-catenin和E-cadherin在胃癌组织中的表达及与临床病理特征的关系

2021年

作者：倪晓冉少丹绘

巍巍太行，一条闪亮的玉带环绕其间。群山之中，它时隐时现，时而穿过幽深的隧洞，时而环抱险峻的山崖。所到之处，鸟儿嬉戏，草木葱郁，一路欢歌不断。它就是由林县三十万群众开凿的“人工天河”-红旗渠。以前的林县，石厚土薄，水源... 详细信息

巍巍太行，一条闪亮的玉带环绕其间。群山之中，它时隐时现，时而穿过幽深的隧洞，时而环抱险峻的山崖。所到之处，鸟儿嬉戏，草木葱郁，一路欢歌不断。它就是由林县三十万群众开凿的“人工天河”-红旗渠。以前的林县，石厚土薄，水源稀缺，地表多是岩石，还有很多小孔，水流过地面会像经过筛子一样，很快漏光。直到六十年前，人们决心战胜旱魔。林县人民在县委领导下，怀揣干粮，把铺盖卷往肩上一扛，踏上了漫漫修渠路。经过十年苦战，他们开凿太行山，引漳河水入境，修建了“人工天河”-红旗渠，彻底告别了“水缺贵如油”的历史，创造了人间奇迹。这条人工天河，承载着“红旗渠精神”，一路奔涌、流淌，鼓励着这里的一代又一代人，打造出经济强盛、风景如画的新太行。

关键词：政治、法律工人、农民、青年、妇女运动与组织青年、学生运动与组织

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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LGR5、β-catenin和E-cadherin在胃癌组织中的表达及与临床病理特...

作者：修一冉内蒙古医科大学

学位级别：硕士

目的检测LGR5、β-catenin和E-cadherin在胃癌组织和癌旁正常黏膜组织中的表达情况,分析三者与临床病理因素的关系及三者表达的相关性,从而期待能为胃癌的诊断、治疗及预后提供依据。方法规范化收集2013年1月至2018年1月经内蒙古医科大... 详细信息

目的检测LGR5、β-catenin和E-cadherin在胃癌组织和癌旁正常黏膜组织中的表达情况,分析三者与临床病理因素的关系及三者表达的相关性,从而期待能为胃癌的诊断、治疗及预后提供依据。方法规范化收集2013年1月至2018年1月经内蒙古医科大学附属医院病理科确诊的胃癌病人139例及距癌组织2cm远的正常胃黏膜组织139例纳入本实验。所有胃癌病例经病理证实均为原发性胃癌,所选患者术前均无辅助放疗、化疗及内分泌治疗史,制成病理石蜡切片。运用免疫组织化学方法检测胃癌组织及癌旁正常黏膜组织中LGR5、β-catenin和E-cadherin的表达,分析三者的表达与胃癌的临床病理特征之间的关系及三者之间是否存在相关性。采用SPSS13.0对数据进行统计分析。结果***5蛋白的阳性表达率,胃癌组织(61.87%)明显高于癌旁正常黏膜组织(28.06%)(P0.05)。3.β-catenin蛋白的阳性表达率与胃癌分化程度、浸润深度、是否存在淋巴结转移以及TNM分期相关。β-catenin蛋白的阳性表达率,高中分化组(73.97%)明显高于低分化组(27.27%)(P0.05)。4.E-cadherin蛋白的阳性表达率与胃癌分化程度、浸润深度、是否有远处转移以及TNM分期相关。E-cadherin蛋白的阳性表达率,高中分化组(79.45%)明显高于低分化组(25.76%)(P0.05)。5.139例胃癌组织中,有26例LGR5蛋白和β-catenin蛋白同时阳性表达,有7例同时阴性表达,Spearman等级相关分析结果显示LGR5蛋白与β-catenin蛋白的阳性表达呈负相关(r=-0.550,P<0.05)。139例胃癌组织中,有39例LGR5蛋白和E-cadherin蛋白同时阳性表达,有17例同时阴性表达,Spearman等级相关分析结果显示LGR5蛋白和E-cadherin蛋白的阳性表达呈负相关(r=-0.220,P<0.05)。139例胃癌组织中,有52例E-cadherin蛋白和β-catenin蛋白同时阳性表达,有44例同时阴性表达,Spearman等级相关分析结果显示E-cadherin蛋白与β-catenin蛋白的阳性表达呈正相关(r=0.380,P<0.05)。结论***5蛋白在胃癌组织中高表达,而在癌旁正常黏膜组织中低表达,提示LGR5蛋白可能为胃癌干细胞标志物,它可能能作为检测早期胃癌的一个有用的生物学标志物。2.β-catenin蛋白和E-cadherin蛋白在癌旁正常黏膜组织中高表达,而在胃癌组织中低表达,提示β-catenin蛋白和E-cadherin蛋白表达下降可能参与了胃癌发生发展过程。***5蛋白的表达与胃癌分化程度、是否存在淋巴结转移以及TNM分期相关,提示LGR5蛋白在胃癌的发展过程中可能起重要作用。4.β-ca

关键词：胃癌 LGR5 β-catenin E-cadherin 免疫组化

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代建制在鄂尔多斯市房地产项目中的应用研究

代建制在鄂尔多斯市房地产项目中的应用研究

作者：宝赫冉天津工业大学

学位级别：硕士

代建制在我国虽然是一种新生事物,但在国外,项目代建制的运用己十分普遍,委托专业性公司对项目的组织及实施进行运作已是一种通行的做法。它们大多是以项目管理制的形式存在,并随着经济的发展、技术的进步、对项目运作规律认识的深化,... 详细信息

代建制在我国虽然是一种新生事物,但在国外,项目代建制的运用己十分普遍,委托专业性公司对项目的组织及实施进行运作已是一种通行的做法。它们大多是以项目管理制的形式存在,并随着经济的发展、技术的进步、对项目运作规律认识的深化,逐渐改进完善。因此,本文针对项目代建制问题在房地产行业的应用实践展开了分析探讨,论述中,文章本着提出问题、分析问题和解决问题的思路,综合运用了文献分析、对比分析和案例分析等研究方法,围绕鄂尔多斯市房产项目代建制的发展情况进行了系统分析,最后文章根据研究结论提出了相关举措和建议,对推动我国房地产项目代建制发展具有一定参考和借鉴意义。通过本文研究发现,项目代建制能够有效提升房地产项目的工程质量,同时也为政府节约成本,对优化资源配置具有重要的意义。因此,通过本文论述,房地产项目代建制为鄂尔多斯市房地产项目开发及其工程管理的规范起到很好的作用,尤其是在项目流程的规范上,能够严格规范设计的方案、健全项目的招投标机制以及发挥政府对项目监管的职能作用等。总之,本文的研究目的主要是在相关房地产管理模式发展轨迹的回顾基础上,通过对我国房地产项目代建制模式下风险管理现状以及在实际项目实施过程中遇到的风险问题展开分析,文章通过结合典型的代建制项目案例为决策者提出了相应的风险因素识别及应对措施,为鄂尔多斯市房地产项目实施代建制模式提供了参考和借鉴,从而为推动房地产投资建设质量和品质提升起到了良好作用,同时也为代建制模式从理论指导到实践应用提供重要的理论指导价值。

关键词：代建制房地产项目鄂尔多斯市工程

多模态翻译视角下《这里是中国2》（节选）英译研究

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多模态翻译视角下《这里是中国2》（节选）英译研究

作者：孙晓冉济南大学

学位级别：硕士

信息时代,人们认识世界的方式逐渐多样化,由于一些跨语言跨文化障碍的存在,汉语文本的翻译传播以及中国对外形象的建构不尽如人意。科普文本具有科学性、文学性和通俗性等特点,其题材涉及广泛,为读者提供了丰富的、科学的与客观的信息... 详细信息

信息时代,人们认识世界的方式逐渐多样化,由于一些跨语言跨文化障碍的存在,汉语文本的翻译传播以及中国对外形象的建构不尽如人意。科普文本具有科学性、文学性和通俗性等特点,其题材涉及广泛,为读者提供了丰富的、科学的与客观的信息。不少中国科普书籍结合了文字与图像两种模态,以更加形象直观、通俗易懂的方式向读者展示了中华民族的伟大复兴之路。多模态要素如何影响翻译的过程,科普文本的翻译如何实现等效,这些都值得深入思考。《这里是中国2》是多方联合出品的中国地理科普读物,该书以时间为尺度让读者读懂中国地理。本文选取了该书的道路建设部分为研究案例,首先借助文献综述和简单的定量分析法构建理论框架,然后利用多模态话语分析的方式从文化、语境、内容和表达的角度分析源文本,并探讨翻译中所遇到的问题;经过一系列分析后,本文从词汇、句法、篇章三个层面总结出该类文本翻译转化与传播的最佳策略。信息传播媒介的发展使得多模态意义传达逐渐成为信息传播的主要方式,多模态翻译也正成为翻译领域的热门话题。而中国在多模态翻译方面的研究还要抢抓机遇,乘势而上。本文借助多模态手段对科普文本的翻译进行分析、研究,尝试拓宽多模态翻译研究的深度与广度,以期为中国科普作品的英译提供新的思路。

关键词：多模态《这里是中国2》科普文本翻译策略

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等离子喷涂工艺能耗建模研究

等离子喷涂工艺能耗建模研究

作者：冉学举山东大学

学位级别：硕士

等离子喷涂技术通过高价值零部件的表面修复,延长零部件的使用寿命,完成再制造零部件的市场流通。然而等离子喷涂工艺在使用过程中呈现出能量消耗大,能量利用率低的缺点。在设备、原材料与技术受到制约发展的时候,如何从工艺层面开展等... 详细信息

等离子喷涂技术通过高价值零部件的表面修复,延长零部件的使用寿命,完成再制造零部件的市场流通。然而等离子喷涂工艺在使用过程中呈现出能量消耗大,能量利用率低的缺点。在设备、原材料与技术受到制约发展的时候,如何从工艺层面开展等离子喷涂工艺能耗研究,有利于进一步研究工艺过程中的能量消耗及性能变化,因此实现工艺能耗模型构建对于提高能源利用率、实现可持续发展具有举足轻重的意义。基于此,本文针对等离子喷涂系统建立能耗模型并进行研究与分析,所取得的研究成果及创新点如下:（1）针对等离子喷涂工艺,基于UPLCI理论与分析方法建立了工艺能耗模型,量化表征工艺参数与相关设备对工艺能耗之间的关系与特征,验证试验表明能耗模型的预测误差控制在5%以内。研究了等离子喷涂的各种功率特征与变化趋势,正交试验结果表明影响能耗的工艺参数顺序为:功率＞道距＞喷枪移速,其中功率对于工艺能耗的影响最大。工艺参数对涂层硬度与孔隙率的影响顺序为:功率＞送粉量＞喷枪移速＞道距,其中功率与送粉速率是主要的影响因素。研究能耗与涂层性能关系发现,在相同的工艺能耗下会有不同的涂层性能表征,这是由于参数的不同组合下呈现出相同的能量消耗,不同的涂层性能所导致的结果。（2）完善基于β分布的单道涂层厚度分布函数,通过分析工艺参数对厚度参量的影响,建立了高度、功率以及主气流量与喷幅的关系,建立了厚度、喷枪移速、道距、送粉速率、功率以及主气流量与厚度参量的关系,利用理论推导与实验拟合的方式,完善了单道涂层厚度模型,研究了道距对于多道涂层叠加对于涂层厚度的影响,最终建立了面向等离子喷涂工艺的涂层厚度模型,模型误差控制在15%以内。（3）基于工艺能耗与涂层厚度模型,确定等离子喷涂工艺的能效数学模型,研究了参数对于能效的影响顺序为:功率＞喷枪移速＞道距＞主气流量＞送粉速率。分析了能效与涂层性能之间的影响关系,发现能效与硬度呈现波动式下降,与孔隙率呈现波动式增大,其中能效的变化与涂层厚度有紧密关系。利用TOPSIS多目标决策方法,以能效、厚度、硬度以及孔隙率为多目标进行优化求解,并用AHP方法对权重进行一致性检验,最终得到第20组实验方案的最优结果,主气流量3400L/h,喷枪移速150mm/s,功率35kW,道距3mm,送粉速率2.4r/min。

关键词：能耗等离子喷涂厚度模型能效多目标决策

沱牌舍得集团混合所有制改革中的政府职能研究

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沱牌舍得集团混合所有制改革中的政府职能研究

作者：冉雅露西南政法大学

学位级别：硕士

我国公有制为主体,多种所有制经济共同发展的基本经济制度建立以来,国有企业一直是经济建设和社会发展的主力军。随着市场经济发展不断深入,国有企业在不断发展壮大过程中出现机制僵化、创新不足、竞争力弱化、成本逐年增加、亏损不断... 详细信息

我国公有制为主体,多种所有制经济共同发展的基本经济制度建立以来,国有企业一直是经济建设和社会发展的主力军。随着市场经济发展不断深入,国有企业在不断发展壮大过程中出现机制僵化、创新不足、竞争力弱化、成本逐年增加、亏损不断扩大等问题,由于市场竞争不断加剧,经济环境日趋复杂,新一轮国企改革迫在眉睫,要求更高。国有企业由于自身的特殊属性导致其不能像其他参与市场经济的主体一样自由地由市场进行自发调控,地方政府作为地方性国企改革的主导力量,在新一轮国有企业改革中,要在遵循市场客观规律的前提下,充分发挥区域性政策制定、地方市场秩序维护、地方经济调控、企业监督管控、补偿服务等职能,制定有针对性的改革措施,结合地方实际情况、企业特色、市场发展前景、区域发展规划等客观因素制定行之有效的改革方案,促使地方国有企业改革取得成效。射洪县沱牌舍得集团作为西部地区众多县属国有企业之一,也面临着生产效益逐年下滑,成本逐年增加,企业负债逐年增加等困境,当地政府从2003年开始探索对该企业进行改制,历经多轮调研讨论洽谈,政府与天洋集团于2016年中旬达成股权转让协议,完成改制第一阶段。目前改制第一阶段完成两年多,企业活力不断回升,效益不断回升,改制成果逐步凸显。本文通过分析各阶段国企改革背景,结合国内外国有企业混改典型案例,对政府与市场关系、政府职能、国有企业混改及政府职能在国企混改中应当如何发挥进行探讨和总结,结合射洪县沱牌舍得集团混改的典型案例,对射洪县沱牌舍得集团混改原因、风险、措施、成效等方面进行研究,文末提出政府要通过发挥政策规划、监督管控、引导管理等职能推动沱牌舍得企业混改进一步深化完善,更好推动区域性国企混改取得成功。

关键词：国有企业混合所有制改革政府职能

具有抑制HepG2细胞增殖活性的紫茎泽兰内生真菌的筛选及发酵条件优化

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具有抑制HepG2细胞增殖活性的紫茎泽兰内生真菌的筛选及发酵条件...

作者：冉怡楠四川农业大学

学位级别：硕士

紫茎泽兰作为入侵植物对当地的生态环境、人畜健康等都带来了一定的威胁,为了对其进行防治和开发,其生物价值的研究成了关注的焦点,这些年陆续报道了泽兰属植物的抗癌活性、抑菌活性、杀螨活性和对昆虫的毒杀及拒食活性。植物内生菌因... 详细信息

紫茎泽兰作为入侵植物对当地的生态环境、人畜健康等都带来了一定的威胁,为了对其进行防治和开发,其生物价值的研究成了关注的焦点,这些年陆续报道了泽兰属植物的抗癌活性、抑菌活性、杀螨活性和对昆虫的毒杀及拒食活性。植物内生菌因为其生存环境的特殊性,其代谢产物的独特与多样性值得进一步探索,近几年来,越来越多的研究重点开始侧重于各种药用植物的内生菌,试图从其代谢产物里发现跟宿主药用植物高度类似的或具有独特价值的活性产物。因此,本研究以紫茎泽兰内生真菌为研究对象,筛选出具有抑制HepG2肝癌细胞增殖活性的菌株,再对该菌株进行鉴定和生长发酵条件优化,从而为紫茎泽兰内生真菌资源的开发提供一定的理论基础。方法:通过PDA培养基活化及多代纯化培养得到来自于紫茎泽兰各部位的内生真菌,将菌落形态相同的真菌作为一类或一株菌,用PDB培养基对各类真菌进行摇瓶培养,利用提取得到的各组内生真菌发酵液对HepG2细胞进行处理,采取CCK-8法初步筛选出抑制HepG2细胞增殖效果最好的菌株。再对这株活性菌株进行传统形态学和DNA分子生物学鉴定,明确该菌株的来源。在保证其他条件一致的情况下,控制不同生长、发酵条件作为单一变量进行多个试验分组,再通过测定与比较分析各试验分组的发酵液IC值,得到活性菌株的最佳生长发酵条件。最后通过观察活性菌株发酵液对HepG2细胞的形态、凋亡坏死、细胞周期的影响,进一步探究该活性菌株的抗肿瘤机制。结果:1.根据菌落形态对88株紫茎泽兰内生真菌进行初步分类,最终可分为10组真菌,每组选取一株菌进行发酵培养后利用CCK-8法筛选出了抑制HepG2细胞增殖效果最好的菌株,将该菌株命名为F-96,其来源于紫茎泽兰的花部,通过形态学和分子生物学方法对F-96菌株进行鉴定,结果表明F-96为曲霉菌属内生真菌,最终定名为Aspergillus sp.F-96。2.F-96菌株生长优化结果显示,当培养基为PDA,p H为9.0,培养箱温度为30℃时,活性菌株F-96菌落生长速度最快。发酵优化结果显示,F-96菌株最佳发酵条件为:培养基为马丁氏液体培养基,培养温度30℃,培养基p H 8.0,摇瓶转速200 r/min,摇瓶装液量200 m L,发酵时间11d。将生长发酵条件优化前后的IC值进行对比,显示F-96菌株发酵液对HepG2细胞的IC值由优化前的62.70μL/m L降低为21.77μL/m L。3.经过F-96菌株发酵液处理后,HepG2细胞体积明显变小,胞质消失,胞膜损伤,核质固缩染色变深;相较于阴性对照组HepG2细胞的总凋亡率(0.65±0.12%)与坏死率(3.52±1.67%),低中高(5、15、50μL)浓度发酵液处理组的凋亡率分别为0.93±0.41%、2.88±0.08%、7.78±1.70%。坏死率分别为5.32±2.15%、16.02±3.02%、58.55±1.43%,结果证明F-96菌株能够显著促进HepG2细胞凋亡与坏死;F-96菌株还能将HepG2细胞周期阻滞在G2/M期,造成细胞DNA损伤,因此全面抑制HepG2细胞的分裂增殖。F-96菌株发酵液对HepG2细胞的作用效果与发酵液的浓度成正相关。结论:本试验从紫茎泽兰各个部位共分离得到10株不同的内生真菌,其中分离自紫茎泽兰花部的F-96菌株来源于曲霉属,对HepG2细胞的抑制活性最佳,该菌株发酵液能够促进HepG2细胞凋亡与坏死、周期阻滞,抑制HepG2细胞分裂增殖。说明F-96内生真菌具有开发提取出抗肝癌药物的潜能。

关键词：紫茎泽兰内生真菌 HepG2 Aspergillus sp.F-96 凋亡坏死细胞周期