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hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白的制备、穿膜效应及其抗氧化、抗炎症功效

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南方医科大学学报 2024年第6期44卷 1059-1069页

作者：张洁姚君妍杨英桂王飞郑清友李欣柳长柏运城护理职业学院山西运城04400 三峡大学肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室湖北宜昌443002 南方医科大学深圳医院麻醉手术中心广东深圳518100 南方医科大学深圳医院泌尿外科广东深圳518100 南方医科大学深圳医院临床医学创新中心广东深圳518100 海南省人民医院泌尿外科海南海口570100

目的探究人源性细胞膜穿透肽hPP10携带人源性抗氧化蛋白Cu,Zn-SOD的穿膜效应并观察其抗氧化、抗炎功效。方法利用RT-PCR技术扩增人源性SOD基因片段、酶切连接法构建重组质粒pET15b-Cu,Zn-SOD,pET15b-hPP10-Cu,Zn-SOD;利用镍柱亲和层析... 详细信息

目的探究人源性细胞膜穿透肽hPP10携带人源性抗氧化蛋白Cu,Zn-SOD的穿膜效应并观察其抗氧化、抗炎功效。方法利用RT-PCR技术扩增人源性SOD基因片段、酶切连接法构建重组质粒pET15b-Cu,Zn-SOD,pET15b-hPP10-Cu,Zn-SOD;利用镍柱亲和层析法、分子筛方法纯化Cu,Zn-SOD、hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白并利用Western blotting法鉴定其正确性;利用免疫荧光法、荧光共定位实验、Western blotting法鉴定hPP10-Cu,Zn-SOD在细胞中的穿膜效应;利用Western blotting法鉴定hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白穿膜时间梯度和浓度梯度效应;利用SOD酶活性测定试剂盒检测hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后的SOD酶活性;利用MTT法检测hPP10对细胞活性的影响。利用H2O2建立HEK293氧化应激细胞模型,通过流式细胞分析术(FCM)分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后细胞凋亡情况;并RT-qPCR分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后凋亡相关因子的表达情况;通过ROS检测分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后抗氧化能力。TPA诱导建立小鼠耳部炎症模型(5只/组,共4组),然后RT-qPCR分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后,NFκB,IL-1β、IL-6、TNFα因子的转录情况;Western blotting检测NFκB p65、p-NFκB p65、IL-1β、TNFα基因的表达;免疫组化分析炎性因子p-NFκB p65、TNFα基因的表达。结果成功构建了重组质粒pET15b-Cu,Zn-SOD,pET15b-hPP10-Cu,Zn-SOD,并获得Cu,Zn-SOD蛋白和hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白;免疫荧光试验结果表明5μmol/L浓度的hPP10-Cu,Zn-SOD转导HEK293细胞具有明显的穿膜效应;荧光共定位实验显示融合蛋白hPP10-Cu,Zn-SOD入胞后定位在细胞膜内,部分蛋白定位在细胞核内;Western blotting实验结果表明hPP10-Cu,Zn-SOD转导Hela(P<0.05),HEK293(P<0.01)细胞具有浓度依赖性,细胞内hPP10-Cu,Zn-SOD存在可持续24 h;5μmol/L的hPP10-Cu,Zn-SOD转导细胞具有较好的抗氧化活性(P<0.01);MTT结果显示高达10μmol/L浓度的hPP10-Cu,Zn-SOD对于细胞活力的影响小。在氧化应激模型中,FCM结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞降低了细胞的早期凋亡(P<0.01)和晚期凋亡(P<0.05);RT-qPCR结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞使Bcl2、Mcl1、Deptor等抗凋亡因子升高(P<0.05),降低了Bad、P21、P27等促凋亡因子的表达(P<0.05);ROS结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞显著降低了细胞内的活性氧含量(P<0.01)。在炎症模型中,hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白可显著降低IL-1β、IL-6、TNFα因子的转录(P<0.05);p-NFκB p65、IL-1β及TNFα的表达都呈现了抑制作用(P<0.05);hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白处理组较Cu,Zn-SOD蛋白处理组,降低了炎性因子p-NFκB p65及TNFα基因的表达(P<0.05)。结论融合蛋白hPP10-Cu,Zn-SOD具有明显的穿膜入胞、抗氧化、抗炎功效,且对细胞毒副作用很小。这些结果为hPP10作为新的递送载体奠定基础,也为hPP10-Cu,Zn-SOD应用于护肤品等提供了理论依据。

关键词：人源性细胞膜穿透肽hPP10 铜锌超氧化物歧化酶Cu Zn-SOD 抗氧化抗炎酶活力测定

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硅基CMOS毫米波移相器的研究与设计

硅基CMOS毫米波移相器的研究与设计

作者：郑清友电子科技大学

学位级别：硕士

社会的发展和进步使得人们对具有高数据传输速率、大接入容量的无线通信系统的需求越来越强烈,现有的无线通信标准受限于有限的频谱和信道资源,很难满足这些的要求。基于相控阵结构的毫米波通信系统是解决这些问题的潜在技术方案,而硅基... 详细信息

社会的发展和进步使得人们对具有高数据传输速率、大接入容量的无线通信系统的需求越来越强烈,现有的无线通信标准受限于有限的频谱和信道资源,很难满足这些的要求。基于相控阵结构的毫米波通信系统是解决这些问题的潜在技术方案,而硅基CMOS技术的发展进步使得低功耗、低成本和高集成度的相控阵系统单片集成成为可能。作为其中的关键电路模块,移相器的设计至关重要,本文主要目的就是研究利用CMOS工艺设计出高精度、低功耗的毫米波移相器。本设计采用基于矢量合成技术的有源结构以提高电路的信号增益、克服硅基工艺的高插损特性对移相器性能的限制。整个电路结构分为三个主要部分,包括可变增益控制单元、正交信号发生器以及信号合成器。为了减小电路的面积和功耗,电路没有使用全差分的结构形式而是在传统结构的基础上进行了改进。可变增益单元被提到电路的第一级,它在控制信号的作用下对输入信号进行离散的增益控制,并将两路不同大小的同相信号分配到下一级;正交信号发生器由电容电感组成的高低通网络来实现,它具有频带宽、低损耗的特点;信号合成器由两个Gilbert单元电路组成,它分为两级结构,其中的共源放大器对信号进一步放大以补偿无源正交网络的损耗,另一部分则在控制信号作用下对合成信号的极性进行选择。除此之外,电路中使用了基于电流复用的技术片上巴伦将两路正交信号转化为四路差动信号,这样既可以减小电路面积又降低了直流功耗。该60GHz有源移相器采用TSMC 90 nm RF CMOS工艺进行设计,经流片测试:移相器可以实现360o范围内4bit相位精度,在574GHz频率范围内,16个相位状态下均方根增益误差为0.75.6 dB,均方根相位误差为2.3o.6o。电路的噪声系数为92dB,移相器的峰值功率增益约为2.5dB(@60.5GHz),整个芯片的面积约为0.61mm2,在1.8V的供电电压下电路功耗为19.8mW。

关键词：毫米波 CMOS 60GHz 有源移相器矢量合成

Survivin因子在膀胱癌中的表达以及熊果酸抑制膀胱癌T24细胞机制的体外实验研究

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Survivin因子在膀胱癌中的表达以及熊果酸抑制膀胱癌T24细胞机制...

作者：郑清友第三军医大学

学位级别：硕士

背景和目的: 膀胱肿瘤是泌尿外科最常见的恶性肿瘤,其临床特点主要是高发病率、高复发率和低度恶性。目前认为膀胱肿瘤是一基因病,由多通路及多靶位调控。但其确切病因、发病机制及复发机制不清楚。近年来有关膀胱肿瘤发病的分子机... 详细信息

背景和目的: 膀胱肿瘤是泌尿外科最常见的恶性肿瘤,其临床特点主要是高发病率、高复发率和低度恶性。目前认为膀胱肿瘤是一基因病,由多通路及多靶位调控。但其确切病因、发病机制及复发机制不清楚。近年来有关膀胱肿瘤发病的分子机制一直是研究的热点,其中包括基因突变、原癌基因激活、抑癌基因失活及凋亡失衡等多种发病机制。Survivin(生存素)因子是近年来发现的一种凋亡抑制因子,高表达于多种肿瘤组织而在正常成人组织中未见表达,其主要作用是抑制肿瘤细胞凋亡。已有研究表明,survivin在许多肿瘤的发生、发展过程中起关键作用,是估计肿瘤预后和复发的重要指标。近年来,survivin因子在膀胱肿瘤中的表达国外已有少量研究,初步结果表明,survivin因子在膀胱肿瘤表达上调,有望成为膀胱肿瘤一种新的肿瘤诊断分子标记物和治疗的新靶点。熊果酸是自然界广泛存在的一种植物类化合物,具有广泛的生物学效应,其最大的功能是抗肿瘤。体外实验表明熊果酸可明显抑制人体多种肿瘤细胞的生长和繁殖。包括对肿瘤细胞有明显的细胞毒作用,可以抑制肿瘤细胞增殖,阻断肿瘤生长因子信号通路,诱导凋亡,抑制抗凋亡蛋白的表达,抑制血管生成等作用。 Survivin因子在膀胱肿瘤中的表达目前已有一些研究,但熊果酸对膀胱肿瘤的抑制作用国内外尚未见报道。为此,我们在体外研究了熊果酸对膀胱肿瘤细胞的影响,并对其作用机制进行探讨。其目的在于:明确survivin因子在膀胱肿瘤中的表达情况及其与临床病理特征的关系,体外观察熊果酸对膀胱肿瘤细胞的抑制作用和检测survivin因子经熊果酸处理后的表达变化。其意义在于:阐明survivin因子在膀胱肿瘤发病机制中的作用和熊果酸治疗膀胱肿瘤的可行性。最终目的为临床提供一种敏感性高、特异性强和无创伤的分子水平肿瘤标志物以及提供一种有效的、无毒副作用的预防和治疗膀胱肿瘤的药物奠定理论基础。材料和方法: 实验分两部分:第一部分:临床选择54例经临床病理确诊为膀胱癌的患者,采用

关键词：膀胱肿瘤熊果酸凋亡 Survivin

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肾脏炎性假瘤(附10例报告)

中华泌尿外科杂志 2002年第12期23卷 715-717页

作者：郑清友杨学辉孙凤岭北京军区总医院泌尿外科 100700

目的　提高对肾脏炎性假瘤的认识和诊治水平。　方法　报告 10例肾脏炎性假瘤的诊治情况 ,结合文献就其诊治问题进行讨论。　结果　肾脏炎性假瘤的主要临床表现为发热、腰痛及血尿。影像学检查无特异性。 10例患者 6例误诊为肾癌而行肾... 详细信息

目的　提高对肾脏炎性假瘤的认识和诊治水平。　方法　报告 10例肾脏炎性假瘤的诊治情况 ,结合文献就其诊治问题进行讨论。　结果　肾脏炎性假瘤的主要临床表现为发热、腰痛及血尿。影像学检查无特异性。 10例患者 6例误诊为肾癌而行肾切除术 ;4例经活检确诊为炎症 ,以抗炎治疗治愈 ,随访 1～ 5年 ,未见复发。　结论　此病诊断应以临床症状为主 ,结合动态影像学检查 ,特别是抗生素治疗前后的对比。当怀疑本病时 ,B超引导下穿刺活检是确诊的主要依据。

关键词：肾脏炎性假瘤诊断治疗病例报告

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肾上腺转移癌45例报告

临床泌尿外科杂志 2010年第9期25卷 658-660页

作者：郑清友狄桂萍许先有北京军区总医院泌尿外科北京100700

目的:总结肾上腺转移癌的临床特点与诊治体会。方法:回顾性分析1996年12月～2010年2月收治的肾上腺转移癌患者45例临床资料:原发肿瘤包括肺癌23例(51.1%),肝癌5例(11.1%),肾癌5例(11.1%),乳腺癌4例(8.9%),黑色素瘤2例(4.4%),其他肿瘤6例... 详细信息

目的:总结肾上腺转移癌的临床特点与诊治体会。方法:回顾性分析1996年12月～2010年2月收治的肾上腺转移癌患者45例临床资料:原发肿瘤包括肺癌23例(51.1%),肝癌5例(11.1%),肾癌5例(11.1%),乳腺癌4例(8.9%),黑色素瘤2例(4.4%),其他肿瘤6例(13.3%)。临床表现为全身乏力、消瘦、贫血或低热16例,患侧腰背部胀痛8例,高血压6例。均行B超、CT、MRI及正电子发射断层扫描(PET)检查确诊。35例行手术治疗,10例放弃手术。结果:完整切除转移癌者30例获得随访,生存6～62个月,平均34.2±4.7个月,最长存活已5年2个月;5例失访。10例放弃手术者中,6例获得随访,生存4～8个月,平均6.3±2.7个月,均死于肿瘤晚期或多发转移。结论:对原发肿瘤应重视术中及术后肾上腺部位的检查及随访。B超及CT是诊断肾上腺转移癌的重要检查方法,PET对诊断肾上腺转移癌有较高的临床价值。完整切除肾上腺转移灶可延长患者生存期,但需严格控制适应证。

关键词：肾上腺肿瘤转移癌

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网版回收与利用

丝网印刷 2004年第3期 47-48页

作者：郑清友

在精细网版印刷中,由于印刷质量要求严格,我们选用的都是高目数丝网,例如纱帝、Sefar等厂家生产的165-31Y PW和180-27YPW类型的丝网,此类丝网价格昂贵,制作每块网版成本很高,为了降低成本,就必须注重网版的回收利用.现将一些注意事项,... 详细信息

在精细网版印刷中,由于印刷质量要求严格,我们选用的都是高目数丝网,例如纱帝、Sefar等厂家生产的165-31Y PW和180-27YPW类型的丝网,此类丝网价格昂贵,制作每块网版成本很高,为了降低成本,就必须注重网版的回收利用.现将一些注意事项,操作经验介绍如下,供大家参考.

关键词：网版印刷网版回收利用操作方法

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肾上腺血管瘤2例诊疗体会

临床泌尿外科杂志 2010年第1期25卷 58-59页

作者：郑清友臧桐张国晖郭岩杰张勇北京军区总医院泌尿外科北京100700

目的:提高肾上腺血管瘤诊疗水平。方法:报告2例肾上腺血管瘤,肿瘤均位于左侧。术前影像学检查诊断为左肾上腺肿瘤,考虑为恶性可能性大,2例均行经腹手术切除。其中1例肿瘤较大,同时切除左肾及脾脏。结果:术后恢复顺利,病理诊断为肾上腺... 详细信息

目的:提高肾上腺血管瘤诊疗水平。方法:报告2例肾上腺血管瘤,肿瘤均位于左侧。术前影像学检查诊断为左肾上腺肿瘤,考虑为恶性可能性大,2例均行经腹手术切除。其中1例肿瘤较大,同时切除左肾及脾脏。结果:术后恢复顺利,病理诊断为肾上腺血管瘤。随访1～3年未见复发及转移。结论:肾上腺血管瘤为少见良性肿瘤,术前误诊率高。手术切除效果满意,预后良好。

关键词：肾上腺肿瘤血管瘤

RNA结合蛋白Musashi2在实体瘤中的研究进展

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南方医科大学学报 2022年第3期42卷 448-456页

作者：杨英桂赵敏丁腾腾倪楚萍郑清友李欣南方医科大学深圳医院临床医学创新中心广东深圳518100 南方医科大学深圳医院泌尿外科广东深圳518100 博纳西亚(合肥)医药科技有限公司安徽合肥230000

RNA结合蛋白(RBP)在基因调控过程中扮演着关键的作用,参与RNA的翻译、修饰、剪接和转运等重要生命活动,探索RBP对RNA的具体作用意义重大。多项研究表明RBP的异常表达与多种疾病相关。哺乳动物的Musashi(Msi)家族是一类进化保守且功能强... 详细信息

RNA结合蛋白(RBP)在基因调控过程中扮演着关键的作用,参与RNA的翻译、修饰、剪接和转运等重要生命活动,探索RBP对RNA的具体作用意义重大。多项研究表明RBP的异常表达与多种疾病相关。哺乳动物的Musashi(Msi)家族是一类进化保守且功能强大的RBP,其家族成员Msi1和Msi2在调控干细胞活性和肿瘤发生发展中具有重要的作用,具体为通过绑定并调节mRNA的翻译、稳定性及其下游的细胞信号通路从而调控机体的多种生物学进程,其中Msi2与胚胎的生长发育、肿瘤干细胞的维持、血液系统肿瘤的发展等密切相关,而近年来越来越多的报道证实Msi2在实体性肿瘤发生发展中同样发挥着至关重要的作用,主要影响肿瘤的增殖、侵袭、转移及耐药等。具体机制上Msi2主要涉及Wnt/β-catenin、TGF-β/SMAD3、Akt/mTOR、JAK/STAT和Numb及其相关信号通路(Notch、p53和Hedgehog通路)等信号通路。将Msi2基因作为靶点指导肿瘤治疗的临床前研究目前取得了一些初步的成果。本文就Msi2的分子结构、生理功能、在多种实体瘤的发生发展中的作用以及相关信号通路等方面的最新研究进展进行综述。

关键词： RNA结合蛋白 Musashi2 实体瘤小分子抑制剂

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肾移植术后并发恶性肿瘤7例临床分析

实用医学杂志 2010年第13期26卷 2365-2367页

作者：郑清友杨玲华夏罗益滨北京军区总医院泌尿外科 100700 北京军区总医院第二军医大学临床部 100700

目的：总结肾移植术后发生恶性肿瘤的诊治体会。方法：对我院于2000年1月至2009年6月行同种异体肾移植术的367例（其中包括38例活体供肾移植）进行了回顾性分析。共发生恶性肿瘤7例，其中2例原榆尿管肿瘤，3例膀胱肿瘤，1例肝癌，1例子... 详细信息

目的：总结肾移植术后发生恶性肿瘤的诊治体会。方法：对我院于2000年1月至2009年6月行同种异体肾移植术的367例（其中包括38例活体供肾移植）进行了回顾性分析。共发生恶性肿瘤7例，其中2例原榆尿管肿瘤，3例膀胱肿瘤，1例肝癌，1例子宫内膜癌。2例原输尿管肿瘤中，1例行肾、输尿管全程及膀胱部分切除术．1例多次复发行输尿管腔镜内切除；3例膀胱癌中，2例行经尿道膀胱肿瘤电切术，术后配合膀胱灌注化疗，1例行膀胱全切术；1例肝癌行肝动脉导管介入治疗，1例子宫内膜癌行子宫全切术；手术后均适当调整免疫抑制方案。结果：1例输尿管肿瘤多次复发，最后肿瘤转移死亡，其余6例随访中均未见异常。移植肾功能正常。结论：肾移植后恶性肿瘤发病率增高，我国以泌尿系肿瘤为主。早期诊断及正规治疗是提高肿瘤治愈及延长患者生存的关键。

关键词：肾移植恶性肿瘤免疫抑制剂