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霍山石斛UDP-鼠李糖合成酶的克隆及功能分析

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中国中药杂志 2024年

作者：黄晓陈创博郑志玉王广林宋程戴军韩邦兴易善勇安徽中医药大学药学院皖西学院安徽省中药生态农业工程研究中心安徽省大别山中医药研究院分析测试中心

鼠李糖合成酶（rhamnose synthase， RHM）催化合成的UDP-鼠李糖，是植物体内合成鼠李糖糖苷类次生代谢产物的重要糖供体。该研究基于已报道的鼠李糖合成酶，通过序列比对从霍山石斛本地化基因数据库中筛选出1条RHM基因（DhuRHM）。克... 详细信息

鼠李糖合成酶（rhamnose synthase， RHM）催化合成的UDP-鼠李糖，是植物体内合成鼠李糖糖苷类次生代谢产物的重要糖供体。该研究基于已报道的鼠李糖合成酶，通过序列比对从霍山石斛本地化基因数据库中筛选出1条RHM基因（DhuRHM）。克隆该基因并进行生物信息学分析及体外功能验证，结果显示DhuRHM的开放阅读框为2 016 bp，编码蛋白的氨基酸数目为671，预测其大小为75.43 kDa，理论等电点为6.21。亚细胞定位分析表明DhuRHM定位于细胞膜，多序列比对及系统进化树显示，DhuRHM有植物RHM家族的特征结构域（GxxGxxG/A和YxxxK），且与其他物种的RHM具有同源性。体外酶活试验表明DhuRHM可体外催化UDP-葡萄糖生成UDP-鼠李糖。此外，RT-qPCR检测发现DhuRHM在茎的表达量高于叶和根，4种非生物胁迫（高温、低温、干旱、紫外）及MeJA处理下，紫外、低温及高温胁迫上调DhuRHM表达较为显著。该研究首次从霍山石斛中获得鼠李糖合成酶并完成其功能鉴定，进一步丰富了植物RHM家族的研究，为霍山石斛UDP-鼠李糖生物合成途径以及相关代谢产物应对环境胁迫等研究提供参考。

关键词：霍山石斛鼠李糖合成酶黄酮苷功能鉴定

霍山石斛DhuCYP75B1基因克隆、表达模式及生物信息学分析

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分子植物育种 2024年

作者：陈创博陆海波张钰黄晓郑志玉高新怡易善勇韩邦兴皖西学院安徽省中药生态农业工程研究中心安徽省大别山中医药研究院安徽中医药大学药学院

霍山石斛作为药用石斛中上品，富含柚皮素、芹菜素、槲皮素、夏佛塔苷等类黄酮物质。本研究依据课题组前期的霍山石斛三种不同栽培模式转录组测序数据，筛选并克隆得到霍山石斛类黄酮生物合成途径中显著差异表达的CYP基因(DhuCYP75B1)... 详细信息

霍山石斛作为药用石斛中上品，富含柚皮素、芹菜素、槲皮素、夏佛塔苷等类黄酮物质。本研究依据课题组前期的霍山石斛三种不同栽培模式转录组测序数据，筛选并克隆得到霍山石斛类黄酮生物合成途径中显著差异表达的CYP基因(DhuCYP75B1)。运用生物信息学方法对DhuCYP75B1蛋白的结构功能展开分析，结果显示DhuCYP75B1开放阅读框为1 554 bp，编码517个氨基酸，终止密码子为TAA，分子量为56.70 kD，理论等电点为6.86，具有跨膜结构域，为亲水酸性蛋白，属于细胞色素P450超家族。系统进化分析表明DhuCYP75B1与兰科小兰屿蝴蝶兰亲缘关系较近，与天南星科的花烛和姜科的姜亲缘关系较远，符合植物分类学特征。此外，实时荧光定量PCR结果显示DhuCYP75B1在叶中的表达量最高，能够响应低温胁迫，并受到茉莉酸甲酯、脱落酸信号调控。本实验结果为进一步研究不同栽培模式下霍山石斛关键酶基因DhuCYP75B1的功能提供了科学依据。

关键词：霍山石斛 DhuCYP75B1 基因克隆表达模式生物信息学

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霍山石斛黄烷酮合酶Ⅱ的克隆及功能分析

中国中药杂志 2024年第1期49卷 70-79页

作者：陆海波黄晓郑志玉陈创博沈晓晓高新怡张艳梅彭华胜韩邦兴易善勇皖西学院生物与制药工程学院、大别山中医药研究院安徽省中药生态农业工程研究中心安徽六安237012 中国中医科学院中药资源中心道地药材品质保障与资源持续利用全国重点实验室北京100700

黄酮碳苷是一类广泛参与植物防御反应且有着广泛药理活性的天然产物,同时也是霍山石斛中一类重要活性成分。黄烷酮合酶Ⅱ已被证实是植物黄酮碳苷合成途径的关键酶,其催化产物2-羟基黄烷酮是多数已报道黄酮碳苷合成的前体化合物。该研究... 详细信息

黄酮碳苷是一类广泛参与植物防御反应且有着广泛药理活性的天然产物,同时也是霍山石斛中一类重要活性成分。黄烷酮合酶Ⅱ已被证实是植物黄酮碳苷合成途径的关键酶,其催化产物2-羟基黄烷酮是多数已报道黄酮碳苷合成的前体化合物。该研究基于已报道的黄烷酮合酶Ⅱ氨基酸序列,从构建的霍山石斛基因组本地化数据库中筛选并验证出一个黄烷酮合酶Ⅱ(DhuFNSⅡ)基因,验证其功能发现该酶可体外催化柚皮素和乔松素分别生成芹菜素和白杨素。DhuFNSⅡ的开放阅读框(ORF)为1 644 bp,编码547个氨基酸,亚细胞定位显示该蛋白定位在内质网上。RT-qPCR结果表明DhuFNSⅡ在茎中的表达量最高,其次是叶、根。霍山石斛经4种生长过程中常遇的非生物胁迫处理后,各组织中DhuFNSⅡ等目标基因的表达量均发生显著上调,但在各处理组中的上调程度却各不相同,其中干旱和冷胁迫对基因表达量影响更为显著。通过对DhuFNSⅡ的鉴定与功能分析,将有助于解析霍山石斛品质代谢物黄酮碳苷形成的分子机制,并为其品质形成及科学栽培提供参考。

关键词：霍山石斛黄烷酮合酶Ⅱ 黄酮碳苷催化活性非生物胁迫

针刺改善CFA小鼠炎性痛的脊髓靶标筛选及Lgals3bp参与镇痛的机制研究

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针刺改善CFA小鼠炎性痛的脊髓靶标筛选及Lgals3bp参与镇痛的机制...

作者：郑志玉天津中医药大学

学位级别：硕士

目的:脊髓作为疼痛信息的初级整合中枢,通过整合穴位局部针刺刺激信号与疼痛部位伤害性刺激信号,上传至脑内,并将各高级中枢发放的下行抑制疼痛信号向下传导,在针刺镇痛过程中发挥重要作用,然而脊髓部位参与针刺镇痛的具体靶标及作用机... 详细信息

目的:脊髓作为疼痛信息的初级整合中枢,通过整合穴位局部针刺刺激信号与疼痛部位伤害性刺激信号,上传至脑内,并将各高级中枢发放的下行抑制疼痛信号向下传导,在针刺镇痛过程中发挥重要作用,然而脊髓部位参与针刺镇痛的具体靶标及作用机制有待进一步挖掘。本研究在针刺CFA(Complete Freund's Adjuvant,完全弗氏佐剂)小鼠双侧足三里镇痛有效的动物模型上,通过蛋白组学分析挖掘脊髓部位针刺镇痛靶标分子,揭示Lgals3bp(Galectin-3-binding protein,半乳糖凝集素-3结合蛋白)参与针刺镇痛的机制。方法:首先,在小鼠右侧足底皮下注射50μL CFA诱导炎性痛,在此基础上针刺双侧足三里,以足底热辐射痛阈值、机械痛阈值作为行为学指标评价针刺CFA小鼠的镇痛效应,建立针刺CFA小鼠足三里镇痛有效的平台。然后,对针刺CFA小鼠足三里镇痛有效的脊髓组织进行蛋白组学检测及分析,具体为对模型组/盐水组和针刺组/模型组差异蛋白的GO(Gene Ontology,基因本论)功能注释、KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,京都基因与基因组百科全书)富集和聚类分析,PPI(Protein Protein Interaction network,蛋白质相互作用网路)分析,通过查阅文献,根据蛋白生物进程、分子功能、相关通路等信息推测,并结合HGNC(HUGO Gene Nomenclature Committee,人类基因命名委员会)数据库查阅人与小鼠共患关节炎的基因进行比较,找出参与针刺镇痛的可能靶标。最后,在蛋白组学分析出可能靶标的基础上,通过RT-q PCR(Quantitative Real-time PCR,实时荧光定量聚合酶链反应)、WB(Western Blot,蛋白质免疫印迹)、IF(Immunofluorescence,免疫荧光)等分子检测方法来验证CFA小鼠足三里针刺镇痛的有效靶标,找到CFA小鼠针刺镇痛靶标后,进一步研究其参与针刺镇痛机制。结果:1.基于蛋白组学筛选针刺CFA小鼠脊髓靶标分子的实验研究(1)针刺对CFA小鼠镇痛有效的平台建立造模后24h,与盐水组相比,模型组和针刺组小鼠的足底热辐射痛阈值与足底机械痛阈值均明显下降(P<0.01),模型组痛阈下降持续到针刺第5天(P<0.01)。与模型组相比,针刺组小鼠的足底热辐射痛阈值、机械痛阈值从第1天针刺后开始增高,并持续到针刺第5天(P<0.01或P<0.05)。(2)针刺对CFA小鼠镇痛有效的脊髓组织蛋白组学分析结果1)差异蛋白统计结果:模型组/盐水组下调的蛋白有74个,上调的蛋白有91个;针刺组/模型组下调、上调的蛋白均有74个。2)可能参与针刺镇痛的脊髓部位分子靶标有Gfra2、Bgn、Lgals3bp、Arap1、Kank2、Npl、Anp32b、Tial1、Nfia、Lamtor2、Ddx21、Cpq、bckdk、Rps15a、zyg11b、Tmem63c、cmtm5、Tuba8,共18个。2.对蛋白组学筛选出针刺CFA小鼠镇痛作用靶标验证结果(1)针刺CFA小鼠镇痛作用的18个靶标分子RT-q PCR验证结果显示:与盐水组相比,模型组升高且与蛋白组学分析结果趋势一致的有Lgals3bp(P<0.01);与模型组相比,针刺组下降且与蛋白组学分析结果趋势一致的有Gfrα2、Arap1(P<0.01)。与盐水组相比,模型组降低且与蛋白组学分析结果趋势一致的有Ddx21、zyg11b(P<0.05)。其余蛋白未见明显变化或变化与蛋白组学分析结果趋势不一致。(2)在基因表达水平的基础上挑选差异明显蛋白进行WB、IF验证,WB结果显示:与盐水组相比,模型组Lgals3bp、Arap1的水平升高(P<0.05),与模型组相比,针刺组Lgals3bp的水平下降(P<0.01),与蛋白组学分析结果趋势一致。IF验证Gfrα2未见明显变化。3.针刺CFA小鼠镇痛作用靶标Lgals3bp相关机制研究结果与盐水组相比,模型组p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-IκBα/IκBα的表达升高(P<0.05或P<0.01),针刺后p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-IκBα/IκBα的表达下降(P<0.05或P<0.01)。与Lgals3bp、NF-κB通路相关的细胞因子RT-q PCR结果显示,与盐水组相比,模型组IL-6、TNF-α、CXCL5的水平升高(P<0.01或P<0.05),针刺后其水平下降(P<0.05)。结论:针刺双侧足三里改善CFA小鼠炎性痛,其机制可能是降低脊髓Lgals3bp表达,进而抑制NF-κB信号通路的激活,降低促炎细胞因子基因水平,减轻中枢敏化。

关键词：针刺镇痛蛋白组学 Lgals3bp NF-κB 促炎细胞因子

全生育期咸水滴灌对土壤盐分累积和棉花生长的影响

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干旱区研究 2022年第6期39卷 1952-1965页

作者：郭晓雯刘佳炜郑志玉闵伟石河子大学农学院绿洲生态农业兵团重点实验室新疆石河子832003

通过研究不同灌溉水盐度和施氮量对土壤可溶性盐离子、土壤元素、酶活性、棉花生长和产量的影响,分析三者之间的关系。试验设置3种灌溉水盐度,即:0.35 dS·m^(-1)(淡水,FW)、4.61 dS·m^(-1)(微咸水,BW)和8.04 dS·m^(-1)(咸水,SW);施... 详细信息

通过研究不同灌溉水盐度和施氮量对土壤可溶性盐离子、土壤元素、酶活性、棉花生长和产量的影响,分析三者之间的关系。试验设置3种灌溉水盐度,即:0.35 dS·m^(-1)(淡水,FW)、4.61 dS·m^(-1)(微咸水,BW)和8.04 dS·m^(-1)(咸水,SW);施氮量分别为0 kg·hm^(-2)(N0)和360 kg·hm^(-2)(N360)。结果表明:(1)与淡水灌溉相比,微咸水和咸水灌溉显著降低棉花生物量和籽棉产量;与不施氮处理相比,施氮处理显著增加棉花生物量和籽棉产量。(2)随灌溉水盐度增加,Na^(+)、Ca^(2+)、Cl-和Ca含量显著增加,SO_(4)^(2-)、HCO_(3)^(-)、Mg^(2+)、Na、Ni、Co、Cr、K、Fe、Se和Cu含量显著降低;在施氮条件下,Na^(+)、Ca^(2+)、Cl-和SO_(4)^(2-)含量显著增加,HCO_(3)^(-)、Mg^(2+)、K^(+)、P、K、Ca、Fe、Se、Zn、Al和Mg含量显著降低。(3)随灌溉水盐度增加,蔗糖酶、过氧化氢酶、脱氢酶、多酚氧化酶、羟胺还原酶、碱性磷酸酶和芳基硫酸酯酶活性显著降低,硝酸还原酶和亚硝酸还原酶活性显著增加;施氮显著增加土壤酶活性。综合分析,咸水灌溉降低了土壤蔗糖酶、过氧化氢酶、脱氢酶、多酚氧化酶、羟胺还原酶、碱性磷酸酶和芳基硫酸酯酶活性,使得籽棉产量降低,咸水中的可溶性盐分离子Cl-、SO_(4)^(2-)、Na^(+)和Ca^(2+)是酶活性变化的主要驱动因子。

关键词：水盐度施氮量土壤离子土壤酶活性籽棉产量

妇科千金方及其拆方、单味饮片主要成分分析及10种成分测定

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中成药 2022年第2期44卷 367-371页

作者：伊美瑾粟倩郑志玉陈典林丽美湖南中医药大学药学院湘产大宗药材品质评价湖南省重点实验室湖南长沙410208

目的分析妇科千金方(穿心莲、单面针、功劳木等)及其拆方(抗炎方、抑菌方、补益方)、单味饮片主要成分,并测定原儿茶酸、木兰花碱、芦丁、染料木苷、党参炔苷、小檗碱、穿心莲内酯、染料木素、脱水穿心莲内酯、藁本内酯的含量。方法制... 详细信息

目的分析妇科千金方(穿心莲、单面针、功劳木等)及其拆方(抗炎方、抑菌方、补益方)、单味饮片主要成分,并测定原儿茶酸、木兰花碱、芦丁、染料木苷、党参炔苷、小檗碱、穿心莲内酯、染料木素、脱水穿心莲内酯、藁本内酯的含量。方法制备全方、拆方、单味饮片,其70%甲醇提取物的HPLC分析采用Kromasil 100-5-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长254 nm。结果 10种成分在各自范围内线性关系良好(R^(2)≥0.998 5),平均加样回收率96.51%~102.03%,RSD 0.88%~2.97%。木兰花碱、小檗碱、穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯归属于抑菌方,染料木苷、染料木素、芦丁归属于抗炎方,原儿茶酸、党参炔苷、藁本内酯归属于补益方。各成分含量在单味饮片中最高,全方中最低。结论妇科千金方主要成分均可归属于拆方、单味饮片中。该方法稳定可靠,可为研究妇科千金方质量控制及配伍规律提供参考。

关键词：妇科千金方拆方单味饮片主要成分 HPLC

针灸通过miRNA调控巨噬细胞极化作用及机制探讨

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辽宁中医杂志 2023年

作者：王悦郭永明张雨郑志玉徐媛天津中医药大学实验针灸研究中心天津中医药大学

巨噬细胞是人体固有的免疫细胞，在抵抗病原体入侵、参与炎症反应及维持机体内稳态方面发挥着重要作用。巨噬细胞根据周围环境刺激极化为不同表型，即M1和M2两种亚型。简而言之，M1极化的特征在于产生促炎因子，具有抗菌和杀瘤活性，而... 详细信息

巨噬细胞是人体固有的免疫细胞，在抵抗病原体入侵、参与炎症反应及维持机体内稳态方面发挥着重要作用。巨噬细胞根据周围环境刺激极化为不同表型，即M1和M2两种亚型。简而言之，M1极化的特征在于产生促炎因子，具有抗菌和杀瘤活性，而巨噬细胞M2极化与免疫抑制，肿瘤发生、伤口修复有关。巨噬细胞极化紊乱会导致一些免疫系统疾病，微RNA (MicroRNA， miRNA)在调节巨噬细胞极化中发挥重要作用，针灸能够改变巨噬细胞的微环境，促使巨噬细胞转化为不同表型，针灸亦可以通过调控miRNA调控免疫。部分研究表明针灸通过miRNA调控巨噬细胞极化可能是针灸调控免疫疾病的一个新方向，肯定其效应解释其机制，能够为针灸调控免疫疾病提供新的证据支持。

关键词：巨噬细胞极化 miRNAs 免疫炎症针灸

“9+3”职业教育模式下民族学生的管理研究 ——以攀枝花市建筑工程学校为个案

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“9+3”职业教育模式下民族学生的管理研究 ——以攀枝花市建筑工...

作者：郑志玉四川师范大学

学位级别：硕士

四川省委、省政府于2009年6月推出了“藏区9+3免费职业教育计划”,给予了四川少数民族地区学生免除学费、补助生活费和杂费的资助政策,鼓励初中毕业的民族学生到内地中职学校进行为期三年的职业学习,为今后民族地区经济跨越式发展培养... 详细信息

四川省委、省政府于2009年6月推出了“藏区9+3免费职业教育计划”,给予了四川少数民族地区学生免除学费、补助生活费和杂费的资助政策,鼓励初中毕业的民族学生到内地中职学校进行为期三年的职业学习,为今后民族地区经济跨越式发展培养高素质的劳动者。本文以攀枝花市建筑工程学校为个案,采用了实证研究、文献研究、个案研究等方法,针对该模式下学校制定的管理举措进行了深入细致的分析、研究。文章从几个方面展开论说,即：第一,问题缘起;第二,研究的目的、主要内容、意义和方法,第三,相关概念进行界定;第四,国内同行对此所作研究的归纳、分析,提出该选题的创新性;第五,课题研究的理论基础;第六,“9+3”模式下民族学生管理的实证研究。全文在呈现了“9+3”模式在实施过程中由于民族学生的文化、心理差异而产生的种种不适应表现的基础上,指出,为了民族学生的发展,应变革学校内部的管理制度、优化组织结构,对民族学生实行差异化管理等新举措,以期探寻更为有效、更适合于民族学生成长与发展的职业教育管理的新策略。当然,针对民族学生在课程学习中如何根据他们自身的需要因材施教的问题还没能得到彻底解决。

关键词： “9+3”模式中等职业教育管理模式民族心理特点文化差异

SLM制备Ti6Al4V合金表层组织的均质化及腐蚀行为研究

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中南大学学报（自然科学版） 2024年第8期55卷 2991-3001页

作者：郑志军张文韬华南理工大学机械与汽车工程学院广东广州510641

采用激光选区熔化(SLM)增材制造工艺制备致密度为97.5%的Ti6Al4V合金,并利用高能喷丸与退火处理复合工艺对垂直建造方向的XOY面及平行建造方向的XOZ面进行均质化处理,然后对原始打印件、喷丸处理以及喷丸+退火处理的3种状态的试样进行... 详细信息

采用激光选区熔化(SLM)增材制造工艺制备致密度为97.5%的Ti6Al4V合金,并利用高能喷丸与退火处理复合工艺对垂直建造方向的XOY面及平行建造方向的XOZ面进行均质化处理,然后对原始打印件、喷丸处理以及喷丸+退火处理的3种状态的试样进行电化学性能测试。研究结果表明:经喷丸处理后,原始打印件XOY面和XOZ面的组织趋于均质化,同时组织明显细化;喷丸既不改变衍射峰的位置,也不产生新的衍射峰,但可使衍射峰宽化;对于喷丸后经不同温度退火处理的样品,随退火温度的升高,XOY面和XOZ面的晶粒逐渐长大,在780℃退火后,二者均可获得α+β双相组织。对于原始打印件,XOY面和XOZ面的电化学腐蚀行为存在明显的差异,其中,XOY面的腐蚀倾向更小,耐蚀性能更优。经喷丸+退火处理后,这种差异明显减小,同时耐蚀性能进一步提高,经综合考虑可得喷丸+780℃退火为最佳工艺。

关键词：激光选区熔化 Ti6Al4V合金喷丸组织各向异性

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