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免疫相关基因CEBPB在肾透明细胞癌中的表达及其临床价值

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中华泌尿外科杂志 2021年第11期42卷 849-855页

作者：吕磊郑福鑫向威冯燕章传华武汉市第一医院泌尿外科 430022 武汉市第一医院病理科 430022

目的探讨CCAAT增强子结合蛋白(CEBPB)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达情况及其与ccRCC临床特征的关系,并检测CEBPB基因对ccRCC细胞增殖和侵袭活性的影响。方法本研究于2020年3—12月完成。从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载537例ccRCC... 详细信息

目的探讨CCAAT增强子结合蛋白(CEBPB)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达情况及其与ccRCC临床特征的关系,并检测CEBPB基因对ccRCC细胞增殖和侵袭活性的影响。方法本研究于2020年3—12月完成。从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载537例ccRCC患者的转录组数据和临床数据。男346例,女191例;≤60岁266例,>60岁271例;G_(1-2)级244例,G_(3-4)级285例,未确定分级8例;T_(1-2)期344例,T_(3-4)期193例;N0期240例,N1期17例,无法评估淋巴结转移情况280例;M0期426例,M1期79例,无法评估远处转移情况32例;生存367例,死亡170例。分析CEBPB mRNA在ccRCC组织中的表达及其与临床特征的相关性;单因素和多因素Cox回归分析CEBPB表达水平对ccRCC患者生存预后的影响;肿瘤免疫浸润评分(TIMER)数据库分析CEBPB表达与免疫细胞浸润的相关性。采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测CEBPB mRNA和蛋白在人肾小管上皮细胞株HK2和ccRCC细胞株(Caki-1、ACHN、786O、769P和A498)中的表达;利用脂质体转染ACHN细胞和786O细胞,实验分为对照组、阴性对照siRNA(NC siRNA)组和CEBPB siRNA组。转染后48 h,分别通过MTT实验和侵袭实验检测各组ACHN细胞和786O细胞的增殖和侵袭活性。结果TCGA数据库资料分析结果显示,与正常肾脏组织比较,ccRCC组织中的CEBPB mRNA表达水平上调2.55倍(P<0.05)。CEBPB表达水平与ccRCC患者年龄、肿瘤分级、肿瘤分期、淋巴结转移及远处转移呈正相关(P<0.05),且肿瘤分级(HR=1.703,P=0.040)、肿瘤分期(HR=1.773,P=0.026)、远处转移(HR=3.080,P<0.001)和CEBPB高表达(HR=1.874,P=0.003)是影响ccRCC患者预后的独立危险因素。TIMER数据库分析结果表明,CEBPB表达水平与B细胞(Rho=0.168)、M2型巨噬细胞(Rho=0.373)、调节性T细胞(Rho=0.348)、中性粒细胞(Rho=0.194)和自然杀伤T细胞(Rho=0.421)的浸润程度呈正相关。Caki-1、ACHN、786O、769P、A498细胞中CEBPB mRNA表达水平分别是HK2细胞中的(9.43±1.25)、(5.44±0.82)、(4.50±0.52)、(4.88±0.73)、(7.50±1.04)倍,CEBPB蛋白表达水平分别是HK2细胞中的(6.22±0.45)、(5.84±0.85)、(6.51±0.55)、(6.23±0.62)、(3.84±0.45)倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。MTT实验结果显示,NC siRNA组中ACHN细胞在培养24、48、72、96 h后细胞增殖率分别为(98.4±1.7)%、(97.8±2.1)%、(101.3±1.2)%、(97.5±2.0)%,786O细胞增殖率分别为(99.0±1.4)%、(98.5±1.5)%、(97.6±1.7)%、(99.1±1.3)%;CEBPB siRNA组中,ACHN细胞在培养24、48、72、96 h后细胞增殖率分别为(68.8±5.8)%、(57.9±6.1)%、(50.9±4.6)%、(43.2±5.0)%,786O细胞增殖率分别为(79.5±6.2)%、(70.8±5.1)%、(66.8±4.9)%、(60.5±5.3)%。与NC siRNA组比较,CEBPB siRNA组ACHN、786O细胞的增殖活性明显受到抑制(P<0.05)。细胞侵袭实验结果显示,NC siRNA组ACHN、786O细胞的侵袭活性分别为对照组的(95.0±5.2)%、(97.3±4.4)%,CEBPB siRNA组ACHN、786O细胞的侵袭活性分别为对照组的(35.2±5.4)%、(26.7±3.3)%。与NC siRNA组比较,CEBPB siRNA组ACHN、786O细胞的侵袭活性明显受到抑制(P<0.05)。结论CEBPB在ccRCC中高表达,且CEBPB表达水平与ccRCC患者生存预后及免疫浸润密切相关,沉默CEBPB表达显著抑制ccRCC细胞的增殖和侵袭。

关键词：癌,肾细胞透明细胞 CCAAT增强子结合蛋白免疫细胞浸润预后

多功能蛋白聚糖基因对膀胱尿路上皮癌免疫浸润及预后的影响

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解放军医学杂志 2023年第8期48卷 921-928页

作者：吕磊郑福鑫周高峰吴维武汉市第一医院泌尿外科湖北武汉430022

目的探讨多功能蛋白聚糖(VCAN)基因对膀胱尿路上皮癌(BUC)免疫细胞浸润及预后的影响。方法从TCGA数据库下载BUC的高通量测序数据及临床数据,运用R语言Limma包分析VCAN表达水平与BUC患者临床特征的相关性;采用单因素和多因素Cox回归分析V... 详细信息

目的探讨多功能蛋白聚糖(VCAN)基因对膀胱尿路上皮癌(BUC)免疫细胞浸润及预后的影响。方法从TCGA数据库下载BUC的高通量测序数据及临床数据,运用R语言Limma包分析VCAN表达水平与BUC患者临床特征的相关性;采用单因素和多因素Cox回归分析VCAN表达情况及患者临床特征(包括性别、年龄、肿瘤分级、肿瘤分期、淋巴转移和远处转移等)对预后的影响;基于肿瘤免疫浸润评分(TIMER)数据库分析VCAN表达水平与免疫细胞浸润的相关性。取T24细胞,设置对照组(未转染任何siRNA)、NC siRNA组(转染阴性对照siRNA)与VCAN siRNA组(转染VCAN siRNA),采用MTT法、细胞侵袭实验和流式细胞术分别检测各组细胞的增殖、侵袭能力和细胞周期比例,Western blotting检测Cyclin E、Cyclin D1、E-cadherin和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平。结果与正常膀胱组织比较,BUC组织中VCAN mRNA表达水平明显上调,且与肿瘤分级、肿瘤分期及远处转移呈正相关(P<0.01);VCAN高表达是BUC患者预后不良的独立危险因素(P<0.05);TIMER数据库分析结果显示,BUC中VCAN表达水平与巨噬细胞及调节性T细胞的浸润程度呈明显正相关(P<0.001)。与对照组比较,VCAN siRNA组T24细胞的增殖和侵袭能力明显下降,G_(0)/G_(1)期细胞比例明显增高(P<0.05),Cyclin E、Cyclin D1和MMP-9蛋白表达水平明显下调,E-cadherin蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。结论VCAN在BUC中呈高表达,且与BUC的免疫浸润及预后相关。沉默VCAN可明显抑制T24细胞的增殖及侵袭,其机制可能与调控Cyclin E、Cyclin D1、E-cadherin及MMP-9蛋白的表达有关。

关键词：膀胱尿路上皮癌多功能蛋白聚糖免疫浸润预后

SLC9A3-AS1调控miR-148a-3p/ROCK1信号轴影响肾癌细胞生物学功能

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华中科技大学学报（医学版） 2024年第2期53卷 161-167页

作者：向威吕磊郑福鑫章传华袁敬东武汉市第一医院泌尿外科武汉430022

目的检测lncRNA SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)组织与肾癌细胞中的表达水平,探讨其促进肾癌细胞恶性生物学行为的机制。方法应用GEPIA2在线软件(http://***/)分析TCGA数据库中SLC9A3-AS1在ccRCC组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SLC9A3-AS1在不同肾癌细胞系、24例ccRCC组织与癌旁正常肾脏组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和Transwell小室迁移实验检测敲低SLC9A3-AS1表达对肾癌细胞增殖与迁移的影响;应用蛋白质免疫印迹法检测增殖与迁移相关信号通路蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证SLC9A3-AS1与miR-148a-3p/ROCK1轴的靶向调控关系。结果GEPIA2软件分析结果显示,相较正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌组织中表达显著上调(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,相较癌旁正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在24例ccRCC组织中表达显著上调(P<0.01);相较永生化肾小管上皮细胞,SLC9A3-AS1在4种肾癌细胞系中表达均显著上调,以786-O细胞最为显著(P<0.01)。干扰SLC9A3-AS1表达,可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力,上调E-cadherin的蛋白表达水平,而下调N-cadherin、MMP2的蛋白表达水平(均P<0.05);过表达miR-148a-3p可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因检测结果表明,SLC9A3-AS1可特异性结合miR-148a-3p,后者进一步靶向结合ROCK1 mRNA的3′UTR区域;过表达miR-148a-3p可明显下调ROCK1 mRNA的表达水平,敲低miR-148a-3p表达则产生相反的效应;敲低SLC9A3-AS1表达可显著下调786-O细胞中ROCK1 mRNA与蛋白的表达水平(P<0.01);下调miR-148a-3p表达可部分逆转SLC9A3-AS1沉默对786-O细胞增殖与迁移的抑制作用(P<0.05)。结论SLC9A3-AS1在ccRCC中通过调控miR-148a-3p/ROCK1轴发挥促癌作用,有望成为ccRCC的一个新的分子标志物。

关键词：肾透明细胞癌 SLC9A3-AS1 miR-148a-3p ROCK1

免疫相关基因HCST对肾透明细胞癌预后的影响及其机制

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现代肿瘤医学 2023年第6期31卷 997-1001页

作者：吕磊郑福鑫吴维周高峰武汉市第一医院泌尿外科湖北武汉430022

目的:分析造血细胞信号转导因子(hematopoietic cell signal transducer, HCST)在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma, ccRCC)中的表达及与ccRCC预后、免疫浸润的关系,探讨HCST对ccRCC细胞生长侵袭的影响及其作用机制。方法... 详细信息

目的:分析造血细胞信号转导因子(hematopoietic cell signal transducer, HCST)在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma, ccRCC)中的表达及与ccRCC预后、免疫浸润的关系,探讨HCST对ccRCC细胞生长侵袭的影响及其作用机制。方法:利用TCGA数据库分析HCST基因在ccRCC组织中的表达水平。Cox比例风险模型分析HCST表达水平及临床特征与ccRCC患者预后的关系。肿瘤免疫评分数据库(tumor immune estimation resource, TIMER)分析ccRCC组织中HCST表达水平与免疫细胞浸润程度的相关性。体外培养ACHN细胞,分为对照组、siRNA阴性对照组和HCST siRNA组。MTT法、流式细胞实验和Transwell实验分别检测各组ACHN细胞增殖、凋亡和侵袭活性。蛋白质印迹法检测caspase-3、Bax、Bcl-2、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达。结果:与正常肾脏组织比较,HCST mRNA在ccRCC组织中的表达显著上调,且与肿瘤的分期、淋巴转移及远处转移正相关(P<0.01)。HCST高表达、肿瘤T分期及M分期是影响ccRCC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。ccRCC中HCST表达与CD8^(+)T细胞、树突状细胞、NK细胞及Treg细胞的浸润程度正相关(P<0.001)。与对照组比较,HCST siRNA组ACHN细胞的增殖活性、侵袭能力、Bcl-2、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平显著降低(P<0.05),ACHN细胞凋亡活性、caspase-3、Bax和E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。siRNA阴性对照组与对照组比较上述各指标,差异无统计学意义(P<0.05)。结论:HCST在ccRCC中表达上调,且与ccRCC患者的免疫浸润和预后相关。沉默HCST的表达可抑制ccRCC细胞的增殖与侵袭、促进其凋亡。

关键词：造血细胞信号转导因子肾透明细胞癌免疫浸润预后

MAGE-A3表达对膀胱癌细胞增殖及侵袭的影响及其机制

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中华肿瘤防治杂志 2021年第18期28卷 1378-1383页

作者：周高峰吕磊郑福鑫吴维向威章传华武汉市第一医院泌尿外科湖北武汉430022

目的研究膀胱癌细胞中黑色素瘤抗原A3(MAGE-A3)表达及其对膀胱癌细胞增殖及侵袭能力的影响和可能机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫细胞化学染色检测膀胱癌TCC-SUP和EJ28细胞中MAGE-A3mRNA和蛋白的表达。采用小干扰RNA(siRNA)敲... 详细信息

目的研究膀胱癌细胞中黑色素瘤抗原A3(MAGE-A3)表达及其对膀胱癌细胞增殖及侵袭能力的影响和可能机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫细胞化学染色检测膀胱癌TCC-SUP和EJ28细胞中MAGE-A3mRNA和蛋白的表达。采用小干扰RNA(siRNA)敲减MAGE-A3的表达后,通过克隆形成实验、MTT实验及侵袭实验检测其对TCC-SUP细胞的存活、增殖及侵袭能力的影响。蛋白质印迹法检测p21蛋白在TCC-SUP细胞中的表达变化。结果qRT-PCR结果显示,MAGE-A3 mRNA在TCC-SUP和EJ28细胞中相对表达水平分别为0.188±0.036和0.005±0.001,组间均值差异有统计学意义,t=11.93,P<0.01。免疫细胞化学染色结果显示,MAGE-A3蛋白在TCC-SUP和EJ28细胞中的阳性细胞数分别为80.33±3.18和6.33±0.88,组间均值差异有统计学意义,t=22.43,P<0.01。TCC-SUP细胞分别转染si-Random和si-MAGE-A3后,MAGE-A3mRNA在si-Random组和si-MAGE-A3组的相对表达量分别为0.198±0.011和0.074±0.005,组间均值差异有统计学意义,t=13.83,P<0.01。MAGE-A3蛋白在si-Random组和si-MAGE-A3组的阳性细胞数分别为78.33±4.91和14.33±2.02,组间均值差异有统计学意义,t=12.04,P<0.01。克隆形成实验结果显示,si-Random组和si-MAGE-A3组TCC-SUP细胞克隆数分别为112.00±2.31和87.67±7.80,组间均值差异有统计学意义,t=5.90,P<0.05;MTT实验结果显示,si-Random组和si-MAGE-A3组TCC-SUP细胞的增殖能力分别为1.000±0.094和0.554±0.032,组间均值差异有统计学意义,t=15.54,P<0.01;侵袭实验结果显示,si-Random组和si-MAGE-A3组TCC-SUP细胞穿膜细胞数为78.67±2.91和56.00±4.59,组间均值差异有统计学意义,t=13.43,P<0.01。蛋白质印记结果显示,siMAGE-A3组p21蛋白的表达水平(0.528±0.060)较si-Random组(0.121±0.019)增加,t=16.47,P<0.01。结论MAGE-A3在膀胱癌细胞TCC-SUP中高表达,其可通过下调p21蛋白的表达而促进膀胱癌细胞的生长。

关键词：膀胱癌 MAGE-A3 增殖侵袭

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坚持分类施策打造明水样板

坚持分类施策打造明水样板

LncRNA FOXP4-AS1调控EZH2/LATS2轴对膀胱尿路上皮癌细胞增殖与迁移的影响

中国县域经济报

作者：吴旋郑福鑫

明水县是黑龙江省重要的牧羊、肉牛生产基地和滨北重要的商品集散地，也是塞外有名的寒地黑土薯米之乡，被誉为天鹅腹下的碧毯，先后荣获全国粮食生产先进县、全国生态文明先进县、中国互联网小镇等荣誉称号。黑龙江省明水县坚持农业农... 详细信息

明水县是黑龙江省重要的牧羊、肉牛生产基地和滨北重要的商品集散地，也是塞外有名的寒地黑土薯米之乡，被誉为天鹅腹下的碧毯，先后荣获全国粮食生产先进县、全国生态文明先进县、中国互联网小镇等荣誉称号。黑龙江省明水县坚持农业农村优先发展，扎实实施乡村振兴战略，统......

关键词：永兴镇基层治理红色文化农产品加工

来源： cnki报纸评论

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cnki报纸

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实用医学杂志 2024年第20期40卷 2819-2827页

作者：向威吕磊郑福鑫袁敬东周高峰武汉市第一医院泌尿外科湖北武汉430022

目的分析lncRNA FOXP4-AS1调控EZH2/LATS2轴对膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma,BUC)细胞增殖与迁移的影响。方法利用TCGA数据库与实时荧光定量PCR分析FOXP4-AS1和LATS2 mRNA在BUC组织中的表达;MTT实验检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞迁移;Western blot检测LATS2与H3K27me3蛋白表达;RNA免疫沉淀(RIP)和染色质免疫沉淀(ChIP)验证FOXP4-AS1、EZH2与LATS2的关系。结果相较正常膀胱组织,BUC组织中FOXP4-AS1表达升高,而LATS2 mRNA表达降低(P<0.01);相较SV-HUC-1,FOXP4-AS1在BUC细胞系(EJ、T24、BIU-87及5637)中表达升高(P<0.01);沉默FOXP4-AS1可显著抑制BUC细胞增殖、迁移及H3K27me3蛋白表达,而显著促进LATS2 mRNA与蛋白的表达,过表达FOXP4-AS1则产生相反效应(P<0.05);RIP与ChIP实验表明FOXP4-AS1可募集EZH2至LATS2启动子区域,导致H3K27me3在该区域富集;敲低LATS2或EZH2表达可部分逆转FOXP4-AS1沉默或过表达对BUC细胞增殖、迁移及LATS2表达的影响。结论FOXP4-AS1在BUC中高表达,其通过招募EZH2至LATS2基因启动子区域负性调控LATS2的表达,进而调控BUC细胞的增殖与迁移。

关键词：膀胱尿路上皮癌 FOXP4-AS1 EZH2 LATS2

Overexpression of CircRNA BCRC4 Regulates Cell Apoptosis and MicroRNA-101/EZH2 Signaling in Bladder Cancer

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Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2017年第6期37卷 886-890页

作者：李博谢飞郑福鑫蒋国松曾甫清肖行远 Department of Urology Union HospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Science and TechnologyWuhan 430022China

Emerging evidence has indicated that circular RNAs（circRNAs） play pivotal roles in the regulation of cellular processes and are found to be aberrantly expressed in a variety of tumors. However, the clinical role of circ RNAs in bladder cancer（BC） and the molecular mechanisms have yet to be fully understood. In this study, the clinical specimens were obtained and the expression level of a circ RNA BCRC4 was detected by real-time PCR in both BC tissues and cell line. The circular RNA over-expression plasmid was constructed and transfected into BC cells and related cell line. The cell cycles and apoptosis were observed using inverted microscope and flow cytometry. Western blotting was used to compare the relative protein expression of groups with different treatments. It was found that circ RNA BCRC4 expression was lower in BC tissues than in adjacent normal tissues. Furthermore, consequences of forced-expression of BCRC4 promoted apoptosis and inhibited viability of T24T and UMUC3 cells, and up-regulated BCRC4-increased miR-101 level, which suppressed EZH2 expression in both RNA and protein levels. In addition, gambogic acid（GA） is a promising natural anticancer compound for BC therapy, and GA treatment increased the BCRC4 expression in T24T and UMUC3 cells in a dose-dependent manner. Altogether, our findings suggest that BCRC4 functions as a tumor suppressor in BC, and mediates anticancer function, at least in part, by up-regulating the expression of miR-101. Targeting this newly identified circ RNA may help us develop a novel strategy for treating human BC.

关键词： bladder cancer circRNA BCBR4 miR-101 EZH2 apoptosis

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明水聚焦党建赋能乡村振兴

明水聚焦党建赋能乡村振兴