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基于16S rRNA测序技术探讨骨松益骨方对去卵巢大鼠肠道菌群的影响

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中国药理学通报 2024年第9期40卷 1752-1759页

作者：郑旭霞柴爽魏立伟张虹秦娜河南省洛阳正骨医院(河南省骨科医院) 河南郑州450016

目的基于肠道菌群探究骨松益骨方(GusongYigu decoction,GSYG)治疗绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)的机制。方法SPF级SD大鼠60只随机分成假手术组(Control)、模型组(Model)、骨松益骨方低剂量组(GSYG-L,1.25 g·kg^(-1))、骨松益骨方中剂量组(GSYG-M,2.5 g·kg^(-1)),骨松益骨方高剂量组(GSYG-H,5 g·kg^(-1))和阿仑膦酸钠组(Al,0.89 mg·kg^(-1)),每组10只。HE染色观察骨组织形态变化,micro CT观察大鼠的股骨组织结构变化;取Control组、Model组、GSYG-H组大鼠结肠粪便样本,提取DNA,利用Illumina Miseq平台进行高通量测序。结果与Control组比较,Model组大鼠骨小梁稀疏;BV/TV、***、Tb.N及BMD均明显降低(P<0.01),SMI、***明显升高(P<0.01);与Model组比较,GSYG-L、GSYG-M、GSYG-H组和Al组骨小梁数目增加,骨微结构得到改善,且BV/TV、***、Tb.N及BMD明显增加(P<0.05),SMI、***明显降低(P<0.05)。肠道菌群测序结果显示,与Control组比较,Model组大鼠肠道菌群多样性降低,厚壁菌门丰度降低,而拟杆菌门丰度增加;与Model组比较,GSYG-H组厚壁菌门丰度增加,拟杆菌门丰度减少。结论GSYG能够改善PMOP患者的骨微结构,增加骨密度,其作用机制可能与增加肠道菌群的多样性、调节肠道菌群结构有关。

关键词：骨松益骨方绝经后骨质疏松症肠-骨轴肠道菌群 16S rRNA 骨密度

基于内质网应激诱导的骨细胞凋亡探究骨松强骨方减轻去卵巢小鼠骨丢失的作用与机制

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中国中药杂志 2024年第11期49卷 2981-2990页

作者：常宇博潘博文魏立伟柴爽郑旭霞张虹丁强秦娜河南中医药大学学位与研究生教育洛阳工作部河南郑州450018 河南省洛阳正骨医院(河南省骨科医院) 河南郑州450016

基于内质网应激(ERS)诱导的细胞凋亡探究骨松强骨方(GSQG)减轻去卵巢小鼠骨丢失的作用与机制。小鼠卵巢摘除(OVX)骨质疏松造模完成后,根据随机数字法,将60只小鼠随机分为6组:假手术组,模型组,骨松强骨方低(GSQG-L)、中(GSQG-M)、高剂量(... 详细信息

基于内质网应激(ERS)诱导的细胞凋亡探究骨松强骨方(GSQG)减轻去卵巢小鼠骨丢失的作用与机制。小鼠卵巢摘除(OVX)骨质疏松造模完成后,根据随机数字法,将60只小鼠随机分为6组:假手术组,模型组,骨松强骨方低(GSQG-L)、中(GSQG-M)、高剂量(GSQG-H)组,雌二醇(E2)组,每组10只;切除双侧卵巢构建模型。术后1个月开始灌胃给药,连续给药3个月。酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清中骨形成指标骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原氨基端前肽(PINP)和骨吸收指标Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTX)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAcP-5b)的水平,使用Micro-CT观察股骨远端骨微结构的改变,HE染色观察骨组织形态,RT-qPCR检测胫骨干成骨相关基因Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨唾液酸糖蛋白(BSP)、OCN以及破骨相关基因抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、活化T细胞核因子(NFATc1)和组织蛋白酶K(CATK)mRNA的表达,TUNEL染色、免疫组化检测骨细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法检测胫骨近端骨组织ERS相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(Grp78)、蛋白激酶RNA样内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)、真核翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化e IF2α(p-eIF2α)、肌醇需求酶1α(IRE1α)、磷酸化IRE1α(p-IRE1α)、激活转录因子6(ATF6)的表达。结果显示,GSQG对去卵巢小鼠血清中OCN、PINP、TRAcP-5b、CTX骨代谢生化指标有明显改善,Micro-CT显示GSQG-H组股骨远端骨微结构明显优于其他组。与模型组比较,HE染色结果显示,GSQG-L组、GSQG-M组、GSQG-H组骨小梁明显变宽,数目增多,网状结构得到了一定程度的恢复,排列仍然整齐,部分间隙轻微增大;TUNEL阳性细胞显著减少(P<0.05,P<0.01);凋亡细胞相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、凋亡因子Bcl-2关联X蛋白(Bax)蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);成骨相关基因Col-Ⅰ、ALP、Runx2、BSP和OCN m RNA表达显著升高(P<0.01),破骨相关基因TRAP、NFATc1和CATK m RNA表达显著减少(P<0.05,P<0.01);ERS相关蛋白Grp78、p-PERK、p-eIF2、p-IRE1α、ATF6表达显著降低(P<0.05,P<0.01),各给药组中以GSQG-H组最为显著。综上研究表明,GSQG能够通过抑制去卵巢小鼠胫骨近端骨组织Grp78/PERK/e IF2α/IRE1α/ATF6信号通路,抑制骨细胞凋亡,从而有效减少去卵巢小鼠骨丢失。

关键词：内质网应激细胞凋亡骨松强骨方骨质疏松骨细胞

骨松益骨方调控Beclin 1/Bcl-2对去卵巢大鼠骨细胞凋亡和自噬的影响

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中国骨质疏松杂志 2024年第5期30卷 655-661页

作者：有曼魏立伟柴爽郑旭霞孟璐张虹何广宏秦娜河南省洛阳正骨医院(河南省骨科医院) 河南洛阳471000

目的探讨骨松益骨方(GSYG)对去卵巢(OVX)大鼠骨质疏松的作用以及对Beclin 1/Bcl-2介导的骨细胞凋亡与自噬的影响。方法将大鼠随机分成假手术组(Sham)、模型组(Model)、GSYG低、中、高剂量组[1.25、2.5、5 g/(kg·d)]。通过ELISA检测大... 详细信息

目的探讨骨松益骨方(GSYG)对去卵巢(OVX)大鼠骨质疏松的作用以及对Beclin 1/Bcl-2介导的骨细胞凋亡与自噬的影响。方法将大鼠随机分成假手术组(Sham)、模型组(Model)、GSYG低、中、高剂量组[1.25、2.5、5 g/(kg·d)]。通过ELISA检测大鼠血清中P1NP和β-CTX的水平;Micro-CT测定股骨骨密度以及微结构的变化;HE染色检查骨组织的形态学变化;TUNEL染色观察骨细胞凋亡;免疫组化观察骨组织中LC3的变化;Western blot法检测大鼠胫骨近端Bcl2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved PARP、LC3、Beclin1的表达变化;免疫共沉淀法检测Beclin1和Bcl-2的相互作用。结果与模型组相比,GSYG中、高剂量组的P1NP和β-CTX水平显著降低(P<0.01);GSYG各剂量组骨的微结构明显改善(P<0.01);骨小梁明显增多;骨细胞凋亡明显减少(P<0.01);Bcl-2的表达显著升高(P<0.01),Bax表达显著降低(P<0.05或P<0.01),GSYG高剂量组中的cleaved caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达显著降低(P<0.01),GSYG中、高剂量组的LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值与Beclin1蛋白表达显著升高(P<0.01);免疫组化染色显示,与模型组相比GSYG各剂量组LC3蛋白显著增加(P<0.05或P<0.01);免疫共沉淀的结果提示,模型组Beclin1和Bcl-2相互作用较强,而GSYG高剂量组中两者结合均减少。结论GSYG对OVX大鼠的骨质疏松发展有抑制作用,其机制与其调控Beclin 1/Bcl-2介导的凋亡与自噬有关。

关键词：骨松益骨方 Beclin 1 Bcl-2 凋亡自噬

四川九龙古茶树种质资源农艺性状遗传多样性研究

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植物遗传资源学报 2024年第2期25卷 249-258页

作者：牛小军包兴伟郑旭霞秦秀珍邱金华王小亚沈世魁辛国田赵芸黄海涛杭州市农业科学研究院茶叶研究所杭州310024 浙江省茶叶集团股份有限公司杭州310008 九龙县魁多镇人民政府四川甘孜626299

为探究甘孜九龙古茶树种质资源的分布区域、形态特征和农艺性状的遗传多样性,通过基本统计分析、变异系数、多样性指数、主成分分析和聚类分析,对67份九龙古茶树种质资源的21个质量性状和12个数量性状进行了遗传多样性分析和评价。结果... 详细信息

为探究甘孜九龙古茶树种质资源的分布区域、形态特征和农艺性状的遗传多样性,通过基本统计分析、变异系数、多样性指数、主成分分析和聚类分析,对67份九龙古茶树种质资源的21个质量性状和12个数量性状进行了遗传多样性分析和评价。结果表明:九龙古茶树资源农艺性状变异丰富,除树型和树姿外,质量性状的遗传多样性指数范围为0.17~1.27,平均为0.82,其中以花瓣颜色多样性指数最小,果实形状的多样性指数最大;数量性状变异系数范围为1.38%~29.94%,平均为15.27%,以叶面积的变异系数最高,萼片数的变异系数最低。主成分分析显示,前11个主成分累计贡献率在76.49%,其中叶宽、叶长、叶色和花瓣颜色等性状是九龙古茶树种质资源农艺性状表现出差异的主要因素。21个质量性状聚类分析结果显示,在欧式距离为16.9时,可将67份九龙古茶树种质资源划分为4个类群,聚类结果与海拔高度及地理位置无明显相关性。本次调查的古茶树种质资源中有13份种质位于海拔2400 m以上,长势良好,展现出良好的抗寒性和抗旱性。此外,还有2份种质花瓣颜色特异,1份种质籽粒较大且结果率高。研究结果为九龙古茶树种质资源收集、保护和利用奠定一定基础。

关键词：九龙古茶树农艺性状多样性分析

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基于肠道菌群及其代谢物探析骨松益骨方抗绝经后骨质疏松症

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中医学报 2024年第7期39卷 1388-1393页

作者：郑旭霞魏立伟谢艳张虹秦娜河南省洛阳正骨医院(河南省骨科医院) 河南郑州450016

绝经后卵巢功能衰竭引起的雌激素缺失是绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)的诱发因素,而且雌激素缺乏也会诱发肠道菌群失调,最终促使骨的吸收及破骨细胞的激活。肠道菌群紊乱易引起肠道上皮细胞屏障功能损伤,使有害... 详细信息

绝经后卵巢功能衰竭引起的雌激素缺失是绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)的诱发因素,而且雌激素缺乏也会诱发肠道菌群失调,最终促使骨的吸收及破骨细胞的激活。肠道菌群紊乱易引起肠道上皮细胞屏障功能损伤,使有害代谢物可以顺利透过肠道屏障入血,诱发机体T细胞免疫反应,生成大量促破骨细胞生成因子,促使破骨细胞激活及骨的吸收,引发骨质疏松。中药复方具有多组分、多靶点、多层次、见效快等特点,在调节肠道菌群方面优势突出,对维持肠道内有益菌和有害菌的平衡起重要作用。骨松益骨方由当归、淫羊藿、杜仲、黄芪等组成,方中黄芪、党参、当归等皆可促进肠道益生菌的增长、抑制有害菌的增殖,从而调节肠道菌群的组成。

关键词：绝经后骨质疏松症肠道菌群代谢产物骨松益骨方

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非一致地震激励下大跨斜拉桥的地震反应

福州大学学报（自然科学版） 2013年第4期41卷 528-533页

作者：许莉郑旭霞福州大学土木工程学院福建福州350116

为了研究非一致地震激励下大跨斜拉桥的地震响应规律,利用大型通用有限元分析软件ANSYS10.0建立该桥的动力计算模型,然后应用动力时程方法分析其地震反应,探讨波传播效应对非一致地震激励下大跨度双塔斜拉桥地震反应的影响规律.研究表明... 详细信息

为了研究非一致地震激励下大跨斜拉桥的地震响应规律,利用大型通用有限元分析软件ANSYS10.0建立该桥的动力计算模型,然后应用动力时程方法分析其地震反应,探讨波传播效应对非一致地震激励下大跨度双塔斜拉桥地震反应的影响规律.研究表明,对大跨度斜拉桥而言,一致地震激励不能控制其抗震设计,要对大跨度斜拉桥的地震反应进行准确分析,场地条件及行波效应必须予以考虑.

关键词：斜拉桥地震反应场地条件行波效应非一致激励

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纤维素键合手性固定相拆分盐酸奈福泮对映体

中国现代应用药学 2019年第3期36卷 278-280页

作者：郑旭霞刘培建河南省洛阳正骨医院郑州450000

目的建立一种用键合纤维素手性固定相的HPLC拆分盐酸奈福泮对映异构体。方法盐酸奈福泮的分离使用Chiralpak IC色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为正己烷-异丙醇(90∶10,0.1%DEA),流速为0.8 mL·min^(-1),检测波长267 nm,柱温25℃。... 详细信息

目的建立一种用键合纤维素手性固定相的HPLC拆分盐酸奈福泮对映异构体。方法盐酸奈福泮的分离使用Chiralpak IC色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为正己烷-异丙醇(90∶10,0.1%DEA),流速为0.8 mL·min^(-1),检测波长267 nm,柱温25℃。结果盐酸奈福泮对映体在键合纤维素手性固定相上能够完全分离,分离度为6.53。结论该方法可快速实现盐酸奈福泮对映体的分离。

关键词：高效液相色谱法 Chialpak IC手性柱对映体分离盐酸奈福泮

奎宁衍生物键合杂化介孔硅胶手性固定相的制备及应用研究

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奎宁衍生物键合杂化介孔硅胶手性固定相的制备及应用研究

作者：郑旭霞郑州大学

学位级别：硕士

手性是自然界的物质属性之一。大多数手性药物以外消旋体的形式存在。而单一构型的药物由于其作用位点明确，见效快，已经成为药物研发的璀璨明星。因而，各种新型的手性药物的分离与分析技术应运而生。其中，手性固定相法应用最为广泛... 详细信息

手性是自然界的物质属性之一。大多数手性药物以外消旋体的形式存在。而单一构型的药物由于其作用位点明确，见效快，已经成为药物研发的璀璨明星。因而，各种新型的手性药物的分离与分析技术应运而生。其中，手性固定相法应用最为广泛。球形氨丙基乙基桥连介孔硅胶（APEPMOs）中不仅含有氨丙基和乙撑基两种官能团，球形形貌，而且具有高度有序的介孔通道、较大的比表面积、较高的容量和机械强度，不仅可以直接作为常规液相色谱柱填料，并且其侧链上的氨丙基为富电子的活性官能团，可以为后续的衍生化修饰提供便利;其通透性较好，在快速分离分析方面有一定的优势。而目前为止，成功制备球形氨丙基修饰的PMOs的报道还比较少。而对于手性选择剂奎宁而言，一直以来，人们都致力于制备奎宁、奎宁衍生物键合手性固定相及正相条件下拆分手性对映体的研究，但很少有文献报道在反相洗脱模式下，考察流动相变量（如流动相组成等）对手性化合物拆分的影响。因此，手性选择剂奎宁衍生物与杂化介孔硅胶的结合，和对其在反相条件下应用的研究有着理论基础和必要性。本文旨在开发一种新型手性固定相，为建立高效、快速的手性药物拆分方法提供新型的分离材料。以APEPMOs为固定相的键合基质，以QN为手性选择剂，将QN键合到介孔硅胶上，制备出新型奎宁衍生物键合手性固定相，并将其制备成手性色谱柱，评价了自制手性柱的色谱性能及在反相洗脱模式下对多种手性药物的拆分能力。首先，以1,2-二（三乙氧基硅基）乙烷（BTSE）和3-氨丙基三乙氧基硅烷（KH-550）为双硅源，以阳离子表面活性剂十八烷基三甲基氯化铵（C18TACl）为模板，乙醇为助溶剂，在碱性条件下通过一步共缩聚合成新型氨丙基乙基桥连球形介孔硅胶;再以偶氮二异丁腈为引发剂，与O-9-（叔丁酯氨基甲酰）奎宁（QN）反应，合成奎宁衍生物键合新型杂化介孔硅胶手性固定相。并对每一步的反应产物进行相应的纯化和表征，表征方法主要有傅里叶红外分光光度计（FT-IR）、元素分析、扫描电子显微镜（Scanning electron microscope, SEM）以及氮气吸附实验，最终得到结构明确的手性固定相。采用湿法装柱，以三氯甲烷-二氧六环（50/50, V/V）为匀浆液，将合成的手性固定相填装于不锈钢液相色谱柱中，制得新型手性液相色谱柱。其次，研究自制奎宁衍生物键合氨丙基介孔硅胶手性色谱柱在高效液相色谱（HPLC）中的应用。在反相洗脱模式下，扁桃酸及其衍生物邻氯扁桃酸、酮洛芬3种手性药物达到了基线分离（Rs>1.5），并系统地考察了流动相改性剂的浓度、柱温及流速等因素对手性药物对映体分离的影响。最后，本文考察了自制手性色谱柱的重复性和稳定性，对三个不同批次的自制手性色谱柱进行考察，得知其手性识别能力及柱效基本保持一致，从而说明自制手性柱的重复性较好;通过对同一自制手性色谱柱在不同时间段色谱性能的考察，发现其手性识别能力减弱，柱效有所降低，说明其稳定性不太好。可能由于键合量问题，部分药物对映体未能达到基线分离。

关键词：高效液相色谱法奎宁衍生物手性固定相对映体分离

茶树新品系“武阳早”和“武阳香”的选育研究

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茶树新品系“武阳早”和“武阳香”的选育研究

作者：郑旭霞中国农业科学院

学位级别：硕士

茶树新品种的选育和推广是茶产业最基础的工作,在茶叶生产增值的各项技术因素中,良种要占30%～40%。上世纪90年代中期,浙江省武义县农业局特产站开始“武阳春雨”茶配套品种的选育工作,从引进的福鼎大白茶实生后代中选出2个单株,一株以... 详细信息

茶树新品种的选育和推广是茶产业最基础的工作,在茶叶生产增值的各项技术因素中,良种要占30%～40%。上世纪90年代中期,浙江省武义县农业局特产站开始“武阳春雨”茶配套品种的选育工作,从引进的福鼎大白茶实生后代中选出2个单株,一株以发芽特早、品质较全面为特点,另一株以香气独特、耐冲泡为特色,分别命名为武阳早、武阳香。2004～2009年,分别在武义县布置品系比较试验,并参加武汉、成都和福安等点的全国区域试验,对武阳早、武阳香这两个品系进行了农艺性状、产量、茶类适制性和品质、生化成分以及抗性的系统鉴定评价。结果表明：武阳早：灌木型、中叶类、特早生、高产优质绿茶品种。树姿直立,分枝密,叶片稍上斜状着生;中叶,平均叶长9.9cm，叶宽4.4cm,平均叶脉7对,叶椭圆形，叶色绿,叶面微隆起,叶身平，叶缘微波状,叶尖钝尖,叶基楔形,叶齿稀、中、中,叶质中;特早生,一芽一叶有效积温小于50℃,春茶一芽二叶绿色,芽尖稍黄,茸毛较多。芽头肥壮,平均一芽三叶长3.1cm,一芽三叶百芽重28.0g。产量高,耐采性好,芽头持嫩性强,针芽形、扁形和毛峰形绿茶均适制。适应性好,抗旱性强,抗寒性中等。可作为“武阳春雨”的主栽品种。注意防治小绿叶蝉和茶橙樱螨。武阳香：灌木型,中叶类,中生,优质高香绿茶品种。树姿半开张,分枝中等,叶片上斜状着生;中叶,平均叶长10.7cm,叶宽4.1cm,平均叶脉9对,主脉稍弯向一侧，叶长椭圆形,叶色绿稍有光泽,叶面平,叶身平,叶缘微波状,叶尖渐尖,叶基楔形,叶齿中、浅、中,叶质中;春茶一芽二叶绿色,茸毛中等,平均一芽三叶长4.1cm,一芽三叶白芽重41.8g。芽叶肥硕,制茶品质达到或超过福鼎大白茶,适制针形茶和毛峰形绿茶,花香显,滋味浓爽,品种特性突出,可作为“武阳春雨”的搭配品种予以栽培。抗寒性中等偏弱,越冬后有局部冻枝,抗虫性与福鼎大白茶相当;地区适应性有待于在以后的试验中继续观察检测。

关键词：茶树新品系选育武阳早武阳香