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汉坦病毒GM04-38株N-联糖基化位点在细胞融合中的作用

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汉坦病毒GM04-38株N-联糖基化位点在细胞融合中的作用

作者：郑晓民山东大学

学位级别：硕士

目的N-联寡糖链可以在很多方面影响蛋白的功能。已有报道显示某些病毒融合蛋白的寡糖链缺失可使病毒的细胞融合功能缺陷或丢失。已有报道显示汉坦病毒的G2糖蛋白可能是其融合蛋白。鉴于汉坦病毒GM04-38株包膜糖蛋白G1和G2也是通过N-联... 详细信息

目的N-联寡糖链可以在很多方面影响蛋白的功能。已有报道显示某些病毒融合蛋白的寡糖链缺失可使病毒的细胞融合功能缺陷或丢失。已有报道显示汉坦病毒的G2糖蛋白可能是其融合蛋白。鉴于汉坦病毒GM04-38株包膜糖蛋白G1和G2也是通过N-联糖基化作用来修饰的,本研究拟通过实验对汉坦病毒N-联糖基化位点在细胞融合中的作用进行初步探讨。从而为阐明HV的细胞融合机制、研制有效的汉坦病毒新型疫苗和治疗制剂奠定基础。方法根据GM04-38株M片段cDNA基因序列应用Primer 5软件设计引物,同源重组PCR法构建5个单个氨基酸突变的N-联糖基化位点的克隆载体。PCR扩增N-联糖基化位点突变体的编码区基因,双酶切后与经过同样双酶切的表达载体pCAGGS/MCS连接,转化大肠杆菌DH5a,氨苄青霉素筛选N-联糖基化位点单个氨基酸突变体的表达载体。经双酶切和测序证实。将真核表达质粒G1Bgl, GmG2及4个G1突变体,1个G2突变体提取后分别共转染Vero E6细胞,间接免疫荧光检测蛋白表达情况,免疫印迹实验确定糖蛋白表达情况,并经酸性MEM处理、Giemsa染色后观察细胞融合现象的发生结果1.构建了5个N-联糖基化位点单个氨基酸突变的克隆载体N134A、N235A、N347A、N399A、N928A双酶切鉴定载体长度约为2.7kb;N134A、N235A、N347A、N399A突变体长度约为2.1kb;N928A突变体长度约为1.6kb,并经测序证实。 2.构建了5个N-联糖基化位点单个氨基酸突变的表达载体G1Bgl-N134A、GlBgl-N235A、GlBgl-N347A、G1Bgl-N399A、GmG2-N928A、双酶切鉴定,载体长度为4.7kb;N134A、N235A、N347A、N399A突变体目的片段长度约为2.1kb;N928A突变体目的片段长度约为1.6kb,并经测序证实。 3.间接免疫荧光实验显示野毒株GlBgl与GmG2共转染组、G1Bgl及各N-联糖基化位点突变体转染组均有亮绿色荧光信号产生,呈胞浆分布。 4.免疫印迹实验显示野毒株GlBgl与GmG2共转染组出现两条带,分别为68KDa和55KDa,N134A突变体转染组不显示G1条带,其余各突变体转染组均显示G1、G2两条带。 5.共转染N134A-:或N928A突变体组未出现细胞融合现象,而其他突变体及野毒株GlBgl与GmG2共转染后则出现融合现象。结论G1上的134位点可能与蛋白正确折叠有密切关系,134位点突变极可能导致蛋白的错误折叠,进而无法转运出内质网。G2上的928位点对细胞融合有重要作用,提示汉坦病毒融合肽很有可能位于G2上

关键词：汉坦病毒包膜糖蛋白 N-联糖基化位点细胞融合

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地铁高密度行车时救援组织优化

都市快轨交通 2016年第4期29卷 67-70,80页

作者：郑晓民广州地铁集团有限公司广州510430

通过对广州地铁2号线历年发生的救援事件进行简要统计,得知故障源主要来自牵引控制系统,分析主要故障原因,以及救援组织中存在的主要问题,包括司机不熟悉车辆故障处理指南,调度发布救援命令不及时,现场信息沟通不畅等。结合地铁高密度... 详细信息

通过对广州地铁2号线历年发生的救援事件进行简要统计,得知故障源主要来自牵引控制系统,分析主要故障原因,以及救援组织中存在的主要问题,包括司机不熟悉车辆故障处理指南,调度发布救援命令不及时,现场信息沟通不畅等。结合地铁高密度行车阶段的特点,计算受到救援影响的列车数量并分析晚点情况。有针对性地提出救援组织优化方案,包括优化改造旁路开关;改造断电区;优化救援旅行速度,以减少列车增晚;优化救援路径,避免二次中断;优化救援组织流程,提高效率,尝试"裸车"动车等,并将优化措施应用于广州地铁6号线,取得很好的效果。

关键词：地铁运营高密度行车救援组织优化广州地铁

广州地铁5号线终点站道岔故障模式下的行车组织

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城市轨道交通研究 2016年第8期19卷 78-82页

作者：郑晓民广州地铁集团有限公司

基于终点站道岔故障先通后复的处理原则,分析了各个操作环节的时间标准,计算了终点站每副道岔发生故障后的折返能力。通过道岔典型故障案例分析,指出关键作业环节效率低和行车调整措施不足是造成列车晚点的主要原因。提出了使用多种行... 详细信息

基于终点站道岔故障先通后复的处理原则,分析了各个操作环节的时间标准,计算了终点站每副道岔发生故障后的折返能力。通过道岔典型故障案例分析,指出关键作业环节效率低和行车调整措施不足是造成列车晚点的主要原因。提出了使用多种行车组织调整方法、合理组织大小交路、制定各个环节操作的标准时间以及减少人为原因晚点的行车组织优化方案。

关键词：地铁行车组织道岔故障折返能力大小交路

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市场经济——医德医风建设的双刃剑

中国卫生事业管理 2009年第7期26卷 461-463页

作者：刘彩郑晓民王健山东大学卫生管理与政策研究中心山东济南250012 山东大学公共卫生学院

医德医风作为一种特殊的职业道德和行业风气,事关生命的诞生、延续和消亡,事关社会的和谐和稳定,其重要性不言而喻。市场经济的飞速发展对医德医风建设是一把双刃剑,具有积极和消极两方面的作用。文章通过分析市场经济的特点、医疗服务... 详细信息

医德医风作为一种特殊的职业道德和行业风气,事关生命的诞生、延续和消亡,事关社会的和谐和稳定,其重要性不言而喻。市场经济的飞速发展对医德医风建设是一把双刃剑,具有积极和消极两方面的作用。文章通过分析市场经济的特点、医疗服务市场的特殊性,指出其对医德医风建设的影响,并结合当前实际情况,提出相关政策建议。

关键词：市场经济医德医风建设双刃剑

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汉坦病毒融合作用研究进展

中国公共卫生 2010年第1期26卷 67-68页

作者：郑晓民王志玉山东大学公共卫生学院病毒学研究室教育部实验畸形学重点实验室济南250012

汉坦病毒(hantavirus,HV)属布尼亚病毒科汉坦病毒属,是肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)和汉坦病毒肺综合征(hantavirus pulmonary syndrome,HPS)的病原体.

关键词：汉坦病毒融合作用肾综合征出血热

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解决近距离煤层群开采不合理通风的途径

煤炭科学技术 2003年第F8期31卷 17-18页

作者：郑晓民马国平李建国开滦精煤股份有限公司范各庄矿业分公司，河北唐山063109

针对范各庄矿业分公司近距离煤层群巷道布置特点，对通风状况进行了分析，并就通风的不合理性，提出了解决办法。

关键词：近距离煤层群开采通风状况分析解决办法巷道布置

开滦集团公司综合防尘经验做法及存在问题分析

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水力采煤与管道运输 2016年第1期 92-95页

作者：郑晓民开滦集团有限责任公司技术管理部河北唐山063000

介绍了开滦集团公司综合防尘管理创新与技术创新经验做法,并深入分析了综合防尘方面存在的问题,提出了下一步的工作重点。

关键词：综合防尘创新问题分析

复杂条件下综采工作面防治煤层自然发火技术研究与应用

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煤炭与化工 2016年第2期39卷 76-78,84页

作者：郑晓民开滦(集团)有限责任公司河北唐山063000

通过对荆各庄煤矿2390柱综采工作面掘进、安装、回采期间的防治自然发火技术进行详细分析研究,得出目前在复杂地质条件下的工作面综合防灭火技术,为同类工作面防治自燃发火提供参考。

关键词：复杂条件综采工作面自然发火治理

采空区调压技术在工作面瓦斯治理中的研究和应用

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煤炭与化工 2016年第1期39卷 55-57页

作者：郑晓民开滦(集团)有限责任公司河北唐山063000

在唐山矿通风系统布置的基础上,分析Y486外综放工作面通风压力与瓦斯涌出变化关系进行分析,研究了利用临近上部采空区及尾巷密闭进行泄放治理瓦斯技术;通过调整通风压力,迫使Y486工作面瓦斯向临近T1455采空区和Y486尾巷密闭运移,有效降... 详细信息

在唐山矿通风系统布置的基础上,分析Y486外综放工作面通风压力与瓦斯涌出变化关系进行分析,研究了利用临近上部采空区及尾巷密闭进行泄放治理瓦斯技术;通过调整通风压力,迫使Y486工作面瓦斯向临近T1455采空区和Y486尾巷密闭运移,有效降低了Y486工作面瓦斯浓度,提高了Y486尾巷抽放浓度,保证Y486工作面安全生产。

关键词：采空区调压技术瓦斯防治