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基于BLI技术的BamAβ-barrel结合化合物检测方法的建立

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中国抗生素杂志 2024年第4期49卷 448-456页

作者：郑怡凡朱小红陈明华卢宇魏元娟时文静司书毅李妍中国医学科学院、北京协和医学院、医药生物技术研究所、国家新药(微生物)筛选实验室北京100050

目的以革兰阴性菌外膜蛋白折叠辅助因子关键蛋白BamA为靶蛋白,基于生物膜干涉(Biolayer interferometry,BLI)技术建立化合物与BamA蛋白β折叠结构域(BamA_(β-barrel))结合活性的评价方法,为建立靶向BamA蛋白的抗革兰阴性菌先导物奠定... 详细信息

目的以革兰阴性菌外膜蛋白折叠辅助因子关键蛋白BamA为靶蛋白,基于生物膜干涉(Biolayer interferometry,BLI)技术建立化合物与BamA蛋白β折叠结构域(BamA_(β-barrel))结合活性的评价方法,为建立靶向BamA蛋白的抗革兰阴性菌先导物奠定基础。方法应用BLI方法检测BamA_(β-barrel)与已知的阳性化合物darobactin的结合活性。原核表达并纯化带有His标签的大肠埃希菌BamA_(β-barrel)蛋白,使用表面活性剂LDAO对其进行复性和折叠;使用生物素标记折叠和未折叠蛋白,并结合到超级链霉亲和素(super streptavidin,SSA)生物传感器,然后检测蛋白与不同浓度的darobactin结合信号的变化,同时做无蛋白或darobactin稀释液对照;空白对照采用未结合生物素化的BamA_(β-barrel)蛋白的传感器,检测上述系列稀释样品。相应信号采用Steady state analysis方式拟合分析,计算平衡常数(KD)值。结果成功获得高纯度的折叠状态BamA_(β-barrel)蛋白,通过BLI技术检测到折叠状态的BamA_(β-barrel)与阳性化合物darobactin具有良好结合活性且呈现浓度依赖性,R^(2)为0.9998,KD值为(2.2E-06±8.0E-08)M。结论基于BLI技术成功建立了折叠状态的BamA_(β-barrel)-化合物结合活性的评价方法,为后续BamA蛋白靶向性抗革兰阴性菌抗生素的发现建立基础。

关键词：革兰阴性菌 Darobactin BamAβ-barrel 生物膜干涉技术

BAM复合体及其靶向性抗革兰阴性菌药物研究进展

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中国抗生素杂志 2023年第6期48卷 617-624页

作者：朱小红郑怡凡张晶李妍司书毅中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室北京100050

革兰阴性菌耐药问题是目前全球面对的最严重的公共卫生问题之一,耐药菌的不断出现与传播使得细菌感染的预防与治疗面临严峻挑战。外膜蛋白(outer membrane proteins,OMPs)是革兰阴性菌特有的外膜结构的重要蛋白,对于外膜的形成和稳定起... 详细信息

革兰阴性菌耐药问题是目前全球面对的最严重的公共卫生问题之一,耐药菌的不断出现与传播使得细菌感染的预防与治疗面临严峻挑战。外膜蛋白(outer membrane proteins,OMPs)是革兰阴性菌特有的外膜结构的重要蛋白,对于外膜的形成和稳定起到关键的作用,而OMPs在外膜上的正确折叠和组装是其功能正常发挥的基础。β-桶状蛋白折叠组装辅助因子(β-barrel assembly machine,BAM)即BAM复合体在外膜蛋白的折叠装配中起到至关重要的作用。本文对BAM复合体的结构与功能,以及靶向BAM复合体的抗革兰阴性菌先导药物研究进展等方面进行综合论述,以期为新型抗革兰阴性菌药物的发现提供参考。

关键词：革兰阴性菌耐药性 OMPs BAM复合体

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基于集成学习方法的糖尿病预测和分析

基于集成学习方法的糖尿病预测和分析

作者：郑怡电子科技大学

学位级别：硕士

初中语文朗读教学中的审美创造核心素养培育研究

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初中语文朗读教学中的审美创造核心素养培育研究

作者：郑怡萱青海师范大学

学位级别：硕士

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MXene纳滤膜的制备及其分离性能研究

MXene纳滤膜的制备及其分离性能研究

作者：郑怡玲西安工业大学

学位级别：硕士

由于人口增长和淡水资源污染造成的水资源短缺,已成为一个紧迫的全球性问题。纳滤膜分离技术因其高的截留效率、低能耗、操作简便和环境友好等优点成为解决水资源不足问题的有效方法。然而,传统的聚合物纳滤膜在废水处理中存在选择性和... 详细信息

由于人口增长和淡水资源污染造成的水资源短缺,已成为一个紧迫的全球性问题。纳滤膜分离技术因其高的截留效率、低能耗、操作简便和环境友好等优点成为解决水资源不足问题的有效方法。然而,传统的聚合物纳滤膜在废水处理中存在选择性和渗透性之间的“trade-off”效应。基于二维（Two-dimensional,2D）纳米材料MXene基膜具有独特的原子级厚度和排列整齐的层间通道,在分子分离和传输方面表现出巨大的潜力,这为其应用带来了广阔前景。本文首先合成了二维层状Ti3C2Tx MXene膜,但其在水环境应用过程中存在易溶胀和分离性能仍较差等问题。为了解决MXene膜的抗溶胀问题和进一步提升膜的分离性能,通过纳米纤维素（CNFs）和β-酮烯胺COF插层MXene制备复合纳滤膜,从而实现对有机污染物分离的高效分离。具体研究内容如下:（1）通过简单温和的Li F/HCl刻蚀获得带负电荷的少层Ti3C2Tx纳米片,在真空抽滤辅助下成功制备了层状Ti3C2Tx膜。与其他二维纳米材料相比,堆叠的Ti3C2Tx纳米片具有更好的刚性从而表现出更加均匀和排列整齐的纳米通道。同时,MXene纳米片表面上丰富的极性末端基团（-O、-OH、-F）赋予了膜优异的表面亲水性和成膜能力。研究发现,最佳的Ti3C2Tx-0.7膜水通量为50.6 L m-2 h-1,对Na2SO4截留率达到50.49%。Ti3C2Tx-0.7膜表现出较好的抗生素分子分离性能和良好的通量。在不同类型染料的测试中,它保持较高的染料截留率（>94%）和水通量(～90 L m-2 h-1)。Ti3C2Tx膜的成功制备为后续高性能MXene分离膜的设计提供了基础。（2）在Ti3C2Tx膜的基础上,通过纳米纤维素诱导自组装策略,研制了一种多孔、刚柔并济且抗溶胀的高选择性Ti3C2Tx/CNFs纳滤膜。柔性、亲水的羧基化纳米纤维（CNFs）的插层不仅起到了桥梁的作用,将相邻的二维Ti3C2Tx片层结合在一起,增强了机械强度;还起到了支柱的作用,有效地固定了层间距离,提高了Ti3C2Tx膜的抗溶胀性能。此外,CNFs插层到Ti3C2Tx的层间,能明显增加层间间距,为快速和选择性分子传输创造更多空隙。当Ti3C2Tx/CNFs纳滤膜应用于抗生素分离时,表现出良好的抗溶胀性能（高达76h）,同时具有高抗生素截留率（对阿奇霉素为99.0%）和高纯水通量(约为26.0 L m-2 h-1 bar-1)。（3）为了进一步提升膜的分离性能和抗溶胀性能,以三醛基间苯三酚和对苯二胺,4,4'-二氨基联苯和1,3,5-三（4-氨基苯基）苯为原料,通过原位生长将三种不同连接体长度的β-酮烯胺COF（即Tp Pa、Tp BD和Tp TAPB）共价键桥连到氨基化的Ti3C2TxMXene纳米片表面,开发出一类具有高结晶度、传输通道结构稳定、可控的MXene/COF杂化膜材料。将COF插层到Ti3C2Tx-NH2纳米片的层间,不仅增加了纳米片的层间间距,还提供了由二维层状MXene传输通道和三维COF微/介孔结构组成的多级分子筛孔,从而提高了MXene膜的通量。在去除有机染料的过程中,MXene/COF杂化膜表现出卓越的水通量,最高可达～300 L m-2 h-1 bar-1,超过了大多数传统的界面聚合膜和目前最先进的二维材料膜。同时还实现了高染料截留率（刚果红98.2%、铬黑T 98.7%、甲基蓝96.4%和甲基橙97.2%）。MXene/COF杂化膜的高分离性能主要来源于尺寸筛分、静电排斥以及多孔COF的吸附能力。在本论文中,利用简单且可扩展的纳米纤维素和COF插层策略制备了MXene纳滤膜,该膜有望应用于海水淡化、工业有机污染物废水处理和水环境修复等多种领域。

关键词： Ti3C2Tx MXene 膜分离纳滤膜水处理染料去除

刑事附带民事公益诉讼“四要素”规则建构——以野生动物保护为视角

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社会科学家 2024年 100-105页

作者：钟三宇郑怡馨福建江夏学院法学院福州市鼓楼人民法院

《关于检察公益诉讼案件适用法律若干问题的解释》为刑附民公益诉讼规则供给法律依据,也为惩治破坏野生动物资源犯罪提供了一种全新路径。然而,该制度运行以来,人民法院在具体适用中出现程序适用、实践样态、审判认定等方面的实践困境,... 详细信息

《关于检察公益诉讼案件适用法律若干问题的解释》为刑附民公益诉讼规则供给法律依据,也为惩治破坏野生动物资源犯罪提供了一种全新路径。然而,该制度运行以来,人民法院在具体适用中出现程序适用、实践样态、审判认定等方面的实践困境,造成生态环境与司法实务之间的冲突。野生动物保护刑附民公益诉讼制度适用失当的原因在于保护法益的认知模糊、刑事惩罚与民事赔偿的衔接不畅,以及忽略检察机关与其他组织在公益保护上的协同作用等。为此,构建“诉前阶段-审查阶段-判决阶段-配套制度”四要素审理规则,遵循生态整体主义进路,合理续造刑附民公益诉讼具体规则构建,以确保生态文明建设与司法审判的深度融合,为野生动物资源筑起保护屏障,为生物多样性和生态安全贡献司法力量。

关键词：野生动物保护刑附民公益诉讼 “四要素”规则生态保护法益衔接机制

没食子酸衍生物-氧化石墨烯复合物的制备及其抗真菌性能研究

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没食子酸衍生物-氧化石墨烯复合物的制备及其抗真菌性能研究

作者：郑怡琳河北科技师范学院

学位级别：硕士

本论文以没食子酸（Gallic acid,GA）为先导化合物合成3种新型的唑类修饰没食子酸衍生物（Azole modified Gallic acid derivatives,AGAs）,以不同尺寸氧化石墨烯（Graphene oxide,GO）为载体生成复合物。研究了没食子酸衍生物及其复合... 详细信息

本论文以没食子酸（Gallic acid,GA）为先导化合物合成3种新型的唑类修饰没食子酸衍生物（Azole modified Gallic acid derivatives,AGAs）,以不同尺寸氧化石墨烯（Graphene oxide,GO）为载体生成复合物。研究了没食子酸衍生物及其复合物对小麦赤霉菌（Fusarium graminearum,***）与油菜菌核菌（Sclerotinia sclerotiorum,***）的抑菌活性。将GA进行酚羟基保护得到化合物3,4,5-三甲氧基苯甲酸（Eudesmic acid,EA）,分别与咪唑（Imidazole,Im）、吡唑（Pyrazole,Py）和苄氯反应得到没食子酸衍生物（Gallic acid derivatives,AGAs）。体外抑菌试验结果表明:AG As显著抑制了***的生长,其中化合物EA-Im-Cl的EC值最低为0.42 mg/m L,在浓度0.8 mg/m L时对菌丝的抑制率达到73.46%。田间试验结果表明:化合物EA-Im-Cl在浓度0.4 mg/m L时对*** rum的防治效果达到72.11%。计算表明:EA-Im-Cl中形成一个大的离域结构,电子从菌丝细胞膜受体向离域区域稳定流动形成电子转移复合物,达到抗真菌作用。将没食子酸衍生物与两种尺寸氧化石墨烯（Graphene oxide,GO;small size Graphene oxide,s GO）分别复配得到没食子酸衍生物-常规氧化石墨烯复合物（GO-AGAs）和没食子酸衍生物-小尺寸氧化石墨烯复合物（s GO-AGAs）。生物产量结果表明:在0.8 mg/m L时,相对于AGAs（EA-Im、EA-I m-Cl、EA-Py）,GO-AGAs（GO-EA-Im、GO-EA-Im-Cl、GO-EA-Py）对菌丝抑制率有所提高（***:28.85%、26.03%、11.21%;*** rum:18.89%、16.47%、16.97%）,s GO-AGAs（s GO-EA-Im、s GO-EA-I m-Cl、s GO-EA-Py）进一步提高菌丝抑制率（***:31.02%、29.06%、15.31%;***:18.48%、19.04%、19.05%）。相比于GO,s GO作为一种新型纳米材料,具有更大的比表面积,与药物复合后具有更好的协同增效作用,从而进一步提高没食子酸衍生物对菌丝的抑制效果。

关键词：抗真菌活性唑类没食子酸氧化石墨烯

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粮食收储制度市场化改革：回顾、反思及启示

玉米科学 2024年

作者：郑怡吕开宇丁永潮朱钰中国农业科学院农业经济与发展研究所中国社会科学院农村发展研究所中共辽宁省委党校

本文从大豆与玉米联动视角，回顾了新一轮粮食收储制度市场化改革的原因及历程，总结了改革成就与经验教训，并对改革中存在的问题及原因进行分析。分析发现：大豆与玉米收储制度市场化改革尚存在市场运行不畅，价格机制难以发挥调节生... 详细信息

本文从大豆与玉米联动视角，回顾了新一轮粮食收储制度市场化改革的原因及历程，总结了改革成就与经验教训，并对改革中存在的问题及原因进行分析。分析发现：大豆与玉米收储制度市场化改革尚存在市场运行不畅，价格机制难以发挥调节生产的作用；生产者补贴制度成本高与效率低并存，部分补贴转化成土地租金；国内外大豆与玉米价格倒挂，高产量与高进口的矛盾再次出现等问题。其原因在于：国家通过扩大大豆与玉米的生产者补贴差额来保障大豆供给；缺乏准确的农业生产决策的信息系统，难以为精细化的补贴政策提供支撑；大豆与玉米国际竞争力偏低，单产与美国差距明显；贸易保护空间用尽，关税“防火墙”作用失效。基于对大豆与玉米收储制度市场化改革效果以及存在问题的分析和总结，提出进一步深化粮食收储制度市场化改革的启示。

关键词：粮食收储制度市场化改革价格机制政府调控国际竞争力

丝网印刷还原氧化石墨烯改性蚕丝织物的导电与电热性能

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纺织学报 2024年第3期45卷 122-128页

作者：陈锟许晶莹郑怡倩李加林洪兴华浙江理工大学纺织科学与工程学院(国际丝绸学院) 浙江杭州310018 浙江理工大学丝绸与时尚文化研究中心浙江杭州310018

为探究组织结构与丝网印刷次数对蚕丝织物导电性、耐水洗性以及电热性能的影响,设计缎纹组织、斜纹组织、重纬组织3种结构,通过丝网印刷工艺制备氧化石墨烯(GO)改性蚕丝织物,经过原位还原制得还原氧化石墨烯(RGO)改性导电蚕丝织物。借... 详细信息

为探究组织结构与丝网印刷次数对蚕丝织物导电性、耐水洗性以及电热性能的影响,设计缎纹组织、斜纹组织、重纬组织3种结构,通过丝网印刷工艺制备氧化石墨烯(GO)改性蚕丝织物,经过原位还原制得还原氧化石墨烯(RGO)改性导电蚕丝织物。借助扫描电子显微镜和X射线衍射仪对RGO改性蚕丝织物进行表观形态观察与晶体结构表征,分析了RGO改性蚕丝织物的导电性、耐水洗性和电热性能。结果表明:随着丝网印刷次数的增加,织物的电阻率逐渐减小;相同丝网印刷次数下电阻率最小的为RGO改性重纬蚕丝织物,经9次水洗后,丝网印刷5次所得RGO改性缎纹、斜纹、重纬蚕丝织物的电阻率分别增大了0.710、0.472、0.308 kΩ·cm;相比RGO改性斜纹和重纬蚕丝织物,RGO改性缎纹蚕丝织物具有较好的电热性能,在0.025 A的恒定电流下以10℃/s的升温速率达到96℃的饱和温度。通过丝网印刷工艺制备的RGO改性蚕丝织物在智能可穿戴纺织品领域具有良好应用潜力。

关键词：蚕丝织物丝网印刷组织结构还原氧化石墨烯导电性能电热性能