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CpGDNA预防小鼠哮喘模型的形成

复旦学报（医学版） 2002年第5期29卷 376-378页

作者：金美玲蔡映云袁正宏郑玲洁张伟复旦大学附属中山医院肺科上海200032 复旦大学医学院分子病毒实验室上海200032

目的　研究含胞嘧啶鸟嘌呤核苷酸的免疫刺激元件 (CpGDNA)能否预防卵蛋白致敏小鼠哮喘模型的形成。方法　将 18只BALB/c小鼠均分为 3组 ,其中卵蛋白致敏哮喘组 (OVA组 )和CpG预防组 (CpG组 )皮下注射卵蛋白致敏制作哮喘模型 ,然后用卵... 详细信息

目的　研究含胞嘧啶鸟嘌呤核苷酸的免疫刺激元件 (CpGDNA)能否预防卵蛋白致敏小鼠哮喘模型的形成。方法　将 18只BALB/c小鼠均分为 3组 ,其中卵蛋白致敏哮喘组 (OVA组 )和CpG预防组 (CpG组 )皮下注射卵蛋白致敏制作哮喘模型 ,然后用卵蛋白激发 2次 ;阴性对照组 (NS组 )皮下注射生理盐水 ,然后生理盐水激发 2次。CpG组在致敏前腹腔注射CpGDNA 10 0 μg/ 10 0 μL ,其他两组不作干预。 3组分别在第 2次激发后 2 4h测外周血OVA特异性IgE、IgG1、IgG2a,并处死小鼠测肺泡灌洗液 (BALF)中的细胞总数及嗜酸性粒细胞 (EOS)计数 ,肺组织病理切片观察形态学改变 ,并测定脾细胞培养上清液中OVA特异性IFN γ。结果　CpG组BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞明显低于OVA组 ,P <0 .0 5 ;CpG组肺组织炎症反应较OVA组明显减轻 ;CpG组脾细胞培养上清液中OVA特异性IFN γ的浓度明显高于OVA组 ,P <0 .0 5 ;CpG组外周血OVA特异性IgE和IgG1均低于OVA组 ,P <0 .0 5 ;CpG组IgG2a较OVA组为高 ,P <0 .0 5。

关键词：含胞嘧啶鸟嘌呤核苷酸的免疫刺激元件变应性哮喘免疫调节

免疫刺激DNA序列与过敏原联用对哮喘小鼠模型气道过敏性炎症的作用

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中华结核和呼吸杂志 2002年第9期25卷 542-545页

作者：金美玲蔡映云袁正宏郑玲洁任涛复旦大学附属中山医院呼吸科上海200032 复旦大学医学院分子病毒学实验室

目的　观察免疫刺激DNA序列 (ISS DNA)单用和与过敏原卵白蛋白 (OVA)合用 ,对支气管哮喘 (简称哮喘 )小鼠模型气道过敏性炎症的作用及作用维持时间。方法　BALB/c小鼠 36只 ,分ISS组 (A组 ) 12只、ISS +OVA组 (B组 ) 12只、OVA组 (C组 ... 详细信息

目的　观察免疫刺激DNA序列 (ISS DNA)单用和与过敏原卵白蛋白 (OVA)合用 ,对支气管哮喘 (简称哮喘 )小鼠模型气道过敏性炎症的作用及作用维持时间。方法　BALB/c小鼠 36只 ,分ISS组 (A组 ) 12只、ISS +OVA组 (B组 ) 12只、OVA组 (C组 ) 6只和生理盐水 (NS)组 (D组 ) 6只。A、B、C组用OVA致敏及激发。A组和B组根据注射次数再分A1、B11次注射组 (1次腹腔注射ISS DNA 10 0μg或ISS DNA 10 0 μg +OVA 10 μg)和A2 、B2 2次注射组 (2次腹腔注射ISS DNA或ISS DNA +OVA)。各组在第 1次激发后 6周中 ,每周采血 1次测特异性IgE ,最后处死小鼠测支气管肺泡灌洗液 (BALF)中细胞计数及分类 ,肺组织病理检查 ,检测脾细胞分泌γ干扰素 (IFN γ)的水平。结果　BALF中嗜酸细胞 (EOS)数A1组为 (2 39± 0 81)× 10 4/ml;A2 组为 (2 .6 2± 0 .77)× 10 4/ml;B1组为 (1.80± 0 .12 )× 10 4/ml;B2 组为 (1.84± 0 .6 7)× 10 4/ml,与C组 [(12 .4 3± 2 .13)× 10 4/ml]比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。脾细胞分泌的IFN γA1组为 (5 10± 10 2 )pg/ml;A2 组为 (492± 98)pg/ml;B1组为 (5 32± 12 0 )pg/ml;B2组为 (46 9± 132 )pg/ml,与C组 [(194± 80 )pg/ml]比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。血清IgE前

关键词：哮喘免疫刺激DNA序列气道过敏性炎症

基因芯片分析干扰素对乙型肝炎病毒转染细胞基因表达的影响(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第12期35卷 1053-1060页

作者：熊炜王迅刘晓颖项黎郑玲洁刘江霞袁正宏复旦大学上海医学院教育部医学分子病毒学重点实验室复旦大学上海医学院教育部医学分子病毒学重点实验室上海200032

乙型肝炎病毒 (HepatitisBvirus ,HBV)的持续性感染是影响人类健康的重大问题 ,而α 干扰素 (IFN α)和γ 干扰素(IFN γ)分别具有抗HBV的作用。为了研究HBV持续存在对IFN效应基因表达的影响 ,将HepG2细胞和来源于HepG2细胞并整合有HBV... 详细信息

乙型肝炎病毒 (HepatitisBvirus ,HBV)的持续性感染是影响人类健康的重大问题 ,而α 干扰素 (IFN α)和γ 干扰素(IFN γ)分别具有抗HBV的作用。为了研究HBV持续存在对IFN效应基因表达的影响 ,将HepG2细胞和来源于HepG2细胞并整合有HBV基因组的HepG2 .2 .15细胞经IFN α或IFN γ处理 6h后 ,用含 14 112个靶基因的人cDNA基因芯片检测了各组基因表达谱的差异。结果证实 ,许多与细胞周期、增殖、凋亡相关的基因及部分EST和功能未知基因受IFN调节 ;IFN诱导后 ,一些与激酶和信号转导、转录调节、抗原递呈和处理相关的基因在两株细胞间表达存在差异 ,提示HBV影响IFN诱导的细胞基因的表达。进一步挑选部分显著差异表达的基因 ,研究其对HBV复制的影响 ,结果发现在两个细胞株中IFN诱导后基因表达差异的双遍在蛋白 (Diubiquitin)和髓样细胞分化蛋白 (MyD88)均可显著降低HBV抗原表达 ,并证实MyD88能抑制HBV复制。这有助于揭示IFN抗病毒效应及HBV持续性感染机制 ,为分子水平寻找新型抗HBV药物的靶点打下基础。

关键词：基因芯片乙型肝炎病毒干扰素细胞基因表达谱

从分子水平上评价牛海绵状脑病和羊痒疫对人的潜在传染性

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国外医学(微生物学分册) 1998年第4期 42-43页

作者：郑玲洁

有报告认为,已有超过百万的感染了牛海绵状脑病(BSE)的牛肉进入了人的食物链。人们对BSE是否穿过种系屏障传染给人及其他动物的担心促使科学家们寻找BSE传染性的分子基础及评价指标。美国NIH等

关键词：牛海绵状脑病转化反应蛋白酶蛋白水解酶 BSE 动物来源

免疫途径及载体对乙肝病毒DNA疫苗免疫效果影响的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 1999年第1期19卷 25-28页

作者：袁正宏方昕郑玲洁姚忻何丽芳闻玉梅上海医科大学医学分子病毒学实验室

目的探讨ＤＮＡ载体结构及接种途径对ＤＮＡ疫苗免疫效果的影响。方法分别构建插入ＨＢＶ表面抗原编码基因的表达载体ｐｃＤＮＡ１．１／ＳＡ（无抗性基因）和ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ／ＳＡ（含氨苄青霉素抗性基因），肌注小鼠后比较其诱... 详细信息

目的探讨ＤＮＡ载体结构及接种途径对ＤＮＡ疫苗免疫效果的影响。方法分别构建插入ＨＢＶ表面抗原编码基因的表达载体ｐｃＤＮＡ１．１／ＳＡ（无抗性基因）和ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ／ＳＡ（含氨苄青霉素抗性基因），肌注小鼠后比较其诱生特异性免疫应答的能力；同时比较不同接种途径（肌内、皮内、皮肤划痕）及ＣｐＧ免疫刺激元件（ＩＳＳ）对ＤＮＡ疫苗诱生免疫效果的影响。结果ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ／ＳＡ的免疫效果优于ｐｃＤＮＡ１．１／ＳＡ。ｐｃＤＮＡ１．１／ＳＡ的免疫效果可被ＩＳＳ增强，而ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ／ＳＡ诱生特异性免疫应答的能力则可被ＩＳＳ抑制；诱生免疫应答的能力以肌内注射最强，皮内注射免疫其次，皮下划痕法较弱。结论不同ＨＢｓＡｇ表达载体诱生免疫应答的能力不尽相同；ＣｐＧ免疫刺激元件在决定ＤＮＡ疫苗免疫原性中起重要作用，可增强不含相应结构ＤＮＡ疫苗的免疫效果；皮内注射可诱发与肌内接种相似的免疫应答，是一种简便。

关键词：乙肝病毒合成疫苗接种基因携带体抗体特性性

巨噬细胞对转染粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的胰腺癌细胞株PC-3的杀伤作用

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复旦学报（医学版） 2003年第6期30卷 569-571页

作者：倪晓凌靳大勇郑玲洁袁正宏吴肇汉复旦大学附属中山医院普外科教育部卫生部医学分子病毒重点实验室上海200032

目的研究巨噬细胞对转染粒细胞-巨噬细胞细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因后的胰腺癌细胞系PC-3的杀伤作用。方法巨噬细胞由小鼠腹腔注射ConA刺激后分离培养而获得。通过脂质体转染法,将含GM-CSF基因的质粒及空质粒转染至PC-3细胞。以上... 详细信息

目的研究巨噬细胞对转染粒细胞-巨噬细胞细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因后的胰腺癌细胞系PC-3的杀伤作用。方法巨噬细胞由小鼠腹腔注射ConA刺激后分离培养而获得。通过脂质体转染法,将含GM-CSF基因的质粒及空质粒转染至PC-3细胞。以上基因的表达由Western blot免疫印迹法鉴定。采用Cal-cein-AM释放法行巨噬细胞杀伤试验以评估GM-CSF对肿瘤免疫调节作用。结果巨噬细胞对转染GM-CSF基因后的PC-3细胞杀伤率较空质粒组显著增高(P<0.001)。结论 GM-CSF能增强巨噬细胞杀伤PC-3细胞的能力,提示GM-CSF对于胰腺癌的免疫治疗有潜在价值。

关键词：巨噬细胞基因转染粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子胰腺癌癌细胞株 PC-3 杀伤作用

用Calcein释放实验检测HBs DNA疫苗诱生的特异性CTL活性

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第3期23卷 234-234页

作者：周晓辉郑玲洁袁正宏复旦大学上海医学院教育部

Calcein释放实验的基本原理为用荧光染料Calcein AM标记靶细胞。脂溶性的Ca]cein AM进入细胞后转变为水溶性，从而可潴留在细胞内而使细胞质染色，细胞杀伤后水溶性的Calcein可从细胞内释放出来，因此可用靶细胞释出的Calcein荧光值反... 详细信息

Calcein释放实验的基本原理为用荧光染料Calcein AM标记靶细胞。脂溶性的Ca]cein AM进入细胞后转变为水溶性，从而可潴留在细胞内而使细胞质染色，细胞杀伤后水溶性的Calcein可从细胞内释放出来，因此可用靶细胞释出的Calcein荧光值反映杀伤率。Lichtenfels R 等报道该方法安全简易，与~(51)Cr释放法比较符合，可能替代~(51)Cr释放实验的方法。我们建立了用Calcein AM标记靶细胞检测CTL活性的方法，并对经不同途径接种HBs DNA疫苗的BALB／c小鼠针对HBs的特异性CTL进行了检测。

关键词： Calcein释放实验检测 HBs DNA疫苗特异性CTL活性

丙型肝炎病毒RNA多聚酶在昆虫细胞中的表达

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中国病毒学 2000年第4期15卷 313-317页

作者：兰水云郑玲洁胡芸文沈重邱海军袁正宏上海医科大学医学分子病毒学重点实验室上海200032

HCVNS5B基因片段克隆入BAC TO BACTM 重组杆状病毒表达系统的pFASTHTc载体质粒 ,转化DH10BACTM感受态细菌获得重组的Bacmid质粒 ,将重组Bacmid质粒转染Sf9细胞 ,获得的重组杆状病毒可表达目的蛋白。免疫印迹和体外活性检测表明 ,所表达... 详细信息

HCVNS5B基因片段克隆入BAC TO BACTM 重组杆状病毒表达系统的pFASTHTc载体质粒 ,转化DH10BACTM感受态细菌获得重组的Bacmid质粒 ,将重组Bacmid质粒转染Sf9细胞 ,获得的重组杆状病毒可表达目的蛋白。免疫印迹和体外活性检测表明 ,所表达蛋白为HCVNS5B蛋白 ,具有多聚酶活性。

关键词：丙型肝炎病毒 RNA多聚酶分子克隆转染

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人与野生动物该如何和谐相处?

生态经济 2025年第1期41卷 5-8页

作者：胥洁内蒙古大学马克思主义学院内蒙古呼和浩特010000

近年来,我国野生动物伤人事件频繁发生,典型案例包括云南省亚洲象群袭击村民并毁坏农作物,江苏、安徽、江西等南方省份的野猪伤人事件,黑龙江东北虎伤人事件,以及四川峨眉山和贵州黔灵山野猴攻击游客等。这些伤人事件的频发,既反映了生... 详细信息

近年来,我国野生动物伤人事件频繁发生,典型案例包括云南省亚洲象群袭击村民并毁坏农作物,江苏、安徽、江西等南方省份的野猪伤人事件,黑龙江东北虎伤人事件,以及四川峨眉山和贵州黔灵山野猴攻击游客等。这些伤人事件的频发,既反映了生态保护政策的成效,也暴露了管理滞后的问题。种群恢复、栖息地破碎化、食物匮乏、人类活动扩展、动物行为适应性增强等因素,是导致当前我国人与野生动物频繁冲突的主要原因。要有效解决这一问题,未来我国要从种群管理、栖息地保护、防护设施建设、公众教育、政策完善、科技投入以及国际合作等多方面入手,推动人与野生动物的和谐共生。

关键词：野生动物环境保护和谐共生生态共同体